Endocrine regulation of extracellular matrix proteins in calcified tissue in teleost fish

Tese dout., Biologia, Universidade do Algarve, 2005A estrutura e a organização celular dos tecidos esqueléticos estão pouco estudadas nos teleósteos e o objectivo da presente tese consistiu na sua caracterização de forma a estudar como é que esses tecidos podem contribuir para a homeostase do cálcio. A morfologia da cartilagem e do osso observada usando técnicas histológicas gerais durante a formação do esqueleto em dourada (Sparus auratus) permitiu a caracterização dos tecidos e das transformações celulares que ocorrem durante a ossificação endocondral e dermal. Foram observados processos de ossificação alternativos em estruturas esqueléticas como os arcos branquiais, onde foram observados outros tecidos esqueléticos, diferentes da cartilagem e do osso. Uma característica dos peixes teleósteos é a presença de uma cobertura externa de escamas calcificadas. A sua morfologia foi descrita numa espécie marinha (dourada) e numa espécie eurihalina (tilápia, Oreochromis mossambicus). As escamas de S. auratus e O. mossambicus foram identificadas como escamas elasmóides e características deste tipo de escama como o foco, os circuli e os radii foram observadas em ambas as espécies. A matriz óssea desempenha, provavelmente, um papel fundamental na mobilização e na libertação de cálcio a partir dos tecidos esqueléticos e, por esse motivo, uma das principais proteínas da matriz óssea, a osteonectina (OSN), foi isolada e caracterizada a partir de um banco de tecido intervertebral de dourada. Foi demonstrado que o cDNA da OSN de dourada é homólogo ao de outras OSNs de vertebrados, e que a sequência de aminoácidos partilha estruturas idênticas à das moléculas equivalentes noutras espécies de vertebrados. Os resultados obtidos por RT-PCR e por ISH mostraram que o mRNA de OSN é mais abundante nos tecidos calcificados de dourada apesar de ocasionalmente ter sido detectado um sinal fraco em tecido moles. Durante a ontogenia, o mRNA de OSN foi detectado pela primeira vez no início da gastrulação e o perfil de expressão apresenta uma série de máximos e minímos durante o desenvolvimento larvar. A sua expressão foi detectada por hibridação in situ (ISH) em larvas a partir do 6º dia após eclosão e a localização e intensidade do sinal variaram com a idade. Elementos esqueléticos de origem endocondral e dermal expressam OSN e os resultados sugerem que a OSN pode desempenhar funções durante a condrogénese e a osteogénese. O mRNA da OSN é também muito abundante nas escamas de douradas e tilápias, juvenis e adultas, sugerindo que a OSN pode participar nas regulação da mineralização das escamas. O padrão de expressão de várias outras proteínas da matriz extracelular como, colagénio tipo I, cadeia a1 (Col1A1), colagénio tipo V, cadeia a2 (Col5A2), fibronectina (FN), fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRACP) e a proteína acídica, secretada pela cartilagem (ASPIC) foi estudado por ISH em escamas de dourada e de tilápia. O Col1A1 é muito abundante nas escamas de douradas e tilápias, quer juvenis, quer adultas. A TRACP também é expressa em escamas de juvenis e adultos de ambas as espécies embora em relativamente poucas células. O Col5A2 e a FN foram detectadas apenas em escamas de douradas e a ASPIC não é expressa em escamas de nenhuma das duas espécies. A ISH das proteínas da matriz extracelular nas escamas, em conjunto com métodos histológicos permitiu a identificação de células, supostamente osteoblastos e osteoclastos, na matriz das escamas indicando que este tecido é activamente metabolizado. Para estabelecer se as escamas podem contribuir, nos peixes, para o aumento dos níveis de cálcio associado ao estrogénio, foi estudada a presença de receptores de estrogénio (ER). A expressão das isoformas dos ER (a, b1 and b2) foi caracterizada por imunohistoquímica usando anticorpos policlonais específicos para dourada, em escamas de dourada e tilápia, juvenis e adultas. Os ER são expressos nas escamas de ambas as espécies nas células identificadas como osteoclastos embora a intensidade do sinal varie com a espécie e com a idade dos animais. Estes resultados sugerem que um dos mecanismos pelos quais o estrogénio pode influenciar a renovação das escamas consiste na ligação aos ER e na modulação da sua actividade. O modo como as hormonas actuam nos tecidos calcificados em peixe para promover a mobilização do cálcio não está estudado. O efeito da única hormona hipercalcémica identificada em peixe, a proteína relacionada com a hormona da paratiróide (PTHrP), na expressão do mRNA de OSN de dourada foi avaliado usando escamas num bio-ensaio in vitro. Os resultados mostraram que a PTHrP reduz a expressão de OSN em escamas de dourada e sugere que a acção da PTHrP no balanço de cálcio pode incluir a regulação de proteínas da matriz extracelular envolvidas na formação e mineralização da matriz do osso e/ou das escamas.Programa de Desenvolvimento Educativo para Portugal (PRODEP

Aquatic pollutants: risks, consequences, possible solutions and novel testing approaches

It is undeniable that there is a wide variety of pollutants in the various water bodies around the planet, including organic and inorganic compounds, pathogenic microorganisms, and microplastics. The existence of these aquatic pollutants has a direct impact on the survival and well-being of all species that are present in these habitats and poses, directly or indirectly, a risk to human health. Although the origin of these pollutants has already been identified in most situations, the study of their effects, in the short and long term, as well as the best solutions to prevent or avoid the adverse consequences of pollution, remains a challenge for researchers. Human activity, both at the agricultural and livestock production level and at the industrial level, has a profound impact on water pollution [1]. In addition, the use of detergents, pharmaceuticals and other health products and substances in our daily lives also contributes to the increased concentration of various pollutants that affect aquatic life. Currently, many effluents discharged into the aquatic environment are still not subject to appropriate prior treatment that ensures the removal of all these potentially toxic substances. Although much progress has already been made in the treatment of various types of effluent, many compounds are still identified that resist the process and continue to be discharged into the water [1,2].info:eu-repo/semantics/publishedVersio

O azeite na alimentação humana

O azeite virgem é o sumo resultante da azeitona (fruto da Oliveira, Olea Europea L.) que conserva o sabor, aroma e todas as propriedades do fruto do qual tem origem, pelo que, possui características organolépticas particulares, colocando-o num lugar cimeiro entre as gorduras (Cenzano et al., 1988; March, 1994). É, além disso, a única gordura vegetal que pode ser consumida directamente, virgem e crua (Gonçalves Ferreira, 1994; March, 1994). O seu valor calórico é de 9 Kcal/g, a mesma proporção de qualquer outra gordura, animal ou vegetal (Gonçalves Ferreira, 1994; Peres, 1994)

Tissue distribution of a novel aquaporin in a teleost fish (Sparus auratus)

The aquaporin family consists of two principal groups of transmembrane proteins which function as channels for non-ionic compounds. The CHIP (CHannel forming Integral Protein) group functions only as water channels (aquaporins) and the GLP (GLycerol intrinsic Protein) group transports primarily glicerol but also water and other small solutes. A sea bream AQP-3 cDNA encoding a protein of 298 amino acids was isolated from a kidney cDNA library. The tissue distribution of this GLP family member was investigated by in situ hybridisation. Tissues, liver, gastrointestinal tract, kidney, head kidney, gonads and gills, were fixed in 4% PFA, dehydrated, embedded in wax and serial sections (8µm) mounted on poly-L-lysine coated slides. The AQP-3 probe was generated from the full length cDNA after digestion with BamHI followed by purification. In vitro transcription was carried out using T7 RNA Polymerase and Digoxigenin-RNA labeling mix to synthetize a specific riboprobe. Tissues were hybridised overnight at 54ºC followed by stringency washes in 2xSSC. Detection of hybridised probe was carried out using anti-digoxigenin-AP Fab fragments. The chromagens for colour detection were NBT (4-Nitroblue tetrazolium chloride) and BCIP (5-Bromo-4-Chloro 3-indolylphosphate). Sections were analysed using a microscope coupled to a digital image analysis systems. Results showed that the expression of AQP-3 was abundant in cells scattered in the lamina propria of the hindgut and in occasional cells localised at the interface of the circular and longitudinal muscle layer in the hindgut. Expression was also abundant in some tubules of the kidney and in putative chloride cells in the gills. Some cells stained intensely in the head kidney and in gonads signal was intense in the cytoplasm of larger oocytes, in the head of some sperm and in unidentified cells scattered in testicular tissue. The signal obtained in the mid gut and duodenum was much weaker and no signal was detected in the liver.FCT pluriannual grant to CCMAR and M.D. Estêvão was funded by FCT Grant 2/5.3/Prodep/2001.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Characterization of the structure and molecular composition of scales in Teleost Fish

Fish scales are an important source of calcium which may be mobilized in response to endocrine factors. To better understand this process it is necessary to understand the structure of this tissue. General histological staining methods and in situ hybridization were utilized to establish the structural organization of sea bream and tilapia scales. The general architecture of the scale has been characterized and putative osteoblasts and osteoclasts identified in both species.FCT pluriannual grant to CCMAR (Project 2/2.1/BIA/211/94) and M.D. Estêvão was funded by FCT Grant 2/5.3/Prodep/2001info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Guia para elaboração de trabalhos escritos e preparação de apresentações

Este documento pretende servir de guia para a elaboração de trabalhos escritos (monografias, trabalhos de pesquisa, relatórios, relatórios de estágio e outros) e para a preparação de apresentações orais e em forma de poster. Além da apresentação de algumas regras gerais relativas à estrutura e organização de um trabalho escrito, são ainda referidas algumas normas a ter em consideração na redação e a formatação do trabalho. São também apresentados dois modelos que podem ser utilizados para a apresentação e citação de referências bibliográficas, adaptados das “Normas de Vancouver” e das Normas da American Psychological Association (APA). Por fim, são apresentadas algumas sugestões a ter em conta na preparação de apresentações orais e na preparação de comunicações em forma de poster. É realizada a necessidade de se procederem às adaptações necessárias para o objetivo de cada trabalho.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Characterization of fish scale regeneration: environmental and endocrine control

Fish scales are calcified structures present in skin which have a protective function but which are also implicated in calcium homeostasis. Information about the molecular and cellular organisation of scales and the endocrine factors which regulate their turnover is scarce. In the present study as a first step to studying the influence of hormones on scale metabolism we aimed to characterize elasmoid scales from the sea bream (Sparus auratus), the dynamics of scale regeneration and the possible regulation of this process by calcium availability. Regenerating scales were evident 7 days after their removal in fish maintained in seawater (SW) and brackish water (BW). In BW, the activity of enzymes involved in scale turnover, tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) and alkaline phosphatase (ALP), increased indicating active remodelling. The higher activity of TRAP compared to ALP suggests that the reduced calcium availability in BW led to calcium mobilization from the scales. The results suggest that the scales can be used as a regulated reservoir of calcium in this fish.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Construção do sistema corporativo em Portugal

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Duplicated membrane estrogen receptors in the European sea bass (Dicentrarchus labrax): Phylogeny, expression and regulation throughout the reproductive cycle

The numerous estrogen functions reported across vertebrates have been classically explained by their binding to specific transcription factors, the nuclear estrogen receptors (ERs). Rapid non-genomic estrogenic responses have also been recently identified in vertebrates including fish, which can be mediated by membrane receptors such as the G protein-coupled estrogen receptor (Gper). In this study, two genes for Gper, namely gpera and gperb, were identified in the genome of a teleost fish, the European sea bass. Phylogenetic analysis indicated they were most likely retained after the 3R teleost-specific whole genome duplication and raises questions about their function in male and female sea bass. Gpera expression was mainly restricted to brain and pituitary in both sexes while gperb had a widespread tissue distribution with higher expression levels in gill filaments, kidney and head kidney. Both receptors were detected in the hypothalamus and pituitary of both sexes and significant changes in gpers expression were observed throughout the annual reproductive season. In female pituitaries, gpera showed an overall increase in expression throughout the reproductive season while gperb levels remained constant. In the hypothalamus, gpera had a higher expression during vitellogenesis and decreased in fish entering the ovary maturation and ovulation stage, while gperb expression increased at the final atresia stage. In males, gpers expression was constant in the hypothalamus and pituitary throughout the reproductive cycle apart from the mid- to late testicular development stage transition when a significant up-regulation of gpera occurred in the pituitary. The differential sex, seasonal and subtype-specific expression patterns detected for the two novel gper genes in sea bass suggests they may have acquired different and/or complementary roles in mediating estrogens actions in fish, namely on the neuroendocrine control of reproduction.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Caracterização da unidade de cuidados paliativos do Hospital do Litoral Alentejano.

Nos Cuidados Paliativos (CP), os sintomas são “encobertos” com tratamentos cuja finalidade primária é a de promover o conforto do doente. Todavia, os CP estendem-se muito para além do alívio dos sintomas físicos; procurando integrar os aspetos físicos, psicológicos e espirituais no tratamento, de modo a que os doentes se possam adaptar à sua morte iminente de forma tão completa e construtiva quanto seja possível. O controlo dos sintomas poderá favorecer, para além da qualidade de vida, a quantidade de vida. O objetivo do trabalho foi caracterizar os utentes internados na Unidade de CP e o seu perfil farmacoterapêutico.info:eu-repo/semantics/publishedVersio