Anticuerpo anti-factor B, composición farmacéutica útil para el tratamiento de enfermedades del complemento y sus aplicaciones

La presente invención describe un anticuerpo anti-factor B que bloquea la generación de la convertasa del C3 de la vía alternativa útil para prevenir o modular la activación o amplificación de la activación del complemento. Una forma concreta de este anticuerpo es el anticuerpo monoclonal anti-factor B producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301. Además, proporciona una composición farmacéutica útil para el tratamiento de enfermedades asociadas del complemento como por ejemplo, el síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS) o la hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN). Igualmente, se proporciona un complejo biotecnológico útil para la realización de ensayos para la identificación y diseño de medicamentos o composiciones farmacéuticas inhibidoras del complementoREIVINDICACIONES 1.- Anticuerpo anti-factor B que bloquea la generación de la convertasa del C3 de la vía alternativa útil para prevenir o modular la activación o amplificación de la activación del complemento caracterizado por que es capaz de reconocer específicamente un epítopo en el fragmento Ba del factor B y cuya secuencia aminoacídica de la cadena pesada presenta un porcentaje de homología de al menos el 95% respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID N01 y/o cuya secuencia aminoacídica de la región variable de la cadena pesada presenta un porcentaje de homología de al menos el 95% respecto a la secuencia aminoacídica la SEQ ID N04. 2.- Anticuerpo antl-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que es un anticuerpo monoclonal producido por un hibridoma. 3.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que está producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301. 4.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que comprende las regiones de reconocimiento del antígeno variables y/o hipervariables de las cadenas ligeras y/o pesadas, o bien de las propias cadenas ligeras y/o pesadas del anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 3. 5.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que comprende en la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada la SEQ ID N01. 6.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que comprende en la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada la SEQ ID N04. 7.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que está constituido por un fragmento del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301. 8.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 7 caracterizado por que el fragmento es un fragmento Fab producido por digestión con papaína. 9.- Hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301. 10.- El uso del hibridoma según la reivindicación 9 para la producción del anticuerpo monoclonal anti-factor B según la reivindicación 3. 11.- Uso de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8 en la elaboración de un medicamento o una composición farmacéutica para el tratamiento de un desorden o una enfermedad asociada al complemento. 12.- Composición farmacéutica antagonista del factor B del complemento útil para el tratamiento de una enfermedad asociada del complemento caracterizada por que comprende el anticuerpo anti-factor B según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8 con portadores farmacéuticamente aceptables. 13.- Composición farmacéutica según la reivindicación 12 caracterizada por que la enfermedad asociada al complemento pertenece al siguiente grupo: artritis reumatoide (AR), lupus eritematoso sistémico (LES), glomerulonefritis, esclerosis múltiple (EM), isquemia / repercusión, glomerulopatías por depósito aislado de C3 (C3G), síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS), enfermedad hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN) y degeneración macular asociada a la edad (AMD). 14.- Uso de la composición farmacéutica según las reivindicaciones 12 y 13 útil en una cantidad terapéuticamente eficaz para el tratamiento de una enfermedad asociada al complemento. 15.- Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 14 caracterizado por que la enfermedad asociada al complemento perteneciente al siguiente grupo: artritis reumatoide (AR), lupus eritematoso sistémico (LES), glomerulonefritis, esclerosis múltiple (EM), isquemia / repercusión, glomerulopatías por depósito aislado de C3 (C3G), síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS), enfermedad hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN) y degeneración macular asociada a la edad (AMD). 16.- Uso de la composición según las reivindicaciones 14 y 15 caracterizado por que la composición farmacéutica puede administrase en combinación con otros agentes terapéuticos. 17.- Complejo biotecnología) útil para la realización de ensayos biotecnológicos caracterizado por que comprende el factor B y el anticuerpo anti-factor B según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8. 18.- Uso de! anticuerpo anti-factor B según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8 para la elaboración del complejo biotecnológico según la reivindicación 17. 19.- Uso de! complejo biotecnológico de la reivindicación 17 en la elaboración de ensayos biotecnológicos para la identificación y diseño de medicamentos o composiciones 10 farmacéuticas inhibidoras de la formación de la convertasa de! C3 de la vía alternativa y de la activación de! complemento.Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idiomaConsejo Superior de Investigaciones Científicas; Instituto de Salud Carlos IIISolicitud de patent

The relationship between R&D subsidy and R&D cooperation in eco-innovative companies. An analysis taking a complementarity approach

We analyze whether eco-innovation has a positive or negative influence on the business performance of companies and, through the complementarity approach, whether the joint implementation of R&D subsidy and R&D cooperation increases or decreases the sum of their respective individual impacts on the business performance. If the joint implementation is substitutive, business performance will be lower than potentially possible, so granting R&D subsidies under the condition of establishing R&D cooperation would not be an adequate policy to promote eco-innovation. The analyses were performed using data from the Technological Innovation Panel (PITEC) of 2013 for Spanish manufacturing companies. Our findings indicate that an eco-innovation-oriented strategy positively affects the labor productivity of companies and that receiving public aid as a consequence of establishing R&D cooperation agreements has a lower effect on labor productivity (non-eco-innovative companies), or the same effect (eco-innovative companies), compared to the sum of the individual impacts of R&D cooperation and R&D subsidy. Consequently, in non-eco-innovative companies the use of subsidized R&D cooperation is inadvisable, while their use in eco-innovative companies is neutral

Equine infection with Leishmania spp. in Costa Rica: Study of five cases

Background: Cutaneous forms of leishmaniosis due to Leishmania braziliensis have been reported in horses in the New World. Domestic animals play a role in the transmission of the disease. In Costa Rica, human cases of L. braziliensis, L. panamensis and L. infantum have been reported. Objectives: The present report describes five cases of equine cutaneous leishmaniosis in Costa Rica. The aetiological diagnosis was based on the presence of the parasite within the lesions. Methods: Skin biopsies were used to perform histopathological analyses of the lesions. Immunohistochemistry was used to detect the presence of the Leishmania spp. antigens in tissue sections. Laser-capture micro-dissection and quantitative real-time PCR techniques were carried out to detect the pathogen nucleic acid within the microscopic lesions. Results: Histopathological analyses showed a granulomatous inflammation within the dermis, with multi-nucleated giant cells, macrophages, lymphocytes and few neutrophils and eosinophils. We detected the parasite by immunohistochemistry, using a rabbit polyclonal antibody raised against Leishmania spp. However, we could not identify Leishmania spp. by quantitative real-time PCR in formalin-fixed paraffin-embedded tissues, using specific primers for the conserved region in the minicircle of the Leishmania DNA kinetoplast. Conclusions: Our results emphasise the importance of Leishmania spp. not only as a causative agent of equine cutaneous disease in the New World, but also as a possible emerging pathogen. Leishmaniosis is one of the most prevalent parasitic public health problems worldwide, and equines may have a role in the epidemiology of the disease.This study was supported by the Ayuntamiento de Madrid of the Comunidad de Madrid S2013/ABI-2747 (TAVS-CM) and by the Structural Funds of the European Union.S

Leishmania infantum UBC1 in Metacyclic Promastigotes from Phlebotomus perniciosus, a Vaccine Candidate for Zoonotic Visceral Leishmaniasis

Leishmania parasites cause outstanding levels of morbidity and mortality in many developing countries in tropical and subtropical regions. Numerous gene expression profiling studies have been performed comparing different Leishmania species' life-cycles and stage forms in regard to their distinct infective ability. Based on expression patterns, homology to human orthologues, in silico HLA-binding predictions, and annotated functions, we were able to select several vaccine candidates which are currently under study. One of these candidates is the Leishmania infantum ubiquitin-conjugating enzyme E2 (LiUBC1), whose relative levels, subcellular location, in vitro infectivity in the U937 myeloid human cell model, and protection levels in Syrian hamsters against L. infantum infection were studied herein. LiUBC1 displays a low level of similarity with the mammalian orthologs and relevant structure differences, such as the C-terminal domain, which is absent in the human ortholog. LiUBC1 is present in highly infective promastigotes. Knock-in parasites overexpressing the enzyme increased their infectivity, according to in vitro experiments. Syrian hamsters immunized with the recombinant LiUBC1 protein did not show any parasite burden in the spleen, unlike the infection control group. The IFN-γ transcript levels in splenocytes were significantly higher in the LiUBC1 immunized group. Therefore, LiUBC1 induced partial protection against L. infantum in the Syrian hamster model.This work was financed by a contract with CZ Vaccines, Porriño, Spain, and partially defrayed by a grant from the Fundación Ramón Areces. JL thanks CZ Vaccines for the fellowship.S

Heat inactivated mycobacteria, alpha-Gal and zebrafish: Insights gained from experiences with two promising trained immunity inductors and a validated animal model

Trained immunity (TRAIM) may be defined as a form of memory where innate immune cells such as monocytes, macrophages, dendritic and natural killer (NK) cells undergo an epigenetic reprogramming that enhances their primary defensive capabilities. Cross-pathogen protective TRAIM can be triggered in different hosts by exposure to live microbes or microbe-derived products such as heat-inactivated Mycobacterium bovis or with the glycan α-Gal to elicit protective responses against several pathogens. We review the TRAIM paradigm using two models representing distinct scales of immune sensitization: the whole bacterial cell and one of its building blocks, the polysaccharides or glycans. Observations point out to macrophage lytic capabilities and cytokine regulation as two key components in non-specific innate immune responses against infections. The study of the TRAIM response deserves attention to better characterize the evolution of host-pathogen cooperation both for identifying the aetiology of some diseases and for finding new therapeutic strategies. In this field, the zebrafish provides a convenient and complete biological system that could help to deepen in the knowledge of TRAIM-mediated mechanisms in pathogen-host interactions.This study was funded by Junta de Comunidades de Castilla-La Mancha, Spain, and EU-FEDER, projects MYCOTRAINING SBPLY/19/180501/000174 and CCM17-PIC-036 (SBPLY/17/180501/000185), Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación MCIN/AEI/10.13039/501100011033, Spain and EU-FEDER (Grant BIOGAL PID2020-116761GB-I00) and by Principado de Asturias, PCTI 2021–2023 (GRUPIN: IDI2021-000102) and FEDER. EFC holds a PhD contract from the UCLM cosupported by the European Social Fund (2020/3836).S

Factors affecting the performance of P22 ELISA for the diagnosis of caprine tuberculosis in milk samples

Caprine tuberculosis (TB) is a zoonosis caused by members of the Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC). Caprine TB eradication programmes are based mainly on intradermal tuberculin tests and slaughterhouse surveillance. However, the use of serological test has been extended as a potential diagnostic tool in goats through the use of serum, plasma, or even milk samples. Milk production and the antibodies (Ab) present in milk can vary depending on several circumstances. In the present study, different factors that may affect the performance of humoral TB diagnosis were analysed using goat milk samples: 1) lactation stage, 2) a recent previous skin test (booster effect) and 3) the effect of freeze-thaw cycles on milk samples preserved with azidiol. TB-infected animals (n = 44) were selected to evaluate the evolution of the Ab levels during the 6-month lactation period, along with its potential effect on the P22 ELISA results. In general, no significant changes (p = 0.079) were observed throughout the study as regards Ab levels in milk samples between consecutive analysis although the reactivity to P22 ELISA decreased when samplings were performed at the last two months of the lactation. Regarding the booster effect, the quantitative results showed a significant variation (p < 0.001) for both milk and serum samples when serological tests were carried out 15 days after the skin test. Finally, there were no significant differences (p = 0.99) in the P22 ELISA results when using milk samples preserved with azidiol that had undergone freeze-thaw cycles.This study was funded by the Spanish Ministry of Science and Innovation through the project “Análisis del proceso de erradicación de la tuberculosis caprina a largo plazo y desarrollo de pruebas de diagnóstico y medidas de control para su mejora (GoaTBfree-UCM, reference PID2019-105155RB-C31) and the Spanish Ministry of Agriculture, Fisheries and Food. JO was supported by an FPU (Formación de Profesorado Universitario) contract-fellowship provided by the Spanish Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades (FPU18/05197).S

CD45 expression discriminates waves of embryonic megakaryocytes in the mouse

Embryonic megakaryopoiesis starts in the yolk sac on gestational day 7.5 as part of the primitive wave of hematopoiesis, and it continues in the fetal liver when this organ is colonized by hematopoietic progenitors between day 9.5 and 10.5, as the definitive hematopoiesis wave. We characterized the precise phenotype of embryo megakaryocytes in the liver at gestational day 11.5, identifying them as CD41++CD45-CD9++CD61+MPL+CD42c+ tetraploid cells that express megakaryocyte-specific transcripts and display differential traits when compared to those present in the yolk sac at the same age. In contrast to megakaryocytes from adult bone marrow, embryo megakaryocytes are CD45- until day 13.5 of gestation, as are both the megakaryocyte progenitors and megakaryocyte/erythroid-committed progenitors. At gestational day 11.5, liver and yolk sac also contain CD41+CD45+ and CD41+CD45- cells. These populations, and that of CD41++CD45-CD42c+ cells, isolated from liver, differentiate in culture into CD41++CD45-CD42c+ proplatelet-bearing megakaryocytes. Also present at this time are CD41-CD45++CD11b+ cells, which produce low numbers of CD41++CD45-CD42c+ megakaryocytes in vitro, as do fetal liver cells expressing the macrophage-specific Csf receptor-1 (Csf1r/CD115) from MaFIA transgenic mice, which give rise poorly to CD41++CD45-CD42c+ embryo megakaryocytes both in vivo and in vitro In contrast, around 30% of adult megakaryocytes (CD41++CD45++CD9++CD42c+) from C57BL/6 and MaFIA mice express CD115. We propose that differential pathways operating in the mouse embryo liver at gestational day 11.5 beget CD41++CD45-CD42c+ embryo megakaryocytes that can be produced from CD41+CD45- or from CD41+CD45+ cells, at difference from those from bone marrow.This work was supported by grants from the Ministerio de Ciencia e Innovacion (MICINN SAF2009-12596) and from the Ministerio de Economia y Competitividad (MINECO SAF2012-33916 and SAF2015-70880-R MINECO/FEDER). NS was the recipient of a fellowship from the Centro de Biologia Molecular Severo Ochoa (CBMSO) and IC received a fellowship from the MICINN. The CBMSO receives institutional funding from Fundacion Ramon Areces. The CNIC is supported by the MEIC and the Pro CNIC Foundation, and is a Severo Ochoa Center of Excellence (MEIC award SEV-2015-0505).S

Detection of environmental SARS-CoV-2 RNA in a high prevalence setting in Spain.

Since March 2020, Spain (along with many other countries) has been severely affected by the ongoing coronavirus disease 19 (COVID-19) pandemic caused by the rapid spread of a new virus (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2; SARS-CoV-2). As part of global efforts to improve disease surveillance, we investigated how readily SARS-CoV-2 RNA could be detected in environmental samples collected from an isolated rural community in Spain with a high COVID-19 prevalence (6% of the population of 883 inhabitants). The first diagnosis of COVID-19-compatible symptoms in the village was recorded on 3 March 2020, and the last known active case resolved on 5 June 2020. By 15 May, two months after strict movement constraints were imposed ('lockdown'), and the cumulative number of symptomatic cases had increased to 53. Of those cases, 22 (41%) had been tested and confirmed by RT-PCR. On 13 May and 5 June, samples were collected from high-use surfaces and clothes in the homes of 13 confirmed cases, from surfaces in nine public service sites (e.g. supermarket and petrol station) and from the wastewater of the village sewage system. SARS-CoV-2 RNA was detected in 7 of 57 (12%) samples, including three households and three public sites. While there is not yet sufficient evidence to recommend environmental surveillance as a standard approach for COVID-19 epidemiology, environmental surveillance research may contribute to advance knowledge about COVID-19 by further elucidating virus shedding dynamics and environmental contamination, including the potential identification of animal reservoirs.S

Evaluation of P22 ELISA for the Detection of Mycobacterium bovis-Specific Antibody in the Oral Fluid of Goats

The ante-mortem diagnosis of tuberculosis (TB) in ruminants is based mainly on the intradermal tuberculin test and the IFN-γ assay. Antibody (Ab)-based tests have emerged as potential tools for the detection of TB infected animals using serum, plasma, or even milk samples. Oral fluids have also been evaluated as alternative samples with which to detect specific Abs against Mycobacterium bovis in pigs or wild boars, but not in ruminants. The objective of this study was, therefore, to evaluate the performance of an in house-ELISA for TB diagnosis (P22 ELISA) in goats as an experimental model for the diagnosis of TB using oral fluid samples. Oral fluid samples from 64 goats from a TB-infected herd (n = 197) and all the animals from a TB-free herd (n = 113) were analyzed using the P22 ELISA. The estimated sensitivity (Se) and specificity (Sp) were 34.4% (95% CI: 22.4-45.6) and 100% (95% CI: 97.4-100), respectively. The optimal cut-off point was set at 100% according to the ROC analysis. Those animals with a higher level of Abs in their oral fluid attained a higher lesion score (p = 0.018). In fact, when taking into account only the setting of the animals with severe lesions (n = 16), the ELISA showed a Se of 75% (95% CI: 53.7-96.2). Results of the present study suggest that the P22 ELISA is highly specific but has a limited value detecting infected animals in oral fluid samples. Nevertheless, its performance is significantly higher in the presence of severe lesions.This study was funded by the Herramientas para alcanzar la erradicación de la tuberculosis caprina (GoaTBfree) project (PID2019-105155RB-C31) and the Spanish Government's Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. JO was supported by an FPU (Formación de Profesorado Universitario) contract-fellowship provided by the Spanish Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades (FPU18/05197).S

Método de obtención de anticuerpos anti-hHDC y aplicaciones de los mismos

La presente invención proporciona un método para la obtención de anticuerpos, mono y/o policlonales, que interaccionan frente a la histidina descarboxilasa humana (hHDC), así como los polinucleótidos y polipéptidos necesarios para llevarlo a cabo. Del mismo modo, los usos de los mencionados anticuerpos, así como los kits de diagnóstico de los que formen parte también son objeto de la presente invención.REIVINDICACIONES: 1. Polinucleótido, capaz de codificar un polinpéptido capaz de generar de anticuerpos o fragmentos de los mismos específicos frente a hHDC, cuya secuencia es elegida del grupo: a.Secuencia que comprende SEQ ID 1 b.Secuencia que consiste en SEQ ID 1 o comprende fragmentos de ésta. c.Secuencia que difiera de las secuencias a o b debido a la degeneración del código genético. d.Secuencias que compartan al menos un 80%, 90%, 95% ó 98% de homología con cualquiera de las secuencias anteriores. 2. Polipéptido, según la reivindicación 1, capaz de generar anticuerpos específicos frente a hHDC y cuya secuencia es elegida del grupo: a.Secuencia que comprende SEQ ID 2 b.Secuencia que consiste en SEQ ID 2 o comprende fragmentos de ésta. c.Secuencia que comparta al menos un 80%, 90%, 95% ó 98% de homología la secuencia a o b. 3. Anticuerpos o fragmentos de los mismos específicos frente a hHDC, en donde dichos anticuerpos interaccionan específicamente frente cualquiera de los polipéptidos de la reivindicación 2. 4. Uso de cualquiera de los polipéptidos según la reivindicación 2 para la generación de anticuerpos o fragmentos de los mismos específicos frente a hHDC. 5. Uso según la reivindicación 4 en donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos son obtenidos por técnicas de generación de hibridomas. 6. Uso según la reivindicación 4 en donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos son obtenidos por la tecnología de "phage display". 7. Uso según la reivindicación 4 en donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos son obtenidos por inmunización de mamíferos no humanos. 8. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento. 9. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la degeneración neurológica. 10. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la anafilaxis y/o procesos alérgicos. 11. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento la degeneración de epitelios digestivos. 12. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento para el tratamiento de diferentes tipos de cáncer. 13. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de procesos infecciosos. 14. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3 para el diagnóstico in vitro de enfermedades. 15. Kit de diagnóstico que comprende la utilización de anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3.Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.Instituto de Salud Carlos III; Universidad de MálagaSolicitud de patent