Immortalisation et caractérisation de la lignée cellulaire de rein fœtal humain PT-1.

Pour ce travail, nous avons immortalisé des cellules de reins fœtaux humains à l'aide du gène grand T de SV40, dans le but d'établir un modèle d'étude de la prolifération et de la différenciation rénales. Une lignée cellulaire appelée PT-1 et provenant probablement du tubule proximal a été obtenue. Afin de caractériser davantage cette lignée, nous avons déterminé par dosages enzymatiques les niveaux d'activité de la phosphatase alcaline et de la y-glutamyltranspeptidase qui sont des marqueurs de différenciation et nous avons également étudié l'aspect morphologique ainsi qu'ultrastructural de la lignée PT-1 en culture. Nos observations ont indiqué que la lignée PT-1 se différencie partiellement en culture pour former un système multi-couche composé de six couches cellulaires, dix-sept jours après la confluence. La couche supérieure est légèrement polarisée, et comporte des cellules avec un aspect plus épithéloïde. Quelques jonctions cellulaires de type zonula occludens sont retrouvées à ce niveau et une lame basale sous-jacente est présente. Les autres couches sont d'allure mésenchymateuse et non polarisé et sont séparées par des espaces intercellulaires. Ensuite, nous avons étudié par immunofluorescence indirecte l'expression des constituants de la matrice extracellulaire (les chaînes B1 et B2 de la laminine, la ténascine), de la lame basale (fibronectine, collagène de type IV), des filaments intermédiaires (cytokératine, vimentine), des jonctions serrées (uvomoruline) et de l'agent immortalisant (la protéine grand T de SV40). Les résultats obtenus suggèrent que la protéine grand T est nécessaire au maintien de la prolifération. La lignée est caractérisée par une expression hétérogène de la kératine, vimentine, fibronectine, ténascine, collagène de type IV et une expression homogène des chaînes B1 et B2 de la laminine. L'uvomoruline est exprimée seulement dix jours après la confluence. Nous avons examiné l'expression de marqueurs de prolifération (c-myc) et de différenciation (y- GT). Elle réagit de façon normale à un signal de prolifération induit par le sérum puisque c-myc est exprimé transitoirement, tandis que l'expression de la y-GT est constante, indiquant une régulation post-transcriptionnelle. Par la suite, nous avons analysé l'effet de différentes substances sur la différenciation fonctionnelle et morphologique de la lignée PT-1. Toutes les substances étudiées ont eu un effet soit positif ou négatif sur l'un des deux marqueurs de différenciation fonctionnelle: la PA et la y-GT. Par contre, seul le dexaméthasone, l'acide rétinoïque et la suramine ont stimulé la différenciation morphologique de la lignée PT-1. Également, nous avons observé qu'un milieu sans glucose affecte la prolifération et la différenciation cellulaire de la lignée PT-1. Donc, la lignée cellulaire PT-1 d'origine humaine est unique et démontre un potentiel énorme en tant que modèle d'étude moléculaire des mécanismes impliqués dans la prolifération et la différenciation rénales humaines

Dynamic localization of SPE-9 in sperm: a protein required for sperm-oocyte interactions in Caenorhabditis elegans

BACKGROUND: Fertilization in Caenorhabditis elegans requires functional SPE-9 protein in sperm. SPE-9 is a transmembrane protein with a predicted extracellular domain that contains ten epidermal growth factor (EGF)-like motifs. The presence of these EGF-like motifs suggests that SPE-9 is likely to function in gamete adhesive and/or ligand-receptor interactions. RESULTS: We obtained specific antisera directed against different regions of SPE-9 in order to determine its subcellular localization. SPE-9 is segregated to spermatids with a pattern that is consistent with localization to the plasma membrane. During spermiogenesis, SPE-9 becomes localized to spiky projections that coalesce to form a pseudopod. This leads to an accumulation of SPE-9 on the pseudopod of mature sperm. CONCLUSIONS: The wild type localization patterns of SPE-9 provide further evidence that like the sperm of other species, C. elegans sperm have molecularly mosaic and dynamic regions. SPE-9 is redistributed by what is likely to be a novel mechanism that is very fast (~5 minutes) and is coincident with dramatic rearrangements in the major sperm protein cytoskeleton. We conclude that SPE-9 ends up in a location on mature sperm where it can function during fertilization and this localization defines the sperm region required for these interactions

La produzione tessile nell’abitato dell’età del Bronzo di Solarolo, via Ordiere: dall’analisi delle fusaiole alle prime attività esperienziali per un protocollo di archeologia sperimentale

The paper deals with the spindle whorls and loom weights found in the Bronze Age settlement of Solarolo, via Ordiere, and investigates the topic of textile production as one of the manufactures of great economic impact that characterises the middle of the 2nd millennium BC. Through the analysis of the operational chain from the procurement of the raw material to the final product, the morphometric analysis of the spindle whorls allows us to interpret the choices made to produce particular yarns. The finds, mainly spindle whorls, have been accurately positioned during the excavation and distinguished by detailed chronological phases (25-50 years). Their distribution allows to analyse the production of yarns within the settlement and to hypothesise the role of resource management and manufacture at a key moment of increased exploitation of wool found in various regions of Europe

Driving and limiting factors of CH4 and CO2 emissions from coastal brackish-water wetlands in temperate regions

Coastal wetlands play a fundamental role in mitigating climate change thanks to their ability to store large amounts of organic carbon in the soil. However, degraded freshwater wetlands are also known to be the first natural emitter of methane (CH4). Salinity is known to inhibit CH4 production, but its effect in brackish ecosystems is still poorly understood. This study provides a contribution to understanding how environmental variables may affect greenhouse gas (GHG) emissions in coastal temperate wetlands. We present the results of over 1 year of measurements performed in four wetlands located along a salinity gradient on the northeast Adriatic coast near Ravenna, Italy. Soil properties were determined by coring soil samples, while carbon dioxide (CO2) and CH4 fluxes from soils and standing waters were monitored monthly by a portable gas flux meter. Additionally, water levels and surface and groundwater physical–chemical parameters (temperature, pH, electrical conductivity, and sulfate concentrations of water) were monitored monthly by multiparametric probes. We observed a substantial reduction in CH4 emissions when water depth exceeded the critical threshold of 50 cm. Regardless of the water salinity value, the mean CH4 flux was 5.04 g m−2 d−1 in freshwater systems and 12.27  g m−2 d−1 in brackish ones. In contrast, when water depth was shallower than 50 cm, CH4 fluxes reached an average of 196.98  g m−2 d−1 in freshwater systems, while non-significant results are available for brackish/saline waters. Results obtained for CO2 fluxes showed the same behavior described for CH4 fluxes, even though they were statistically non-significant. Temperature and irradiance strongly influenced CH4 emissions from water and soil, resulting in higher rates during summer and spring

Étude de l'expression des gènes C/EBP [alpha], [bêta] et [delta] dans les cellules IEC-6 normales et cellules transformées par Ha-ras

Les mécanismes moléculaires qui régulent l'expression de gènes exprimés dans l'intestin sont encore à ce jour très peu connus. Cependant, plusieurs études ont montré une expression des facteurs de transcription C/EBPs dans l'intestin. De plus, les C/EBPs sont régulés par les glucocorticoïdes au niveau des cellules épithéliales intestinales. Le premier objectif de ce travail était d'approfondir les mécanismes de régulation des facteurs de transcription C/EBPs, et le deuxième, de déterminer l'effet de la transformation par Ha-ras et des glucocorticoïdes sur l'expression des facteurs de transcription C/EBPs, Jun et Fos dans les cellules épithéliales intestinales. Afin de répondre à ces objectifs, la lignée cellulaire IEC-6 a été utilisée. Cette ligne épithéliale intestinale non transformée constitue un modèle d'étude bien caractérisé et très utilisé. La régulation des isoformes C/EBPs a été étudiée par les méthodes de Northern blot, de transfert de type Western et des gels de rétention, suite à des traitements avec des inhibiteurs de protéines kinases (staurosporine) et protéines phosphatases (acide okadaïque et vanadate). Également, la transformation des cellules IEC-6 avec Ha-ras a été faite par la méthode de transfection : l'électroporation.Les résultats obtenus tendent à démontrer une régulation différentielle des isoformes C/EBP α, β, et δ suite aux traitements avec des activateurs ou des inhibiteurs de phosphorylation. De plus, une prolifération cellulaire accélérée dans les cellules transformées par rapport aux cellules non transformées a été observée. Également, la présence d'ARNm supplémentaires et spécifiques à la transformation par Ha-ras pour l'isoforme C/EBP α a été constatée.Les glucocorticoïdes inhibent la prolifération des cellules IEC-6 sans affecter celle des cellules transformées. Et une résistance à l'effet de la dexaméthasone entraînant un blocage de la transcription de c-fos dans les cellules transformées a été observée, ce qui suggère une séquestration des facteurs de transcription importants dans la régulation de la transcription de c-fos.Les résultats présentés suggèrent des mécanismes de régulation différentielle des facteurs de transcription C/EBPs et que les membres de la famille Jun et Fos sont des cibles des glucocorticoïdes dans les cellules épithéliales intestinales

Immortalisation et caractérisation de la lignée cellulaire de rein fœtal humain PT-1.

Pour ce travail, nous avons immortalisé des cellules de reins fœtaux humains à l'aide du gène grand T de SV40, dans le but d'établir un modèle d'étude de la prolifération et de la différenciation rénales. Une lignée cellulaire appelée PT-1 et provenant probablement du tubule proximal a été obtenue. Afin de caractériser davantage cette lignée, nous avons déterminé par dosages enzymatiques les niveaux d'activité de la phosphatase alcaline et de la y-glutamyltranspeptidase qui sont des marqueurs de différenciation et nous avons également étudié l'aspect morphologique ainsi qu'ultrastructural de la lignée PT-1 en culture. Nos observations ont indiqué que la lignée PT-1 se différencie partiellement en culture pour former un système multi-couche composé de six couches cellulaires, dix-sept jours après la confluence. La couche supérieure est légèrement polarisée, et comporte des cellules avec un aspect plus épithéloïde. Quelques jonctions cellulaires de type zonula occludens sont retrouvées à ce niveau et une lame basale sous-jacente est présente. Les autres couches sont d'allure mésenchymateuse et non polarisé et sont séparées par des espaces intercellulaires. Ensuite, nous avons étudié par immunofluorescence indirecte l'expression des constituants de la matrice extracellulaire (les chaînes B1 et B2 de la laminine, la ténascine), de la lame basale (fibronectine, collagène de type IV), des filaments intermédiaires (cytokératine, vimentine), des jonctions serrées (uvomoruline) et de l'agent immortalisant (la protéine grand T de SV40). Les résultats obtenus suggèrent que la protéine grand T est nécessaire au maintien de la prolifération. La lignée est caractérisée par une expression hétérogène de la kératine, vimentine, fibronectine, ténascine, collagène de type IV et une expression homogène des chaînes B1 et B2 de la laminine. L'uvomoruline est exprimée seulement dix jours après la confluence. Nous avons examiné l'expression de marqueurs de prolifération (c-myc) et de différenciation (y- GT). Elle réagit de façon normale à un signal de prolifération induit par le sérum puisque c-myc est exprimé transitoirement, tandis que l'expression de la y-GT est constante, indiquant une régulation post-transcriptionnelle. Par la suite, nous avons analysé l'effet de différentes substances sur la différenciation fonctionnelle et morphologique de la lignée PT-1. Toutes les substances étudiées ont eu un effet soit positif ou négatif sur l'un des deux marqueurs de différenciation fonctionnelle: la PA et la y-GT. Par contre, seul le dexaméthasone, l'acide rétinoïque et la suramine ont stimulé la différenciation morphologique de la lignée PT-1. Également, nous avons observé qu'un milieu sans glucose affecte la prolifération et la différenciation cellulaire de la lignée PT-1. Donc, la lignée cellulaire PT-1 d'origine humaine est unique et démontre un potentiel énorme en tant que modèle d'étude moléculaire des mécanismes impliqués dans la prolifération et la différenciation rénales humaines

Étude de l'expression des gènes C/EBP [alpha], [bêta] et [delta] dans les cellules IEC-6 normales et cellules transformées par Ha-ras

Les mécanismes moléculaires qui régulent l'expression de gènes exprimés dans l'intestin sont encore à ce jour très peu connus. Cependant, plusieurs études ont montré une expression des facteurs de transcription C/EBPs dans l'intestin. De plus, les C/EBPs sont régulés par les glucocorticoïdes au niveau des cellules épithéliales intestinales. Le premier objectif de ce travail était d'approfondir les mécanismes de régulation des facteurs de transcription C/EBPs, et le deuxième, de déterminer l'effet de la transformation par Ha-ras et des glucocorticoïdes sur l'expression des facteurs de transcription C/EBPs, Jun et Fos dans les cellules épithéliales intestinales. Afin de répondre à ces objectifs, la lignée cellulaire IEC-6 a été utilisée. Cette ligne épithéliale intestinale non transformée constitue un modèle d'étude bien caractérisé et très utilisé. La régulation des isoformes C/EBPs a été étudiée par les méthodes de Northern blot, de transfert de type Western et des gels de rétention, suite à des traitements avec des inhibiteurs de protéines kinases (staurosporine) et protéines phosphatases (acide okadaïque et vanadate). Également, la transformation des cellules IEC-6 avec Ha-ras a été faite par la méthode de transfection : l'électroporation.Les résultats obtenus tendent à démontrer une régulation différentielle des isoformes C/EBP α, β, et δ suite aux traitements avec des activateurs ou des inhibiteurs de phosphorylation. De plus, une prolifération cellulaire accélérée dans les cellules transformées par rapport aux cellules non transformées a été observée. Également, la présence d'ARNm supplémentaires et spécifiques à la transformation par Ha-ras pour l'isoforme C/EBP α a été constatée.Les glucocorticoïdes inhibent la prolifération des cellules IEC-6 sans affecter celle des cellules transformées. Et une résistance à l'effet de la dexaméthasone entraînant un blocage de la transcription de c-fos dans les cellules transformées a été observée, ce qui suggère une séquestration des facteurs de transcription importants dans la régulation de la transcription de c-fos.Les résultats présentés suggèrent des mécanismes de régulation différentielle des facteurs de transcription C/EBPs et que les membres de la famille Jun et Fos sont des cibles des glucocorticoïdes dans les cellules épithéliales intestinales

Dataset for the study:"Driving and limiting factors of CH4 and CO2 emissions from coastal brackish-water wetlands in temperate regions"

<p>Dataset used for statistical analysis of the manuscript "Chiapponi, E., Silvestri, S., Zannoni, D., Antonellini, M., and Giambastiani, B. M. S.: Driving and limiting factors of CH<sub>4</sub> and CO<sub>2</sub> emissions from coastal brackish-water wetlands in temperate regions, EGUsphere, https://doi.org/10.5194/egusphere-2023-605, 2023."</p> <p>The dataset include:</p> <ul> <li>CO2 and CH4 fluxes retrived with a portable fluximeter from soils and standing waters</li> <li>environemntal parameters ( T of air and water, Electrical Conductivity (EC), irradiance and water depth </li> </ul> <p>To cite content from this repository: "Chiapponi, E., Silvestri, S., Zannoni, D., Antonellini, M., and Giambastiani, B. M. S.: Dataset for the study:"Driving and limiting factors of CH4 and CO2 emissions from coastal brackish-water wetlands in temperate regions", EGUsphere, 10.5281/zenodo.10390803."</p> <p> </p&gt

The vulvar immunohistochemical panel (VIP) project: molecular profiles of vulvar Paget's disease

Purpose To investigate the expression of biological markers in primary vulvar Paget's disease (VPD). Methods Forty-one patients referred to a single major Center for Gynecologic Oncology from January 2008 to June 2018 were enrolled retrospectively: 30 non-invasive-VPD and 11 invasive-VPD. A total number of 60 samples, from all the 41 vulvar sites (VS), 8 metastatic lymph node sites (MLS) and 11 successive recurrent disease in vulvar site (RVS), were tested for an immunohistochemical panel, including the following markers: PD-L1, CD3, MSH2, MSH6, MLH1, PMS2, HER2/neu, EGFR, p16, p53, Ki67, ER, PR, AR, VEGF and CD31. Results We found a positive PD-L1 in 10% of non-invasive-VPD and 27% of invasive-VPD (18% VS; 38% MLS). ER and AR were expressed respectively in more than 70% and 75% of all specimens. HER2/neu amplification was found in 21% of non-invasive-VPD and 45% of invasive-VPD (40% VS; 38% MLS). A machine learning cluster analysis identified three groups among non- invasive-VPD: cluster-1 with higher median ER expression (40%); cluster-3 with more frequent HER2/neu overexpression (46%). Among invasive-VPD, two clusters were found: the second with more frequent HER2/neu overexpression (67% vs. 0%) and nodal metastases (100% vs. 25%). Repeating the IHC panel on the correspondent MLS and RVS, it significantly changed, respectively, in 50% and 27%. Conclusions This study reveals the expression of PDL-1 and ER and confirms the expression of HER2/AR in VPD; new bases are provided to design multicenter clinical trials on personalized target therapies