Estudio del perfil metabólico de los complejos ovocito-cumulus porcinos en la maduración in vitro

The in vitro porcine embryo production technique needs to be improved. Inefficient oocyte in vitro maturation is one of the main causes of the embryo production failure. The cumulus-oocyte complex (COC) metabolism and its regulation by gonadotropins are relevant aspects that remain unclear. Although immature cumulus features are related to oocyte maturation ability, those features lack clearly defined evaluation criteria. In addition, the relation between cumulus characteristics and COC metabolic activity has not been considered. The main purpose of this work was to evaluate the metabolic profile of porcine COC during in vitro maturation. The specific aims were: to establish immature oocyte quality, to evaluate oocyte in vitro maturation in each COC class and to study the influence of cumulus and gonadotropins on carbohydrates, amino acids and lipid metabolism and reactive oxygen species (ROS) production during in vitro maturation. Immature COCs were allotted into six different classes (A1, A2, B1, B2, C and D) according to their size and morphological criteria. COCs able to complete nuclear maturation (A1, A2, B1 and B2) were matured with and without gonadotropins to evaluate cumulus and hormonal influence on metabolism. Variations of glucose, lactate and ammonia concentrations in maturation media, amounts of COC protein and oocyte neutral lipid and endogenous ROS levels were measured. In addition, the number of cumulus cells of each COC class and its variation due to the influence of gonadotropins during in vitro maturation were evaluated.\nAlthough a higher rate of live immature oocytes was observed in A classes, the percentages of oocytes at germinal vesicle stage were similar between A, B and C classes. The nuclear maturation rates after in vitro culture were the same in classes A and B, but cytoplasmic maturation was higher in class A1. The number of cumulus cell was the same in both A classes, raising with gonadotropic stimulation during maturation and decreasing during culture without hormones. The cumulus cell number\nobserved in B classes was lower and showed no variation during culture with or without gonadotropins. Glycolysis would be the main fate of glucose consumption showed by porcine COC during in vitro maturation, as suggested by the high positive correlation and molar rate 1:2 observed between glucose consumption and lactate production. Glycolysis and ammonia production were higher in A classes. Both pathways showed increased activity during gonadotropic stimulation and the hormonal effect was more intense in class A1 COCs. No association was found between the glycolytic activity and the nuclear maturation of oocytes when both aspects were evaluated simultaneously. Sodium fluoride (NaF) and ATP induced glycolysis and nuclear maturation inhibition. AMP showed no effect on glycolytic activity in the presence or absence of gonadotropins, but it diminished metaphase II rate. Protein content of immature COC was higher in A classes. After maturation without gonadotropins no modification was observed, but hormonal stimulation induced a similar raise in the amount of proteins present in both A classes. Equal neutral lipid content and ROS levels were observed in immature oocytes from classes A1, A2, B1 and B2. Both parameters showed the same decrease after maturation in the presence or absence of gonadotropins. In addition, culture media supplementation with cysteine induced a greater decrease in ROS levels in oocytes belonging to all evaluated classes.\nImmature oocyte vitality would be associated with cumulus features, but germinal vesicle stage seems to be the main factor affecting nuclear maturation. Oocytes from classes A and B could reach metaphase II stage regardless of cumulus characteristics. However cytoplasmic maturation would be closely associated to the surrounding cumulus. Glycolysis and amino acid metabolism mainly take place in cumulus cells. The higher protein content in immature class A COCs could be partly due to their greater cumulus cell number. The increase of glycolysis, amino acid catabolism and protein synthesis in response to gonadotropins would be partly mediated by the higher number of cumulus cells. However class A1 particularities would\nallow a greater metabolic response to hormones. Glycolysis in cumulus cells seems not to be associated with oocyte nuclear progress, but the activity of this pathway would be required for oocytes during in vitro maturation to reach metaphase II stage. Lipid content and ROS levels of immature oocytes would not be associated with cumulus features. The lipid consumption and the decrease in ROS levels during in vitro oocyte maturation seem to be independent of the surrounding cumulus and gonadotropic stimulation. Thus, oocyte metabolism itself would regulate those aspects without cumulus participation. Cysteine supplementation to culture medium would contribute to diminish ROS production in oocytes during in vitro maturation without cumulus influence. In conclusion, oocytes surrounded by a complete and dense cumulus would be more competent for in vitro maturation. Gonadotropic stimulation of carbohydrates and amino acid metabolism in cumulus cells would improve oocyte maturation. Oocyte lipolysis and ROS production would be independent of the surrounding cumulus and gonadotropic regulation.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Buenos Aires, ArgentinaFil: Alvarez, Gabriel Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Buenos Aires, ArgentinaLa técnica de producción de embriones porcinos in vitro dista de ser óptima. Una de las principales causas es la deficiente maduración del ovocito in vitro. El desconocimiento de las variables involucradas en el proceso de maduración incluye al metabolismo del complejo ovocito-cumulus (COC) y a la regulación de su actividad metabólica por acción de las gonadotrofinas. Las características del cumulus que rodea al ovocito inmaduro han demostrado estar relacionadas con la capacidad de maduración del gameto, sin embargo no hay consenso sobre los criterios utilizados para evaluar el cumulus. Además, no se ha considerado la relación de las características del cumulus con la actividad metabólica del COC. El objetivo general del presente trabajo fue estudiar el perfil metabólico de los COCs porcinos durante la maduración in vitro. Los objetivos particulares fueron: establecer la calidad de los ovocitos inmaduros, evaluar la maduración in vitro en las diferentes categorías de COCs y estudiar el metabolismo de los hidratos de carbono, aminoácidos y lípidos y la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) analizando la injerencia del cumulus y de las gonadotrofinas en los patrones metabólicos durante el proceso de maduración. Los COCs inmaduros fueron clasificados en seis clases dependiendo del tamaño y el aspecto del cumulus que rodea al ovocito (clases A1, A2, B1, B2, C y D). En todas las experiencias realizadas para evaluar la participación del cumulus y de las hormonas en el metabolismo se maduraron COCs pertenecientes a las clases aptas para madurar nuclearmente (A1, A2, B1 y B2) en presencia y ausencia de gonadotrofinas. Se determinaron las variaciones en las concentraciones de glucosa, lactato y amoníaco en el medio de maduración del COC, el contenido de proteínas totales del COC, el contenido de lípidos neutros y el nivel de ROS endógenas del ovocito. Además, se evaluó el número de células del cumulus en las diferentes clases y su variación debida al efecto de las gonadotrofinas durante la maduración in vitro. Se observó un mayor porcentaje de ovocitos inmaduros vivos en las clases A, pero igual porcentaje de ovocitos en estadio de vesícula germinal en las clases A, B y C. El porcentaje de ovocitos que alcanzaron el estadio de metafase II luego de la maduración in vitro fue similar en las clases A y B, pero el porcentaje de ovocitos con capacidad de madurar citoplasmáticamente resultó superior en la clase A1. El número de células que forman el cumulus resultó similar en las clases A, aumentando durante la maduración con gonadotrofinas y disminuyendo al madurar sin estimulación hormonal. En las clases B se halló menor número de células del cumulus y no se apreció variación del mismo durante la maduración independientemente de la presencia de gonadotrofinas. La alta correlación positiva y la relación molar 1:2 entre el consumo de glucosa y la producción de lactato observadas indican que la glucólisis sería el principal destino de la glucosa consumida por el COC porcino durante la maduración in vitro. La actividad glucolítica y la producción de amoníaco resultaron mayores en las clases A y se incrementaron por acción de las gonadotrofinas, aunque con mayor intensidad en la clase A1. Al analizar de modo simultáneo la actividad de la glucólisis y el estadio nuclear luego del cultivo in vitro, no se halló relación entre estos parámetros. La inhibición de la glucólisis con fluoruro de sodio (NaF) y ATP se acompañó con una disminución paralela en el porcentaje de ovocitos que alcanzaron el estadio de metafase II. El AMP no modificó la actividad glucolítica en presencia o ausencia de gonadotrofinas, pero disminuyó el porcentaje de metafase II alcanzado. Se halló mayor contenido de proteínas en los COCs inmaduros de las clases A, el cual no se modificó luego de la maduración sin gonadotrofinas pero se incrementó al suplementar el medio con hormonas. Las clases de COCs evaluadas demostraron tener igual contenido de lípidos y nivel de ROS en el ovocito inmaduro, produciéndose una disminución similar de ambos parámetros en todas las clases luego de la maduración en ausencia o presencia de gonadotrofinas. Además, la adición de cisteína al medio de cultivo ocasionó una mayor disminución en el nivel de ROS de los ovocitos en todas las clases de COCs estudiadas. Si bien la vitalidad del ovocito inmaduro estaría relacionada con las características del cumulus, el estadio de vesícula germinal sería el factor principalmente vinculado con la maduración nuclear. La maduración meiótica podría completarse independientemente de las características del cumulus en las clases A y B, sin embargo la maduración citoplasmática tendría una dependencia mayor con las características del cumulus que rodea al gameto. La glucólisis y el metabolismo de aminoácidos se desarrollarían principalmente en las células del cumulus. El mayor número de células del cumulus explicaría en parte el mayor contenido de proteínas de los COCs inmaduros pertenecientes a las clases A y les permitiría responder al estímulo gonadotrófico durante la maduración in vitro incrementando la intensidad de la vía glucolítica, el catabolismo de aminoácidos y la síntesis de proteínas, sin embargo las particularidades del cumulus clase A1 conferirían una mayor capacidad de respuesta metabólica a las hormonas. El desarrollo de la actividad glucolítica en las células del cumulus sería independiente del progreso meiótico del ovocito, sin embargo la actividad de la vía sería necesaria para que los ovocitos puedan completar la maduración. El contenido de lípidos y el nivel de ROS del ovocito inmaduro no estarían asociados con el tipo cumulus que rodea al gameto. El consumo de lípidos endógenos y la disminución del nivel de ROS en los ovocitos durante la maduración serían independientes de las características del cumulus y de la estimulación gonadotrófica, por lo tanto el metabolismo del ovocito sería responsable de la regulación de estos aspectos metabólicos sin la participación de las células del cumulus. La adición de cisteína al medio de maduración contribuiría al control de la producción de ROS de los ovocitos durante el cultivo in vitro sin estar influido por el tipo de cumulus que rodea al gameto. En conclusión, los ovocitos rodeados por un cumulus íntegro y oscuro tendrían la mayor competencia de maduración in vitro. Las gonadotrofinas mejorarían la maduración de los ovocitos al modular el metabolismo de los hidratos de carbono y de los aminoácidos en las células del cumulus. La lipólisis y la producción de ROS en el ovocito serían independientes de las características del cumulus que lo rodea y no estarían reguladas hormonalmente

Situación actual de los sistemas automáticos y cerrados de vitrificación

La vitrificación se ha convertido hace más de una década en la técnica dominante para la criopreservación de embriones y ovocitos. En los últimos años se han propuesto cambios en busca de aumentar la repetibilidad de resultados entre operadores y la seguridad de la técnica con relación a la posibilidad de contaminación de las muestras con agentes infecciosos en los termos de nitrógeno líquido. El objetivo de esta revisión bibliográfica fue encontrar la evidencia actual de la eficiencia de los sistemas de vitrificación abiertos y cerrados, y del sistema automático de equilibrio para vitrificación de ovocitos y embriones.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentin

Modulation of glycolisis and the pentose phosphate pathway influences porcine oocyte in vitro maturation

Glycolytic and pentose phosphate pathway (PPP) activities were modulated in porcine cumulus-oocyte complexes (COCs) during in vitro maturation (IVM) by the addition of inhibitors or stimulators of key enzymes of the pathways to elucidate their relative participation in oocyte maturation. The activities of glycolysis and PPP were evaluated by lactate production per COC and by the brilliant cresyl blue test, respectively. Glucose uptake per COC and the oocyte maturation rate were also evaluated. Lactate production, glucose uptake and the percentage of oocytes reaching metaphase II decreased in a dose-dependent manner in the presence of the pharmacological (NaF) or the physiological (ATP) inhibitors of glycolysis (p < 0.05). The addition of the physiological stimulator of glycolysis (AMP) caused no effect on lactate production, glucose uptake or the meiotic maturation rate. The pharmacological (6-AN) and the physiological (NADPH) inhibitors of PPP induced a dose-dependent decrease in the percentage of oocytes with high PPP activity and in the nuclear maturation rate (p < 0.05). The physiological stimulator of PPP (NADP) caused no effect on the percentage of oocytes with high PPP activity. The glycolytic and PPP activities of porcine COCs and maturational competence of oocytes seem to be closely related events. This study shows for the first time the regulatory effect of ATP and NADPH as physiological inhibitors of glycolysis and PPP in porcine COCs, respectively. Besides, these pathways seem to reach their maximum activities in porcine COCs during IVM because no further increases were achieved by the presence of AMP or NADP.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Ferretti, E. L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Environmental Pollutant Hexachlorobenzene Induces Hypertension In a Rat Model

Hexachlorobenzene (HCB) is a dioxin-like environmental pollutant, widely distributed in the environment. New research links exposure to high levels of persistent organic environmental toxicants to cardiovascular disease, however little is known about the effect of HCB on vascular function and on blood pressure. The purpose of the present study was to evaluate biochemical and cardiovascular changes resulting from subchronic HCB exposure. Adult female Sprague-Dawley rats were treated with vehicle or HCB (5 or 500 mg/kg b.w) for 45 days. Systolic blood pressure (BP), recorded by tail cuff plethysmography, was significantly increased at 35, 40 and 45 days of 500 mg/kg HCB-treatment. HCB (500 mg/kg) increased arterial thickness, while both 5 and 500 mg/kg HCB decreased proliferating cell nuclear antigen (PCNA) protein levels and cellular nuclei in abdominal aortas indicating a hypertrophic process. Also, aortas from both groups of HCB-treated rats presented higher sensitivity to noradrenalin (NA) and a significant decrease in maximum contractile response. Arteries from 500 mg/kg HCB-treated rats showed a significant increase in the levels of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) mRNA and angiotensin II type1 receptor (AT1), and a significant decrease in estrogen receptor alpha (ERα), endothelial nitric oxidide synthase (eNOS) protein expression and deiodinase II (DII) mRNA levels. In conclusion, we have demonstrated for the first time that subchronic HCB administration significantly increases BP and alters associated cardiovascular parameters in rats. In addition, HCB alters the expression of key vascular tissue molecules involved in BP regulation, such as TGF-β1, AT1, ERα, eNOS and DII.Fil: Castilla Lozano, Maria del Rocio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Cardiológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Cardiológicas; ArgentinaFil: Asuaje, Agustín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Riviere, Stephanie. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Cardiológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Cardiológicas; ArgentinaFil: Romero, Caimi Giselle. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; ArgentinaFil: Martín, Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Cao, Gabriel Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Cardiológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Cardiológicas; ArgentinaFil: Kleiman, Diana Leonor. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Milesi, Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Alvarez, Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Paleomagnetismo y mineralogia magnetica en las unidades del Mesozoico de Bucaramanga y Macizo de Floresta

Análisis de paleomagnetismo y de mineralogía magnética en rocas del Jurásico y Cretácico Inferior del área de Bucaramanga (Fms. Bocas, Jordán, Girón y Los Santos), y del sur del Macizo de Floresta (Fms. Girón y Tibasosa) permitieron determinar componentes característicos y secundarios de magnetización, y establecer el mineral asociado a dicho componente magnético. Componentes secundarios con una dirección paralela a la dirección del campo magnético actual fueron aislados en todas las unidades y en rango de temperaturas bajas a intermedias ( 4 km) entre estas dos áreas soporta la posibilidad de rotación y/o basculamiento de bloques tectónicos previos a los eventos de magnetización de la Fm. Girón. Los componentes magnéticos característicos (primarios) aislados en ambos sectores muestran una clara diferencia entre las paleolatitudes del Jurásico Temprano- Cretácico Temprano con las determinadas para unidades de edad similar en el cratón, sugiriendo así posibles movimientos translacionales de bloques con respecto a la margen occidental del Cratón Suramericano.Paleomagnetic and magnetic mineralogy analyses from Jurassic – Lower Cretaceous rocks (Bocas, Jordán, Girón, Los Santos Fms) in the Bucaramanga area and in the southern segment of the Floresta Massif (Girón and Tibasosa Fms.) allow to determine characteristic (primary) and secondary magnetic components and to identify the carrying minerals. Secondary components have directions parallel to the current magnetic field direction; they were isolated in all the units and in unblocking temperature below 620ºC or by Alternating Field. Characterisitc (primary) components were isolated at unblocking temperatures ranging between 550º and 700ºC, with exception of limestones of the Tibasosa Formation that had unblocking temperatures between 300º and 500ºC. The relative time of magnetization was constrained from fold, conglomerate, unconformity, and baked contact tests. The characteristic component isolated in the Middle(?) Jurassic Jordan Fm. constrains 96±16º counterclockwise rotation of fault-bounded blocks at La Mesa de Los Santos area with respect to the Rionegro area. In addition, abrupt thickness change in the Girón Fm. from 100m to >4 km between those areas support the possibility of rotation and/or tilting of tectonic blocks, previous to the time of magnetization of the Girón Fm. The characteristic (primary) magnetic components isolated in both areas show a noticeable difference among the Early Jurassic-Early Cretaceous paleolatitudes and paleolatitudes calculated by other authors in rocks of the same age in the stable craton, suggesting possible translations of these blocks with respect to the western plate margin of South America.Fil: Ayala Calvo, Rosa Carolina. Corporación Geológica ARES; ColombiaFil: Veloza Fajardo, Gabriel Eduardo. Corporación Geológica ARES; ColombiaFil: Bayona, Germán. Corporación Geológica ARES; ColombiaFil: Gomez Casallas, Mayeli. Ministerio de Minas y Energía. Servicio Geológico Colombiano; ColombiaFil: Rapalini, Augusto Ernesto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Geociencias Básicas, Aplicadas y Ambientales de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Geociencias Básicas, Aplicadas y Ambientales de Buenos Aires; ArgentinaFil: Costanzo-Alvarez, Vincenzo. Universidad Simón Bolivar; VenezuelaFil: Aldana, Milagrosa. Universidad Simón Bolivar; VenezuelaFil: Cortés, Martín. Corporación Geológica ARES; Colombi

Survey of transcripts expressed by the invasive juvenile stage of the liver fluke Fasciola hepatica

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The common liver fluke <it>Fasciola hepatica </it>is the agent of a zoonosis with significant economic consequences in livestock production worldwide, and increasing relevance to human health in developing countries. Although flukicidal drugs are available, re-infection and emerging resistance are demanding new efficient and inexpensive control strategies. Understanding the molecular mechanisms underlying the host-parasite interaction provide relevant clues in this search, while enlightening the physiological adaptations to parasitism. Genomics and transcriptomics are still in their infancy in <it>F. hepatica</it>, with very scarce information available from the invasive newly excysted juveniles (NEJ). Here we provide an initial glimpse to the transcriptomics of the NEJ, the first stage to interact with the mammalian host.</p> <p>Results</p> <p>We catalogued more than 500 clusters generated from the analysis of <it>F. hepatica </it>juvenile expressed sequence tags (EST), several of them not detected in the adult stage. A set of putative <it>F. hepatica </it>specific transcripts, and a group of sequences conserved exclusively in flatworms were identified. These novel sequences along with a set of parasite transcripts absent in the host genomes are putative new targets for future anti-parasitic drugs or vaccine development.</p> <p>Comparisons of the <it>F. hepatica </it>sequences with other metazoans genomes or EST databases were consistent with the basal positioning of flatworms in the bilaterian phylogeny. Notably, GC content, codon usage and amino acid frequencies are remarkably different in Schistosomes to <it>F. hepatica </it>and other trematodes.</p> <p>Functional annotation of predicted proteins showed a general representation of diverse biological functions. Besides proteases and antioxidant enzymes expected to participate in the early interaction with the host, various proteins involved in gene expression, protein synthesis, cell signaling and mitochondrial enzymes were identified. Differential expression of secreted protease gene family members between juvenile and adult stages may respond to different needs during host colonization.</p> <p>Conclusion</p> <p>The knowledge of the genes expressed by the invasive stage of <it>Fasciola hepatica </it>is a starting point to unravel key aspects of this parasite's biology. The integration of the emerging transcriptomics, and proteomics data and the advent of functional genomics tools in this organism are positioning <it>F. hepatica </it>as an interesting model for trematode biology.</p

Survey of transcripts expressed by the invasive juvenile stage of the liver fluke Fasciola hepatica

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The common liver fluke <it>Fasciola hepatica </it>is the agent of a zoonosis with significant economic consequences in livestock production worldwide, and increasing relevance to human health in developing countries. Although flukicidal drugs are available, re-infection and emerging resistance are demanding new efficient and inexpensive control strategies. Understanding the molecular mechanisms underlying the host-parasite interaction provide relevant clues in this search, while enlightening the physiological adaptations to parasitism. Genomics and transcriptomics are still in their infancy in <it>F. hepatica</it>, with very scarce information available from the invasive newly excysted juveniles (NEJ). Here we provide an initial glimpse to the transcriptomics of the NEJ, the first stage to interact with the mammalian host.</p> <p>Results</p> <p>We catalogued more than 500 clusters generated from the analysis of <it>F. hepatica </it>juvenile expressed sequence tags (EST), several of them not detected in the adult stage. A set of putative <it>F. hepatica </it>specific transcripts, and a group of sequences conserved exclusively in flatworms were identified. These novel sequences along with a set of parasite transcripts absent in the host genomes are putative new targets for future anti-parasitic drugs or vaccine development.</p> <p>Comparisons of the <it>F. hepatica </it>sequences with other metazoans genomes or EST databases were consistent with the basal positioning of flatworms in the bilaterian phylogeny. Notably, GC content, codon usage and amino acid frequencies are remarkably different in Schistosomes to <it>F. hepatica </it>and other trematodes.</p> <p>Functional annotation of predicted proteins showed a general representation of diverse biological functions. Besides proteases and antioxidant enzymes expected to participate in the early interaction with the host, various proteins involved in gene expression, protein synthesis, cell signaling and mitochondrial enzymes were identified. Differential expression of secreted protease gene family members between juvenile and adult stages may respond to different needs during host colonization.</p> <p>Conclusion</p> <p>The knowledge of the genes expressed by the invasive stage of <it>Fasciola hepatica </it>is a starting point to unravel key aspects of this parasite's biology. The integration of the emerging transcriptomics, and proteomics data and the advent of functional genomics tools in this organism are positioning <it>F. hepatica </it>as an interesting model for trematode biology.</p

A Novel Bacterial Protease Inhibitor Adjuvant in RBD-Based COVID-19 Vaccine Formulations Containing Alum Increases Neutralizing Antibodies, Specific Germinal Center B Cells and Confers Protection Against SARS-CoV-2 Infection in Mice

In this work, we evaluated recombinant receptor binding domain (RBD)-based vaccine formulation prototypes with potential for further clinical development. We assessed different formulations containing RBD plus alum, AddaS03, AddaVax, or the combination of alum and U-Omp19: a novel Brucella spp. protease inhibitor vaccine adjuvant. Results show that the vaccine formulation composed of U-Omp19 and alum as adjuvants has a better performance: it significantly increased mucosal and systemic neutralizing antibodies in comparison to antigen plus alum, AddaVax, or AddaS03. Antibodies induced with the formulation containing U-Omp19 and alum not only increased their neutralization capacity against the ancestral virus but also cross-neutralized alpha, lambda, and gamma variants with similar potency. Furthermore, the addition of U-Omp19 to alum vaccine formulation increased the frequency of RBD-specific geminal center B cells and plasmablasts. Additionally, U-Omp19+alum formulation induced RBD-specific Th1 and CD8+ T-cell responses in spleens and lungs. Finally, this vaccine formulation conferred protection against an intranasal severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) challenge of K18-hACE2 mice.Fil: Coria, Mirta Lorena. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Saposnik, Lucas Martín. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Pueblas Castro, Celeste Victoria. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Castro, Eliana Florencia. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Bruno, Laura Alejandra. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Stone, William B.. University of Virginia; Estados UnidosFil: Pérez, Paula Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Darriba, Maria Laura. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Chemes, Lucia Beatriz. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Alcain, Julieta María. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Mazzitelli, Ignacio Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Varese, Augusto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Salvatori, Melina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Auguste, Albert J.. University of Virginia; Estados UnidosFil: Alvarez, Diego Ezequiel. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Pasquevich, Karina Alejandra. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Cassataro, Juliana. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Sputnik V vaccine elicits seroconversion and neutralizing capacity to SARS-CoV-2 after a single dose

Massive vaccination offers great promise for halting the global COVID-19 pandemic. However, the limited supply and uneven vaccine distribution create an urgent need to optimize vaccination strategies. We evaluate SARS-CoV-2-specific antibody responses after Sputnik V vaccination of healthcare workers in Argentina, measuring IgG anti-spike titers and neutralizing capacity after one and two doses in a cohort of naive or previously infected volunteers. By 21 days after receiving the first dose of the vaccine, 94% of naive participants develop spike-specific IgG antibodies. A single Sputnik V dose elicits higher antibody levels and virus-neutralizing capacity in previously infected individuals than in naive ones receiving the full two-dose schedule. The high seroconversion rate after a single dose in naive participants suggests a benefit of delaying administration of the second dose to increase the number of people vaccinated. The data presented provide information for guiding public health decisions in light of the current global health emergency.Fil: Rossi, Andrés Hugo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Ojeda, Diego Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Varese, Augusto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Sanchez, Lautaro Nicolas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: González López Ledesma, María Mora. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Mazzitelli, Ignacio Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Alvarez Juliá, Anabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Oviedo Rouco, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Pallarés, Horacio Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Costa Navarro, Guadalupe Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Rasetto, Natalí Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Garcia, Corina Ileana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Wenker, Shirley Denise. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Ramis, Lila Yanina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Bialer, Magali Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: de Leone, María José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Hernando, Carlos Esteban. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Sosa, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Bianchimano, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Rios, Antonella Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Treffinger Cienfuegos, Maria Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Caramelo, Julio Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Longueira, Yesica Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Laufer, Natalia Lorna. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Alvarez, Diego Ezequiel. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carradori, Jorge. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Pedrozza, Dariana. Hospital Interzonal General de Agudos Dr Pedro Fiorito; ArgentinaFil: Rima, Alejandra. Gobierno de la Provincia de Buenos Aires. Hospital Interzonal de Agudos Evita.; ArgentinaFil: Echegoyen, Cecilia. Gobierno de la Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital Interzonal General de Agudos "prof. Dr. Rodolfo Rossi".; ArgentinaFil: Ercole, Regina. Gobierno de la Provincia de Buenos Aires. Hospital Interzonal Especializado de Agudos y Cronicos San Juan de Dios.; ArgentinaFil: Gelpi, Paula. Gobierno de la Provincia de Buenos Aires. Hospital Interzonal de Agudos San Roque de Gonnet; ArgentinaFil: Marchetti, Susana. Hospital Interzonal General de Agudos San Martín; ArgentinaFil: Zubieta, Martín. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital Alta Complejidad en Red El Cruce Dr. Néstor Carlos Kirchner Samic; ArgentinaFil: Docena, Guillermo H.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Kreplak, Nicolas. Ministerio de Salud de la Nación; ArgentinaFil: Yanovsky, Marcelo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Geffner, Jorge Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Pifano, Marina. Ministerio de Salud de la Nación; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gamarnik, Andrea Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentin