Immunohistochemistry as an Important Tool in Biomarkers Detection and Clinical Practice

The immunohistochemistry technique is used in the search for cell or tissue antigens that range from amino acids and proteins to infectious agents and specific cellular populations. The technique comprises two phases: (1) slides preparation and stages involved for the reaction; (2) interpretation and quantification of the obtained expression. Immunohistochemistry is an important tool for scientific research and also a complementary technique for the elucidation of differential diagnoses which are not determinable by conventional analysis with hematoxylin and eosin. In the last couple of decades there has been an exponential increase in publications on immunohistochemistry and immunocytochemistry techniques. This review covers the immunohistochemistry technique; its history, applications, importance, limitations, difficulties, problems and some aspects related to results interpretation and quantification. Future developments on the immunohistochemistry technique and its expression quantification should not be disseminated in two languages—that of the pathologist and another of clinician or surgeon. The scientific, diagnostic and prognostic applications of this methodology must be explored in a bid to benefit of patient. In order to achieve this goal a collaboration and pooling of knowledge from both of these valuable medical areas is vita

Heparanase isoform expression and extracellular matrix remodeling in intervertebral disc degenerative disease

OBJECTIVE: To determine the molecules involved in extracellular matrix remodeling and to identify and quantify heparanase isoforms present in herniated and degenerative discs. INTRODUCTION: Heparanase is an endo-beta-glucuronidase that specifically acts upon the heparan sulfate chains of proteoglycans. However, heparanase expression in degenerative intervertebral discs has not yet been evaluated. Notably, previous studies demonstrated a correlation between changes in the heparan sulfate proteoglycan pattern and the degenerative process associated with intervertebral discs. METHODS: Twenty-nine samples of intervertebral degenerative discs, 23 samples of herniated discs and 12 samples of non-degenerative discs were analyzed. The expression of both heparanase isoforms (heparanase-1 and heparanase-2) was evaluated using immunohistochemistry and real-time RT-PCR analysis. RESULTS: Heparanase-1 and heparanase-2 expression levels were significantly higher in the herniated and degenerative discs in comparison to the control tissues, suggesting a possible role of these proteins in the intervertebral degenerative process. CONCLUSION: The overexpression of heparanase isoforms in the degenerative intervertebral discs and the herniated discs suggests a potential role of both proteins in the mediation of inflammatory processes and in extracellular matrix remodeling. The heparanase-2 isoform may be involved in normal metabolic processes, as evidenced by its higher expression in the control intervertebral discs relative to the expression of heparanase-1

Método digital assistido por computador de quantificação imunohistoquímica comparado à análise semiquantitativa

PURPOSE: To compare immunostaining quantification obtained by a digital computer-assisted method with the well-established semiquantitative analysis. METHODS: Cytoplasmic staining of galectin-3 was obtained by standard immunohistochemical reactions in 25 cases of well-differentiated thyroid carcinoma. The expression index that associates the conventional area fraction of labeled cells with the immunostaining intensity score based on visual qualitative observation was used as the semiquantitative analysis. A digital computer-assisted method is described based on the use of an image processing program (ImageLab®). Three parameters were obtained: (1) percentage of labeled cells; (2) digital immunostaining intensity, and (3) digital expression index. The proposed method allows numerical analysis of the immunostaining intensity. RESULTS: There was a strong correlation between the immunostaining intensity obtained by the two methods (Pearson correlation coefficient, r = 0.71, P = 0.0001). The same was observed between expression indexes (Pearson correlation coefficient, r = 0.66, P = 0.0001). CONCLUSION: Results obtained with our proposed digital computer-assisted method for immunoexpression analysis were concordant with the semiquantitative analysis. In addition, digital values can also resolve disagreement among different observers about the quality of staining intensity because the digital method does not classify the results into groups, but rather provides a numerical value for each individual case; thus, it increases the diagnostic and, more importantly, the prognostic sensitivity of the immunohistochemical analysis.OBJETIVO: Comparar a quantificação da imunomarcação através de um método digital assistido por computador à bem estabelecida análise semiquantitativa. MÉTODO: A marcação citoplasmática de galectina-3 foi obtida por reações imunohistoquímicas em 25 casos de carcinoma bem-diferenciado da glândula tireóide. Determinou-se o índice de expressão da análise semiquantitativa que associa a convencional fração de área de células marcadas com os escores de intensidade da imunoexpressão, com base na observação visual qualitativa. O método digital assistido por computador foi desenvolvido com o uso de um programa de análise de imagem (ImageLab®). Três parâmetros foram obtidos: (1) porcentagem de células marcadas; (2) intensidade de imunoexpressão digital e (3) índice de expressão digital. O método proposto resulta na análise numérica da intensidade de imunoexpressão. RESULTADOS: Houve importante correlação entre as intensidades de imunoexpressão obtidas pelos dois métodos (coeficiente de correlação de Pearson, r=0,71, p=0,0001). O mesmo foi observado entre os índices de expressão (coeficiente de correlação de Pearson, r=0,66, p=0,0001). DISCUSSÃO: Os resultados de intensidade de imunoexpressão obtidos com o emprego do método digital assistido por computador foram concordantes com os escores da análise semiquantitativa. Entretanto, os resultados alcançados com o emprego do método digital podem resolver a discordância entre diferentes observadores com relação a esta intensidade de imunomarcação. Além disso, o método proposto não categoriza os resultados em grupos, o que torna a análise imunohistoquímica numericamente mensurável individualmente, aumentando seu poder diagnóstico e, sobretudo, prognóstico

Expression of ck-19, galectin-3 and hbme-1 in the differentiation of thyroid lesions: systematic review and diagnostic meta-analysis

Background: To distinguish between malignant and benign lesions of the thyroid gland histological demonstration is often required since the fine-needle aspiration biopsy method applied pre-operatively has some limitations. in an attempt to improve diagnostic accuracy, markers using immunocytochemistry and immunohistochemistry techniques have been studied, mainly cytokeratin-19 (CK-19), galectin-3 (Gal-3) and Hector Battifora mesothelial-1 (HBME-1). However, current results remain controversial. the aim of the present article was to establish the diagnostic accuracy of CK-19, Gal-3 and HBME-1 markers, as well as their associations, in the differentiation of malignant and benign thyroid lesions.Methods: A systematic review of published articles on MEDLINE and the Cochrane Library was performed. After establishing inclusion and exclusion criteria, 66 articles were selected. the technique of meta-analysis of diagnostic accuracy was employed and global values of sensitivity, specificity, area under the summary ROC curve, and diagnostic odds ratio (dOR) were calculated.Results: for the immunohistochemistry technique, the positivity of CK-19 for the diagnosis of malignant thyroid lesions demonstrated global sensitivity of 81% and specificity of 73%; for Gal-3, sensitivity of 82% and specificity of 81%; and for HBME-1, sensitivity of 77% and specificity of 83%. the association of the three markers determined sensitivity of 85%, specificity of 97%, and diagnostic odds ratio of 95.1. Similar results were also found for the immunocytochemistry assay.Conclusion: This meta-analysis demonstrated that the three immunomarkers studied are accurate in pre- and postoperative diagnosis of benign and malignant thyroid lesions. Nevertheless, the search for other molecular markers must continue in order to enhance this diagnostic accuracy since the results found still show a persistency of false-negative and false-positive tests.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Fac Med ABC, Dept Biochem, Santo Andre, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Biochem, São Paulo, BrazilFac Med ABC, Dept Head & Neck Surg, Santo Andre, BrazilFac Med ABC, Med Sch Students, Santo Andre, BrazilFac Med ABC, Dept Hematol & Oncol, Santo Andre, BrazilAlbert Einstein Jewish Hosp, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Biochem, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Predictive value of serum markers of hepatic fibrosis in patients with chronic hepatitis C

INTRODUCTION: Serum markers have been used in the assessment of liver fibrosis in patients with chronic hepatitis C (CHC). AIMS: We evaluated the capacity of aspartate aminotransferase (AST)/alanine aminotransferase (ALT) ratio, gama-glutamyltransferase (GGT) levels, platelet count, the AST to platelet ratio index (APRI) and serum hyaluronic acid (HA) to predict the intensity of hepatic fibrosis in patients with CHC and the variation of these markers after therapy with interferon. PATIENTS AND METHODS: In 72 patients with hepatitis C, AST/ALT ratio, GGT levels, platelet count, the APRI index (calculated as the ratio of AST to platelets) and serum HA concentration were determined and compared to histological staging according to the scoring system of METAVIR. Sixty-five patients received interferon and ribavirin therapy. The individuals that completed the treatment (n = 33) underwent a new test for serum marker of fibrosis in order to compare it with pre-treatment levels. RESULTS: GGT levels, platelet count, the APRI index and serum HA were correlated with the stage of hepatic fibrosis (p < 0.01), except AST/ALT ratio. The analysis of the areas under the ROC curve (AUC) evidenced that APRI and HA levels were the markers with the best association with hepatic staging: AUC (APRI) = 0.85 and AUC (HA) = 0.86. After therapy with interferon, only GGT and the APRI showed reduction of their levels (p < 0.05). CONCLUSION: HA and the APRI index were the most accurate approaches to liver fibrosis staging and they may be used as alternative diagnostic methods in patients with CHC.INTRODUÇÃO: Os marcadores séricos têm sido empregados na avaliação da fibrose hepática em pacientes portadores de hepatite crônica C (HCC). OBJETIVOS: Avaliar a capacidade do índice aspartato aminotransferase (AST)/alanina aminotransferase (ALT), dos níveis séricos de gama-glutamiltransferase (GGT), contagem de plaquetas, do índice AST/plaquetas (APRI) e do ácido hialurônico (AH) em predizer a intensidade da fibrose hepática na HCC e a variação desses marcadores após tratamento com interferon. PACIENTES E MÉTODOS: Em 72 pacientes portadores de hepatite C determinamos no soro o índice AST/ALT, GGT, plaquetas, índice APRI (obtido pelo quociente AST/plaquetas) e o AH, que foram comparados ao estadiamento histológico, segundo os critérios de METAVIR. Receberam tratamento com interferon e ribavirina 65 pacientes. Os indivíduos que concluíram o tratamento (n = 33) realizaram nova dosagem dos marcadores séricos de fibrose para comparar com os níveis pré-tratamento. RESULTADOS: Observamos que a GGT, a contagem de plaquetas, o índice APRI e o AH se correlacionaram com estádio de doença hepática (p < 0,01), exceto o índice AST/ALT. A análise das áreas sob as curvas ROC (AUC) evidenciaram que a melhor associação com estadiamento hepático foi para o índice APRI e a dosagem sérica do AH: AUC (APRI) = 0,85 e AUC (AH) = 0,86. Na avaliação pós-terapia com interferon, apenas a GGT e o índice APRI apresentaram redução de seus níveis (p < 0,05). CONCLUSÃO: O AH e o índice APRI apresentaram maior acurácia no estadiamento da fibrose, podendo ser aplicados como métodos diagnósticos alternativos na HCC.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Universidade Federal de Alagoas Hospital UniversitárioUNIFESPFundação Universitária de Ciências da Saúde de Alagoas Governador Lamenha FilhoUFAL HUUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Escola Paulista de MedicinaUNIFESP, EPMSciEL

Controlo mecânico de infestantes

As infestantes são plantas indesejáveis que crescem juntamente com as plantas cultivadas e que interferem no seu desenvolvimento normal. As infestantes podem ser uma das principais causas da diminuição do rendimento das culturas, porque competem com elas para o espaço, para a água, luz solar, nutrientes e dióxido de carbono, podem segregar substâncias alelopáticas, ser o meio no qual temporariamente se instalam alguns organismos responsáveis por inúmeras pragas e doenças que atacam as culturas dificultando assim o combate às mesmas, dificultam a colheita quer esta seja manual ou mecanizada, podem contaminar o produto final, depreciando-o e, asseguram a reinfestação para as culturas seguintes. O controlo de infestantes ter-se-á iniciado quando o homem deixou a de ser nómada e de assegurar as suas necessidades através da colheita de frutos e da caça e passou após a “domesticação“ das espécies animais e vegetais a fazer agricultura, tornando-se sedentário. Portanto, desde o início da agricultura, que o homem tem feito grandes esforços para controlar as plantas infestantes, primeiro à mão, depois com o uso de alguns artefactos, ferramentas e equipamentos para melhorar a eficiência no seu controlo. Hoje existem equipamentos mecânicos sofisticados tal como, substâncias químicas ou biológicas que permitem o seu controlo prevenindo ou retardando a sua germinação ou crescimento. Interferência das plantas infestantes com a cultura pode gerar perdas significativas, na qualidade e quantidade de alimentos produzidos, desperdiçando enormes quantidades de energia, especialmente não renováveis. Os custos no controlo e os efeitos sobre os rendimentos são muito variáveis, dependendo do agricultor, das espécies de plantas infestantes e da estratégia ou estratégias adoptadas para garantir a eficácia no controlo. Nas últimas cinco décadas têm vindo a fazer-se significativos avanços científicos e tecnológicos na criação de estratégias para o aumento da eficácia no controlo de infestantes seja mecanicamente, seja através da utilização de substâncias químicas ou biológicas menos tóxicas para o homem, menos agressivas ao meio ambiente, com menores custos de produção e ao mesmo tempo, mais selectivas para as culturas onde são aplicadas. A alternativa ao controlo químico de infestantes através da aplicação de herbicidas é o controlo mecânico pela utilização de diversas alfaias agrícolas, tais como a charrua de aivecas, a charrua de discos, o escarificador de braços rígidos, o escarificador de braços flexíveis (vibrocultor) e a fresa. O controlo mecânico de infestantes poderá ser levado a cabo também por máquinas de corte, como por exemplo, as gadanheiras. Cortar as infestantes numa fase de desenvolvimento antes da produção de semente evita a sua propagação. Se o agricultor optar pela sementeira directa como técnica de instalação das culturas, a única alternativa que tem para o controlo de infestantes é a química, mas se optar pelo sistema de mobilização tradicional ou pela mobilização reduzida poderá controlar as infestantes, química e/ou mecanicamente. A eficácia das diferentes alfaias no controlo de infestantes depende da própria alfaia, da época do ano em que se realiza esse controlo, do estado do solo, das espécies de infestantes presentes e seu estádio de desenvolvimento. Iremos no presente trabalho, referir os aspectos mais importantes do controlo mecânico de infestantes

Ação de agentes antitrombóticos na síntese e estrutura do heparam sulfato e caracterização do receptor em células endoteliais

BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Efeito da heparina e derivados sobre os glicosaminoglicanos sulfatados sintetizados por células em cultura

BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe