Estudio de la expresión de Apolipoproteína D en células de astrocitoma humano. Un gen supresor de tumores peculiar

Las modificaciones epigenéticas son fundamentales para la diferenciación celular tanto en el periodo embrionario como en la edad adulta. Estas modificaciones incluyen la metilación del DNA y modificaciones en la acetilación de las histonas. La combinación de ambos fenómenos permite mantener un equilibrio en la expresión génica de nuestras células. Pero en ciertas ocasiones, como en la oncogénesis, este equilibrio se rompe, apareciendo represión en los genes supresores de tumores por medio de hipermetilación y una sobreexpresión de proto-oncogenes gracias a su hipometilación. Uno de estos genes que en el seno de los tejidos neoplásicos sufre una regulación a la baja es APOD. Un gen que codifica para una lipocalina a la que se le atribuyen múltiples funciones antioxidantes y antiproliferativas. En este trabajo se quiso estudiar la expresión del gen APOD en un cultivo celular de astrocitoma humano (1321N1) y ver si en condiciones basales el gen está reprimido a expensas de hipermetilación y cómo varia su expresión ante el estrés oxidativo (un inductor conocido de la transcripción de APOD). Mediante el uso de un agente desmetilante se demostró que, en efecto, el gen APOD en condiciones basales está regulado a la baja en esta línea celular. Pudimos observar además que el estrés oxidativo genera un cambio en la distribución intracelular de ApoD hacia organelas de pequeño tamaño. Por último, pero no por ello menos relevante, se observó un importante incremento en la transcripción de APOD en condiciones de escasez nutricional. Esto último hace sospechar que este incremento en los niveles de ApoD pudiera tener que ver con el papel antiproliferativo de dicha proteína, razón por la cual se le ha incluido en el grupo de genes supresores de tumores.Grado en Medicin

The use of Mitomycin-C to reduce synechia in middle meatus in sinus surgery: preliminary results

Synechia is the most frequent complication after sinus surgery and has been reported in up to 36% of cases. Several types of materials have been used to reduce the incidence of synechia, including Mitomycin C (MMC). OBJECTIVE: This prospective study aimed to assess the effectiveness of topical MMC in the prevention of synechia after sinus surgery in humans. METHODS: At the end of surgery, MMC solution (1.0 mg/ml) was topically applied randomly to one of the middle meatuses (MMC group) of 14 patients while saline solution was applied to the contralateral meatus (control group). The author remained blind to the medicated side. Synechiae were classified as partial or total. RESULTS: Three patients had middle meatus synechia in the MMC group (21.43%) versus nine (64.29%) in the control group (p = 0.054). In the MMC group, all three middle meatus synechia were partial, while in the control group there were four partial (28.57%) and five total (35.71%) cases of synechia (p = 0.025). CONCLUSIONS: Mitomycin C was not effective in preventing middle meatus synechia, but reduced the probability of total synechia formation.As sinéquias constituem a complicação pós-operatória mais frequente das cirurgias endoscópicas sinusais, chegando a 36% dos casos. Na tentativa de diminuir esse índice, inúmeros materiais têm sido utilizados, dentre eles a Mitomicina-C (MMC). OBJETIVO: Avaliar a eficácia da MMC tópica na prevenção de sinéquias após cirurgias sinusais em humanos. MÉTODO: Ao final das cirurgias, colocava-se cotonoide com MMC (1,0 mg/ml) em um dos meatos médios (grupo MMC) e outro embebido em solução salina, no meato médio contralateral (grupo controle), por 5 minutos, de forma randomizada e com o avaliador cego em relação aos lados. As sinéquias foram classificadas em parciais, quando não fechavam totalmente os meatos médios, e totais, quando a oclusão era completa. Desenho: prospectivo. RESULTADOS: No grupo MMC, ocorreram três sinéquias (21,43%) versus nove (64,29%) no grupo controle (p = 0,054). No grupo MMC, todas as três (21,43%) foram parciais, enquanto no grupo controle houve quatro (28,57%) parciais e cinco (35,71%) totais (p = 0,025). CONCLUSÃO: A MMC não foi eficaz na prevenção sinéquias como um todo, porém, preveniu a formação de sinéquias totais.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Disciplina de Otorrinolaringologia setor de RinologiaUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Disciplina de OtorrinolaringologiaUNIFESP, Disciplina de Otorrinolaringologia setor de RinologiaUNIFESP, Disciplina de OtorrinolaringologiaSciEL

Actividad biológica de fracciones de la esponja marina Iotrochota birotulata en células de mamíferos

ABSTRACT: Marine sponges are considered an important source of substances with pharmacological potential. They play a key role in the intensive investigation of promising new compounds to treat cancer and other diseases. Objective: To evaluate in CHOK1 and Jurkat cell lines, the cytotoxic, genotoxic and antiproliferative effects of two fractions of I. birotulata sponge from Colombian Caribbean. Methods: The cell viability (cytotoxic effect) was determined by Trypan blue exclusion and MTT assays. Genotoxicity was assessed by single cell gel electrophoresis, the antiproliferative effect was monitored with clonogenic test, sister chromatid exchange proliferative kinetic, and accumulation function. Data was analyzed with lineal regression, oneway ANOVA, and Bonferroni tests. Results: Both cytotoxic assays showed a similar dose dependent effect for the CHOK1 and Jurkat cell lines treated with both fractions (F5 y F6) of I. birotulata. They also revealed an effect on the cell membrane and mitochondrial activity of both cell lines. Fraction F5 exhibited a greater genotoxic effect on both cell lines, which is consistent with the antiproliferation results obtained by the clonogenic assay. These results are also consistent with the inhibitory effect on the cell cycle, which was evaluated with SCE, proliferative kinetic, and the accumulation function tests. Consequently, the results showed differential sensitivity to the treatment of the Jurkat cells compared to the CHOK1 cell line. Conclusions: Together, the results show a differential effect of the two assessed fractions on cell membrane integrity, mitochondrial activity, and antiproliferative effect on both mammalian cell lines.RESUMEN: Las esponjas marinas son una fuente importante de compuestos con propiedades farmacológicas potenciales. Desempeñan una función esencial en la intensa en la búsqueda de nuevas y prometedores compuestos que brinden tratamiento para el cáncer y otras enfermedades. Objetivo: Evaluar los efectos citotóxico, genotóxico y antiproliferativo en las líneas celulares CHOK1 y Jurkat de dos fracciones de la esponja Iotrochota birotulata del Caribe colombiano. Métodos: La viabilidad celular (efecto citotóxico) se determinó mediante ensayos de azul de Tripano y MTT. La genotoxicidad se evaluó mediante la electroforesis en gel de células individuales y el efecto antiproliferativo se monitoreó con pruebas clonogénica, cinética proliferativa por intercambio de cromátides hermanas y la función de acumulación. Los datos se analizaron mediante regresión lineal, ANOVA de una vía, y la prueba de Bonferroni. Resultados: Ambas pruebas citotóxicas mostraron un efecto similar dependiente de la dosis en las líneas celulares CHOK1 y Jurkat tratadas con dos fracciones (F5 y F6) de I. birotulata. Las pruebas citotóxicas también revelaron efectos en la membrana celular y en la actividad mitocondrial en ambas líneas celulares. La fracción F5 mostró mayor efecto genotóxico en las dos líneas celulares, consistente con los resultados de antiproliferación del ensayo clonogénico y con el efecto inhibitorio en el ciclo celular evaluado por las pruebas de intercambio de cromátides hermanas, cinética proliferativa y función de acumulación. Por consiguiente, los resultados revelaron mayor sensibilidad diferencial al tratamiento en las células Jurkat comparada con la línea celular CHOK1. Conclusiones: Los datos obtenidos demuestran el efecto diferencial de las fracciones F5 y F6, en la integridad de la membrana celular, la actividad mitocondrial y el efecto antiproliferativo en las dos líneas celulares de mamíferos evaluadas

Capacidad atrapadora de radicales libres, efectos citotóxicos y antiproliferativos de Vaccinium meridionale Sw. en líneas celulares de cáncer de colon

ABSTRACT: Vaccinium meridionale Swartz, of the family Ericaceae, is commonly known as mortiño or agraz. The plant is considered a functional food, with a content of anthocyanins and antioxidants similar to or greater than that reported for other Vaccinium species. However, little is known about its nutraceutical and medicinal properties. Objectives: determine the antioxidant activity and cytotoxic and antiproliferative effect of mortiño fruit aqueous extract against colon adenocarcinoma cells (SW480) and their derived metastatic cells (SW620). Methods: total phenols and anthocyanins were determined by the Folin-Ciocalteu method. Caffeoyl derivatives were determined by HPLC-DAD. Antioxidant activity was analyzed as the ability to scavenge reactive oxygen species (ROS), reactive nitrogen species (RNI), peroxyl radicals and hydroxyl radicals. Cytotoxic and antiproliferative activities were studied by MTT and sulforhodamine B. Results: the following substances were found in 100 g of lyophilized extract: total phenols (2 546 mg GAE), anthocyanins (150.7 mg C3G), chlorogenic acid (126 mg), ferulic acid (108 mg) and coumaric acid (63 mg). Hydroxyl radical scavenging capacity was 36 147.5 μmol DMSO, whereas ROS and RNS scavenging capacity was 29 255.9 y 41 775.2 μmolTrolox, respectively. ORAC value was 41 775.2 μmolTrolox. A dose-dependent cytotoxic and antiproliferative effect was observed. IC50 value was 59.12 μg/ml for SW480 and 56.10 μg/mL for SW620. Conclusions: mortiño fruit aqueous extract exhibited antioxidant, cytotoxic and antiproliferative activities comparable to those of other berries of the genus Vaccinium, which could be partly explained by the presence of a high content of anthocyanins and phenolic acids.RESUMEN: Vaccinium meridionale Swartz, pertenece a la familia Ericaceae, conocida comúnmente como mortiño agraz. Considerado un alimento funcional por su contenido de antocianinas y antioxidantes similares o mayor al reportado para otras especies de Vaccinium. Sin embargo, poco se conoce sobre sus propiedades nutracéuticas y en la salud. Objetivos: determinar en extracto acuoso del fruto mortiño, la actividad antioxidante y su efecto citotóxico y antiproliferativo en células de adenocarcinoma de colon (SW480) y sus derivadas metastásicas (SW620). Métodos: se determinó el contenido de fenoles y antocianinas totales por el método Folin-Ciocalteu, los derivados caffeoil por HPLC-DAD. La actividad antioxidante se analizó como habilidad para atrapar especies reactivas del oxígeno (ROS) y del nitrógeno (RNI), radicales peróxilo e hidróxilo. La actividad citotóxica y antiproliferativa se estudiaron por MTT y sulforodamina B. Resultados: en 100 g de liofilizado se encontrófenoles totales (2546 mg GAE), antocianinas (150,7 mg C3G), ácido clorogénico (126 mg), ácido ferúlico (108 mg) y cumárico (63 mg), capacidad atrapadora de radical hidroxilo fue 36147,5 μmol DMSO, capacidad atrapadorade ROS y RNS fue 29255,9 y 41775,2 μmol Trolox, respectivamente, valor ORAC 41775,2 μmol Trolox. Se observó un efecto citotóxico y antiproliferativo dosis-dependiente. El valor IC50 para SW480: 59,12 μg/mL y SW620: 56,10 μg/mL. Conclusiones: el extracto acuoso del fruto del mortiño exhibió actividades antioxidantes, citotóxicas y antiproliferativas comparables a las de otras bayas del género Vaccinium, lo que podría ser explicado parcialmente por la presencia del alto contenido de antocianinas y ácidos fenólicos

Germinação de Eragrostis plana Nees sob efeito do extrato de Achyrocline satureioides (Lam.) DC.

Resumo 31

Actividad anticancerígena de extractos de maracuyá (Passiflora edulis f. flavicarpa) en células de cáncer de colon humano

El cáncer es una de las principales causas de morbilidad y muerte a nivel mundial. Entre estas neoplasias el Cáncer de Colón (CC) ocupa el cuarto lugar en incidencia y mortalidad. Debido a que su etiología muestra una correlación directa con hábitos dietarios no saludables, se ha ampliado la búsqueda de constituyentes alimenticios puedan contribuir a la prevención y tratamiento de esta enfermedad. Algunos estudios de extractos y fitoquímicos de especies del género Passiflora L. han mostrado actividad biológica promisoria. Sin embargo, es poca la investigación sobre la compleja mezcla de fitoquímicos de especies como Passiflora edulis que podrían interactuar y presentar actividad anticancerígena. El objetivo de este trabajo fue evaluar propiedades biológicas del extracto acuoso del fruto y el extracto etanólico de hojas de maracuyá en células de adenocarcinoma de colon Caco-2, SW480 y su derivada metastásica SW620, y sobre la línea celular no tumoral CHO-K1. Se realizó la marcha fitoquímica preliminar de ambos y se evaluó el efecto sobre la viabilidad celular mediante MTT y exclusión del colorante azul de tripano, el efecto antiproliferativo por sulforodamina B y eficiencia de clonación, el efecto inductor de muerte celular y sobre el ciclo celular por citometría de flujo, la actividad de caspasa 3 y la proporción de glutatión oxidado como medida del estrés oxidativo. Se encontró un mejor efecto del extracto etanólico con una Dosis letal media (DL50) de 167,62μg/ml a las 24 horas y una concentración umbral en proporciones superiores a 229μg/ml, una inhibición de la proliferación de hasta 50% a las 24 de horas de tratamiento con la DL50 y una reducción en la eficiencia de clonación relativa de hasta 76.6% para una concentración de 160.3μg/ml. Se observó un incremento en el número de células necróticas en cultivos tratados durante 48 horas y un incremento en las poblaciones SubG1 y G2/M. Además se aumentó la actividad de Caspasa3 y se probó una acumulación del glutatión oxidado y una selectividad celular con un mayor efecto en células SW620 y menor en células CHO-K1. En su conjunto, esta investigación sugiere que P. edulis es una fuente potencial de compuestos fitoquímicos con propiedad antiproliferativa y se constituye como una aproximación a la aplicación biotecnológica para el uso de esta especie.Abstract: Cancer is a major cause of morbidity and death worldwide. Among these neoplasms colon cancer (CC) is ranks fourth in incidence and mortality. Because its etiology shows a direct correlation with unhealthy dietary habits, it has expanded the search for food constituents can contribute to the prevention and treatment of this disease. Some studies of extracts and phytochemicals species of P. edulis have shown promising biological activity. However, there is little research on the complex mixture of phytochemicals Passiflora edulis species as they could interact and present anticancer activity. The aim of this study was to evaluate biological properties of aqueous extract of the fruit and the ethanol extract of leaves in the adenocarcinoma of colon cell lines Caco-2, SW480 and its metastatic derived SW620, and the non-tumor cell line CHO-K1. A preliminary phytochemical analysis was performed and the effect on cell viability was evaluated by MTT and exclusion of trypan blue dye methods. Sulforhodamine B and clonogenic assay were employed using the LD50 to determinate the antiproliferative effect. Inducing cell death effect and the cell cycle was assessed by flow cytometry , caspase 3 activity was performed to. Finally, the proportion of oxidized glutathione was used like a measure of oxidative stress. A better effect of the ethanol extract was found with a LD50 of 167,62 μg/ml at 24 hours of treatment and there was a threshold concentration in excess of 229 μg/ml proportions, inhibition of proliferation up to 50% at 24 hours of treatment was found with LD50 and a reduction in relative cloning efficiency 76.6% up to a concentration of 160.3 μg/ml. An increase in the number of necrotic cells in cultures treated for 48 hours and an increase in subG1 and G2/M populations were observed. In addition Caspasa3 activity was increased and an accumulation of oxidized glutathione and cell selectivity was tested with a greater effect on SW620 and smaller cells in CHO-K1 cells. Taken together, this research suggests that P. edulis is a potential source of phytochemical compounds with antiproliferative source property and establishes itself as an approach to biotechnological application for the use of this species.Maestrí

Complejos metálicos con carbenos N-Heterociclicos como agentes anticancerígenos

El cáncer es una enfermedad cada vez más prevalente en España y, a su vez, cada vez más investigada. En este contexto, un compuestoquímico que ha sido muy empleadopor su acción anticancerígena y que a día de hoy sigue presente en muchas terapias contra el cáncer es el llamado cisplatino. A pesar del evidente potencial de este fármaco como agente anticancerígeno, son varios los efectos adversos que han sido detectados y que derivan de su actividad. Por ello, numerosos grupos de investigaciónhanllevado a cabo, a lo largo de los años,múltiples ensayos encaminados asintetizar y caracterizar moléculasparecidas estructuralmente al cisplatino, pero que, a diferencia de éste, no produzcanlos efectos adversos a los que nos hemos referido anteriormente. El cisplatino contiene un átomo de platino en su estructura química, por lo que los ensayos iniciales se basaron en la búsqueda de moléculas que también contuvieran metales de transición como el oro, la plata, el cobre yel paladio, entre otros. A raíz del interés por la búsqueda de nuevas sustancias que presenten un mejor perfil terapéutico, se ha comenzado a explorar el uso delos ligandos de tipocarbeno N-heterocíclico(NHC), con el fin de preparar compuestos más estables que presenten acción anticancerígena.Para ello se ha seguido una estrategia que consiste enincorporar a la estructura de la molécula ligandos que actúen como fuertes donadores para que, gracias a esta característica química, se generen enlaces fuertesentre el metal y los ligandos que forman parte del compuesto. El primero fármaco que se preparóy que superó la resistencia decisplatino frente a un tipo de carcinomafue el oxaliplatino. A raíz de ello, se han sintetizado numerosos complejos metálicos con NHC que han demostrado ser capaces de actuar como potentes agentes anticancerígenos.Universidad de Sevilla. Grado en Farmaci

Evaluación de la acción antiproliferativa del extracto acuoso de Physalis peruviana L. (Aguaymanto) en cultivos celulares de linfocitos humanos y leucemia mieloide crónica (K562)

Evalúa el efecto antiproliferativo del extracto acuoso de Physalis peruviana L. en linfocitos humanos y en la línea celular K562 (leucemia mieloide crónica), para lo cual se colectaron frutos frescos de la provincia de Carhuaz (Ancash) que fueron procesados para obtener un extracto sólido puro para adicionarlo a un cultivo celular in vitro linfocitario aislado de 10 individuos sanos y de la línea celular K562. Los cultivos fueron mantenidos en condiciones adecuadas y se les añadió cuatro dosis del extracto acuoso (50, 100, 200 y 400 µg/ml), de cisplatino (0.3, 0.6, 1.25 y 2.5 µg/ml) y como control negativo el medio de cultivo. Se determinó la viabilidad celular mediante el conteo celular con el colorante azul de tripano en la cámara de Neubauer y con el ensayo colorimétrico MTT en el lector de ELISA. Los resultados muestran que las concentraciones de aguaymanto con mayor efecto antiproliferativo fueron 200 y 400 µg/ml, que alcanzaron porcentajes de inhibición mayores de 50 % tanto para los linfocitos y la línea celular K562. Paralelamente, el cisplatino muestra claramente mayor efecto antiproliferativo en los linfocitos en comparación con el aguaymanto, mientras que este mostró mayor efecto antiproliferativo en la línea K562, lo que podría sugerir que el fruto es menos dañino en linfocitos que el cisplatino. El análisis estadístico se realizó con el software STATA a un nivel del 5% (Kruskall-Wallis, p<0.05), encontrándose diferencias significativas en la viabilidad celular de los linfocitos y de K562 con extracto acuoso de aguaymanto y cisplatino. Con el aguaymanto, la viabilidad celular fue mayor en linfocitos que en K562; y con el cisplatino, la viabilidad celular fue mayor en K562 que en linfocitos. La concentración inhibitoria media del aguaymanto fue de βγ5.7γ μg/ml para linfocitos y para la línea celular K56β fue de 146.β5 μg/ml, lo que dio un índice de selectividad mayor a 1 (Microsoft Excel 2010). Esto indica que el aguaymanto tiene mayor efecto antiproliferativo sobre las células cancerígenas de leucemia que sobre las células no malignas (linfocitos). Los resultados son satisfactorios y sugieren continuar estudios sobre las diversas bondades medicinales del aguaymanto como fuente potencial de compuestos bioactivos con aplicación terapéutica.Tesi

Chromatographic analysis and antiproliferative potential of aqueous extracts of Punica granatum fruit peels using the Allium cepa test

Punica granatum L., conhecida como romanzeira, é originária da Ásia e encontra-se distribuída por todo Brasil. É usada para o tratamento de doenças inflamatórias, infecciosas e respiratórias. Em decorrência da grande utilização de recursos fitoterápicos, é necessário esclarecer à população sobre a grande quantidade de substâncias existentes nas plantas e sobre os benefícios e prejuízos de tais substâncias à saúde. O presente trabalho objetivou realizar a análise cromatográfica e o estudo da genotoxicidade dos extratos aquosos das cascas dos frutos de P. granatum através do teste de Allium cepa L. Para a montagem do experimento, foram utilizados 7 tratamentos: T1-água destilada, T2-chá 5 g.L-1, T3-chá 10 g.L-1, T4-glifosato a 9,6%, T5-glifosato para recuperação em água destilada, T6-glifosato para recuperação em chá 5 g.L-1 e T7-glifosato para recuperação em chá 10 g.L-1. As radículas foram coletadas e fixadas em etanol:ácido acético (3:1) por 24 horas, e armazenadas em álcool 70%, sob refrigeração. Realizou-se análise por cromatografia líquida de alta eficiência para quantificação dos compostos fenólicos. Nos extratos de P. granatum foram observados em maior quantidade: ácido gálico, catequina, ácido cafeico e rutina. Além disso, os extratos demonstraram potencial antiproliferativo, sem apresentar atividade antimutagênica e genotóxica.Punica granatum L., locally known as romanzeira, is native to Asia but found throughout Brazil. P. granatum is used for treating inflammatory, infectious and respiratory diseases. The aim of this study was to evaluate the chromatography and genotoxicity of an aqueous extract of P. granatum (pomegranate) fruit peel using the Allium cepa L. test. The experiment set-up entailed 7 treatments: T1-distilled water, T2-tea 5 g.L-1, T3-tea 10 g.L-1, T4-glyphosate at 9.6%, T5-glyphosate with subsequent recovery in distilled water, T6-glyphosate with subsequent recovery in tea 5 g.L-1 and T7-glyphosate with subsequent recovery in tea 10 g.L-1. The rootlets were collected and fixed in ethanol:acetic acid (3:1) for 24 hours, then stored in 70% ethanol under refrigeration. Analysis was performed using high performance liquid chromatography for the quantification of the extracted phenolic compounds. Gallic acid, catechin, caffeic acid, and rutin were abundant in the extracts of P. granatum. The extracts were found to exhibit antiproliferative potential but not antimutagenic or genotoxic activity

Efeito do óxido nítrico na proliferação de células musculares lisas: mecanismos e implicações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia.O aumento da concentração intracelular de guanosina monofosfato cíclico (cGMP) após a ativação da guanilil ciclase solúvel (sGC) é o principal mecanismo mediador do efeito antiproliferativo do óxido nítrico (NO) em células musculares lisas vasculares (CMLV). Entretanto, pouco se conhece sobre o efeito do NO na proliferação de células musculares lisas uterinas (CMLU). Além disso, a importância dos canais de potássio (CK) e de adenosina monofosfato cíclico (cAMP) na proliferação celular, nos levou a investigar a relação entre o NO, os nucleotídeos cíclicos e CK na proliferação de células musculares lisas vascular e uterina. Os doadores de NO (dois nitrosotióis, S-nitroso-N-acetil-D,L-penicilamina, SNAP, S-nitrosoglutationa, GSNO, e um nitrato orgânico, propano-1,2,3-triol trinitrato, GTN) inibiram a proliferação das células musculares lisas de maneira concentração-dependente sem induzir morte celular. O efeito citostático dos doadores pode ser inteiramente atribuído à liberação de NO, uma vez que nem NAP nem GSH (precursores não-nitrosilados dos nitrosotióis) interferiram na proliferação celular. A prevenção do efeito inibitório do NO na proliferação de CMLV por ODQ, um inibidor seletivo da sGC e por KT-5823, um inibidor da proteína quinase dependente de cGMP, PKG, bem como a prevenção do efeito antiproliferativo do 8-Br-cGMP, um análogo de cGMP permeável à membrana, pelo KT-5823, confirmaram que o NO inibe a proliferação da CMLV por um mecanismo dependente de cGMP e que a PKG é o alvo molecular mais importante deste nucleotídeo cíclico. Em contraste, ambos os compostos em nada interferiram com a inibição da proliferação de CMLU induzida por NO. A idêntica abundância do mRNA da sGC nos dois tipos de células musculares lisas e a prevenção do efeito antiproliferativo do BAY 41-2272 (um ativador da sGC) na CMLU por ODQ e KT-5823, demonstraram que o mecanismo de transdução de sinal sGC/cGMP/PKG pode ser mobilizado para reduzir a proliferação do músculo liso uterino, mas que o efeito do NO na proliferação da CMLU não está correlacionado com ativação da sGC, nem com o aumento da concentração intracelular de cGMP nem com a ativação da PKG. A prevenção dos efeitos antiproliferativos do NO e do isoproterenol (um agonista beta-adrenérgico e ativador clássico de adenilil ciclase, AC) na CMLU por SQ22536 (um inibidor seletivo de AC) e KT-5720 (um inibidor seletivo da proteína quinase dependente de cAMP; PKA), assim como a prevenção do efeito inibitório do dibutiril-cAMP (um análogo de cAMP permeável à membrana) por KT-5720, mostraram que o efeito do NO na proliferação da CMLU é mediado por ativação da AC, aumento da concentração intracelular de cAMP e ativação da PKA. Uma fração significativa do efeito antiproliferativo do NO nas células musculares lisas vascular e uterina também é mediada por CK uma vez que o tetraetilamônio, um bloqueador não-seletivo de CK, preveniu o efeito do NO. Contudo, o bloqueio do efeito inibitório do NO na proliferação das células musculares lisas por 4-aminopiridina (um bloqueador seletivo de CK dependente de voltagem) e por bloqueadores de canais de potássio dependentes de cálcio (iberiotoxina, caribdotoxina, apamina e clotrimazol) mostrou que a modulação de CK voltagem- e cálcio-dependentes parece ter a mesma importância para o efeito do NO na inibição da proliferação de ambas as células. Este achado está em contraste com a relevância dos canais ATP-dependentes apenas em CMLU, demonstrada pelo bloqueio do efeito do NO com a glibenclamida, um bloqueador seletivo de CK ATP-dependente. O efeito antiproliferativo do ativador de CK dependentes de cálcio (NS1619), confirmou o envolvimento destes canais no efeito inibitório do NO na proliferação da CMLV, da mesma forma que o cromakalim e o diazóxido (ativadores de CK ATP-dependente), confirmaram a participação deste tipo de canal no efeito inibitório do NO na proliferação de CMLU. Além disso, a prevenção completa do efeito antiproliferativo do NO na CMLV por combinação de concentrações sub-efetivas de ODQ e TEA, sugere que o NO inibe a proliferação do músculo liso através da fosforilação de CK. Assim, a reversão completa dos efeitos antiproliferativos de 8-Br-cGMP na CMLV e de Db-cAMP na CMLU por bloqueadores de CK indica que a fosforilação de CK deve ser relevante no efeito inibitório do NO na proliferação de ambas as células. Nossos dados também sugerem que CMLV incubadas com doadores de NO por um curto período de tempo formam reservas de nitrosotióis que mantém a atividade da sGC e a modulação de CK, causando um efeito antiproliferativo de longa duração do NO. Finalmente, o efeito inibitório do NO na proliferação foi mimetizado por nifedipina (um bloqueador de canal de cálcio) e revertido por A23187 (um ionóforo de cálcio) na CMLV, sugerindo que a modulação dos canais de potássio mediada por NO altera a sinalização de cálcio e inibe a proliferação celular. Em resumo, nossos resultados mostram que o efeito antiproliferativo do NO na CMLU depende de cAMP e ativação de PKA, apesar da presença e da funcionalidade do mecanismo de transdução de sinal sGC/cGMP/PKG, sugerindo a não-universalidade do paradigma NO/cGMP, pelo menos no que refere à inibição da proliferação de células musculares lisas. Além disso, o efeito antiproliferativo do NO também mobiliza diferentes subtipos de CK, através de mecanismos dependentes de nucleotídeos cíclicos e/ou nitrosilação