Obtaining Of β-Lactoglobulin By Gel Filtration Of Cow Milk Whey

Milk whey proteins carry out a number of important biological functions and also they are precursors of many biologically active peptides (antihypertensive peptides, antagonists of opioid receptors, regulators of intestinal motility, immunomodulatory, anti-microbial and anti-cancer peptides, appetite regulators and so on.). An important stage in natural bioactive peptides obtaining from milk whey proteins is the isolation of homogeneous proteins-precursors. Considering the significant difference in the molecular masses of whey proteins, a promising method for their selection is gel filtration. The purpose of the research was the fractionation of bioactive peptides precursors from milk whey using gel filtration on Sephadex G-150. The whey was obtained from fresh skimmed milk after isoelectric precipitation of casein. Gel filtration was carried out on the columns from a liquid chromatography kit by the “Reanal” company. The fractional composition and the degree of homogeneity of milk whey proteins were determined by disc-electrophoresis in the plates of a polyacrylamide gel. A repeated gel filtration of fractions from the chromatographic peaks, separated into sections, was performed to increase the fractionation efficiency. While choosing a dextran gel for gel filtration of precursors of biologically active peptides from milk whey proteins, we have taken into account the range of their molecular weights (from 10000 to 150000 Da), the ability to form supramolecular structures (β-LG), as well as the previously obtained results of gel filtration. As a result, it was shown that repeated gel filtration of milk whey on Sephadex G-150 allows efficiently fractionate the proteins-precursors of bioactive peptides. The range of peptides and proteins molecular weights that can be fractionated on this Sephadex is from 5000 to 300 000 Da. The usage of repeated gel filtration on Sephadex G-150 with the chromatogram separation into sectors allows to effectively fractionate proteins-precursors of bioactive peptides from milk whey. In particular, homogeneous β-lactoglobulin (degree of homogeneity > 95 %) and partially purified α-lactalbumin, as well as a group of immunoglobulins and a proteose-peptone fraction were obtained

ЕФЕКТИВНІСТЬ ЗАСТОСУВАННЯ ФЛУРЕНІЗИДУ В КОМПЛЕКСНІЙ ТЕРАПІЇ ТУБЕРКУЛЬОЗУ ГЕНІТАЛІЙ

We have analysed the efficient use of ’Flurenizyd’ in complex therapy of genital tuberculosis. We have examined 53 women with first discovered genital tuberculosis without bacterial excretion. The specific etiology of woman genitals was proved: on 19 patients - histological way and on 34 patients - clinical and X-rays way. To undergo the course of treatment we have had two groups: group 1 (25 patients) followed the traditional treatment - ’Isoniazyd’, ’Rifampicin’and ’Streptomicin’and group 2 (28 patients) who used ’Flurenizyd’, ’Rifampicin’and ’Streptomicin’. The effectiveness of the treatment has been estimated according to the result of clinical and laboratorial and instrumental methods after three and six months of therapy. The ’Flurenizyd’ including into the complex therapy has demonstrated positive influence on clinical and immunological status of women with genital tuberculosis and provided better cure effect.Проведена оценка эффективности применения флуренизида в комплексной терапии туберкульоза гениталий. Обследовано 53 женщины с впервые выявленным генитальным туберкульозом без бактериовыделения. Специфическая этиология воспаления половых органов женщины подтверждена у 19 - гистологично, у 34- клинико-ретгенологично. Аппробованные схемы лечения, которые включали в 1 -й групе (25 больных) традиционную схему: изониазид, рифампицин, стрептомицин; в 2-й группе (28 пациенток) - флуренизид, рифампицин, стрептомицин. Эффективность лечения оценивали за результатами клиниколабораторных и инструментальных методов исследования через 3 и 6 месяцев терапии. Доведено положительное влияние на клинический и иммунологический статус женщин с генитальным туберкульозом комплексной химиотерапии с применением флуренизида, который обеспечил улучшение эффективности лечения.Проведена оцінка ефективності застосування флуренізиду в комплексній терапії туберкульозу геніталій. Обстежено 53 жінки з вперше виявленим генітальним туберкульозом без бактеріовиділення. Специфічна етіологія запалення статевих органів жінки підтверджена у 19 - гістологічно, у 34 - клініко-рентгенологічно. Апробовані схеми лікування, які включали в 1-й групі (25 хворих) традиційну схему: ізоніазид, рифампіцин, стрептоміцин; в 2-й групі (28 пацієнток) - флуренізид, рифампіцин, стрептоміцин. Ефективність лікування оцінювали за результатами клініко-лабораторних та інструментальних методів дослідження через 3 та 6 місяців терапії. Доведено позитивний вплив на клінічний та імунологічний статус жінок з генітальним туберкульозом комплексноїхіміотерапіїз включенням флуренізиду, який забезпечив поліпшення ефективності лікування

Комбінація сефадексів для виділення протеїнових фракцій з сироватки молока

Whey proteins perform important biological functions. They can also be a source of numerous natural bioactive peptides that have a positive effect on various physiological systems of the body. For research and usage of this phenomenon, the question of these proteins isolating with saving of their structure and biological functions is relevant. Considering the significant difference in molecular weights, gel filtration is a promising method. The purpose of the study was the fractionation of milk whey proteins using gel filtration with a combination of different dextran gels. We used in the work milk whey proteins after isoelectric precipitation of casein and isolation of low molecular weight peptides by gel filtration on Sephadex G-25. The first gel filtration of the whey protein preparation was performed on a column with Sephadex G-150. For further fractionation were used three sectors from the first two chromatographic peaks obtained by gel filtration on Sephadex G-150. The first peak contains high molecular fractions of proteins eluting with a volume close to the free volume of the chromatographic column. The second asymmetric peak consists mainly of β-lactoglobulin and α-lactalbumin mixture. The third peak includes low molecular weight polypeptides and peptides that are not fixed in a polyacrylamide gel. The combined chromatographic fractions of three sectors from the first two chromatographic peaks were re-fractionated on a G-100 column. Electrophoretic analysis of chromatographic fractions after repeated chromatography of milk whey proteins confirmed the feasibility of choosing a certain sequence of sephadex. At the same time, the yield of β-lactoglobulin fraction increases by 12 ± 1 %, and α-lactalbumin by 9 ± 1 % compared to the results obtained by repeated gel filtration on one Sephadex (G-100). The degree of purification of β-lactoglobulin and α-lactalbumin, according to the densitometry, was 93 ± 5 % and 77 ± 4 %, respectively.Протеїни сироватки молока виконують важливі біологічні функції. Також вони можуть бути джерелом численних природних біоактивних пептидів, які позитивно впливають на різні фізіологічні системи організму. Для дослідження і використання цього явища актуальним є питання виділення цих протеїнів зі збереженням їхньої структури і біологічних функцій. Основними недоліками класичних методів досліджень протеїнів є складність, багатостадійність, використання токсичних реагентів. Окрім цього, такі умови виділення можуть руйнувати нативну структуру і відповідно призводити до втрати біологічних властивостей. Враховуючи значну різницю в молекулярних масах, перспективним методом є гель-фільтрація. Метою дослідження було фракціонування протеїнів сироватки молока з допомогою гель-фільтрації з комбінацією різних декстранових гелів. В роботі використали протеїни сироватки молока після ізоелектричного осадження казеїну і виділення низькомолекулярних пептидів гель-фільтрацією на сефадексі G-25. Першу гель-фільтрацію препарату протеїнів сироватки проводили на колонці з сефадексом G-150. Для подальшого фракціонування було використано три сектори з двох перших хроматографічних піків, що були отримані гель-фільтрацією на сефадексі G-150. Перший пік містить високомолекулярні фракції протеїнів, що елююються з об’ємом, близьким до вільного об’єму хроматографічної колонки. Другий асиметричний пік складається переважно з суміші β-лактоглобуліну та α-лактальбуміну. Третій пік включає низькомолекулярні поліпептиди і пептиди, які не фіксуються в поліакриламідному гелі. Об’єднані хроматографічні фракції трьох секторів з двох перших хроматографічних піків фракціонували повторно на колонці G-100. Електрофоретичний аналіз хроматографічних фракцій після повторної хроматографії протеїнів сироватки молока підтвердив доцільність вибору певної послідовності сефадексів. При цьому вихід фракції β-лактоглобуліну зростає на 12 ± 1 %, а α-лактальбуміну на 9 ± 1 % порівняно з результатами, отриманими повторною гель-фільтрацією на одному сефадексі (G-100). Ступінь очищення β-лактоглобуліну і  α-лактальбуміну, за даними денситометрії, становив 93 ± 5 % і 77 ± 4 % відповідно

ВИВЧЕННЯ СТРУКТУРНО–МЕХАНІЧНИХ ХАРАКТЕРИСТИК ТІСТА НА ОСНОВІ БОРОШНЯНИХ СУМІШЕЙ З ЕКСТРУДОВАНИМ КУКУРУДЗЯНИМ БОРОШНОМ

The results of the impact study using extruded corn flour mixed with wheat flour quality technology sponge semi-finished products. A range of studies on the structural and mechanical properties of dough from flour mixtures with extruded corn flour. To study taken from a mixture of wheat flour (PB) of the highest quality (control) and extruded corn flour (EKB) in the ratio EKB: PB – 5:95%, 10:90%, 15:85%, 20:80%. The quantity and quality gluten determined in accordance with GOST 27839-2013, its properties – on the instrument IIR-5. Structural and mechanical properties test studied at farynohrafi Brabendera and alveohrafi company "Chopin". The introduction of extruded corn flour (EКВ) leads to a drop curves after a period of formation test, which is much more clearly expressed already while adding even 5% EКВ. With increasing content of EКВ farinograph curves width decreases, therefore, such a mixture of flour can not be used in bakery technology, but technology sponge semi-finished products specially used weak flour. The values of the elastic parameters and dough elasticity, adding ECF changes slightly. Using EKB technology biscuit semifinished product is important in terms of creating quality food and sustainable use of wheat flour in baking and confectionery industry. Using the EКВ contributes to the dilution of dough with a simultaneous increase in the time of its formation up to 5 minutes, which will contribute to the optimization of the process at the stage of kneading the dough biscuit and can be recommended for use in EКВ biscuit semifinished technology. The research shows that flour mixture containing 20% EКВ can be recommended for the preparation of confectionery products based on semi-finished biscuit. Farynohrafichni studies have shown that the addition of EKB in any amount increases the ability of the test vodopohlynalnu 1.5...3%, which is a prerequisite for increasing output pastry.  Приведены результаты исследования влияния использования экструдированой кукурузной муки (ЭКМ) в смеси с мукой пшеничной высшего сорта в технологии бисквитного полуфабриката. Проведен комплекс исследований по изучению структурно–механических характеристик теста на основе мучных смесей с ЭКМ. Установлено, что введение ЭКМ приводит к падению кривых после периода образования теста, что значительно четче выражено уже при добавлении даже 5% ЭКМ. С увеличением содержания ЭКМ ширина кривых фаринографа уменьшается, поэтому такие мучные смеси невозможно использовать в технологии хлебобулочных изделий, но в технологии бисквитных полуфабрикатов специально используется слабая мука. Значения показателей упругости и эластичности теста при добавлении ЭКМ меняется незначительно. Использование ЭКМ способствует разжижению теста с одновременным увеличением времени его образования до 5 минут, что будет способствовать оптимизации технологического процесса на этапе замеса бисквитного теста и позволяет рекомендовать ЭКМ к использованию в технологии бисквитного полуфабриката. Проведенные исследования показывают, что мучная смесь с содержанием 20% ЭКМ, может быть рекомендована для приготовления кондитерских изделий на основе бисквитных полуфабрикатов.Наведено результати дослідження впливу використання екструдованого кукурудзяного борошна в суміші з борошном пшеничним вищого ґатунку  в технології бісквітного напівфабрикату. Проведено комплекс досліджень з вивчення структурно–механічних характеристик тіста на основі борошняних сумішей з екструдованим кукурудзяним борошном. Встановлено, що введення  екструдованого кукурудзяного борошна призводить до падіння кривих після періоду утворення тіста, що значно чіткіше виражено вже при додаванні навіть 5% ЕКБ. Із збільшенням вмісту ЕКБ ширина кривих фаринографа зменшується, тому такі борошняні суміші неможливо використовувати в технології хлібобулочних виробів, але в технології бісквітних напівфабрикатів спеціально використовується слабке борошно. Значення показників пружності та еластичності тіста при додаванні ЕКБ змінюється несуттєво.Використання ЕКБ сприяє розрідженню тіста з одночасним збільшенням часу його утворення до 5 хвилин, що сприятиме оптимізації технологічного процесу на етапі замісу бісквітного тіста та дозволяє рекомендувати ЕКБ до використання в технології бісквітного напівфабрикату. Проведені дослідження показують, що борошняна суміш з вмістом 20% ЕКБ може бути рекомендована для приготування кондитерських виробів на основі бісквітних напівфабрикатів. &nbsp

Технологія низькоалергенного молока з гідролізатом білків сироватки

In recent years, there has been a steady increase in the number of various allergic diseases in children and adults. Clinical manifestations of allergic reactions can be observed almost from infancy, which is often associated with nutrition specificity. It is proved that one of the strongest milk allergens are the main whey fractions β-lactoglobulin and α-lactalbumin. One way to reduce allergies is to remove or completely replace whey proteins. Another way to reduce allergenicity is to use whey protein hydrolysates. In most cases, hydrolysates are obtained using cheap active proteolytic preparations. They usually have wide specificity, and the hydrolysates formed by them include short peptides with low allergenicity. Numerous biologically active peptides which have a positive effect on the organism are either lost or the possibility of their formation is reduced in such cases. A valuable source of such biologically active peptides is whey protein-precursors. Therefore, the purpose of the research is to develop a technology of low-allergenic milk with the preservation of natural biologically active peptides from whey proteins. The concentrate of natural casein was obtained in the result of the «milk-pectin-water» system dividing for creating a low-allergenic product. The fractional composition of the casein complex and milk whey proteins was analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis. Whey protein concentrate was used as the substrate to obtain the hydrolysate. Proteolysis was performed with pancreatin at 37 °C and pH 7.9. The composition of the obtained hydrolysate was analyzed by gel filtration on Sephadex G-25. The peptides and polypeptides composition of hydrolysate was characterizated with the help of express electrophoresis. The technology of the proposed dairy product includes addition to a liquid concentrate of natural casein the whey protein hydrolysate obtained in physiological conditions. The results of electrophoretic and chromatographic researches indicate about the absence of main proteins allergens from milk whey in the product. This allows recommending it for the nutrition of people allergic to whey proteins.В останні роки спостерігається невпинне зростання кількості різноманітних алергічних захворювань у дітей і дорослих. Клінічні прояви алергічних реакцій можуть спостерігатися практично з грудного віку, що пов’язано найчастіше з особливостями харчування. Доведено, що одними з найсильніших алергенів молока є основні фракції сироватки β-лактоглобулін та α-лактальбумін. Одним із шляхів зниження алергії є видалення або повна заміна білків сироватки молока. Іншим шляхом зниження алергенності є використання гідролізатів сироваткових білків. В більшості випадків гідролізати отримують з використанням дешевих активних протеолітичних препаратів. Вони зазвичай володіють широкою специфічністю, а утворені за їх допомогою гідролізати включають короткі пептиди із низькою алергенністю. В таких випадках або повністю втрачається, або знижується імовірність утворення численних біологічно активних пептидів, які позитивно впливають на організм. Цінним джерелом таких біологічно активних пептидів є білки-попередники з сироватки молока. Тому метою роботи є розробка технології низькоалергенного молока зі збереженням природніх біологічно активних пептидів із білків сироватки. Для створення низькоалергенного продукту нами було отримано концентрат нативного казеїну в результаті розшарування системи “молоко–пектин–вода”. Фракційний склад білків казеїнового комплексу та сироватки молока аналізували електрофорезом в поліакриламідному гелі. Як субстрат для отримання гідролізату використовували концентрат сироваткових білків. Протеоліз проводили панкреатином при температурі 37 °С та рН 7,9. Склад отриманого гідролізату аналізували гель-фільтрацією на сефадексі G-25. За допомогою експрес-електрофорезу була проведена оцінка гідролізату за складом пептидів та поліпептидів. В технології запропонованого нами молочного продукту, передбачається внесення гідролізату білків сироватки молока, що отриманий у фізіологічних умовах, до рідкого концентрату нативного казеїну. Отримані електрофоретичні та хроматографічні дослідження свідчать про відсутність в отриманому продукті основних білків-алергенів з сироватки молока. Це дозволяє рекомендувати його для харчування людей з алергією на білки сироватки