Purificação de toxinas produzidas por Clostridium perfringens: uma revisão

Clostridium perfringensé uma bactéria anaeróbia Gram-positiva, amplamente distribuída no meio ambiente e comumente encontrada no intestino de animais, incluindo o homem. As espécies de C. perfringensestão classificadas em cinco tipos toxigênicos (A, B, C, D, E) em função da produção de quatro toxinas (±, ², µ, ¹). Entretanto, as toxinas teta, delta, lambda e enterotoxina são também sintetizadas por outras espécies dessa bactéria. Muitas metodologias para purificação das toxinas produzidas por C. perfringens têm sido propostas e, portanto, nesta revisão foram apresentados e discutidos os métodos e resultados de purificação dessas toxinas relatados nas últimas quatro décadas.Clostridium perfringens, a Gram-positive anaerobic bacterium, is widespread in the environment and commonly found in the intestines of animals, including humans. C. perfringens strains are classified into five toxinotypes (A, B, C, D and E) based on the production of four major toxins (±, ², µ, ¹). However the toxins (theta, delta, lambda and enterotoxin) are also synthesized by C. perfringens strain. Many attempts to purify the toxins produced by C. perfringens have been proposed. In this review we discuss the purification methods used to isolate toxins from C. perfringens reported in last four decades

Parâmetros técnicos do processo de secagem de pimentão (Capsicum annuum L.) / Technical parameters of the bell pepper drying process (Capsicum annuum L.)

 O pimentão é um fruto muito consumido no Brasil e no mundo sendo encontrado em diferentes cores e destaca-se por ser uma fonte rica em vitamina C e sais minerais. Em temperatura ambiente conserva-se por pouco tempo fazendo-se necessário sua imediata conservação. A desidratação de alimentos destaca-se pela influência nos aspectos técnicos e econômicos. Este trabalho objetivou-se determinar as características físico-químicas e de secagem do pimentão. A matéria-prima foi adquirida no mercado local na cidade de Montes Claros. Foi lavada e higienizada em seguida branqueada a 100° C por 15 minutos. As análises físico-químicas foram conduzidas conforme as Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz. A secagem foi realizada utilizando um secador de bandeja na temperatura de ar de secagem de 65ºC. A análise da cor foi feita utilizando um colorímetro. Os resultados evidenciaram que para atingir teor de umidade adimensional de 0,1 correspondentes a um teor de umidade de 9,36% em base úmida, são necessárias 6 horas na temperatura de ar de secagem de 65º C. Verifica-se que na secagem o pimentão sofre alteração da cor do produto de 7,89 (ΔE). Conclui-se que o modelo polinomial de terceiro grau ajustou-se bem aos dados experimentais da curva de secagem do pimentão desidratado e que o processo de secagem influencia na perda da cor. O pimentão após desidratado sofre ligeira modificação em suas características físico-químicas

Evaluation of type B Clostridium perfringens growing conditions and the production of toxins for veterinary vaccines production

Clostridium perfringens tipo B, bactéria anaeróbia, heterofermentativa, gram-positiva e produtora de toxina, é importante agente causador de doenças entéricas em animais. As toxinas inativadas α, β e ε produzidas por esse microrganismo estão presentes na composição das vacinas veterinárias contra clostridioses. Neste trabalho, estudou-se o efeito da composição do meio de cultura e do pH sobre o crescimento e produção de toxinas por Clostridium perfringens Tipo B para produção de vacinas veterinárias. Foram estudadas as concentrações iniciais da glicose e a presença de diferentes hidrolisados protéicos no meio – peptona de carne e peptona de caseína – e suas combinações. Os experimentos foram realizados em culturas conduzidas sob regime de batelada, com o uso de meio basal recomendado na literatura, observando-se a produção máxima de toxinas. Amostras foram coletadas a cada hora para determinação da concentração de células, ácido lático, ácido acético, ácido propiônico, ácido fórmico, etanol e glicose. Os melhores resultados foram obtidos quando o pH foi mantido em 6,5, utilizando-se 10,0 g.L-1 de glicose e 10,0 g.L-1 de hidrolisado protéico. A origem da proteína não teve influência significativa sobre o cultivo e a produção de toxinas. Pela análise da cinética de crescimento e produção, evidenciou-se que a formação de toxinas está associada ao crescimento. O presente estudo permitiu encontrar parâmetros satisfatórios de cultivo, que foram utilizados na ampliação de escala para produção industrial de vacinas contra clostridioses causadas por C. perfringens tipo B.Type B Clostridium perfringens, anaerobic, hetero-fermentative, gram- positive and toxin producer bacteria is an important agent of enteric diseases in animals. The α, β and ε inactivated toxins produced by this microorganism are present in the composition of veterinary vaccines against diseases. In this work, the effects of culture medium composition and pH on growth and toxin production by the bacteria were studied. The initial glucose concentrations and the presence of different hydrolytic proteins in the medium – meat peptone and casein peptone – and their combination, were studied. The experiments were conducted in the batch system, using basal medium as recommended by literature. The best results were obtained when pH was kept at 6.5, using 10.0 gL-1 glucose and 10.0 gL-1 hydrolytic protein. The variation of the protein origin had no significant effect on the growth and toxin production. The analysis of the growth kinetics and production indicated that toxin formation is associated with growth. The present study permitted the finding of optimum growth parameters which were used in the amplification of scale for industrial production of vaccines against clostridial diseases caused by type B Clostridium perfringens.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

EFEITO DO TEOR DE SÓLIDOS NÃO GORDUROSOS E DA CONCENTRAÇÃO DE SACAROSE NA ACIDIFICAÇÃO DE IOGURTE POR BACTÉRIAS LÁTICAS

The culture conditions influence the kinetics of growth and acidification of lactic acid bacteria. This study assessed the effect of adding different concentrations of sucrose and non fat milk solids in the production of lactic acid and pH variation in yogurt by thermophilic lactic acid bacteria. Yogurts were prepared from milk powder with concentrations of 6, 8, 10 and 12% solids non fat, 4, 6, 8 and 12% sucrose, was added to mixed lactic acid culture of Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus and Streptococcus thermophilus. Samples were collected from yogurt in pre-determined for analysis of acidity and pH. The factors time, solids non fat and sucrose content were significant (p <0.05), except the concentration of sucrose in relation to variable pH. Therefore, pH and acidity behaved independently as a function of the factors studied. We observed a decrease in acidity as a function of sucrose concentration in milk. A signi? cant interaction between pH and concentrations of sucrose used in this study. So, although there may be differences in texture and viscosity of the clot, no differences were observed in relation to acid production and pH decrease.As condições da cultura influenciam na cinética de crescimento e de acidi? cação das bactérias láticas em iogurtes. A pós-acidi? cação é uma das principais características de qualidade de um leite fermentado e por esse fato deve ser controlada rigorosamente para que na indústria a produção seja padronizada. Objetivou-se verificar a influência da adição de diferentes concentrações de sacarose e sólidos não gordurosos do leite na produção de ácido lático e variação do pH em iogurte por bactérias láticas termofílicas. Preparou-se iogurtes a partir de leite em pó com concentrações de 6, 8, 10 e 12 % de sólidos não gordurosos e 4, 6, 8 e 12 % de sacarose, adicionou-se cultura lática mista de Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus e Streptococcus termophilus. Coletou-se amostras de iogurte em tempos pré-determinado para a análise de acidez e pH. Os fatores tempo, sólidos não gordurosos e teor de sacarose foram significativos (p<0,05), exceto a concentração de sacarose em relação à variável pH. Portanto, as variáveis pH e acidez comportaram-se de maneira independente em função dos fatores estudados. Observou-se o decréscimo da acidez titulável em função da concentração de sacarose no leite. Houve interação significativa entre os valores de pH e as concentrações de sacarose utilizadas neste estudo. Logo, ainda que possa haver diferenças na textura e viscosidade do coágulo, não se observou diferenças em relação à produção de ácido e decréscimo do pH

Efeito in-vitro de nisina sobre pool de Staphylococcus aureus isolados de queijos minas artesanal da região do Campo das Vertentes-MG

Minas traditional cheeses currently have a prominent role in the scientific depending on their social and economic importance to the country legally. Although the cheese can be marketed within the state, is notorious its presence outside of Minas Gerais. Because it is made with raw milk, the cheese has a risk for consumers to be potential carrier of pathogens such as Listeria, Salmonella and Staphylococcus aureus. The use of raw milk implies the need for studies to significantly decrease their contamination by S. aureus. Studies have shown that the addition of nisin to cheese manufacturing process can significantly reduce the contamination. The aim of this study was to evaluate the effect of Nisin on pool S. aureus isolates from traditional cheeses of Campo das Vertentes. Four levels (100, 200, 400 and 500 IU. mL-1) of the commercial preparation Nisaplin ® in autoclaved reconstituted skim milk at 10%. The analysis of S. aureus were made using 3M Petrifilm at zero; 3, 5, 8, 10, 12, 16, 24, 36, 48, 72, and 96 of incubation. There was no significant difference (p > 0.05) between control and doses of 200 IU mL-1. However differences were observed between the other doses (p <0.05) in the two mentioned and also among themselves. The results of this study confirm those already made elsewhere showing that nisin can be effective in reducing counts of S. aureus in cheeses made with raw milk.Queijos artesanais têm atualmente papel de destaque no cenário científico em função da sua importância social e econômica para o País. Embora legalmente o queijo só possa ser comercializado dentro do Estado, é notória a sua presença fora de Minas Gerais. Pelo fato de ser elaborado com leite cru, o queijo apresenta risco para os consumidores por ser potencial carreador de micro-organismos patogênicos como Staphylococcus aureus. A obrigatoriedade da utilização de leite cru implica a necessidade de estudos para diminuir consideravelmente a contaminação dos mesmos por S. aureus. Estudos mostraram que a adição de nisina ao processo de fabricação dos queijos podem diminuir a contaminação consideravelmente. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da adição de nisina sobre pool de S. aureus isolados de queijos Minas artesanais do Campo das Vertentes. Foram testadas quatro doses (100; 200; 400 e 500 UI. mL-1) do preparado comercial Nisaplin® em leite autoclavado desnatado reconstituído a 10%. As análises de S. aureus foram feitas utilizando-se Petrifilm nos tempos zero; 3, 5, 8, 10, 12, 16, 24, 36, 48, 72 e 96 de incubação. Não houve diferença significativa (p > 0,05) entres o controle e a doses de 200 UI mL-1. No entanto foi observada diferença entre as demais doses (p<0,05) em relação as duas mencionadas e também entre elas próprias. Os resultados obtidos neste trabalho corroboram os já realizados em outras regiões mostrando que a nisina pode ser efetiva para redução das contagens de S. aureus em queijos elaborados com leite cru

Growth conditions of clostridium perfringens type B for production of toxins used to obtain veterinary vaccines

The diseases caused for Clostridium perfringens are generically called enterotoxemias because toxins produced in the intestine may be absorbed into the general circulation. C. perfringens type B, grown in batch fermentation, produced toxins used to obtain veterinary vaccines. Glucose in concentrations of 1.4–111.1 mM was used to define the culture medium. The minimum concentration for a satisfactory production of vaccines against clostridial diseases was 55.6 mM. Best results were brought forth by meat and casein peptones, both in the concentration 5.0 g l^−1 in combination with glucose and a culture pH maintained at 6.5 throughout the fermentation process. The production of lactic, acetic and propionic organic acids was observed. Ethanol was the metabolite produced in the highest concentration when cultures maintained steady pH of 6.5 with exception of cultures with initial glucose concentration of 1.4 mM, where the highest production was of propionic acid. Maximal cell concentration and the highest toxin title concomitantly low yield coefficient to organic acids and ethanol were obtained using basal medium containing 111.1 mM glucose under a controlled pH culture (pH) 6.5 in batch fermentations of C. perfringens type B. These data contribute to improve process for industrial toxin production allowing better condition to produce a toxoid vaccine

Antioxidant activity of essential oils from condiment plants and their effect on lactic cultures and pathogenic bacteria

ABSTRACT: Studies about preservative and antioxidant activity of essential oils have been encouraged in recent years, given their importance to food industry. The aim of the current study was to evaluate the antioxidant properties and antimicrobial activity of essential oils deriving from Syzygium aromaticum, Cymbopogon citratus and Lippia alba against lactic and pathogenic bacteria responsible for food-borne diseases. Essential oil antibacterial activity was assessed through disc diffusion and macrodilution tests conducted in a mixed lactic culture of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Streptococcus thermophilus (YF-L903) and of Escherichia coli (ATCC 8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Salmonella enterica (ATCC 6017) strains. Based on the chromatographic analysis results, the essential oils shown to be composed of eugenol (79.41%) which was the prevalent compound in S. aromaticum, geranial (31.89%), neral (24.52%) and β-myrcene (25.37%) in C. citratus, as well as of geranial (33.80%) and neral (25.63%) in L. alba. The observed antibacterial activity confirmed the dose-dependent effect of these three oils on all the assessed bacteria; there was halo inhibition at concentration 20μL mL-1. The essential oil of S. aromaticum presented better antioxidant activity, with IC50 equal to 5.76μg mL-1 and antioxidant activity index of 6.94, and it was considered strong (AAI>2.0) in comparison to the other evaluated oils. This essential oil also presented excellent antioxidant activity at concentrations lower than the one required to inhibit lactic cultures. Based in this outcome, the essential oil from S. aromaticum can be used as preservative agent in processed food whose formulation presents lactic cultures

Toxicidade aguda dos extratos hidroalcoólicos das folhas de alecrim-pimenta, aroeira e barbatimão e do farelo da casca de pequi administrados por via intraperitoneal Acute toxicity of leaf hydroalcoholic extracts of Lippia sidoides, Myracroduon urundeuva, Stryphnodendron adstringens and of Caryocar brasilliense administered by intraperitoneal route

O estudo objetivou realizar ensaio toxicológico pré-clínico inicial para investigar a toxicidade das folhas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), aroeira (Myracrodruon urundeuva Fr. All.) e barbatimão [Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville] e do farelo da casca de pequi (Caryocar brasiliense Camb.), por meio da determinação da dose letal 50% (DL50). Na investigação da DL50, foram utilizados grupos de camundongos Swiss de mesmo sexo (n=150, sendo 30 animais por tratamento) inoculados, por via intraperitoneal, com diluições seriadas do extrato hidroalcoólico das folhas de alecrim, aroeira e barbatimão e do farelo da casca de pequi. Após a inoculação, os animais foram observados por um período de 14 dias, para determinar a quantidade de mortos, doentes e sobreviventes. O estudo toxicológico pré-clínico agudo demonstrou, em camundongos por via intraperitoneal, toxicidade igual a 0,31mg mL-1 DL50 mL-1 para todas as plantas, exceto para o barbatimão, que apresentou toxicidade igual a 0,25mg mL-1. Pesquisas devem ser realizadas visando a obter dados de toxicidade das plantas em outras vias para assegurar o uso em saúde humana e animal.This study aimed to conductpre-clinical toxicology testing to investigate the toxicity of Lippia sidoides Cham., Myracrodruon urundeuva Fr. All., Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville and Caryocar brasiliense Camb., by determining the 50% (LDL50) lethal dose. In the investigation of the LD50, groups of Swiss mice of the same sex were used (n=150; 30 animals per plant and all inoculated intraperitoneally with serial dilutions of the aqueous fraction obtained from the leaves of plants. After inoculation, the animals were observed along a period of 14 days in order to observe the dead, sick and survivors rate. In mice inoculated intraperitoneally, the acute pre-clinical toxicology testing demonstrated toxicity equal to 0,31mg mL-1 LD50 mL-1 for all plants. The exception was for Stryphnodendron adstringens, which presented toxicity equal to a 0,25mg mL-1DL50 mL-1 and values expressed in terms of dilution. Research should be conducted to obtain data on toxicity of the plants in other ways to ensure the use in human and animal health. Therefore, the studied plants should be used with caution. They present a relatively mild toxic potential, but it may be harmful to users if they are not properly utilized