Etude de la fonction d'une protéine à doigts de zinc (la basonucline 2)

La basonucline 2 (bnc2) est une protéine à doigts de zinc récemment découverte au laboratoire d accueil. Son paralogue, la basonucline 1 (bnc1), est associé au potentiel prolifératif des kératinocytes basaux. Les deux basonuclines partagent la même structure générale (NLS, doigts de zinc, région riche en sérine), suggérant une origine évolutive commune. Bnc2 colocalise avec SC35, un marqueur des speckles nucléaires, ce qui suggère fortement une fonction dans le mécanisme de maturation des ARNm. De plus, l extrême stabilité évolutive de la basonucline 2 suggère que cette protéine possède une importante fonction. Afin d identifier cette fonction, nous avons généré des souris transgéniques dont le gène de la basonucline 2 a été invalidé par trappe génique. Les nouveau-nés mutants ont des anomalies des crânio-faciales ainsi qu une fente palatine responsable de leur décès dans les 24h post natal. Chez les embryons tardifs, une diminution importante du taux de prolifération des cellules mésenchymateuses est visible signifiant que bnc2 est essentielle pour la multiplication du mésenchyme crânio-facial durant l embryogénèse. La protéine bnc2 est présente dans divers tissus tels que le tractus intestinal, le périchondrium, les follicules pilleux, le périneurium et les gonades, le développement de ces dernières étant fortement affecté par l absence de bnc2.Nous avons confirmé que les doigts de zinc des basonuclines et des protéines disco et disco-r de drosophile possèdent des séquences similaires ce suggère que ce sont les orthologues. L invalidation de bnc2 a également démontré que la basonucline 2 partage avec disco une fonction dans le développement céphaliquePARIS-BIUSJ-Biologie recherche (751052107) / SudocSudocFranceF

La supplémentation en hypotaurine des milieux de préparation et de congélation améliore la qualité fonctionnelle et nucléaire spermatique

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Quelle est la place de l’automatisation du spermogramme-spermocytogramme dans un laboratoire de Biologie de la Reproduction: performance et validation de méthode de l’automate du SQA-Vision®

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Sperm cryostorage in a dry tank: An accurate alternative

International audienceThis prospective study aimed to determine the effects of dry nitrogen cryostorage on human sperm characteristics in comparison with liquid nitrogen cryostorage. For this purpose, 42 men undergoing routine semen analysis (21 normozoospermia and 21 with altered semen parameters) were analyzed. After slow freezing, half of the straws of each sample were randomly stored in liquid and dry tanks, at the top and bottom levels of the latter. After 6 months storage, thawed samples were treated by density gradient centrifugation and sperm characteristics were compared. There was no difference in sperm progressive motility (15.1% ± 14.2% vs. 15.1% ± 12.7%; p = 0.76), sperm vitality (25.5% ± 17.7% vs. 26.2% ± 19%; p = 0.71), percentages of acrosome-reacted spermatozoa (38% ± 8.5% vs. 38.5% ± 7.4%; p = 0.53) and DNA fragmentation spermatozoa (27.3% ± 12.4% vs. 28.5% ± 12.9%, p = 0.47) after cryostorage in the dry or the liquid nitrogen tank. Moreover, we did not observe differences between either cryostorage system for normal and altered sperm samples. This lack of difference was also observed whatever the floor level of cryostorage in the dry tank. The temperature measurement of the dry tank showed a stable temperature at −194 °C throughout storage whatever the storage floor level, guaranteeing the stability of the low temperatures suitable for human sperm storage. Because of its greater safety, dry storage without contact with the liquid phase should be preferred and can be a useful alternative for the cryostorage of human sperm samples

Beneficial effects of hypotaurine supplementation in preparation and freezing media on human sperm cryo-capacitation and DNA quality

International audienceAbstract Background Although widely used, slow freezing considerably modifies the functions of human spermatozoa. Cryopreservation induces nuclear sperm alterations and cryo-capacitation, reducing the chances of pregnancy. Hypotaurine is naturally present in the male and female genital tracts and has capacitating, osmolytic and anti-oxidant properties. The analysis were performed on surplus semen of men with normal ( n = 19) or abnormal ( n = 14) sperm parameters. Spermatozoa were selected by density gradient centrifugation before slow freezing. For each sample, these steps were performed in parallel with (“H+” arm) or without (“H-” arm) hypotaurine supplementation. After thawing, we measured total and progressive mobility, vitality, acrosome integrity, markers of capacitation signaling pathway and nuclear quality. For the latter, we focused on sperm chromatin packaging, DNA fragmentation and the presence of vacuoles in the sperm nucleus. Results Post-thaw spermatozoa selected and frozen in the presence of hypotaurine had a higher vitality (+ 16.7%, p < 0.001), progressive and total motility (+ 39.9% and + 21.6% respectively, p < 0.005) than spermatozoa from the control “H-” arm. Hypotaurine also reduced the non-specific phosphorylation of the capacitation protein markers P110 and P80 ( p < 0.01), indicating a decrease in cryo-capacitation. Hypotaurine supplementation reduced chromatin decondensation, measured by chromomycin A3 (− 16.1%, p < 0.05), DNA fragmentation (− 18.7%, p < 0.05) and nuclear vacuolization (− 20.8%, p < 0.05). Conclusion Our study is the first to demonstrate beneficial effects of hypotaurine supplementation in preparation and freezing procedures on human spermatozoa sperm fertilization capacity and nucleus quality. Hypotaurine supplementation limited cryo-capacitation, increased the proportion of live and progressively motile spermatozoa and reduces the percentage of spermatozoa showing chromatin decondensation, DNA fragmentation and nuclear vacuolation. Trial registration Clinical Trial, NCT04011813 . Registered 19 May 2019 - Retrospectively registered.Résumé Contexte Bien que largement utilisée, la congélation lente modifie considérablement les fonctions des spermatozoïdes humains. La cryoconservation induit des altérations nucléaires du sperme et une cryocapacitation, réduisant les chances de grossesse. L’hypotaurine est. naturellement présente dans les voies génitales masculines et féminines et possède des propriétés capacitantes, osmotiques et anti-oxydantes. Les mesures ont été réalisées sur le reliquat de sperme d’hommes avec des paramètres spermatiques normaux ( n = 19) ou anormaux ( n = 14). Les spermatozoïdes ont été sélectionnés par centrifugation sur gradient de densité (test de migration survie) avant congélation lente. Pour chaque prélèvement, ces étapes ont été réalisées en parallèle avec des milieux supplémentés en hypotaurine (bras « H+ ») ou sans hypotaurine (bras « H- »). Après décongélation, nous avons mesuré la mobilité totale et progressive, la vitalité, l’intégrité de l’acrosome, des marqueurs de la voie de signalisation de la capacitation et la qualité nucléaire. Pour cette dernière, nous nous sommes concentrés sur la condensation de la chromatine, la fragmentation de l’ADN et la présence de vacuoles dans le noyau du sperme. Résultats Post-décongélation, les spermatozoïdes sélectionnés et congelés en présence d’hypotaurine avaient une vitalité plus élevée (+ 16,7%, p < 0,001), une motilité progressive et totale (+ 39,9% et + 21,6% respectivement, p < 0,005) que les spermatozoïdes du bras « H- » sans suplémentation. L’hypotaurine a également réduit la phosphorylation non spécifique des marqueurs protéiques de capacitation P110 et P80 ( p < 0,01), indiquant une diminution de la cryocapacitation. La supplémentation en hypotaurine a réduit la décondensation de la chromatine, mesurée par la chromomycine A3 (− 16,1%, p < 0,05), la fragmentation de l’ADN (− 18,7%, p < 0,05) et la vacuolisation nucléaire (− 20,8%, p < 0,05). Conclusion Notre étude est. la première à démontrer les effets bénéfiques de la supplémentation en hypotaurine dans les milieux de préparation et de congélation sur la capacité de fécondation des spermatozoïdes humains et leur qualité nucléaire. La supplémentation en hypotaurine a limité la cryocapacitation, augmenté la proportion de spermatozoïdes vivants et progressivement mobiles et réduit le pourcentage de spermatozoïdes présentant une décondensation de la chromatine, une fragmentation de l’ADN et une vacuolisation nucléaire. Enregistrement de l’essai essai clinique, NCT04011813 . Enregistré le 19 mai 2019 - Enregistré rétrospectivement

Comparaison des paramètres morphocinétiques du développement embryonnaire humain cultivé en milieu global ou en milieu séquentiel

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