Localization and regulation by GABA of anion transporter present in pollen grain protoplasts and tube of Arabidopsis thaliana

Tese de doutoramento, Biologia (Biologia do Desenvolvimento), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2015Upon hydration in the female gametophyte, pollen grains germinate and develop a cytoplasmic extension designated as the pollen tube. This cell is dramatically polarized, grows exclusively at its apex (apical growth) and responds to specific female cues by changing growth axis in order to direct it towards the entrance of the ovule. When germinated in vitro, pollen tubes display oscillations in growth, which is underlied by ion dynamics, namely ion fluxes across the membrane and cytosolic ionic gradients. By means of imaging techniques and by Ion-Specific Vibrating Probes, Zonia et al., (2002) identified and characterized chloride (Cl-) fluxes in growing pollen tubes from Lilium longiflorum and Nicotiana tabacum, showing an massive oscillatory efflux of Cl- at the tip and influxes all over the shank of the tube, starting approximately at 15 μm from the tip. The authors suggested that the Cl- fluxes are essential to pollen tube growth due to its role on the maintenance of the cellular volume, presumably by water flux control. The molecular nature and mechanisms of the pollen tube anion transporters are still mostly unknown. This thesis aims at characterizing the anionic currents present in the pollen grain protoplasts of two species, Lilium longiflorum (Lily) and Arabidopsis thaliana, and to characterize the putative transporters underlying these currents in Arabidopis. Lily pollen was chosen because (1) it’s one of the most studied species because of the favourable features of its pollen for Cell Biology studies and (2) it allows for a comparison between the same type of currents in two very different species. During the course of this project single channel events were detected by patch-clamp, and the existence of anionic currents across channels in the plasma membrane of un-germinated grains was demonstrated. In addition, by germinating Lily pollen we were able to find anionic currents similar to those measured in hydrated Lily protoplasts. We speculate that many of the channels present in the plasma membrane of the grain protoplasts may suffer a spatial redistribution to specific regions of the membrane during pollen tube germination and growth or that they undergo recycling. Arabidopsis was chosen due to its genetic tractability, namely the established resources for reverse-genetics approaches that facilitate the identification of candidate channels and transporters responsible for Cl- transport determined by patch-clamp. A full search into the available transcriptomic datasets for pollen grain (PG) and tube (PT) resulted in the selection of four candidate proteins that, due to their known electrophysiological profiles, could account for the observed currents and fluxes previously measured, respectively. Four transporter candidates were chosen: AtCCC (The Cation Chloride Cotransporter), SLAH3 (SLow Anion channel Homolog 3), ALMT12 (Aluminum-activated Malate Transporter 12) and At1g73020 (here designated by AtTMEM16, Arabidopsis thaliana TransMEMbrane 16). Mutant lines were generated and a electrophysiological characterization study and localization assays were performed. By patch clamp we could measure current alterations on hydrated pollen grain protoplasts of mutant for these genes. Pollen protoplasts (sporoplats) of the single gene mutants slah3-/-, almt12-/- and atmem16-/-, and the double mutant slah3-/-;almt12-/- present significant specific differences in currents than those measured in the wild-type (wt) group, namely: (1) a higher initial current (IInitial) in slah3-/- and attmem16-/- protoplasts; (2) almt12-/- had reduced IInitial and final currents (IFinal) for the negative membrane potentials (Vm) tested; (3) increased rundown currents (ILostRD) for the negative Vm in all three single mutants, (4) higher loss of ILostRd in slah3-/- and attmem16-/- protoplasts for positive Vm; (5) different sensitivities to 5-Nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoic acid (NPPB) were measured for all three single mutants and (6) different sensitivities and conductive states to Vm variations in the three single mutants. In addition, the currents measured from the double mutant line almt12-/-; slah3-/-, presented key differences when compared to wt, and to the respective single mutants, namely: a significant decrease in IInitial, IFinal and ILostRd, a higher rundown for the negative Vm, and a higher inhibition of ILostRd in relation to the slah3-/- single mutant. In the mutant context, the observed differences in the current amplitudes throughout the experimental protocol strongly suggest that the regulation of Cl- transport is very complex and involves several regulatory loops and different types of compensation, either by modulation/activation of the remaining channels or by transcriptional activation of other transporters. By overexpressing Green Fluorescent Protein (GFP) fusion chimeras of SLAH3, ALMT12 and AtTMEM16 channels and AtCCC under the control of the LAT52 pollen specific promoter we observe that AtCCC localizes to the plasma membrane (PM) in the shank of the PT, but not in the tip; AtTMEM16 localizes to the plasma membrane of the shank, and to enlogated membranous structures, presumably endoplasmatic reticulum, vesicle accumulation, or stretched young vacuoles; SLAH3 and ALMT12 are present in small circular organelles. We were able to successfully establish the localization of AtCCC at the shank of the PT and allocate SLAH3 to the tip. These results are suggestive that SLAH3 and AtCCC transporters could account for the fluxes measured by Zonia et al., (2002) in the growing PT. Vibrating Probe analysis in the 4 selected transporter mutants, further sustains the previous statement: the anionic fluxes collected from the tip of germinating PTs of slah3-/- and atccc-/- was significantly lower than those measured from the wt and almt12-/- and atmem16-/- mutants. We further expressed the candidate genes on mammalian cell lines, in order to characterize them electrophysiologically and to establish their molecular identity. ALMT12 expressed in COS-7 was technically challenging, but we were able to measure statistically relevant inward currents, resembling the electrophysiological profile of that described in Meyer et al., (2010). Finally, we show a direct regulation of the elicited currents in hydrated PGs by gamma-Aminobutyric acid (GABA). A motif that contains a binding site to GABA is shared between GABAA receptors and the ALMT family (Ramesh et al., 2015). When added to wt, 80-500 μM GABA inhibit significantly the overall currents, but this effect is completely abrogated in almt12-/-.sporoplasts. In addition, when GABA was added to two ALMT12 transfected COS-7 mammalian cell it induced single channel flickering events. These results, strongly suggest that GABA directly binds to ALMT12 channels, and establishes ALMT channels as prominent candidates for GABA binding and consequent biological implications in plants. The physiological implications of the present findings are discussed, in the context of pollen tube growth regulation.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT

Sistemas de informações sua estrutura e gerenciamento

TCC (Graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro Socioeconômico. Curso de Ciências Contábeis0 surgimento de novas tecnologias tem levado as empresas para um constante aperfeiçoamento, procurando melhorar a qualidade dos serviços e produtos, para serem competitivos e continuarem concorrendo no mercado. Neste contexto, torna-se imprescindível estabelecer metas e buscar ferramentas disponíveis para se adequarem as exigências do mercado. Partindo desta necessidade, as organizações buscam formas de se organizarem para obterem os recursos necessários para o bom andamento das atividades. 0 planejamento adequado da administração é um ponto que deve ser feito com atenção, pois é a partir deste que se inicia o controle das atividades. Para tanto tem-se que buscar instrumentos que auxiliem o processo gerencial da empresa. A qualidade da decisão tomada depende da informação que é obtida. Os sistemas de informações foram criados para dar apoio as organizações a atingirem suas metas. Auxiliando na avaliação de todas as areas da empresa, como, operacional; mercadológica; financeira; administrativa, enfim, auxiliar na obtenção de lucros e redução de custos

The expert nurse in mental health and psychiatry as a facilitator of behavioral adaptation/management

As transições são processos fundamentais no ciclo de vida e embora não impliquem necessariamente doença, esta surge como um elemento que exige uma mudança e um processo de adaptação. Por sua vez a adaptação de comportamento às diferentes situações ou acontecimentos prevê a existência de uma harmonia entre as necessidades internas, as demandas externas e os processos utilizados para essa concretização. Neste contexto o Enfermeiro de Saúde Mental e Psiquiatria surge, pelas suas competências específicas que contemplam a pessoa durante o ciclo vital, o individuo, famílias e comunidades, como o profissional com plenas capacidades para auxiliar o outro na adaptação a diversos desafios de vida, incluam a doença ou promovam a saúde mental.Transitions are fundamental processes in the life cycle and although they do not necessarily imply disease, it appears as an element that requires a change and a process of adaptation. In turn the adaptation of behavior to the different situations or events foresees the existence of a harmony the internal needs, the external demands and the processes used for this realization. In this context the nurse of Mental Health and psychiatry arises, by their specific skills that contemplate the person during the life cycle, the individual, families and communities, as the professional with full capacities to assist the other in adapting to various life challenges, include disease or promote mental health

Conceções e experiências de conciliação entre a vida profissional, familiar e pessoal : a perspetiva das pessoas que trabalham numa autarquia

A persistência de problemas de conciliação da vida profissional, pessoal e familiar é um dos sinais mais evidentes da persistência da desigualdade de género, apesar dos progressos ao nível da igualdade formal, consubstanciada em políticas públicas e legislação. No estudo, a análise da problemática da conciliação é uma análise genderizada, que coloca as relações sociais entre homens e mulheres no centro da reflexão. Isto porque se acredita no seu potencial heurístico quer para a compreensão da problemática na perspetiva dos sujeitos (a forma como conceções de género influenciam práticas, conceções e experiências de mulheres e de homens relativamente ao trabalho e à família), quer para a fundamentação de uma intervenção organizacional promotora da igualdade (objetivo do Plano para a igualdade em desenvolvimento na autarquia). Assim, são mobilizadas em termos analíticos as seguintes dimensões: Conceções sobre identidades, valores e papéis de género, estratégias mobilizadas para a conciliação, perceção do conflito trabalho-família, família-trabalho (fatores de conflito, perceções de perda), visões sobre as políticas públicas e práticas organizacionais, literacia de direitos e “sentido dos direitos”.The persistence of the problems of professional, personal and familiar conciliation is one of the most obvious signs of gender inequality persistence, in spite of the progress relating with formal equality, consolidated in public politics and legislation. In this research, the analysis of the conciliation problematic is a gender analysis, which puts the relationships between men and women in the centre of this reflection. This occurs because it is believed that it has a heuristic potential for the problematic understanding in the subjects’ perspective (the way the gender conceptions have influence in men and women’s performance, conception and experience relating with work and family). So, the following dimensions are mobilized in an analytic perspective: Conceptions about identities, gender’s value and role, strategies used to conciliation, perception of work-family, family-work conflict (conflict factors, lost perception), visions about public politics and organizational practice, rights’ literacy and “sense of entitlement”

Cooperativismo e desenvolvimento rural em Angola: o caso do município de Cacula /Província da Huíla

Trabalho de Conclusão de Curso, apresentado para obtenção do grau de bacharelado no curso de ciências econômicas da Universidade do Extremo Sul Catarinense, UNESC.Este estudo teve como objetivo analisar o papel socioeconômico das cooperativas agrícolas no município de Cacula, localizado na província da Huíla, Angola, bem como a sua importância nas localidades rurais, na geração de emprego e renda, diminuição das desigualdades sociais e combate à pobreza. Desta feita, a pesquisa teve uma abordagem qualitativa, com delineamento documental. O estudo foi desenvolvido com base relatórios fornecidos por uma instituição não governamental denominada Ação para o Desenvolvimento rural e Ambiente de Angola (ADRA). Neste sentido, usando como um estudo de caso as cooperativas de Cacula, conseguiu-se perceber o contributo significativo das cooperativas agrícolas nas regiões onde atuam, tendo as mesmas uma participação significativa no desenvolvimento das localidades rurais, mas, que possuem algumas limitações que impossibilitam crescimentos maiores destas organizações, tendo sido simplificadas pela falta de políticas públicas que ajudem a alavancar as atividades destes movimentos no campo

dos conceitos às práticas no parto por cesariana

Recomendado pela OMS/UNICEF, o contacto pele-a-pele, traduz-se em vários benefícios para a mãe e para o recém-nascido e é fundamental que seja estabelecido imediatamente após o parto. Não obstante, em Portugal, a prática deste tipo de contacto nos partos por cesariana não é uma realidade generalizada, e, muitas parturientes/recém-nascidos são privadas das suas vantagens. Adotando como quadro de referência a teoria de Kristen Swanson (1991), o presente relatório, teve como finalidade apresentar uma análise crítica das competências desenvolvidas (e das atividades realizadas) no âmbito da unidade curricular Estágio com Relatório inserida no 6º Curso de Mestrado de Saúde Materna e Obstetrícia da ESEL. Privilegiando a prática baseada em evidência, foi realizada uma revisão da literatura tendo como ponto de partida uma questão elaborada segundo a mnemónica PICo (JBI, 2014): “Quais as experiências dos enfermeiros obstetras na promoção do contacto pele-a-pele no parto por cesariana?”. Da revisão efetuada emergiu a existência de vários obstáculos na realização do contacto pele-a-pele no parto por cesariana, entre os quais se destacam: os aspetos relacionados com os serviços (estrutura física e escassez de recursos humanos), com os profissionais (prioridade atribuída ao cumprimento de rotinas, dificuldades na articulação com outros profissionais, heterogeneidade de perspetivas sobre a temática) e com os pais (desconhecimento sobre a temática, limitações físicas decorrentes da condição materna e falta de motivação)

Anti-inflamatórios não esteroides: automedicação versus regime de prescrição

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas MonizIntrodução: Este estudo pretendia determinar o padrão de indicação e o perfil de utilização dos AINEs, incluindo experiência de efeitos adversos em ambulatório. Métodos: Recorreu-se a um estudo observacional transversal para estudar o padrão de indicação dos AINEs, com componente prospetiva para caracterizar o seu perfil de utilização e a incidência de efeitos adversos. A informação foi recolhida por dois questionários (T0 e T1) numa amostra de conveniência numa farmácia no concelho de Loures. Estimou-se (Epi Info versão 7), numa população de 3500 habitantes, prevalência do fenómeno de19,4%, IC 95% e erro de 3%, serem necessários 159 doentes para um ensaio piloto da componente transversal. Os dados foram analisados em SPSS v. 21. Resultados: A amostra (n=159) constituiu-se maioritariamente de mulheres (61,6%), com idade média de 55 anos (Dp = 19,88), casadas (58,5%), com o 1º Ciclo do Ensino básico (30,8%) e ativas (56,0%). Os AINEs foram maioritariamente adquiridos mediante prescrição médica (67%). Verificou-se maior recurso à automedicação entre os indivíduos analfabetos (p = 0,041). A via de administração mais prescrita foi a oral (92,2%), sendo a tópica mais frequente entre os casos de automedicação. Entre os inquiridos, 11,3% haviam experienciado previamente efeitos adversos a AINEs [ibuprofeno (38%), diclofenac (29%) e etoricoxib (14%)]; os efeitos adversos mais reportados foram as epigastralgias (52%). Entre os indivíduos que integraram a componente prospetiva (n= 31) verificou-se uma incidência de efeitos adversos de 3,2%; a adesão foi 9,7%. Discussão e conclusão: Existem diferenças no padrão de indicação de AINEs entre a automedicação e prescrição. A prevalência de efeitos adversos foi superior a 10%, consistente com a literatura. A baixa incidência observada pode resultar do curto tempo de seguimento e da reduzida amostra que integrou a componente prospetiva, indicando que existem aspetos a aprofundar em estudos futuros sobre a utilização dos AINEs na população portuguesa