Aspectos imunopatológicos da interação do mycobacterium bovis em hospederios bovinos naturalmente infectados e coinfectados com vírus da leucose enzoótica bovina (BLV)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2013.A pesquisa racional de novos candidatos a antígenos vacinais ou imunodiagnóstico destinados ao controle da tuberculose bovina (bTB) requer o conhecimento básico da imunopatogênese da doença. No entanto, ainda há escassez de informações sobre os aspectos imunopatológicos da interação Mycobacterium bovis-hospedeiro durante a infecção natural de bovinos. Na análise de uma coorte de 349 bovinos positivos no teste tuberculínico (PPD), em 247 bovinos foi confirmada a infectação natural pelo M. bovis. Dos animais positivos para M. bovis, 92% (228/247) não apresentavam sinais sugestivos da doença, entretanto, apresentavam lesões de bTB graves e disseminadas. Além disso, a disseminação das lesões de bTB estava correlacionada positivamente com a gravidade da patologia da doença e carga bacteriana viável no tecido. Adicionalmente, o encapsulamento do granuloma foi correlacionado negativamente com o crescimento do M. bovis nos tecidos, bem como com a gravidade da patologia, sugerindo que o encapsulamento é um mecanismo dinâmico e pode ser eficaz para controlar a proliferação/disseminação micobacteriana intragranuloma durante a infecção natural. Além disso, a avaliação detalhada da resposta granulomatosa nos pulmões demonstrou que o número de células gigantes multinucleadas tipo Langhans correlaciona negativamente com a contagem micobacteriana. Em contraste, a população de neutrófilos na resposta granulomatosa tuberculosa foi associado com o aumento na proliferação do M. bovis intragranuloma. Os achados aqui apresentados sugerem que o encapsulamento e as células gigantes multinucleadas estão associados ao controle da infecção pelo M. bovis, enquanto que os neutrófilos podem servir como um biomarcador celular de proliferação bacteriana durante a infecção natural. Como prova de conceito de que a dinâmica celular incitada durante a infecção por M. bovis influencia o controle do crescimento micobacteriano, analisamos parâmetros imunopatológicos durante a co-infecção natural com o vírus da leucose enzoótica bovina (BLV), um patógeno que modula a resposta imune adaptativa. Bovinos coinfectados com M. bovis e BLV apresentaram maior carga micobacteriana intragranuloma e uma doença mais grave. Na análise histomorfológica das lesões granulomatosas, observamos uma diminuição significativa na população de linfócitos, seguido por um aumento no número de neutrófilos e menor deposição de tecido conjuntivo. Estes dados sugerem uma alteração no fluxo de células para o ambiente intragranuloma devido a defeitos linfocitários. Consistente com essa hipótese, observamos uma menor resposta de hipersensibilidade do tipo tardia (DTH) em animais com linfocitose persistente (LP-BLV+). Estas evidências indicam que a infecção pelo BLV está associada à perda da homeostase da resposta imune celular do hospedeiro e possivelmente ao aumento da suscetibilidade do hospedeiro a bTB. Em conjunto, nossos dados integram a resposta granulomatosa do hospedeiro com a carga infecciosa micobacteriana e revelam novos elementos para o entendimento da imunopatogênese da bTB que poderiam ser empregados na implementação de estratégias racionais de controle da tuberculose bovina.<br.Abstract : Rational discovery of novel immunodiagnostic and vaccine candidateantigens to control bovine tuberculosis (bTB) requires knowledge ofdisease immunopathogenesis. However, there remains a paucity ofinformation on the Mycobacterium bovis-host immune interactionsduring the natural infection. Analysis of 247 naturally tuberculinic testpositive (PPD) M. bovis-infected cattle revealed that 92% of theseanimals were found to display no clinical signs, but presenteddisseminated bTB-lesions positively correlated with both pathologyseverity score and viable tissue bacterial loads. Additionally, granulomaencapsulation negatively correlated with M. bovis growth as well aspathology severity, suggesting that encapsulation is an effectivemechanism to control bacterial proliferation during natural infection.Moreover, multinucleated giant cell numbers were found to negativelycorrelate with bacterial counts in lung granulomas. In contrast,neutrophil numbers in the granuloma were associated with increased M.bovis proliferation. To better understand the role of the granulomatousresponse for the control of mycobacterial growth during infection by M.bovis, immunopathological parameters during co-infection with naturalbovine leukemia virus (BLV), a pathogen that modulates the adaptiveimmune response, were analyzed. Cattle co-infected with M. bovis andBLV had higher mycobacterial intragranuloma load and more severedisease. In the histomorphological analysis of granulomatous lesions,we observed a significant decrease in the lymphocyte populationfollowed by an increase in neutrophils and a reduction in connectivetissue deposition. These data suggest an alteration in the cell flow for theintragranuloma environment due to defective lymphocytes. Consistentwith this hypothesis, we observed a lower delayed-type hypersensitivity(DTH) response in animals with persistent lymphocytosis (LP-BLV+).This evidence indicate that BLV infection is associated with a loss ofhomeostasis of the host cellular immune response and possiblyincreased susceptibility of the host to bTB. Together, our data integratethe host granulomatous response with the mycobacterial infectious loadand reveal new elements for understanding the immunopathogenesis ofbTB which can be used in the implementation of rational strategies tocontrol bovine tuberculosis

ASPECTOS GERAIS SOBRE A INFECÇÃO POR HAEMOPHILUS PARASUIS EM SUÍNOS – REVISÃO

The Haemophilus parasuis is a Gram-negative, nonhemolytic, nonmotile and nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) dependent bacterium, commonly found in the nasal cavity of healthy swine. However, it is also the cause of Glässer’s disease, characterized by polyserositis, polyarthritis and meningitis in young pigs. This review highlights general aspects about the infection, including etiology, epidemiology, pathogenesis, clinical signs, lesions, diagnosis, prevention and control of the disesase.O Haemophilus parasuis é uma bactéria gram negativa, não hemolítica, imóvel e nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD) dependente, comumente encontrada na cavidade nasal de suínos saudáveis. Entretanto, também é o agente causador da Doença de Glässer, manifestada por poliserosite, poliartrite e meningite em suínos jovens. Esta revisão enfoca aspectos gerais sobre a infecção, abrangendo desde etiologia, epidemiologia, patogenia, sinais clínicos, lesões, diagnóstico, prevenção e controle da enfermidade

METABOLISMO OXIDATIVO E ALTERAÇÕES HEMATOBIOQUÍMICAS EM EQUINOS COM LEPTOSPIROSE SUBCLÍNICA

A leptospirose é uma doença infectocontagiosa de caráter zoonótico, que afeta animais domésticos e silvestres, com grande importância para a saúde pública mundial. Nos animais, especialmente equinos, a doença se apresenta frequentemente de forma assintomática, entretanto, são considerados uma fonte de infecção para humanos e outras espécies. O presente estudo objetivou avaliar padrões do metabolismo oxidativo eritrocitário (glutationa e malondialdeído), fragilidade osmótica eritrocitária e hematobioquímicos em equinos com leptospirose subclínica para auxiliar no diagnóstico e prognóstico da infecção.  Para tal foram avaliados 207 equinos, positivos (n=94) e negativos (n= 113) para leptospirose. Os equinos com leptospirose apresentaram mais frequentemente anticorpos anti-leptospira dos sorogrupos L. Bratislava 37,23% (35/94), L. Icterohaemorrhagiae 23,4% (22/94) e L. Grippotyphosa 11,7% (11/94). As principais alterações observadas foram nos valores de hemoglobina, VGM, eosinófilos, glutationa reduzida eritrocitária, albumina e glicose (P<0,05). Estas alterações evidenciam que a leptospirose em equinos pode ser uma doença silenciosa, de difícil diagnóstico e prognóstico. Entretanto, as medidas de diagnóstico e vigilância devem ser ativas, pois os animais podem representar um reservatório para o agente e uma fonte potencial de infecção para seres humanos

Tétano em um canino: aspectos clínicos e terapêuticos

O tétano é uma doença grave e rara em pequenos animais, de caráter agudo e mediada pela ação da neurotoxina tetanospasmina, proveniente do bacilo Clostridium tetani. Neste relato descreve-se um caso de tétano em um canino, com ênfase em seus aspectos clínicos e terapêuticos, além da sua recuperação clínica. Foi atendido no Hospital Veterinário da Universidade de Passo Fundo, um canino, fêmea, da raça Pitbull, com cinco meses, em status epilepticus. Após a estabilização da paciente, constataram-se animal em posição de cavalete, com paralisia espástica generalizada, risus sardonicus, trismo, cauda e orelhas eretas e dificuldade em expandir o tórax. O diagnóstico presuntivo de tétano foi firmado a partir da anamnese, sinais clínicos e achados laboratoriais. O tratamento suporte estabelecido incluiu reposição hidroeletrolítica, soro antitetânico, antibioticoterapia, analgesia, fármacos miorrelaxantes e anticonvulsivantes. O manejo intensivo da paciente foi realizado com sondagem uretral e nasoesofágica, trocas de decúbito a cada duas horas e diminuição de estímulos ambientais. A fisioterapia e a acupuntura também foram utilizadas para complementar o tratamento e acelerar a recuperação. A paciente recebeu alta médica um mês após o início do tratamento, apresentando evolução satisfatória. No presente caso, o exame clínico em associação aos sinais clínicos característicos da doença, acrescidos da anamnese minuciosa foram fundamentais ao diagnóstico presuntivo de tétano. Além disso, o manejo intensivo, o tratamento medicamentoso, assim como a realização de fisioterapia e acupuntura, possibilitaram a evolução do quadro clínico à cura. Palavras-chaves: Clostridium tetani, diagnóstico; paralisia espástica; tetanospasmina; tratamento

Epidemiology of the enteric bacterial diseases in swine in the different age groups and phenotyoic characterization of isolated of Escheria coli

To know the enteropathogenic bacteria present in the production system of swine can be an important tool to understand the sanitary challenges and to establish with success sanitary programs. The objective of this study was to diagnose effectivy enteropathogenic (s) bacterial (s) associate the pathogenese of the enteritis in newborn piglets, postweaning, growing and finish and to do the phenotypic characterization and of resistance the antimicrobials of the isolated of Escherichia coli. The main species of diagnosed bacterial enteropatógenos were Escherichia coli, Clostridium sp., Salmonella sp, Brachyspira hyodysenteriae, Brachyspira pilosicoli and Lawsonia intracellularis. The E. coli it was the bacteria more frequently isolated as primary agent or in an associated, of the diarrhea between second and 81st days of life of the pigs. Analyze the phenotypic of isolated of E. coli, considering the age group, its revealed that the serotypes of E. coli potentially pathogenic, prevalence more until the third week of age, were F5 (K99) 29%, F41 10%, F42 11% and F6 (987P) 23%, already in pigs with more than 21 days, stumps prevailed with fimbrials F4 (K88) 27%. Using the test of CIM, the largest resistance indexes were observed for oxytetracycline (84%), gentamicin (76%), and smaller resistance index for ceftiofur (37%) and enrofloxacin (39%). In the resistance test the antimicrobials, for disk - diffusion, the samples of Salmonella sp., they presented high sensibility to the gentamicin (3,5%) amoxicillin (4,8%) and larger resistance the oxytetracycline (77%), tetracycline (42,1%)Conhecer as bactérias enteropatogênicas presentes no sistema de produção de suínos é uma importante ferramenta para compreender os desafios sanitários e estabelecer com sucesso programas sanitários voltados ao tratamento, controle e profilaxia. O objetivo deste estudo foi diagnosticar efetivamente o (s) enteropatógeno (s) bacteriano (s) associado (s) a patogênese da enterite nas fases de maternidade, creche, recria e terminação e fazer a caracterização fenotipica e de resistência a antimicrobianos dos isolados de Escherichia coli. Os principais gêneros / espécies de enteropatógenos bacterianos diagnosticados foram Escherichia coli, Clostridium sp., Salmonella sp, Brachyspira hyodysenteriae, Brachyspira pilosicoli e Lawsonia intracellularis. A E. coli foi o enteropatógeno mais frequentemente isolado como agente primário ou de forma associada, dos quadros clínicos de diarréia entre segundo e 81º dias de vida dos leitões. A análise fenotípica dos isolados de E. coli, considerando a faixa etária, revelou que os sorotipos de E. coli potencialmente patogênicos, mais prevalentes até a terceira semana de idade, foram F5/K99 29%, F41 10%, F42 11% e F6/987P 23%, já em leitões com mais de 21 dias, predominaram cepas com fimbrias F4/K88 27%. Utilizando o teste da concentração inibitória mínima (CIM), os maiores índices de resistência foram observados para oxitetraciclina (84%), gentamicina (76,0 %), e menor índice de resistência para ceftiofur (37%) e enrofloxacina (39 %). No teste de resistência a antimicrobianos, por disco difusão, as amostras de Salmonella sp., apresentaram alta sensibilidade à gentamicina (3,5%) amoxicilina (4,8%) e maior resistência a oxitetraciclina (77%), tetraciclina (42,1%

Avaliação in vitro do papel do zinco no mecanismo de adesão de Escherichia coli em suínos

Os distúrbios gastrintestinais e toxi-infeciosos causadas por Escherichia coli são uma importante causa de mortalidade, atrasos no crescimento e decréscimo na taxa de conversão alimentar em leitões no período pós-desmame, gerando perdas econômicas severas. Dentre as estratégias de combate a estas formas de apresentação estão à utilização de antimicrobianos, probióticos e aditivos na dieta, como o óxido de zinco. O zinco tem efeito promotor de crescimento, diminui a incidência de diarréia e mortalidade de leitões desmamados. O objetivo da realização desse trabalho foi verificar, in vitro, o papel de diferentes concentrações de zinco na adesão da E. coli aos enterócitos de suínos. O ensaio avaliou a eficácia de quatro suspensões: zero (controle negativo), 1200, 2400 e 3000 ppm de óxido de zinco. O teste de adesão fundamentou-se na exposição de enterócitos suínos, a uma cepa patogênica de E. coli e ao zinco, simulando o que ocorreria in vivo. Nas condições in vitro em que foi desenvolvido o experimento, o zinco não foi capaz de inibir a adesão de E.coli aos enterócitos em nenhuma das concentrações utilizadas

Características clínicas e anatomo-histopatologicas da infecção experimental mista por Orthoreovirus aviario e Mycoplasma synoviae em frangos de corte

A artrite infecciosa em frangos de corte representa um problema sanitário e econômico de grande impacto, provocando perdas de produtividade e nos processos de produção e industrialização. Os principais agentes etiológicos associados aos casos de artrites e tenossinovites infecciosas em aves são Mycoplasma synoviae (MS) e Orthoreovirus aviario (ARV). Esse trabalho propôs investigar as alterações anatomohistopatológicas causadas pela infecção experimental concomitante por Mycoplasma synoviae e Orthoreovirus aviario em frangos de corte e confirmar a presença dos agentes através das técnicas de PCR e imuno-luorescência indireta (RIFI). Para tal foram utilizados 16 frangos de corte, alojados em cama, com fornecimento de ração e água ad libitum. A infecção experimental foi realizada utilizando amostras atenuadas de MS e de ARV. Clinicamente as aves inoculadas apresentaram apatia e edemaciação da região da articulação tíbiotársica. Após 30 dias procedeu-se a eutanásia e a necropsia das aves. Na análise histopatológica constatou-se o efeito da infecção mista com MS e ARV sobre os diferentes órgãos/tecidos. Todos os animais apresentaram quadro de artrite e tenossinovite caracterizado pela presença de infiltrado inflamatório linfohistiocitário difuso, com acúmulo de heterófilos na cápsula articular/membrana sinovial e tendão flexor digital. Além disso, foi possível observar infiltrado inflamatório na traquéia, nos pulmões e sacos aéreos, no fígado, baço, pericárdio e proventrículo. A utilização da RIFI foi necessária para visualizar a presença de ambos os agentes nas articulações, identificando a presença de antígenos do ARV e do MS. A técnica de PCR constatou positividade do MS na traquéia, pulmões/sacos aéreos, cápsula articular/membrana sinovial e liquido sinovial. Já para o ARV a PCR foi positiva em amostras de fígado, baço, cápsula articular/membrana sinovial e tendão flexor digital. Com base nas lesões observadas e nos dados da literatura, sugere-se a ação concomitante por MS e ARV nos diferentes tecidos