Chronic obstructive pulmonary disease : a proteomics approach

Tese de doutoramento, Biologia (Biologia Molecular), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by chronic airflow limitation that is not fully reversible even under bronchodilators effect, caused by a mixture of small airway disease – obstructive bronchiolitis – and parenchymal destruction – emphysema. At the present time, COPD is the fourth leading cause of death and its prevalence and mortality are expected to continue increasing in next decade. Spirometry is the most reproducible way to measure lung function and is nowadays the best tool to diagnose airflow limitation and, consequently, diagnose COPD itself. Biomarkers for diagnosis and/or prognosis as well as novel targets for the development of more effective therapies for COPD are still needed. Proteomics has the capacity to provide large-scale information and consequently it has the potential to expand previous knowledge on COPD. Surprisingly, given the need for new biomarkers in COPD and the power of proteomics, proteomics have been quite neglected so far. Up to date only 50 reports (14 are reviews) match the search at Pubmed (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed, accessed June 23, 2011) for COPD proteomics. Hence, there is a clear need to engage clinically valuable proteomics studies in order to match the need for new biomarkers in COPD. In last decade, the shotgun proteomics approach has become the method of choice for identifying and quantifying proteins in most large-scale studies. Compared with 2DE, shotgun proteomics allows higher data throughput and better protein detection sensitivity. This strategy is based on trypsin digestion of proteins into peptides. This produces a complex peptide mixture that is then separated by one- or multiple dimensional liquid chromatography (LC) and subjected to peptide sequencing using tandem mass spectrometry (MS/MS) before automated database searching. In the present work we have employed different methodologies within shotgun proteomics to generate solid and comprehensive data in COPD. There are quite a lot biological materials that can be used to investigate biomarkers for this disease. Although COPD is now known to possess a systemic inflammation xii component which is responsible for affecting other organs, it is in the lung that the events that lead to breathless take place. Investigating to the lung directly is therefore an optimal strategy to be able to identify proteins that may not be detectable elsewhere either because they are not present or diluted into undetectable concentrations. But this means that lung tissue has to be collected by biopsy which is an extremely invasive technique. But besides tissue biospecimens, other sources of biological materials used to study COPD is biofluids which includes sputum, bronchoalveolar and nasal lavage fluid, exhaled breath condensate, and blood. It had been observed before by means of microscopy that red blood cells (RBCs) from COPD patients showed deformations in their shape. RBCs are crucial to the uptake of oxygen from the lungs to the cells and this transport is dependent on their ability to change shapes rapidly while navigating through blood vessels. In addition, RBCs play a crucial role in antioxidant defense when fighting against oxidative stress, which has long been recognized as feature of COPD. In this work we made use of a RBC membrane fractionation procedure, stable isotope labeling and bidimensional liquid chromatography (strong cation exchange / reverse phase) before sample acquisition using a high-resolution fourier transform - ion cyclotron resonance (FT-ICR) mass spectrometer (Chapter III). A total of 4697 peptides were quantified as present in both COPD and control spectra corresponding to 1083 proteins. Three-hundred and fourteen proteins possessing at least two peptides were identified, 46% of which were annotated as membrane proteins. Golgin-245/p230 (GOLGA4), was identified as overexpressed in COPD, a protein which is reported to be essential for intracellular trafficking and cell surface delivery of tumor necrosis factor-α (TNF), the main proinflammatory cytokine made and secreted by inflammatory macrophages enhancing activation and recruitment of T-cells and ensuring robust innate and acquired immune responses. Chorein or Vacuolar protein sorting-associated protein 13A (VPS13A) is reported to play a role in the cytoskeleton organization has been associated with thorny deformations of circulating erythrocytes, possibly due to red cell membranes deformation. This protein was found to be underexpressed in COPD patients when compared to controls by MS and this underexpression was confirmed by WB. Consequently, underexpression of chorein may play an important role in the deformation of COPD RBCs. Many other interesting proteins were identified in the xiii context of COPD and, additionally, there were a considerable number of proteins described in RBC for the first time (Chapter III). To overcome the difficulty of acquiring fresh biopsies of well characterized patients, we have established in our laboratory a procedure to collect human fresh nasal epithelial cells. We have shown previously that these cells presented similar proteome of epithelial cells presented in the lower airway. Here, two different types of studies were presented using these cells: a study performed on the effects of cigarette smoke, which is the main risk factor for developing COPD (Chapter IV) and a comparative proteomic study between COPD patients and healthy individuals (Chapter V). Both were pioneer studies by investigating the proteome of fresh nasal epithelial cells from cigarette smoker subjects (Chapter IV) or COPD patients (Chapter V). In both studies a high-resolution mass analyzer, the orbitrap, was employed increasing the number of confident peptide/protein identifications. In Chapter IV, ninety-six proteins were found to be differentially expressed between the proteomes of healthy smokers and nonsmokers. These proteins were related to processes of antigen presentation, cell-to-cell signaling and interaction, cell morphology, drug metabolism, DNA repair, energy production or mitochondrial dysfunction. Although requiring further orthogonal validation, our data was consistent with previous evidences showing CD44, MUC5AC or SOD2 differential modulation in smokers due to inflammatory response pathways. In Chapter V, 89968 peptides and 1475 proteins were identified in total, of which 1173 proteins were identified by at least two peptides. We were able to confirm previous evidences that UPR is activated in COPD patients since we were able to observe overexpression in a considerable number of proteins involved in different protein complexes involved in UPR. This includes overexpression of VCP, both components of the Hsp10/Hsp60 chaperone complex (HSPD1 and HSPE1), CALR and two members of a large ER-localized multiprotein complex of at least 11 proteins, PPIB and ERP29. We also observed an increase in expression of proteins related to Nrf2-mediated oxidative stress response such as GSTP1, TXNRD1 and GSR. Additionally, we also report an increase in drug metabolism, as all significantly differentially expressed proteins related to this biofunction were overexpressed in COPD: GSTP1, GSR, AKR1C3 and ANXA2. Further validation by orthogonal methods is needed so that the activation of xiv UPR and Nrf2-mediated oxidative stress response and the increase in drug metabolism on the nasal epithelial cells of COPD patients is fully confirmed. In Chapter VI, serum collected from COPD patients was divided into 4 different groups in all different combinations of presence/absence of the two main features of COPD, chronic bronchitis and emphysema, to study their impact in the serum proteome. Due to its complex protein mixture, serum was first immunodepleted from its most abundant proteins, comprising about 94% of total protein content, before being analyzed by 1D-PAGE – LC-MS/MS (GeLC-MS/MS) in a linear ion trap mass spectrometer. This powerful strategy was able to identify as many as 2856 proteins, of which 929 were identified by two or more peptides. Plasminogen was found to be underexpressed in COPD patients that suffer simultaneously from emphysema and chronic bronchitis, while it maintained about the same expression level over the three other groups of COPD patients and this differential expression was successfully validated by ELISA. It was possible to identify other interesting proteins as TRAF3IP2, which is associated with innate immunity in response to pathogens, inflammatory signals and stress and has also been implicated in airway hyperresponsiveness or Isoform 1 of phosphatidylinositol-glycan-specific phospholipase D (GPLD1), which is GPI degrading enzyme that was described to be responsible for secretion of prostasin, which was the first of several membrane serine peptidases found to activate the epithelium-sodium channel (ENaC). Prostasin was also reported to have a critical role in regulating epithelial sodium transport in normal and pathological conditions in the lung. The work herein presented confirmed a few findings that had already been reported and more important revealed new insights into COPD disease mechanisms as well as provided new candidate biomarkers for these diseases. Further validation and integration of all data obtained into a systems biology approach will certainly contribute to increase knowledge of COPD and ultimately bringing the well being of patients.A Doença Pulmonar Obstrutiva Crónica (DPOC) é caracterizada por uma limitação obstrutiva do fluxo aéreo do exterior para os alvéolos e destes para o exterior. Esta limitação ventilatória não é completamente reversível mesmo após a administração de um broncodilatador e tende a ser progressiva. As causas que conduzem a esta limitação são um conjunto de patologias respiratórias do qual fazem parte a bronquite crónica e o enfisema. Para a obstrução do débito de ar na bronquite crónica, contribuem a inflamação das vias aéreas inferiores, a cicatrização das suas paredes, o edema do seu revestimento, o muco e o espasmo do músculo liso. A bronquite crónica manifesta-se por tosse frequente e produção aumentada de expectoração. No entanto nem todos os doentes portadores de bronquite crónica têm ou irão desenvolver uma limitação crónica do fluxo aéreo. No caso do enfisema, as paredes alveolares estão destruidas, pelo que os bronquíolos perdem o seu apoio estrutural e, por isso, entram em colapso quando expiram o ar. Por conseguinte, no enfisema a redução do fluxo de ar é permanente e de origem estrutural. Actualmente, nenhum tratamento tem a capacidade de reduzir a progressão da DPOC ou suprimir a inflamação das vias aéreas de pequeno calibre e do parênquima pulmonar. Nos dias de hoje, a DPOC é a quarta causa de morte no mundo e prevê-se que a sua prevalência e mortalidade continuem a aumentar ao longo da próxima década. Em Portugal e de acordo com um relatório divulgado pelo Observatório Nacional das Doenças Respiratórias (ONDR), cerca de 540 000 pessoas sofriam de DPOC em 2007, o que significa que 5,2% da população padece desta condição. Recentemente, um relatório divulgado pela iniciativa Burden of Obstructive Lung Disease (BOLD), revelou que a taxa de prevalência de DPOC em Portugal é de 14,2%. A espirometria é fundamental no diagnóstico e na avaliação da DPOC por ser o meio mais objectivo, padronizado e facilmente reprodutivel de medir o grau de obstrução das vias aéreas. Considera-se que existe obstrução brônquica e, portanto, DPOC, quando após a administração de um broncodilatador a relação FEV1/FVC é menor do xvi que 70% (FEV1 – Volume Expiratório Máximo no 1.º segundo; FVC – Capacidade Vital Forçada) A Proteómica tem a capacidade de provedenciar informação em larga escala e, consequentemente, de alargar o actual conhecimento da DPOC. Surpreendentemente dada a necessidade de encontrar novos biomarcadores em DPOC e do potencial da proteómica, esta tem sido negligenciada na investigação da doença até aos dias de hoje. Actualmente, existem apenas 50 publicações científicas, dos quais 14 são artigos de revisão, correspondentes a uma pesquisa no site da PubMed (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed, acedido em 23 de Junho de 2011) com o termo “COPD Proteomics”. No entanto, quando pesquisados em separado o número total de artigos com os termos “COPD” e “Proteomics” é de, aproximadamente, 30 000. Portanto, existe uma clara necessidade de produzir novos estudos de proteómica para colmatar esta lacuna e encontrar novos biomarcadores para a DPOC. Na última década, a abordagem designada por shotgun proteomics tornou-se a abordagem de eleição para a identificação e a quantificação de proteínas em estudos de larga escala. Comparando com a electroforese bidimensional (2DE), esta abordagem permite obter um maior número de identificações de péptidos e proteínas por ter uma maior sensibilidade. A estratégia de shotgun proteomics tem como base a digestão tríptica de proteínas para péptidos que vai conduzir a uma mistura complexa de péptidos que são separados através de uma ou múltiplas dimensões cromatográficas. Posteriormente sofrem uma sequenciação peptídica através de um espectómetro de massa e pesquisa automática contra uma base de dados. No presente trabalho utilizaram-se diferentes metodologias dentro da abordagem shotgun proteomics com o objectivo de gerar resultados contundentes em DPOC. Existe uma vasta gama de materiais biológicos que podem ser usados para procurar biomarcadores para esta doença. Embora a DPOC possua um componente de inflamação sistémica que é responsável por afectar outros orgãos, é no pulmão que os mecanismos que originam a falta de ar estão presentes. Assim sendo, investigar directamente o pulmão é a estratégia ideal para poder encontrar as proteínas responsáveis por esses mecanismos que noutros materiais biológicos podem não estar presentes ou, quando presentes, se encontram em concentrações diminutas conduzindo à sua não detecção. Isto significa ter acesso a tecido pulmonar que é xvii obtido através de biopsia, uma técnica extremamente invasiva. Para além de tecido pulmonar, existem outras fontes de material biológico têm sido utilizadas para o estudo da DPOC como são os casos de expectoração, lavado nasal e lavado broncoalveolar, condensado do ar expirado e sangue e seus componentes. No presente trabalho foram utilizados eritrócitos, células do epitélio nasal e soro para o estudo da doença. Foi reportado por meios de microscopia que os eritrócitos de doentes com DPOC exibiam alterações na sua morfologia. Os eritrócitos são fundamentais no transporte de oxigénio dos pulmões para as células e este transporte depende da sua capacidade para mudar rapidamente a sua forma ao navegar pelos capilares sanguíneos. Os eritrócitos desempenham um papel fundamental no combate ao stress oxidativo, que é uma característica da DPOC. Devido à sua hipotética importância para a doença, eritrócitos foram isolados a partir de sangue total de doentes com DPOC e indivíduos saudáveis. Neste trabalho (Chapter III), foi utilizada uma técnica de fraccionamento membranar em conjunto com uma marcação isotópica com 18O/16O e posterior separação através de cromatografia bidimensional (cromatografia de troca catiónica e de fase inversa). A cromatografia de fase inversa estava directamente acoplada a um espectómetro de massa de alta resolução (espectómetro de massa de ressonância de ião-ciclotrão com transformada de Fourier – FT-ICR). Foi possível quantificar um total de 4697 péptidos presentes em ambos os grupos estudados, que corresponderam a 1083 proteínas. 314 proteínas foram identificadas por dois ou mais péptidos, 46% das quais se encontram anotadas como proteínas de membrana. A proteína GOLGA4 foi identificada como estando sobreexpressa em DPOC. Esta proteína está descrita como sendo essencial para o tráfego intracelular e pela colocação à superfície da célula da proteína tumor necrosis factor-α (TNF), a principal citocina pró-inflamatória produzida e secretada por macrófagos para activação e recrutamento de células T. Foi possível também identificar a proteína VPS13A que está associada a deformações em eritrócitos circulantes, possivelmente devido a deformações na membrana. Como resultado do estudo concluiu-se que em doentes com DPOC esta proteína se encontra subexpressa, resultado que foi confirmado por Western Blot. Devido à dificuldade em adquirir amostras de biópsias pulmonares em doentes com DPOC, foi desenvolvido no nosso laboratório um procedimento para obter células do xviii epitélio nasal. Em trabalhos anteriores foi demonstrado que estas células apresentam um comportamento semelhante às células epiteliais das vias respiratórias inferiores. Dois diferentes tipos de estudo foram realizados com estas células: um estudo sobre os efeitos do fumo do tabaco, que é o principal factor de risco para o desenvolvimento de DPOC (Chapter IV) e um estudo comparativo entre doentes com DPOC e indivíduos saudáveis (Chapter V). Ambos os estudos são estudos pioneiros uma vez que o proteoma de células do epitélio nasal nunca tinha sido descrito quer em indivíduos saudáveis fumadores, quer em doentes com DPOC. No primeiro estudo, 96 proteínas foram identificadas como diferencialmente expressas entre fumadores e não fumadores saudáveis. Estas proteínas estão relacionadas com processos de apresentação de antigénios, sinalização e interacção celular, morfologia celular, metabolismo de xenobióticos, reparação de DNA, produção de energia e disfunção mitocondrial. Os resultados obtidos foram consistentes com anteriores evidências que mostram uma diferente modulação de CD44, MUC5AC ou SOD2 em fumadores devido a processos de resposta inflamatória. No segundo estudo, foram identificados um total de 89968 péptidos correspondentes a 1475 proteínas das quais 1173 foram identificadas por dois ou mais péptidos. Foi possível confirmar resultados obtidos em estudos anteriores que referiam que mecanismos de Unfolded Protein Response (UPR) se encontravam activados em doentes com DPOC, uma vez que foi observada a sobreexpressão de um númeo considerável de proteínas envolvidas em diferentes complexos de proteínas relacionados com UPR. Exemplos dessas proteínas incluem a VCP, os dois componentes do complexo Hsp10/Hsp60, a CALR e dois membros de um grande complexo composto por, pelo menos, 11 proteínas, localizado no retículo endoplasmático: PPIB e ERP29. Foi também possível observar um aumento na expressão de proteínas relacionadas com os mecanismos de resposta ao stress oxidativo mediados por Nrf2, como GSTP1, TXNRD1 e GSR. Relativamente ao estudo efectuado com o soro (Chapter VI), quatro grupos foram constituídos para estudar as diferentes combinações de presença/ausência dos dois principais componentes da doença: a bronquite crónica e o enfisema. Uma vez que o soro é uma mistura complexa de proteínas, o soro de doentes de DPOC foi primeiramente imunodepletado das suas proteínas mais abundantes, que xix representam cerca de 94% do seu conteúdo total de proteína. As amostras de soro imunodepletado foram analisadas através de 1D-PAGE – LC-MS/MS (GeLC-MS/MS). Esta poderosa estratégia permitiu a identificação de 33049 péptidos correspondentes a 2856 proteínas, das quais 929 foram identificadas por dois ou mais péptidos. Foi possível observar uma subexpressão de PLG em doentes com DPOC que sofrem simultaneamente de enfisema e bronquite crónica. Esta subexpressão foi validada através de ELISA. Outras proteínas de interesse foram encontradas diferencialmente expressas em cada um dos grupos de doentes com DPOC, entre as quais TRAF3IP2, que está associada à resposta imunitária inata a patogéneos e à resposta exacerbada das vias respiratórias. O trabalho aqui descrito confirmou evidências anteriormente reportadas e ao mesmo tempo formulou novas hipóteses para os mecanismos da doença e revelou potenciais novos biomarcadores. Embora alguns resultados necessitem de posterior validação através de técnicas ortogonais, o presente trabalho tornou possível a descoberta de proteínas e, inclusivamente, vias metabólicas que não tinham sido anteriormente associadas à DPOC. Este trabalho enfatiza também o uso de células epiteliais nasais na investigação da patogénese da doença, uma vez que pode conduzir/conduz à identificação de novos biomarcadores específicos desta doença.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, SFRH/BD/2006/31415); POCI/SAU-MMO/56163/2004; FCT/Poly-Annual Funding Program e FEDER/Saúde XXI Program (Portugal

Relatório final de estágio

Relatório de estágio do mestrado em Ensino da Educação Física nos Ensinos Básico e Secundário, apresentado à Fac. de Ciências do Desporto e Educação Fisica da Univ. de CoimbraO presente trabalho visa a elaboração do relatório final de Estágio Pedagógico, sendo realizado como parte integrante e conclusivo do Mestrado em Ensino da Educação Física dos Ensinos Básico e Secundário pela Faculdade de Ciências do Desporto e Educação Física da Universidade de Coimbra. O Estágio Pedagógico foi consumado na Escola Básica 2,3 da Mealhada durante o ano lectivo de 2010/2011, tendo como objectivo favorecer a integração e consolidação, em contexto prático, dos conhecimentos teóricos adquiridos no decorrer dos 1º e 2º semestres do Curso de Mestrado, através de uma prática docente supervisionada e orientada em situação real, com vista à profissionalização de docentes de Educação Física competentes e capazes da sua profissão. Este trabalho está dividido em cinco capítulos, sendo o primeiro uma breve introdução ao mesmo, em que é feita a contextualização do presente relatório e a apresentação das principais linhas orientadoras que serviram de base para a sua execução. Em seguida, no segundo capítulo, são relatadas as expectativas iniciais relativamente a esta etapa. No terceiro capítulo é feita uma descrição das actividades desenvolvidas ao nível do planeamento a longo, médio prazo e planificação diária, aos domínios de intervenção pedagógica do professor de Educação Física, ao sistema de avaliação aplicado, à componente ético - profissional nos vários domínios que a compõem e em seguida, no quarto capítulo, as justificações das opções tomadas relativamente a todas as áreas de intervenção. O quinto capítulo é composto, entre outros, por uma análise reflexiva das aprendizagens decorrentes da realização do referido estágio, do compromisso com as aprendizagens dos alunos, da capacidade de iniciativa e responsabilidade do professor estagiário, das dificuldades sentidas e como foram resolvidas, das conclusões chegadas referentes à formação inicial e de como é que a experiência da realização deste estágio o influenciou em termos pessoais e profissionais

prehabilitation da pessoa proposta para cirurgia ortopédica

O ato cirúrgico comporta um stress fisico e psicológico para a pessoa que se submete ao mesmo, quer esta esteja ou não em condições para o enfrentar. Posto isto, acreditamos que a pessoa proposta para uma cirurgia deve ser abordada no âmbito da sua capacitação para enfrentar as consequências do ato cirúrgico. Propomos assim o estabelecimento de um programa de prehabilitation, que se define por um processo de potenciação da capacidade funcional da pessoa no periodo pré operatório. O presente relatório pretende assim caracterizar a possibilidade de o enfermeiro especialista em enfermagem de reabilitação desenvolver intervenções autónomas no âmbito da prehabilitation. Tratando-se de um relatório de estágio pretendemos também demonstrar, através das intervenções desenvolvidas, o desenvolvimento das competências enunciadas nos Descritores de Dublin para o 2º ciclo de ensino, o desenvolvimento das competências especificas do enfermeiro especialista em enfermagem de reabilitação e das competências comuns do enfermeiro especialista, preconizadas pela Ordem dos Enfermeiros. Como teoria orientadora das intervenções realizadadas foi adotada a Teoria do Défice de Autocuidado em Enfermagem de Orem, uma vez que a capacidade de autocuidado se encontra diretamente ligada à capacidade funcional. Foi desenvolvida uma Revisão Narrativa da Literatura utilizando a metodologia PICo, com o intuito de identificar as intervenções supracitadas. O processo de investigação permitiu-nos identificar os principais objetivos do processo de prehabilitation sendo estes: aumentar a capacidade de exercício, aumentar a massa muscular, melhorar o estado nutricional e preparar a condição psicológica. Comprovou-se que o estado fisiológico basal da pessoa é um importante fator que afeta o resultado cirúrgico e que os fatores de risco modificáveis podem ser abordados antes da cirurgia. As intervenções a implementar inserem-se maioritariamente sob o exercício físico e a sua tolerância, mas também sob a melhoria da função respiratória, através de uma ação profilática com o treino dos músculos inspiratórios e com uma higiene brônquica eficaz

Marketing de eventos desportivos no âmbito das modalidades menos mediáticas. Estudo de caso do voleibol do Sport Lisboa e Benfica.

O desporto constitui uma alavanca em vários setores da vida pública, nos quais os eventos desportivos assumem um lugar de destaque, pelas suas diversas implicações económicas, sociais e organizacionais. Para corresponder a todas as expectativas de que são alvos, os eventos desportivos necessitam de estar integrados num modelo de gestão que lhes proporcione a garantia de uma ótima atuação em todas as suas áreas de intervenção, com destaque para a promoção da modalidade. A gestão de marketing de eventos desportivos constitui uma inesgotável fonte onde os gestores de eventos desportivos podem identificar, prevenir e controlar os objetivos do evento em todas as suas etapas e fases de desenvolvimento, orientando-os para a satisfação dos grupos de interesse. Neste sentido, o presente estudo tem como objetivo contribuir para a promoção e notoriedade do voleibol do Sport Lisboa e Benfica através do desenvolvimento de um plano estratégico de comunicação tendo os eventos como elemento estratégico, estudando o contributo dos eventos desportivos na promoção e valorização das modalidades menos mediáticas, expondo as suas potenciais implicações no estudo de caso em análise. Os dados recolhidos foram obtidos através da aplicação de quatro abordagens distintas: a entrevista (a especialistas e à equipa técnica de voleibol do Sport Lisboa e Benfica), o questionário in loco (a uma amostra de 100 indivíduos adeptos de voleibol do Sport Lisboa e Benfica), a observação participante e a análise documental. Os dados recolhidos foram analisados qualitativa e quantitativamente, de acordo com os objetivos do estudo. Neste sentido, foi possível concluir que os eventos desportivos da modalidade não integram uma estratégia de marketing coesa que vise a promoção e valorização da modalidade, negligenciando as ferramentas disponíveis e a relevância dos eventos desportivos perante o adepto. Por último, foi elaborado um plano integrado enumerando um conjunto de aspetos a considerar na gestão do evento desportivo, utilizando como referência o estudo de caso.Sport is an important vector in various sectors of public life, in which sports events assume a prominent place, for its various economic implications, social and organizational. To match all the target expectations, sports events need to be integrated into a management model that gives them the guarantee of a great performance in all its areas of intervention, with emphasis on the promotion of the sport modality. The marketing management of sports events is an inexhaustible source where managers of sports events can identify, prevent and control objectives of the event in all its stages and phases of development, guiding them to the satisfaction of stakeholders. In this sense, the present study aims to contribute to the promotion and awareness of volleyball Sport Lisboa e Benfica through the development of a strategic communication plan with the events as a strategic element, studying the contribution of sports events in the promotion and enhancement of procedures less media, exposing its potential implications on the case study analysis. The data collected were obtained by applying four different approaches: the interview (the experts and technical team volleyball Sport Lisboa e Benfica), questionnaire in loco (a sample of 100 individuals volleyball enthusiasts of Sport Lisboa e Benfica), participant observation and document analysis. The collected data were analyzed qualitatively and quantitatively, according to the study objectives. In this sense, it was concluded that the sports events of the sport do not integrate a cohesive marketing strategy aimed at promoting and enhancing the sport, neglecting the available tools and the relevance of sports events before the adept. Finally, a comprehensive plan was developed enumerating a set of aspects to consider in the management of sports event, using as reference the case study

phyloDB: A framework for large-scale phylogenetic analysis

phyloDB is a modular and extensible framework for large-scale phylogenetic analyses, which are essential for understanding epidemics evolution. It relies on the Neo4j graph database for data storage and processing, providing a schema and an API for representing and querying phylogenetic data. Custom algorithms are also supported, allowing to perform heavy computations directly over the data, and to store results in the database. Multiple computation results are stored as multilayer networks, promoting and facilitating comparative analyses, as well as avoiding unnecessary ab initio computations. The experimental evaluation results showcase that phyloDB is efficient and scalable with respect to both API operations and algorithms execution.Comment: arXiv admin note: text overlap with arXiv:2012.1336

Immunohistochemical expression of melan-A and tyrosinase in uveal melanoma

BACKGROUND: Melan-A and tyrosinase are new immunohistochemical markers that can be used in the diagnosis of melanocytic lesions. The aim of this study was to investigate the correlation between radiotherapy or clinicohistopathological parameters and the expression of melan-A and tyrosinase in uveal melanoma. METHODS: Thirty-six enucleated cases of uveal melanoma were studied. The formalin-fixed, paraffin-embedded specimens were immunostained with monoclonal antibodies against melan-A and tyrosinase. The samples were classified as either positive or negative. The chi-square or the Student-t tests were used to test for the correlation of the expression rates of melan-A and tyrosinase with clinico-pathological parameters. RESULTS: Melan-A and tyrosinase were positive in 33 (91.7%) and 35 (97.2%) of the specimens, respectively. There was no significant association between the expression of melan-A or tyrosinase and radiotherapy or any clinico-pathological parameter. All specimens were positive for at least one of the immunohistochemical markers. CONCLUSION: To the best of our knowledge this is the first study concluding that the expression of melanocytic markers such as melan-A and tyrosinase is not influenced by radiotherapy or any clinico-pathological parameter. Moreover, when tyrosinase and melan-A are used together, 100% of the formalin-fixed, paraffin-embedded uveal melanoma samples tested positive for one of those markers

Clinical-histopathological correlation in a case of Coats' disease

Background: Coats' disease is a non-hereditary ocular disease, with no systemic manifestation, first described by Coats in 1908. It occurs more commonly in children and has a clear male predominance. Most patients present clinically with unilateral decreased vision, strabismus or leukocoria. the most important differential diagnosis is unilateral retinoblastoma, which occurs in the same age group and has some overlapping clinical manifestations.Case presentation: A 4 year-old girl presented with a blind and painful right eye. Ocular examination revealed neovascular glaucoma, cataract and posterior synechiae. Although viewing of the fundus was impossible, computed tomography disclosed total exsudative retinal detachment in the affected eye. the eye was enucleated and subsequent histopathological evaluation confirmed the diagnosis of Coats' disease.Conclusion: General pathologists usually do not have the opportunity to receive and study specimens from patients with Coats' disease. Coats' disease is one of the most important differential diagnoses of retinoblastoma. Therefore, It is crucial for the pathologist to be familiar with the histopathological features of the former, and distinguish it from the latter.McGill Univ, Ctr Hlth, Dept Ophthalmol & Pathol, Montreal, PQ, CanadaHenry C Witelson Ocular Pathol Lab, Montreal, PQ, CanadaUniversidade Federal de São Paulo, EPM, Dept Ophthalmol, UNIFESP, São Paulo, BrazilHosp Servidores Estado, Dept Ophthalmol, Rio de Janeiro, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, EPM, Dept Ophthalmol, UNIFESP, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Developing a data fusion concept for radar and optical ground based SST station

As part of the Portuguese Space Surveillance and Tracking (SST) program, a tracking radar and a double Wide Field of View Telescope system (4.3{\deg} x 2.3{\deg}) are being installed at the Pampilhosa da Serra Space Observatory (PASO) in the centre of continental Portugal, complementing an already installed deployable optical sensor for MEO and GEO surveillance. The tracking radar will track space debris in Low Earth Orbit (LEO) up to 1000 km and at the same time the telescope will also have LEO tracking capabilities. This article intends to discuss possible ways to take advantage of having these two sensors at the same location. Using both types of sensors takes advantage of the radar measurements which give precise radial velocity and distance to the objects, while the telescope gives better sky coordinates measurements. With the installation of radar and optical sensors, PASO can extend observation time of space debris and correlate information from optical and radar provenances in real time. During twilight periods both sensors can be used simultaneously to rapidly compute new TLEs for LEO objects, eliminating the time delays involved in data exchange between sites in a large SST network. This concept will not replace the need for a SST network with sensors in multiple locations around the globe, but will provide a more complete set of measurements from a given object passage, and therefore increase the added value for initial orbit determination, or monitoring of reentry campaigns of a given location. PASO will contribute to the development of new solutions to better characterize the objects improving the overall SST capabilities and constitute a perfect site for the development and testing of new radar and optical data fusion algorithms and techniques for space debris monitoring.Comment: 3 pages, 3 figures, Draft accepted for publication at 73rd International Astronautical Congress, Paris 202

Prostate-specific membrane antigen is undetectable in choroidal neovascular membrane

BACKGROUND: Choroidal neovascular membrane (CNVM) is one of the leading causes of severe visual loss and is often associated with age-related macular degeneration (AMD). Various modalities of treatment, including photocoagulation and surgery, are being considered as options, but with limited success. Prostate-specific membrane antigen (PSMA) is a type II membrane glycoprotein expressed in benign and malignant prostatic tissues, in some non-prostatic tissues, and in the endothelium of tumor-associated neovasculature of non-prostatic neoplasm. Some studies have suggested that the expression of PSMA is restricted to endothelium from tumor-associated neovasculature and might be stimulated by some tumor-secreted angiogenic factors. However, no previous study demonstrating PSMA expression in non-related tumor neovasculature, such as CNVM, has been performed to date. Furthermore, demonstration of PSMA expression in CNVM in AMD patients could reveal a novel target for antineovascular therapy. The purpose of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of PSMA in CNVM from AMD. METHODS: Immunohistochemical analysis, with a standard avidin-biotin complex technique, was performed using an anti-PSMA mouse monoclonal antibody in 30 specimens of surgically excised CNVM from AMD patients. Antibody to an endothelial cell specific marker, factor VIII, was used to confirm the location of the endothelial cells. RESULTS: The angiogenic microvessels of the 30 cases demonstrated negative staining to PSMA while factor VIII was expressed in all cases. Seventy-five percent of the secretory-acinar epithelium of the prostatic hyperplasia specimen stained positive, confirming that the immunohistochemical technique was correctly performed. CONCLUSION: The absence of PSMA expression in non-tumoral neovasculature supports the theory, previously suggested, that endothelial cell PSMA expression may be stimulated by one or more tumor-secreted angiogenic factors. Angiogenesis is very important in neoplasia and the endothelial expression of PSMA in tumor-associated neovasculature may represent a target for antineovasculature-based therapy. The absence of PSMA expression in CNVM suggests that PSMA may not be a potential target for antineovasculature-based therapy

Radio astronomy and Space science in Azores: enhancing the Atlantic VLBI infrastructure cluster

Radio astronomy and Space Infrastructures in the Azores have a great scientific and industrial interest because they benefit from a unique geographical location in the middle of the North Atlantic allowing a vast improvement in the sky coverage. This fact obviously has a very high added value for: i) the establishment of space tracking and communications networks for the emergent global small satellite fleets ii) it is invaluable to connect the radio astronomy infrastructure networks in Africa, Europe and America continents using Very Large Baseline Interferometry (VLBI) techniques, iii) it allows excellent potential for monitoring space debris and Near Earth Objects (NEOs). There is in S. Miguel island a 32-metre SATCOM antenna that could be integrated in advanced VLBI networks and be capable of additional Deep Space Network ground support. This paper explores the space science opportunities offered by the upgrade of the S. Miguel 32-metre SATCOM antenna into a world-class infrastructure for radio astronomy and space exploration: it would enable a Deep Space Network mode and would constitute a key space facility for data production, promoting local digital infrastructure investments and the testing of cutting-edge information technologies. Its Atlantic location also enables improvements in angular resolution, provides many baseline in East-West and North-South directions connecting the emergent VLBI stations in America to Europe and Africa VLBI arrays therefore contributing for greater array imaging capabilities especially for sources or well studied fields close to or below the celestial equator, where ESO facilities, ALMA, SKA and its precursors do or will operate and observe in the coming decades.Comment: 14 pages, 7 figures, 3 tables. Accepted for Publication at Advances in Space Research, COSPAR, Elsevie