Colagenase para aplicações biotecnológicas

Mestrado em Biologia Molecular e CelularCollagen is an abundant protein in all animals and is the main component of numerous tissues, having also structural and regulatory roles. Collagen can be found in various numerous locations presenting specific functions, such as the establishment of the cellular shape, its strength and structural integrity, and is also involved in tissue maintenance. Moreover, collagen has an important role in the formation of the extracellular matrix of the connective tissue, by contributing to its physical properties. Collagenases are enzymes, more specifically metalloproteinases, with a zincbinding domain. These enzymes are able to digest the triple helical region of native collagen, cleaving its peptide bonds. In recent years, bacterial collagenases have been gaining interest for industry proposes, by offering a variety of applications. In the clinical area, collagenases are used as therapy for diseases associated with excessive deposition of collagen, as for example, in patients suffering from Dupuytren’s disease. The enzymes can also be used to help the debridement of wounds and burns, and also for cancer gene therapy applications. The objective of this work is the comparison and optimization of two methods of recombinant collagenase purification, evaluating which method provides the most cost-effective purification. For that purpose, a simple and high resolution method for purification of histidine-tagged recombinant protein was used. Immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) with a Ni Sepharose 6 Fast Flow, through a column HisTrap FF 1ml or in batch were used. Results obtained through protein quantification by densitometry technique, showed that the purification using a column has higher yield. By zimography was possible determine the gelagenolytic activity of ColAh, and was also possible quantify the collagenolytic activity of ColAh, using a synthetic peptide N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGA). Obtained results also showed that the obtained recombinant protein is stable to storage over time and when submitted to different temperatures (room temperature; 4°C; -20°C).O colagénio é uma proteína abundante em todos os animais, exercendo funções estruturais e reguladoras. Está presente em diversos locais e executa funções específicas, nomeadamente na manutenção dos tecidos e na conservação da sua estrutura celular, da sua força e integridade estrutural. Possui uma elevada importância na formação da matriz extracelular do tecido conjuntivo ao contribuir para as suas propriedades físicas. Colagenases são enzimas, mais especificamente metaloproteinases, com um característico domínio de ligação a zinco característico Atualmente, as colagenases bacterianas possuem diversas aplicações industriais. Por exemplo, na clínica são utilizadas no tratamento de doenças associadas a acumulação excessiva de colagénio, como a Doença de Dupuytren, no desbridamento de queimaduras e feridas e também em terapia génica oncológica. O objetivo deste trabalho é a comparação e a otimização de dois métodos de purificação, para avaliar qual dos processos será mais rentável. Para tal, foi utilizado um método de purificação de proteínas recombinantes, que foram marcadas com histidinas, utilizando um método de cromatografia de afinidade com ião metálico imobilizado (IMAC). Para comparação, a purificação foi estabelecida utilizando um método em coluna, HisTrap FF e um método em batch. Os resultados obtidos através da quantificação de proteína, usando técnica de quantificação por densitometria demonstraram que a purificação quando realizada por coluna, apresenta maior rendimento. Através de ensaios realizados posteriormente foi possível demonstrar a atividade da ColAh por zimografia de gelatina, e quantificar a atividade colagenolitica contra o péptido sintético N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA). Os resultados também demonstram que a proteína recombinante apresentou estabilidade, quando armazenada ao longo do tempo, a diferentes temperaturas (temperatura ambiente; 4°C; -20°C)

Potenciais aplicações biotecnológicas de microalgas

Orientadora: Profa. Dra. Michele Rigon SpierTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos. Defesa : Curitiba, 10/05/2019Inclui referências: p. 115-134Resumo: As microalgas são organismos fotossintetizantes presentes no solo e em ambientes marinhos e de água doce. Neste grupo estima-se que existam entre 200.000 a 1.000.000 de espécies, no entanto, apenas algumas são utilizadas industrialmente. As microalgas apresentam baixo custo de cultivo quando comparados a outros organismos e apresentam capacidade de produção de diferentes compostos bioativos, pigmentos, lipídios e enzimas (Capítulo 1). Considerando a demanda dos consumidores e da indústria por produtos sustentáveis e naturais, o presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial biotecnológico de diferentes gêneros de microalgas para a produção da enzima ?-galactosidase, avaliar da atividade antibacteriana e antioxidante de extratos e lipídios e caracterizar e otimizar a produção dos biocompostos. No Capítulo 2 foi realizado o cultivo mixotrófico de oito espécies de microalgas utilizando lactose como indutora da produção de ?-galactosidase. A produção intra e extracelular da enzima foi avaliada durante o cultivo. Dunaliella tertiolecta, Chlorella minutissima e Nannochloropsis oculata foram capazes de crescer sob condições mixotróficas. D. tertiolecta apresentou a maior atividade enzimática (33,5 U L? 1) no 11° dia de cultivo e maior rendimento de produto em relação ao substrato. Foram empregadas duas técnicas de rompimento celular, sendo que a sonicação apresentou os melhores resultados. No Capítulo 3 foi avaliada a atividade antibacteriana, antioxidante e a caracterização de extratos aquosos, etanólicos e hexânicos da biomassa microalgal. Os extratos aquosos não apresentaram atividade antibacteriana. Os extratos etanólicos e hexânicos de C. vulgaris, D. tertiolecta, N. oculata e Tetraselmis gracilis apresentaram atividade no ensaio de difusão em poços e os valores de CIM variaram de 0,40 a 9,55 mg mL-1. Quarenta compostos foram identificados por CG-EM nos extratos etanólicos e hexânico, sendo o fitol, ácidos graxos e fitoesterois encontrados em maior proporção. O extrato etanólico de T. gracilis apresentou a maior capacidade antioxidante no ensaio ABTS+o e o extrato de D. tertiolecta no ensaio HClO.Observou-se correlação significativa positiva entre a atividade antioxidante e o teor de fenólicos totais dos extratos etanólicos das espécies estudadas. No Capítulo 4 foi realizada a extração dos lipídios da biomassa seca, transesterificação e avaliação das atividades antibacteriana, antioxidante, quantificação de fenólicos e análise do perfil lipídico. As espécies C. vulgaris e D. tertiolecta apresentaram altos níveis de ácidos graxos poliinsaturados e N. oculata apresentou o maior teor de ácido palmítico, que são ácidos graxos reconhecidos por seus efeitos antimicrobianos. O extrato de C. vulgaris apresentou a maior capacidade antioxidante (ensaios ABTS+o e HClO) em comparação aos demais extratos lipídicos. No Capitulo 5 foi realizada a otimização da produção de biomassa da microalga T. gracilis, otimização das condições de extração, análise do perfil de ácidos graxos e atividade antibacteriana. Os valores ótimos estimados para maximizar a produção de biomassa foram de 132,56 mg L-1 de NaNO3, 25,14 mg L-1 de NaH2PO4.2H2O. e 19,23 g L-1 de NaCl. O tempo de extração não teve efeito significativo e a proporção de solvente 3:1 (clorofórmio:metanol) e temperatura de extração de 60°C apresentaram os maiores rendimentos de extração. Todos os extratos testados apresentaram atividade antibacteriana frente aos patógenos em concentrações variando de 0,20 a 1,45 mg mL-1.Abstract: Microalgae are photosynthetic organisms present in soil, marine and freshwater habitats. In this group it is estimated that 200,000 to 1,000,000 species exist, however, only a few are used industrially. The microalgae present low cost of cultivation when compared to other organisms and can produce a great variety of bioactive compounds as pigments, lipids and enzymes (Chapter 1). Regarding consumer and industry demand for sustainable and natural products, the present study aimed to evaluate the biotechnological potential of different genera of microalgae for the production of the ?-galactosidase enzyme, to evaluate the antibacterial and antioxidant activity of extracts and lipids and to characterize and optimize the production of biocompounds. In Chapter 2, the mixotrophic cultutivation of eight species of microalgae using lactose as carbon source was carried out. Intracellular and extracellular production of the enzyme was evaluated during cultutivation. Dunaliella tertiolecta, Chlorella minutissima and Nannochloropsis oculata were able to grow under mixotrophic conditions. D. tertiolecta presented the highest enzymatic activity (33.5 U L -1) on the 11th day of cultivation and higher yield in relation to the substrate. Two techniques of cell disruption were employed, and sonication presented the best results. In Chapter 3 the antibacterial, antioxidant and characterization of aqueous, ethanolic and hexane extracts of the microalgal biomass were evaluated. The aqueous extracts did not present antibacterial activity. Ethanolic and hexane extracts of C. vulgaris, D. tertiolecta, N. oculata and Tetraselmis gracilis showed activity in agar well diffusion assay and MIC values ranged from 0.40 to 9.55 mg mL -1. Forty compounds were identified by GC-MS in ethanolic and hexane extracts, with phytol, fatty acids and phytosterols being found in greater proportion. The ethanolic extract of T. gracilis presented the highest antioxidant capacity in the ABTS+o assay and the D. tertiolecta extract in the HClO assay. A significant positive correlation was observed between the antioxidant activity and the total phenolic content of the ethanolic extracts of the studied species. In Chapter 4, lipids were extracted from dry biomass, transesterificated and evaluated of antibacterial, antioxidant activity, phenolic quantification and lipid profile analysis. The species C. vulgaris and D. tertiolecta presented high levels of polyunsaturated fatty acids (PUFA) and N. oculata presented the highest content of palmitic acid (42.85%), which are recognized for their antimicrobial effects. The extract of C. vulgaris showed the highest antioxidant capacity (ABTS +o and HClO) compared to the other lipid extracts. In Chapter 5 the optimization of the lipid productivity of T. gracilis, optimization of extraction conditions and analysis of the fatty acid profile and antibacterial activity were performed. The optimum values estimated to maximize biomass productivity were 132.56 mg L-1 of NaNO3, 25.14 mg L-1 of NaH2PO4.2H2O and 19,23 g L-1 of NaCl. The extraction time had no significant effect and the solvent ratio 3:1 (chloroform: methanol) and the extraction temperature of 60 °C showed the highest extraction yields. All extracts tested showed antibacterial activity against pathogens in concentrations ranging from 0.20 to 1.45 mg mL-1

Esponjas marinhas : potenciais aplicações biotecnológicas

O Oceano tem se revelado prolífico em organismos com propriedades únicas em termos de aplicação biotecnológica. Entre estes, as esponjas marinhas estão representadas em cerca de 45% de todos os produtos naturais extraídos de organismos marinhos. Este trabalho apresenta dois casos de estudo de potenciais aplicações biotecnológicas encontradas em esponjas marinhas: a potente actividade anti-VIH observada na espécie Erylus discophorus e a bioacumulação de níquel no género Cliona. O primeiro caso poderá ter evidente aplicação na indústria farmacêutica; o segundo poderá eventualmente vir a demonstrar-se útil em termos de bioremediação. O trabalho desenvolvido no capítulo 2, Erylus discophorus e inibição do VIH-1, tinha como objectivos principais a identificação da(s) molécula(s) responsável(eis) por esta inibição, o seu isolamento e elucidação da sua estrutura e mecanismo de inibição. Embora estes objectivos não tenham sido atingidos, devido à impossibilidade de isolamento de uma molécula bioactiva sem consequente perda de actividade, observouse que esta actividade anti-viral é específica para a espécie Erylus discophorus, independentemente da sua localização geográfica. Não se exclui a possibilidade de um efeito sinergístico de duas ou mais moléculas. No entanto, determinou-se que a principal molécula responsável pela actividade anti-VIH será de natureza glicídica ou glicoproteíca, extremamente hidrofílica, com uma massa molecular acima de 2000 kDa e carga aniónica a pH 6. No capítulo 3, Família Clionidae e bioacumulação de níquel, os objectivos principais focaram o estudo da reprodutibilidade dos elevados teores de níquel, a elucidação do mecanismo e esclarecimento da origem biológica da bioacumulação. Os resultados apontam para a existência de uma bioacumulação de níquel específica para o “complexo Cliona viridis”, independente da localização geográfica, da contaminação ambiental e de outras variações sazonais. Estas esponjas acumulam níquel em teores médios de 1300 ppm, na sua forma iónica livre, Ni2+, ou associado a uma molécula de massa molecular inferior a 3000 Da. Propõe-se um possível envolvimento de um dinoflagelado do género Symbiodinium no mecanismo de bioacumulaçãoThe Ocean is prolific in organisms with unique properties in terms of biotechnological applications. Amongst them, marine sponges are represented in around 45% of all natural products extracted from marine organisms. This work presents two case studies of the potential biotechnological applications of marine sponges: the strong anti-HIV activity observed in the species Erylus discophorus and the nickel bioaccumulation in the genus Cliona. The first case could have evident application in the pharmaceutical industry; the latter can eventually become useful in bioremediation. The work developed in chapter 2, Erylus discophorus and HIV-1 inhibition, had as main goals the identification of the molecule(s) responsible for this inhibition, its isolation, structural and mechanistic characterization. Although these objectives were not achieved, mainly due to the loss of activity during fractionation, we observed that this antiviral activity is specific for the species Erylus discophorus, regardless of its geographical localization. We were not able to exclude the possibility of a synergistic effect of two or more molecules. However, we have determined that the principal molecule responsible for the anti-HIV activity is either a glycid or a glycoprotein, extremely hidrophilic, with a molecular weight over 2000 kDa and anionic at pH 6. In chapter 3, family Clionidae and nickel bioaccumulation, the main goals focused on the study of the reproducibility of the high nickel contents, the mechanism elucidation and biological origin of the bioaccumulation. Results indicate the existence of a nickel bioaccumulation specific for the “Cliona viridis complex”, independent of geographic localization, environmental contamination and other seasonal variations. These sponges accumulate nickel in an average concentration of 1300 ppm, in its free ionic form, Ni2+, or associated to a low molecular weight molecule (less than 3000 Da). The possible role of a Symbiodinium spp. in the bioaccumulation mechanism is hypothesized

Indução de embriogênese somática em calos das tangerineiras Cleópatra e Sunki Tropical.

A embriogênese somática em citros tem sido observada a partir de calos embriogênicos, cuja produção pode ocorrer a partir de nucelos, óvulos abortados, óvulos não desenvolvidos, dentre outros explantes. Esta técnica visa o desenvolvimento de aplicações biotecnológicas potenciais, tais como produção de sementes sintéticas, micropropagação e transformação genética, além de maximizar a regeneração de plantas

Avaliação funcional de fungos da região do Parque Nacional do Iguaçu - Paraná

Anais do V Encontro de Iniciação Científica e I Encontro Anual de Iniciação ao Desenvolvimento Tecnológico e Inovação – EICTI 2016 - 05 e 07 de outubro de 2016 – Sessão BiológicasNo estudo da diversidade estrutural e funcional de fungos do solo com potencial para a degradação vegetal a atividade de enzimas têm sido cada vez mais usada como marcadores funcionais. Além de marcadores a tecnologia enzimática é hoje um dos campos mais promissores na síntese de compostos biocatalíticos de alto valor agregado. Neste sentido, enzimas fúngicas vêm ganhando destaque e dentre a gama de enzimas, a lacase, uma enzima do grupo das ligninolíticas, ganha destaque por apresentar diversas aplicações biotecnológicas e é uma das principais enzimas envolvidas na degradação da lignina, segundo componente mais abundante no material vegetal em decomposição (Baldrian, 2006). O Parque Nacional do Iguaçu (PNI) no estado do Paraná tem sido alvo de trabalhos de pesquisas há vários anos, sobretudo de conservação ambiental. No entanto, trabalhos sobre a microbiota do solo e sua importância ecológica são escassos na literatura ou mesmo inexistentes. Além disto, por conta da grande presença de ferro e outros minerais nos solos do PNI (Schobbenhaus et al, 2002), o estudo de sua microbiota merece destaque. Pode-se esperar, por exemplo, que enzimas fúngicas possam possivelmente apresentar alguma adaptação natural proporcionando vantagens biotecnológicas em relação a enzimas de micro- organismos já descritos. Neste cenário, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade de enzima ligninolíticas de fungos isolados do solo do PNI visando o conhecimento da atividade funcional e o impacto do estado de conservação do ambiente frente a atividade. Em adição, a seleção de fungos com atividade enzimática permitirá avaliações futuras de possíveis aplicações biotecnológicas

Leveduras killer: biologia, ecologia e aplicações biotecnológicas

The killer activity of yeasts has been observed in more than 90 species and many killer toxins (mycocins) produced by strains belonging to different genera have been extensively studied. Many studies have highlighted the biotechnological applications of the killer phenomenon: (i) control of yeasts contaminants of process fermentations; (ii) taxonomy of yeasts of clinical and industry interest; and (iii) applications in medicine like new antimycotic agents. This review deals with the potential biotechnological applications of the killer system of yeasts emphasizing the studies that have been developed until now.A atividade killer de leveduras tem sido observada em mais de 90 espécies e diversas toxinas killer (micocinas) produzidas por linhagens pertencentes a diversos gêneros têm sido extensivamente estudadas. Muitos estudos têm destacado as aplicações biotecnológicas do fenômeno killer: (i) controle de leveduras contaminantes de processos fermentativos; (ii) taxonomia e biotipagem de leveduras de interesse clínico e industrial; e (iii) aplicações biomédicas como novos agentes antimicóticos. Este trabalho de revisão aborda as potenciais aplicações do sistema killer de leveduras com base em estudos até o momento realizados, demonstrando o potencial biotecnológico dessas leveduras

Estudo de hidrolases glicosídicas bacterianas para aplicações biotecnológicas : bioprospecção, produção e imobilização

Orientadores: Hélia Harumi Sato, Roberto RullerTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de AlimentosResumo: A biomassa lignocelulósica é um importante recurso renovável que está prontamente disponível, sendo uma fonte de matéria-prima com alto potencial biotecnológico. Os polissacarídeos complexos que compõem lignocelulose podem ser convertidos em monossacarídeos fermentescíveis, com grande aplicabilidade em diversos bioprocessos industriais. A degradação dos materiais lignocelulósicos pode ser realizada por uma diversidade de vias enzimáticas complexas, onde é requerido um número considerável de enzimas ativas sobre carboidratos. Entre elas, as famílias das celulases e hemicelulases, além de atuarem na hidrólise dos materiais lignocelulósicos, possuem um uso versátil em setores industriais, tais como, nas áreas alimentícia, bebidas e de biocombustíveis. A tese teve como principais objetivos o delineamento de estratégias para a produção de enzimas e coquetéis enzimáticos eficientes para o uso na hidrólise da biomassa vegetal e, a aplicação de técnicas de imobilização para ampliar a utilização de enzimas em escala comercial. Inicialmente, a bioprospecção de novos micro-organismos secretores de enzimas atuantes na biomassa lignocelulósica foi realizada, e dentre as oitenta linhagens de Streptomyces testadas, duas linhagens (F1 e F7) se destacaram por apresentarem elevadas atividades celulolíticas e hemicelulolíticas. Uma abordagem genômica dessas linhagens possibilitou a identificação de 85 hidrolases glicosídicas (GHs) distribuídas em 33 famílias diferentes na linhagem F1, e 100 GHs dispostas em 44 famílias na linhagem F7. Além disso, os dados genômicos das linhagens F1 e F7 também indicaram a presença de genes relacionados à degradação da lignina. Ferramentas estatísticas também foram aplicadas e possibilitaram a ampliação da produção de GHs pela linhagem F1. Com a otimização, elevadas concentrações de GHs foram alcançadas com meio nutriente adicionado de 16,4 g L-1 de farelo de trigo e 10,0 g L-1 de caseína, onde se obteve 9,27 U mL -1 de xilanase e 0,22 U mL -1 de celulase. Para confirmar a diversidade de GHs expressas pela linhagem F1, uma análise por espectrometria de massa foi realizada e observou-se que quanto maior a complexidade da fonte de carbono utilizada, maior foi a gama de proteínas expressas, incluindo vários tipos de celulases e hemicelulases. A eficiência do extrato enzimático produzido pela linhagem F1 foi estudada para a sacarificação da biomassa vegetal e possibilitou um aumento significativo na liberação de açúcares quando adicionado ao extrato celulolítico comercial, indicando que as enzimas secretadas pela Streptomyces sp. F1 podem ser aplicadas para o melhoramento dos atuais coquetéis comerciais. Foi estudada também a criação de métodos de imobilização de enzimas em condições neutras de pH. Os novos suportes produzidos com a agarose foram utilizados para a imobilização de enzimas monoméricas e multiméricas de grande importância biotecnológica. Um estudo mais detalhado explorando os novos suportes e o uso de técnicas de pós-imobilização foi também proposto. O processo desenvolvido aplicando o polímero polietilenimina (PEI) possibilitou a formação de um excelente sistema para imobilizar e estabilizar a ?-glicosidase obtida de Exiguobacterium antarcticum. A ?-glicosidase imobilizada apresentou uma melhora em suas características, incluindo estabilidade térmica e de armazenamento. Além disso, a ?-glicosidase manteve sua atividade elevada mesmo após vários ciclos de hidrólise com celobiose como substratoAbstract: Lignocellulosic biomass is an important renewable resource that is readily available, being a source of raw material with high biotechnological potential. The complex polysaccharides that compose lignocellulose can be converted into fermentable monosaccharides, with great applicability in several industrial bioprocesses. The degradation of lignocellulosic materials can be accomplished by a variety of complex enzymatic pathways, where a considerable number of carbohydrate active enzymes are required. Among them, the families of cellulases and hemicellulases, besides acting in the hydrolysis of lignocellulosic materials, have a versatile use in industrial sectors, such as in food, beverages and biofuels. The main aims of this thesis were the design of efficient strategies for the production of enzymes and enzymatic cocktails for use in plant biomass hydrolysis and the application of immobilization techniques to increase the use of enzymes in a commercial scale. Initially, bioprospection of new enzyme secreting microorganisms active in lignocellulosic biomass was performed, and among the eighty Streptomyces strains tested, two strains (F1 and F7) were distinguished by their high cellulolytic and hemicellulolytic activities. A genomic approach of these strains allowed the identification of 85 glycoside hydrolases (GHs) distributed in 33 different families the strain F1, and 100 GHs arranged in 44 families the strain F7. In addition, the genomic data from strains F1 and F7 also indicated the presence of genes related to lignin degradation. Statistical tools were also applied and allowed the increase in GH production by strain F1. With the optimization, high concentrations of GHs were achieved with a nutrient medium containing 16.4 g L-1 of wheat bran and 10.0 g L-1 of casein, where 9.27 U mL-1 of xylanase and 0.22 U mL-1 of cellulase were obtained. To confirm the diversity of GHs expressed by the strain F1, an analysis using mass spectrometry technique was performed and it was observed that the greater the complexity of the carbon source used, the greater the range of proteins secreted, including several types of cellulases and hemicellulases. The efficiency of the enzymatic extract produced with strain F1 was studied for the saccharification of plant biomass and allowed a significant increase in sugar release when added to the commercial cellulolytic extract, indicating that the enzymes expressed by Streptomyces sp. F1 can be applied for the improvement of the current commercial cocktails. The creation of enzyme immobilization methods under neutral conditions of pH was also study. The new agarose supports were used for the immobilization of monomeric and multimeric enzymes of great industrial and biotechnological importance. A more detailed study exploring the new supports and the use of post-immobilization techniques with polymers and small molecules was also proposed. The process developed by applying the polymer polyethyleneimine (PEI) enabled the formation of an excellent system to stabilize the glucose-tolerant tetrameric ?-glycosidase obtained from Exiguobacterium antarcticum. The immobilized ?-glycosidase showed an improvement in its characteristics, with an increased activity, including thermal and storage stability. In addition, the ?-glycosidase maintained a high activity even after several cycles of hydrolysis applying cellobiose as substrateDoutoradoCiência de AlimentosDoutor em Ciência de Alimentos140610/2014-6CNP

Bioprospecção de Fungos de um Fragmento de Cerrado no Brasil Central para Aplicações Biotecnológicas

Considering the importance of bio-prospection studies involving species from threatened environments that are of great biological richness and endemism, this work aimed to investigate the biotechnological potential of fungi from different habitats in a fragment of Cerrado. The fungi were isolated in culture, and some were selected for the prospection of enzymes that are of industrial interest, for antimicrobial activity and preliminary toxicity. Carboxymethyl cellulose and peroxidase activity was detected in all isolates evaluated. In the tests for antimicrobial activity, the fungal metabolites did not show growth inhibition for the bacterial strains analyzed, and in the toxicity assays these metabolites were shown to be innocuous for Artemia salina larvae. Although the toxicity evaluation still requires complementary assays, these results justify the continuation of bio-prospection studies on the biotechnological potential of these fungi, showing them to be promising candidates for use in processes applied directly to humans or to the environment.Considerando a importância dos estudos de bioprospecção de espécies de ambientes ameaçados, de grande riqueza biológica e endemismo, esse trabalho visou investigar o potencial biotecnológico de espécies fúngicas de diferentes hábitats de um fragmento de Cerrado. Os fungos foram isolados em cultura, algumas das quais selecionadas para a prospecção de enzimas de interesse industrial, atividade antimicrobiana e toxicidade preliminar. Foi detectada atividade de carboximetilcelulase e peroxidase em todos os isolados avaliados. Nos testes para atividade antimicrobiana, os metabólitos fúngicos não mostraram inibição do crescimento para as cepas bacterianas analisadas, da mesma forma que nos ensaios de toxicidade, esses metabólitos se mostraram inócuos para larvas de Artemia salina. Ainda que a avaliação da toxicidade requeira ensaios complementares, esses resultados estimulam a continuidade dos estudos para a bioprospecção do potencial biotecnológico destes fungos, apontando-os como candidatos promissores para serem empregados em processos de aplicação direta ao homem ou ao meio ambiente

Metagenômica e possíveis aplicações biotecnológicas - identificação do microbioma de ectoparasitos que impactam a bovinocultura.

A comunidade microbiana que coexiste em habitats tais como a superfície externa e ambientes internos de ectoparasitos de bovinos pode e deve ser conhecida quanto a sua composição e fisiologia. Este conhecimento pode contribuir para o estabelecimento de estratégias de controle, busca de novas moléculas funcionais, prevenção de transmissão de patógenos emergentes e reemergentes, entre outras possibilidades biotecnológicas. Análises completas e complexas de taxonomia, filogenia e funcionalidade têm sido possíveis pelo uso da metagenômica. Por esta metodologia, baseada em sequenciamento concomitante de diferentes genomas, seguido de análises in silico (ferramentas de bioinformática), é possível identificar inclusive microrganismos não cultiváveis, abordagem esta que antes não era possível a partir de métodos de isolamento tradicionais. Até recentemente, pouco se conhecia sobre a comunidade microbiana associada a diferentes ectoparasitos de bovinos. De interesse maior estão o carrapato-do-boi e a mosca-dos-estábulos, responsáveis por impactarem negativamente a produção na bovinocultura de corte e de leite. Esta publicação apresenta uma breve revisão na busca da identificação e entendimento da interação da comunidade microbiana presente e/ou carreada por ectoparasitos de bovinos e, também, uma breve descrição da metodologia que tem permitido avanço significativo do conhecimento nesta área.bitstream/item/207808/1/metagenomica-e-possiveis-aplicacoes-biotecnologicas.pd