Avaliação citotóxica do óleo volátil extraído das folhas do Zanthoxylum rhoifolium Lam.

Zanthoxylum rhoifolium Lam is a plant popularly used as antimicrobial, for malaria and inflammatory treatment. The essential oil of Z. rhoifolium was extracted and its cytotoxic effects against HeLa (human cervical carcinoma), A-549 (human lung carcinoma), HT-29 (human colon adenocarcinoma), Vero (monkey kidney) cell lines and mice macrophages were evaluated. Some of the terpenes of its essential oil (ß-caryophyllene, alpha-humulene, alpha -pinene, myrcene and linalool) were also tested to verify their possible influence in the oil cytotoxic activity. The results obtained permitted to confirm that the essential oil is cytotoxic against tumoral cells (CD50 = 82.3, 90.7 and 113.6 µg/ml for A-549, HeLa e HT-29 cell lines, respectively), while it did not show cytotoxicity against non-tumoral cells (Vero and mice macrophages). Thus, the essential oil from Z. rhoifolium leaves seems to present a possible therapeuthic role due to its selective cytotoxic activity against tumoral cell lines.O Zanthoxylum rhoifolium Lam. é uma planta popularmente utilizada como antimicrobianos, no tratamento da malária e de inflamações. O óleo volátil do Z. rhoifolium foi extraído e posteriormente foi avaliada a sua citotoxicidade contra células HeLa (carcinoma cervical humano), A-549 (carcinoma de pulmão humano), HT-29 (adenocarcinoma de cólon humano), Vero (rim de macaco) e macrófagos de camundongos. Alguns terpenos constituintes do óleo volátil (beta-cariofileno, alfa -humuleno, alfa -pineno, mirceno e linalool) também foram testados para verificar as possíveis influências sobre a citotoxicidade do óleo. Os resultados obtidos permitiram verificar que o óleo volátil é citotóxico contra células as tumorais (CD50 = 82.3, 90.7 e 113.6 µg/ml para A-549, HeLa e HT-29 cell lines, respectivamente), mas não apresenta citotoxicidade contra as células não tumorais (Vero e macrófagos de camundongos). Desta forma o óleo volátil das folhas do Z. rhoifolium demonstra possuir uma possível ação terapêutica em função de sua citotoxicidade contra células tumorais.28128

Caracterização genotípica dos fatores de virulência em amostras de Escherichia coli isoladas de pacientes com cistite

Adhesins (P-fimbriae, S-fimbriae, type 1 fimbriae and afimbrial adhesin), toxins (α-hemolysin and cytotoxic necrotizing factor type 1), iron acquisition systems (aerobactin) and host defense avoidance mechanisms (capsule or lipopolysaccharide) have been shown to be prevalent in Escherichia coli strains associated with urinary tract infections. In this work, 162 Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) strains from patients with cystitis were genotypically characterized by polymerase chain reaction (PCR) assay. We developed three multiplex PCR assays for virulence-related genes papC, papE/F, papG alleles, fimH, sfa/foc, afaE, hly, cnf-1, usp, cdtB, iucD, and kpsMTII, all of them previously identified in UPEC strains. The PCR assay results identified 158 fimH (97.5%), 86 kpsMTII (53.1%), 53 papC/papEF/papG (32.7%), 45 sfa (27.8%), 42 iucD (25.9%), 41 hly (25.3%), 36 usp (22.2%), 30 cnf-1(18.5%) and 10 afa (6.2%) strains. No strain was positive for cdtB. In this work, we also demonstrated that adhesins may be multiple within a single strain and that several virulence genes can occur combined in association.Adesinas (Fímbria P, fímbria S, fímbria do tipo 1 e a adesina afimbrial), toxinas (α-hemolisina e o fator necrosante citotóxico do tipo 1), sistemas de captação de ferro (aerobactina), e mecanismos de defesa do hospedeiro (cápsula ou lipopolissacarídeo) são prevalentes em amostras de Escherichia coli associadas a infecções do trato urinário. O objetivo deste trabalho foi caracterizar genotipicamente 162 amostras de Escherichia coli uropatogênica (UPEC) de pacientes com cistite através do ensaio da reação em cadeia da polimerase. Foram realizados três ensaios de PCR multiplex para os seguintes fatores de virulência: papC, papE/F, alelos de papG, fimH, sfa/foc, afaE, hly, cnf-1, usp, cdtB, iucD, e kpsMTII. Os resultados da PCR identificaram, 158 amostras fimH (97,5%), 86 amostras kpsMTII (53,1%), 53 amostras papC/papEF/papG (32,7%), 45 amostras sfa (27,8%), 42 amostras iucD (25,9%), 41 amostras hly (25,3%), 36 amostras usp (22,2%), 30 amostras cnf-1 (18,5%) e 10 amostras afa (6,2%). Nenhuma amostra foi positiva para o gene cdtB. Neste trabalho, demonstramos que podemos encontrar múltiplas adesinas em uma única amostra e que diferentes genes de fatores de virulência podem ser encontrados em associação

Curli fimbria: an Escherichia coli adhesin associated with human cystitis

Escherichia coli is the major causative agent of human cystitis. In this study, a preliminary molecular analysis carried out by PCR (polymerase chain reaction) demonstrated that 100% of 31 E. coli strains isolated from patients with recurrent UTIs (urinary tract infections) showed the presence of the curli fimbria gene (csgA). Curli fimbria is known to be associated with bacterial biofilm formation but not with the adhesion of human cystitis-associated E. coli. Therefore, this work aimed to study how curli fimbria is associated with uropathogenic E. coli (UPEC) as an adhesion factor. For this purpose, the csgA gene was deleted from strain UPEC-4, which carries three adhesion factor genes (csgA, fimH and ompA). The wild-type UPEC-4 strain and its mutant (ΔcsgA) were analyzed for their adhesion ability over HTB-9 (human bladder carcinoma), Vero (kidney cells of African green monkey) and HUVEC (human umbilical vein) cells in the presence of α-D-mannose. All the wild-type UPEC strains tested (100%) were able to adhere to all three cell types, while the UPEC-4 ΔcsgA mutant lost its adherence to HTB-9 but continued to adhere to the HUVEC and Vero cells. The results suggest that curli fimbria has an important role in the adhesion processes associated with human UPEC-induced cystitis.472414416CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQSem informaçã

Cytotoxic factor secreted by Escherichia coli associated with sepsis facilitates transcytosis through human umbilical vein endothelial cell monolayers

Culture supernatant of sepsis-associated Escherichia coli (SEPEC) isolated from patients with sepsis caused loss of intercellular junctions and elongation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). The cytotoxic factor was purified from culture supernatant of SEPEC 15 (serogroup O153) by liquid chromatography process. PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis) showed that the purified SEPEC cytotoxic factor had a molecular mass of ∼150 kDa and consisted of at least two subunits. At the concentration of 1 CD50 (40 μg/mL) did facilitate transcytosis through the HUVEC cells monolayer of SEPEC 15 as much as E. coli K12 within 30 min without affecting cell viability. These results suggest that this cytotoxic factor, named as SPF (SEPEC's permeabilizing factor), may be an important SEPEC virulence factor that facilitates bacterial access to the bloodstream.203298302COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPESSem informaçã

Revues reçues

Endopleura uchi (Huber) Cuatrec. is an Amazon species traditionally used as treatment for inflammations and female disorders. Bergenin was isolated from ethyl acetate fraction of bark of E. uchi by using column chromatography over sephadex LH-20 and then silica gel 60 flash. Its structure was identified on the basis of its NMR spectra. The antimicrobial activity of bergenin and fractions of methanol extract of E. uchi were evaluated against ATCC microorganisms (Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Candida albicans, C. guilliermondii, Aspergillus flavus, A. nidulans). Clinically isolated strains of all of these microorganisms, along with C. tropicalis, A. niger, Shigella sonnei, Serratia marcenses and Klebsiella pneumoniae were also evaluated. The growth inhibition caused by bergenin, extracts and fractions of E. uchi against ATCC microorganisms were similar to the inhibition to microorganisms clinically isolated. The ethyl acetate fraction and the isolate bergenin inhibit the growth of the yeasts C. albicans, C. tropicalis, and C. guilliermondii, but present lower activity against filamentous fungi Aspergillus flavus, A. nidulans, A. niger, and did not inhibit the Gram positive and Gram negative bacteria. The activity of the ethyl acetate fraction and bergenin are in agreement wit its high concentration found in bark extract of E. uchi. Moreover, the selective activity against three Candida species helps to understand its traditional use against infections that affect women.Endopleura uchi (Huber) Cuatrec. é uma espécie amazônica utilizada tradicionalmente para o tratamento de inflamações uterinas e outras afecções femininas. Das cascas de E. uchi foi isolada a substância bergenina, por meio de cromatografia em coluna usando como fases estacionárias sephadex LH-20 e posteriormente, sílica gel 60 flash. A identificação estrutural de bergenina foi realizada por meio de espectros de RMN. A avaliação da atividade antimicrobiana da bergenina, dos extratos e frações de E. uchi foi realizada contra microorganismos ATCC e clinicamente isolados (Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Candida albicans, C. guilliermondii, Aspergillus flavus, A. nidulans). Além desses, foram testados os microorganismos isolados clinicamente (C. tropicalis, A. nidulans, A. niger, Shigella sonnei, Serratia marcenses, Klebsiella pneumoniae e Enterococcus faecalis). A inibição de crescimento dos microorganismos pela bergenina e extratos e frações de E. uchi contra os microorganismos ATCC foram similares à inibição obtida contra microorganimos isolados clinicamente. Os resultados revelaram a bergenina como um inibidor seletivo de Candida albicans, C. tropicalis e C. guilliermondii. Porém, a bergenina apresentou uma atividade inferior contra os fungos Aspergillus flavus, A. nidulans, A. niger, e não inibiu o crescimento de bactérias Gram positivas e Gram negativas. As atividades da fração de acetato de etila e da bergenina pura estão em concordância com a concentração da bergenina nas cascas. A atividade seletiva de bergenina contra três espécies de Candida auxilia na compreensão do seu uso tradicional contra que infecções que afetam o aparelho reprodutor feminino

Avaliação citotóxica do óleo essencial de Casearia sylvestris Sw sobre células tumorais humanas e eritrócitos

A Casearia sylvestris (Flacourtiaceae) é uma planta popularmente conhecida como guaçatonga e é usada por povos indígenas da América do sul (Brasil, Peru e Bolivia) no tratamento de muitas doenças, incluindo câncer. Estudos citotóxicos mostraram que esta planta apresenta um possível e interessante potencial antitumoral devido à presença de moléculas chamadas casearinas. Além disso, a composição do óleo essencial mostrou uma alta concentração de sesquiterpenos de alto potencial citotóxico. Neste trabalho, nós verificamos que o óleo essencial da C. sylvestris apresentou uma boa citotoxicidade seletiva contra as linhagens de células tumorais HeLa, A-549 and HT-29 (CD50 63,3, 60,7 e 90,6 µg.ml-1, respectivamente) quando comparada às células não-tumorais Vero (CD50 210,1 µg.ml-1) e macrófagos de camundongos (CD50 234,0 µg.ml-1). Além disso, o óleo causou hemólise em sete diferentes tipos de eritrócitos, indicando que a C. sylvestris precisa ser usada com cuidado. Também foram testados padrões de β-cariofileno e α-humuleno que mostraram citotoxicidade similar àquelas apresentadas pelo óleo, indicando que estes compostos podem ser os responsáveis pelos efeitos tóxicos que foram observados neste estudo.Casearia sylvestris (Flacourtiaceae) is a plant popularly known as guaçatonga and it is used by indigenous population from South America (Brazil, Peru and Bolivia) in the treatment of several diseases, including cancer. Cytotoxic studies showed that it presents an interesting antitumoral potential due to the presence of casearins and the essential oil showed a high percentage of potent cytotoxic sesquiterpenes (β-caryophyllene and α-humulene). In this work, we verified that the essential oil of C. sylvestris presents a good selective cytotoxicity against HeLa, A-549 and HT-29 tumor cells (CD50 63.3, 60.7 and 90.6 µg.ml-1, respectively) when compared to non-tumoral cells Vero (CD50 210.1 µg.ml-1) and mice macrophages (CD50 234.0 µg.ml-1). The oil causes hemolysis in seven different kinds of erythrocytes, indicating that C. sylvestris must be used carefully. Besides, standard of β-caryophyllene and α-humulene were also tested and they showed similar cytotoxicity to the cytotoxicity presented in the oil, indicating that they might be responsible for the toxic effects that were observed in this study.10711

Evaluation of an oil emulsified vaccine against bovine colibacillosis using semi-purified K99-F41 adhesins

The K99 and F41 fimbrial antigens were extracted from Escherichia coli B41 strain by heating, and semi-purified by precipitation with ammonium sulfate and treatment with sodium desoxicolate (DOC). The semi-purified antigens K99 and F4I were used to prepare an oil emulsified vaccine against bovine colibacillosis. The vaccine was made up containing in each dose 1,500, 750 or 380 HU (Haemagglutinating Units). The test of the vaccine efficiency was measured by gel immunodiffusion and ELISA test. Challenge of calves from vaccinated and control cows was carried out with the virulent Escherichia coli B4I. Our findings suggested that 750 HU vaccine, induces better production of anti-K99-F4l antibodies in vaccinated cows, and the transference of these antibodies to calves through the colostrum, gave full protection to challenge. Furthermore no adverse effects were observed in any of the vaccinated cows.Os antígenos K99-F41 foram extraídos da amostra de Escherichia coli B41 por aquecimento e semi-purificados pela precipitação com sulfato de amônio e tratamento com desoxicolato de sódio (DOC). Os antígenos semi-purificados foram utilizados na produção de uma vacina oleosa contra a colibacilose bovina. Foram preparadas vacinas contendo em cada dose 1.500 HU (Unidades Hemaglutinantes), 750 HU e 380 HU. A eficiência da vacina foi avaliada através do ensaio de imunodifusão dupla, ensaio imunoenzimático (ELISA) e por um desafio, em que a amostra de Escherichia coli virulenta foi inoculada nos bezerros nascidos de vacas vacinadas e não vacinadas. Observamos que a vacina contendo 750 HU foi a que melhor induziu a produção de anticorpos nas vacas vacinadas, e que estes mostraram-se protetores, uma vez que os bezerros nascidos de vacas vacinadas e que mamaram o colostro, nada sofreram no desafio. Não se verificou nenhum efeito colateral nas vacas vacinadas

Colibacilose em carneiros é associada à enterotoxina termo-estável do tipo I em uma propriedade rural do estado de São Paulo, Brasil

Twenty seven (48.2%) culture supernatants of 56 Escherichia coli isolated from diarrheic lamb feces (7 to 10 days old) in São Paulo State, Brazil, presented positive results to suckling mice assay (fluid accumulation) but none caused cytopathic effects on Vero and CHO cells, indicating that these strains did not produced LT or VT toxins. PCR assays showed that these 27 E. coli strains harbored estA, that codifies for STa, but not for stx1, stx2 or cnf genes. The positive STa strains were checked for genes that codify for F41, F17 and K99 fimbriae, wich are considered colonization factors in ETEC. Only F17 was detect in two samples (7.4%). Twelve of 27 STa positive carried hlyA gene and presented hemolytic activity in blood Agar. Presence of rotavirus was not detected among the diarrheic feces. These data suggests that STa must be an important diarrheagenic factor to small ruminants in São Paulo State425854857COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPESFUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESPsem informaçãoCinquenta e seis Escherichia coli isoladas de fezes diarreicas de carneiros (7 a 10 dias) no Estado de São Paulo, Brasil, foram avaliadas quando ao acúmulo de fluidos no intestino de camundongos recém-nascidos. Vinte e sete (48,2%) das amostras foram positivas para esse ensaio, porém nenhuma das 56 amostras foi capaz de induzir efeitos citopáticos em células Vero e CHO, indicando que não produzem toxinas LT ou VT. Análise por PCR mostrou que estas 27 E. coli foram positivas para estA, que codifica a proteína STa, mas não para os genes stx1, stx2 ou cnf. As amostras positivas para STa foram também analisadas quanto à presença dos genes que codificam as fímbrias F41, F17 e K99, fatores de colonização em ETEC. Somente F17 foi detectada em 2 amostras (7,4%). Doze das 27 E. coli STa positivas também contêm o gene hlyA e apresentaram atividade hemolítica em Agar sangue. Rotavírus não foi detectado nas fezes desses animais. Em conjunto, esses resultados sugerem que STa é um fator diarreiogênico importante para colibacilose de pequenos ruminantes no Estado de São Paul