Generation and characterisation of monoclonal antibodies against cell cycle and cytokinesis regulators in Trypanosoma brucei

Trypanosoma brucei é o parasita que causa Trypanossomose Africana, sendo transmitido pela picada de um inseto vetor para a corrente sanguínea do hospedeiro mamífero. Afeta atualmente 36 países sub-saharianos e a falta de métodos de diagnóstico eficazes e de tratamentos seguros e eficazes, levou à necessidade de se desenvolverem novas medidas de controlo e novas estratégias terapêuticas. O ciclo celular do parasita T. brucei é invulgar. Uma vez que é tão distinto do ciclo celular dos mamíferos, as proteínas que o regulam têm sido consideradas como possíveis alvos terapêuticos. No entanto, muitas proteínas reguladoras ainda não foram identificadas e a função específica de algumas proteínas envolvidas na progressão do ciclo celular é desconhecida. De entre os diversos reguladores do ciclo celular, estão as CRKs e as ciclinas que as ativam. Em T. brucei, foram identificadas 11 CRKs (CRK1-4 and CRK6-12) e 10 ciclinas. No entanto, ainda nem todas têm uma função conhecida e apenas dois complexos CRK:ciclina foram identificados in vivo. Durante este projeto, provou-se a existência de um novo complexo: CRK12:CYC9, que interage in vivo tanto na forma sanguínea como na forma procíclica. Um resultado interessante é que, apesar de interagirem, cada proteína regula diferentes processos biológicos na forma sanguínea do parasita. Na realidade, enquanto a CYC9 está envolvida na regulação do ciclo celular, levando a um bloqueio da citocinese em células em que não é expressa, a cinase CRK12 assume um papel essencial na regulação da endocitose. Esta consiste na primeira vez que uma CRK foi relacionada com o processo de endocitose de T. brucei, levando na sua ausência a um alargamento da bolsa flagelar. De forma a garantir estas diferentes funções, tanto a cinase CRK12 como a ciclina 9 podem interagir com outras proteínas, ou ser substituídas funcionalmente por outras cinases/ciclinas. O uso de anticorpos monoclonais e ensaios de proteção têm sido estudados frequentemente como alternativas terapêuticas. Com esse objetivo, anticorpos monoclonais foram produzidos contra CRK12. Apesar de se ter produzido um anticorpo que reconhece especificamente esta cinase em diferentes extratos celulares de T. brucei, não foi possível usar o mesmo em estudos de localisação por fluorescência e os ensaios de neutralização/proteção não foram feitos devido a limitações de tempo. Um projeto alternativo desenvolvido tinha como objetivo identificar possíveis proteínas reguladoras. Como tal, extratos de citoesqueleto foram obtidos em células sincronizadas em mitose e citocinese, e usados para geração de anticorpos monoclonais. Um total de 28 anticorpos foram selecionados. Apesar de não mostrarem especificidade contra uma fase específica do ciclo celular, produziram-se anticorpos com imunolocalisações muito interessantes. Além disso, estes anticorpos poderiam num futuro ser usados como ferramentas valiosas para estudar diferentes processos biológicas em T. brucei.Trypanosomabruceiis the causative agent of African Trypanosomiasis, being transmitted by the bite of a blood-feeding invertebrate vector into the mammalian host. It affects 36 sub-Saharan African countries and the lack of efficient diagnostic methods and safe and effective drugs has led to the need fornew control measures and novel treatment strategies. Cell cycle progression in T. bruceiis quite unique. Being so distinct from the mammalian cell cycle, regulatory proteins are believed to constitute good drug targets. However, many of these proteinsremain to be identified, and their rolesin specific pathwaysarestill unknown. The cdc-2 related kinases (CRKs) and their cyclin partners are among the different cell cycle regulators that are vital for an accurate progression through the cell cycle. InT. brucei, several CRKs (CRK1-4 and CRK6-12) and cyclins (CYC2-11) have been identified, although a role in cell cycle regulation has not been established for all of them and only two active CRK:cyclin complexes have been identified in vivo. During this project, CRK12 and CYC9 have been proved to constitute a novel CRK:cyclin complex in vivo, in both the bloodstream (BSF) and the procyclic (PCF) stages. Interestingly, each protein regulates different biological processes in BSF trypanosomes. In fact, whileCYC9 is involved in cell cycle regulation, blocking cytokinesis once depleted, CRK12 has a critical role in the endocytic pathway. It is the first time a CRK is connected with regulation of endocytosis, causing enlargement of the flagellar pocket if depleted. The interaction of CRK12 and CYC9 with additional proteins and the presence of functional redundancy between kinases/cyclins might explain the different functions. The use of monoclonal antibodies (MAbs) and immunisation strategies as therapeutic techniques hasbeen the subject of several studies. With that aim, α-CRK12 MAbs were efficiently generated, recognising the protein specifically in different T. bruceicell extracts. However, this MAb might not be suitable for immunolocalisation studies. Time constraints did not allow neutralization/protection studies. A parallel approach was taken to identify new proteins as cell cycle regulators. BSF cultures were synchronized in S-phase by addition of hydroxyurea, and cytoskeleton extracts of populations enriched forcells in mitosis and cytokinesis were used for MAb generation. After different screening techniques, a total of 28 MAbs were selected and the proteins they recognised, their cell cycle specificity and immunolocalisation of the recognised antigensanalysed. Although a specific antigen was not identified as a possible mitosis/cytokinesis regulator, interesting MAbs were generated with respect toto their localisation in the T. bruceicytoskeleton. Additionally, these MAbs couldbecome valuable tools to understand cellular biology and different biological pathways in T. brucei

Searching for chemical elements: a multidisciplinary activity in the 150th anniversary of the Periodic Table of Chemical Elements

[Excerpt] 2019 is the 150th anniversary of the Periodic Table of Chemical Elements and has therefore been proclaimed the "International Year of the Periodic Table of Chemical Elements (IYPT2019)" by the United Nations General Assembly and UNESCO [1]. A working tool very useful to various professionals and in diverse scientific areas, this table would not exist if someone had not distributed and ordered the chemical elements according to the value of their atomic weights. The father of the Periodic Table, the Russian chemist Dmitri Mendeleev (1834-1907), was so visionary that his Table allows housing not only the known chemical elements at that time but also the ones still unknown that came to be discovered or synthesized. When we come across this Table, with so many chemical elements, we ask ourselves how we use them and where we can find each of them, in our real world

Principais desafios que se colocam a Portugal e intervenções prioritárias no âmbito dos Oito Objectivos do Milénio

O presente texto centra-se nos resultados que se pretendem alcançar inerentes a um Projecto que está a ser desenvolvido desde Março de 2008 e pelo período de um ano intitulado “Oito Maneiras de Mudar o Mundo” e que é financiado pelo Ministério dos Negócios Estrangeiros através do Instituto Português de Apoio ao Desenvolvimento (I.P.A.D.). Está a ser executado pela URB-África (Associação para a Cooperação e o Desenvolvimento Urbano) e pela U.C.C.L.A. (União das Cidades Luso-Afro-Américo- Asiáticas) em parceria com o Departamento de Geografia da Universidade do Minho pressupondo várias iniciativas no domínio da Educação para o Desenvolvimento e no âmbito dos Oito Objectivos do Milénio. Estes objectivos, inseridos na Declaração do Milénio, foram aprovados no ano 2000, na Assembleia-Geral da O.N.U., por 189 chefes de Estado e de Governo. A principal finalidade deste projecto é fomentar uma mudança de valores e comportamentos no âmbito da cidadania, solidariedade e participação social no espaço público português

Viabilidade técnica do cultivo protegido e orgânico de capuchinha (Tropaeolum majus L.) em consórcio com hortaliças convencionais

Trabalho de Conclusão de Curso (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Curso de Agronomia, 2019.O cultivo consorciado de hortaliças convencionais com hortaliças tradicionais apresenta grande potencial como tática de manejo de culturas em sistemas alternativos e diversificados de produção de alimentos, contribuindo para o resgate de espécies tradicionais e incremento da renda do produtor rural. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade técnica do consórcio de capuchinha com alface e repolho em sistema de cultivo orgânico de produção, visando o incremento da produtividade de hortaliças, além de possibilitar o resgate do cultivo de plantas alimentícias não-convencionais. O experimento foi conduzido em casa de vegetação no período de março a agosto de 2018, na Fazenda Água Limpa - Universidade de Brasília. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com sete tratamentos em três repetições. Os tratamentos foram: monocultura de repolho, monocultura de alface, monocultura de capuchinha, consórcio duplo alface/repolho, consórcio duplo alface/capuchinha, consórcio duplo repolho/capuchinha e consórcio triplo alface/repolho/capuchinha. Avaliou-se para capuchinha altura e diâmetro da planta, massa fresca da parte aérea, peso, altura média e o diâmetro médio das flores. Avaliou-se para a alface altura, diâmetro e massa fresca da planta. Para o repolho, os parâmetros avaliados foram massa fresca e diâmetro da cabeça. Os dados foram submetidos a análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade. O consórcio da capuchinha com alface e repolho não interferiu significativamente no desenvolvimento e produção das culturas. Todos os arranjos de consórcio apresentaram índice de equivalência de área acima de 1,0, confirmando a viabilidade técnica deste tipo de arranjo de cultivo. O consórcio da capuchinha com alface e repolho é tecnicamente viável, pode ser utilizado em sistemas de cultivo orgânico, resultando em incremento da produção de hortaliças em uma mesma área, bem como proporciona oportunidade de resgate de plantas alimentícias não-convencionais, assegurando ao produtor uma produção diversificada

A vivência subjectiva da pessoa transexual: Um olhar focal na experiência da discriminação

Dissertação de Mestrado apresentada ao Instituto Superior de Psicologia Aplicada para obtenção de grau de Mestre na especialidade de Psicologia Clínica.O que é na verdade nascer no corpo errado e ver a sua identidade de género trocada? Como é ver-se obrigado a desempenhar um papel de género contrário ao seu? A transexualidade é caracterizada como o desejo de viver e ser visto como pertencendo ao sexo oposto, geralmente acompanhado de uma vontade de transformar o corpo. Esta transformação tem como objectivo libertar a pessoa do enorme desconforto que sente em relação ao seu corpo mas também vai ter repercussões a nível físico, psicológico e social, provocando desta forma várias alterações na vida da pessoa transexual que a obrigam a desenvolver estratégias de adaptação. O objectivo deste estudo visa compreender a experiência subjectiva da pessoa transexual antes, durante e após o seu processo de transformação, dando primazia à temática da discriminação. O delineamento metodológico foi do tipo qualitativo, com uma amostra constituída por 2 participantes transexuais (um feminino - masculino e um masculino - feminino) com 52 e 36 anos respectivamente. Sendo o instrumento utilizado a entrevista e o processo para o tratamento de informação a análise de conteúdo. Os resultados demonstram a existência de diversas dificuldades com as quais os transexuais se deparam ao longo do seu processo de transformação e consequentes efeitos psicológicos e sociais, nomeadamente mal-estar, tristeza, ansiedade, frustração, isolamento; e incompreensão. Seria pertinente replicar este estudo no futuro, atendendo às limitações encontradas.What does it mean to be born in the wrong body and having your gender identity exchanged? How’s like to be forced to play a gender role opposite to one's own? Transsexuality translates into the desire of living and be seen as belonging to the opposite gender, and, usually present along with it, the strong urge to change one's body. This transformation primarily suits the purpose of freeing the individual from the enormous discomfort felt in relation to his body, and has its own set of repercussions on the physical, psychological and social levels which in turn induce drastic changes in the life of the transsexual individual, forcing him to develop adaptation strategies. This essay's objective is to understand the subjective experience of the transsexual individual before, during and after his process of transformation, focusing on discrimination. The methodological approach was a qualitative one, with a participation of two individuals (one self-identified female-to-male with 52 years old and one self-identified male-to-female with 36 years old). The instrument used was an interview and the corresponding information was processed by means of content analysis. The results are testimony to the difficulties with which transsexuals face along their process of transformation and the social and psychological consequences that ensue, wich are disconfort, sadness, anxiety, frustration, isolation and misunderstanding. Attending to the limitations found it would prove useful to further the essay in the future

The Trypanosoma brucei AIR9-like protein is cytoskeleton-associated and is required for nucleus positioning and accurate cleavage furrow placement

AIR9 is a cytoskeleton-associated protein in Arabidopsis thaliana with roles in cytokinesis and cross wall maturation, and reported homologues in land plants and excavate protists, including trypanosomatids. We show that the Trypanosoma brucei AIR9-like protein, TbAIR9, is also cytoskeleton-associated and colocalises with the subpellicular microtubules. We find it to be expressed in all life cycle stages and show that it is essential for normal proliferation of trypanosomes in vitro. Depletion of TbAIR9 from procyclic trypanosomes resulted in increased cell length due to increased microtubule extension at the cell posterior. Additionally, the nucleus was re-positioned to a location posterior to the kinetoplast, leading to defects in cytokinesis and the generation of aberrant progeny. In contrast, in bloodstream trypanosomes, depletion of TbAIR9 had little effect on nucleus positioning, but resulted in aberrant cleavage furrow placement and the generation of non-equivalent daughter cells following cytokinesis. Our data provide insight into the control of nucleus positioning in this important pathogen and emphasise differences in the cytoskeleton and cell cycle control between two life cycle stages of the T. brucei parasite

A produção de cinema: compreender o contexto do meio cinematográfico português contemporâneo

Este trabalho consiste numa reflexão sobre o contexto em que se insere o mercado cinematográfico em Portugal no séc. XXI, considerando a importância do produtor conhecer e compreender o estado atual do financiamento estatal, o consumo de cinema nacional, a quota de mercado dos filmes portugueses e as possíveis formas de distribuição, incluindo as que resultam do desenvolvimento das novas plataformas digitais. Cada filme é uma entidade em si mesmo, e o seu objetivo primordial é ser visto pelo maior número de pessoas. Tendo como ponto de partida esta premissa, importa aqui refletir sobre a panóplia de canais de distribuição existentes e perceber quais os que, integrados numa conjuntura artística e comercial, melhor se adequam a esta finalidade. Esta pesquisa sobre os meios e as possibilidades que o produtor dispõe para contribuir para a visibilidade do cinema português (dentro das fronteiras nacionais e no mercado internacional) tem por objetivo a conclusão do Mestrado em Comunicação Audiovisual, com Especialização em Produção e Realização, da Escola Superior de Música, Artes e Espetáculo do Instituto Politécnico do Porto.This work is a reflection on the environment of the film market in the 21st century in Portugal, given the importance of the producer to know and understand the current status of the State funding, the national film consumption, the market share of Portuguese films and the possible ways of distribution, including those resulting from the development of new digital platforms. Each movie is an entity in itself, is primary goal is to be seen by the largest number of people. Taking as starting point this premise, it matters here to reflect on the panoply of existing distribution channels and to realize which ones, integrated in an artistic and commercial context, are more suitable for this purpose. The aim of this research on the media and options available the producer has to contribute to the Portuguese cinema visibility (within national boundaries and at international market) is the conclusion of the Master Degree in Audiovisual Communication, with Specialization in Production and Realization, at the Escola Superior de Música e Artes do Espectáculo (School of Music and Performing Arts) of IPP (Polytechnic Institute of Porto)

Parceria nos cuidados de enfermagem com o familiar cuidador, para a prevenção do abuso à pessoa idosa dependente em casa

Mestrado, Enfermagem Médico-Cirúrgica - Pessoa Idosa, 2013, Escola Superior de Enfermagem de LisboaO fenómeno do abuso de idosos, em situação de maior fragilidade, é uma realidade cada vez mais frequente em Portugal, trazendo consequências ao nível do bem-estar físico, psíquico e social do indivíduo. No entanto as equipas de saúde da comunidade, nomeadamente os enfermeiros, têm dificuldades na prevenção destas situações, sendo imperioso investir na sua capacitação. Neste sentido elaborou-se um projeto de estágio com o objetivo de desenvolver competências de enfermeiro especialista à pessoa idosa, nomeadamente na compreensão da importância dos cuidados de enfermagem em parceria com o familiar cuidador na prevenção de situações de abuso ao idoso dependente em casa. Foi desenvolvido numa UCC na área de Lisboa, envolvendo a ECC, os clientes idosos em situação de dependência e os cuidadores familiares, tendo-se adotado a metodologia de trabalho de projeto. Como métodos de recolha de informação para o diagnóstico, monotorização e avaliação do projeto foram utilizados a entrevista semi-diretiva aos enfermeiros e assistente social da ECC e às respostas sociais da comunidade, a análise de conteúdo dos registos de enfermagem e da colheita de dados, a observação direta das práticas de cuidados aos clientes e seus familiares. A análise e reflexão das práticas de cuidados, originaram ações de formação e sensibilização da ECC e comunidade, sendo ainda criados instrumentos para protocolar as intervenções de modo a permitir identificar, avaliar e reportar situações de risco e de abuso. A intervenção em termos da prática de cuidados e a reflexão contínua das experiências vividas, permitiram-me adquirir competências de enfermeira especialista nos cuidados à pessoa idosa e sua família, intervindo de forma crítica e fundamentada utilizando o modelo de intervenção em parceria junto dos clientes. A aquisição de conhecimentos pela ECC no sentido da prevenção do abuso à pessoa idosa, a criação de um fluxograma de intervenção e de um dossier com toda a documentação e orientações de atuação perante estas situações foram também alguns dos ganhos deste projeto. Conclui-se assim que a promoção de cuidados de enfermagem em parceria, com a construção de projeto de cuidados personalizados a cada situação de vida, constitui uma forma de prevenção de situações de abuso aos idosos, pois permite a criação de ambientes de suporte e reforço da ação comunitária

Os enfermeiros e as representações sociais sobre o envelhecimento : implicações nos cuidados promotores da autonomia da pessoa idosa hospitalizada

RESUMO: O envelhecimento da população tende a aumentar em todo o mundo, trazendo consequências a níveis sociais, económicos, e de saúde. As hospitalizações e a necessidade de cuidados de enfermagem à população idosa tendencialmente aumentam pela maior fragilidade, derivada do aumento das situações de doença crónica e dependência. Os cuidados de enfermagem podem ser influenciados pelas representações sociais acerca do envelhecimento, estando associados mitos e estereótipos, e levar à desvalorização da individualidade e autonomia da pessoa idosa. Neste sentido, preconiza-se a realização de cuidados em parceria com a pessoa idosa, que promovam a sua autonomia e empowerment. Este estudo tem como objectivo compreender o modo como as representações sociais dos enfermeiros acerca do envelhecimento influenciam os cuidados de enfermagem na promoção da autonomia do idoso hospitalizado. Realizámos um estudo qualitativo, com recurso à entrevista e a técnica por associação livre de ideias, sendo entrevistados 17 enfermeiros de um serviço de internamento de medicina. Da análise dos resultados, constatámos que para os enfermeiros do estudo a representação social negativa acerca do envelhecimento foi a mais evidenciada, associada a situações como: dependência, doença, solidão, isolamento, necessidades, tristeza, peso na sociedade/problemas/dificuldades; levando à desvalorização das capacidades físicas, mentais, psicológicas, e da autonomia da pessoa idosa. Como factores dificultadores da promoção do respeito e autonomia da pessoa idosa referiram a motivação, características do enfermeiro e da pessoa idosa e os constrangimentos institucionais. Contudo alguns enfermeiros utilizam estratégias facilitadoras da promoção da autonomia como a: apresentação, proximidade, disponibilidade, promoção da esperança, avaliação da situação, e capacitação física e mental. Concluímos que as representações sociais negativas acerca do envelhecimento condicionam os cuidados de enfermagem na promoção da participação da pessoa idosa nos cuidados e nas decisões relativas a si. Os cuidados realizados em parceria, influenciados por uma visão positiva da pessoa idosa, valorizam a sua individualidade e toda a sua história de vida fomentando a sua autonomia.---------- ABSTRACT: Population aging is a global phenomenon, felt particularly in developed countries, with consequences at the social, economic and health-related levels. Hospitalization rates and nursing care needs among the elderly are on the rise in part due to the increased fragility of this population which experience greater levels of dependency and chronic disease. The quality of nursing care may be influenced by social representations of aging, associated with myths and stereotypes, that may lead to the devaluation of the individuality and autonomy of elderly persons. To this end, advocates for care in partnership with the elderly person, that promote their empowerment and autonomy. The present study aims to understand the manner in which social representations held by nurses with regards to the phenomenon of aging influence nursing care, with particular emphasis on the promotion of autonomy among hospitalized elderly patients. This study is a qualitative study, utilizing interviews and the free association of ideas technique, with a total of 17 interviews conducted on nurses working in a hospital ward. According to our results, nurses harbour negative social representations concerning the aging process, associating the latter with dependency, disease, loneliness, needs, sadness, burden on society/problems/difficulties, all of which may lead to the devaluation of the physical, mental, and psychological capacities of the elderly, negatively impacting upon their autonomy. Among those factors found to hinder the promotion of respect and autonomy of the elderly in this study, are personal motivation, characteristics of the nurse and the elderly person and institutional barriers. However, some nurses made use of a number of strategies that promoted patient autonomy, namely: presentation, proximity, availability, the promotion of hope, situation evaluation and physical and mental capacitation. In conclusion, negative social representations concerning aging condition the quality of nursing care, particularly, in what concerns the promotion of patient participation in care and self determination. Nursing interventions carried out in collaboration with the patient, influenced by a positive view of the elderly, value the individuality and life history of these individuals, thereby fomenting their autonom