Avaliação da resposta imune humoral em camundongos para a proteína Glutationa S-transferase de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (GST-Bm), e de Haemaphysalis longicornis (GST-HI)

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, e é um dos principais causadores de prejuízos econômicos à pecuária. O principal método de controle baseia-se no uso de acaricidas. No entanto, devido à crescente preocupação com os problemas criados pela poluição química do meio ambiente, ao alto custo e toxicidade das drogas e ao aparecimento de carrapatos resistentes aos acaricidas, métodos alternativos para o controle do R. microplus devem ser encontrados. Um dos métodos alternativos estudados é o uso de vacinas. As Glutationa S-transferases (GST) são enzimas que estão presentes em organismos animais e vegetais e, entre suas funções, podem-se destacar transporte intracelular, participação em processos digestivos, síntese de prostaglandinas, e detoxificação de substâncias tóxicas e proteção contra estresse oxidativo. Neste estudo, foi analisada a resposta imunológica comparativa de camundongos para a GST de R. microplus (GST-Bm) e para a GST de Haemaphysalis longicornis (GST-Hl). Ambas as proteínas foram expressas em Escherichia coli linhagem AD494, e purificadas por cromatografia de afinidade por glutationa utilizando a coluna GSTrap FF. Para verificar a imunogenicidade das proteínas, foram utilizados 25 camundongos Balb/c divididos em 12 grupos. As condições testadas foram as inoculações das proteínas GST-Bm e GST-Hl com os adjuvantes Montanide, saponina ou sem adjuvantes. Camundongos controle foram inoculados com extrato de E. coli ou somente com os adjuvantes. Foi coletado sangue de todos os animais, com intervalos de sete dias, durante 70 dias. Os soros foram analisados por ELISA para acompanhar a cinética da produção de anticorpos de todos os animais imunizados. Os camundongos inoculados com GST-Hl emulsificada com Montanide mostraram aumento dos níveis de anticorpos a partir do dia 21. O nível máximo de anticorpos foi detectado no dia 42, e diminuiu após o dia 56. Todos os outros animais não apresentaram aumento nos níveis de anticorpos

Anti-tick monoclonal antibody applied by artificial capillary feeding in Rhipicephalus (Boophilus) microplus females

AbstractThe tick Rhipicephalus microplus is an ectoparasite harmful to livestock, a vector of disease agents that affects meat and milk production. However, resistance to acaricides reflects the need for alternative tick control methods, among which vaccines have gained increasing relevance. In this scenario, monoclonal antibodies can be used to identify and characterize antigens that can be used as vaccine immunogens. Capillary tube artificial feeding of partially engorged R. microplus females with monoclonal antibodies against proteins from the gut of tick were used to test the effects of immunoglobulins in the physiology of the parasite. The results of artificial feeding showed that female ticks over 25mg and under 60mg in weight performed better in the artificial feeding process, with a 94–168% weight increase after 24h of feeding. Results showed that artificial feeding of ticks proved to be a viable technique to study the effects of antibodies or drugs in the physiology of the parasite. One monoclonal antibody (BrBm2) induced decreased oviposition. Moreover, the antigen recognized by BrBm2 was identified as a 27-kDa protein and immunolabeled on digestive vesicles membranes of digestive cells of partially and fully engorged females

Intoxicação experimental por Brachiaria decumbens em coelhos

Brachiaria spp. are important sources of forage for ruminants in Brazil, due to the easy cultivation, good resistance to drought, good adaptation to different soils and low maintenance cost. However, the ingestion of this grass has been related to photosensitization outbreaks in cattle and sheep with significant economic losses. The hepatotoxic effects related to the ingestion of grass are the formation of crystals and foamy macrophages due to the accumulation of toxic metabolites. The use of cattle and sheep in experiments involving the plant presents several obstacles in the ethical, economic and animal management. The objective of this study was to evaluate the sensitivity of rabbits as an experimental model for B. decumbens poisoning. Two experiments were carried out. In Experiment 1 four rabbits received the fresh plant in daily doses of 10, 20, 40 and 80g/kg body weight for 120 days. In Experiment 2 three rabbits received the fresh plant in amounts of 500g daily with duration of 210 days. The animals of Experiment 1 showed no clinical signs and no macroscopic and microscopic changes characteristic of B. decumbens poisoning. In Experiment 2 the animals also showed no clinical signs or significant macroscopic alterations. Histological analysis showed isolated foamy macrophages or present in random groups of cells in the liver and mesenteric lymph nodes. Samples of liver and mesenteric lymph nodes of the rabbits of Experiment 2 were submitted to the lectin-histochemistry technique. The WGA, sWGA and RCA lectins showed reactivity in foamy macrophages in both organs. This is the first study of our knowledge that demonstrates histopathological lesions caused expetimentally by Brachiaria spp. in rabbits, demonstrating its potential as an animal model.Brachiaria ssp. são importantes fontes de forragem para ruminantes no Brasil, devido ao fácil cultivo, boa resistência a seca, boa adaptação a diferentes solos e baixo custo de manutenção. Entretanto, a ingestão desta gramínea está relacionada a surtos de fotossensibilização, em bovinos e ovinos, principalmente, ocasionando prejuízos econômicos significativos. Os efeitos hepatotóxicos relacionados à ingestão da gramínea são a formação de cristais e macrófagos espumosos causados pelo acúmulo de metabólitos tóxicos. A utilização de bovinos e ovinos em experimentos envolvendo a planta apresenta vários empecilhos, tanto no âmbito ético, econômico e no manejo dos animais. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a sensibilidade de coelhos como modelo experimental para intoxicação por B. decumbens. No presente estudo foram realizados dois experimentos. O Experimento 1 utilizou quatro coelhos que receberam a planta fresca em doses diárias de 10, 20, 40 e 80 g/Kg de peso vivo durante 120 dias. O Experimento 2 utilizou três coelhos recebendo a planta fresca em quantidades de 500g diárias por animal com duração de 210 dias. No Experimento 1, os animais não apresentaram sinais clínicos e nem alterações macroscópicas e microscópicas características de intoxicação por B. decumbens No Experimento 2 os animais também não apresentaram sinais clínicos e alterações macroscópicas significativas. Na análise histológica observou-se presença de macrófagos espumosos isolados ou em grupos aleatórios de células no fígado e nos linfonodos mesentéricos. Amostras de fígado e linfonodos mesentéricos dos animais do Experimento 2 foram submetidos à técnica de lectino-histoquímica. As lectinas WGA, sWGA e RCA apresentaram reatividade em macrófagos espumosos nos dois órgãos. Este é o primeiro trabalho de nosso conhecimento que demonstra lesões histopatológicas por Brachiaria spp conduzido de forma experimental em coelhos, demonstrando seu potencial como modelo animal nesse campo de estudo

Diagnoses of Ovine Infection by the Serotype-4 Bluetongue Virus on Minas Gerais, Brazil

Background: Bluetongue (BT) is a viral disease transmitted by hematophagous vectors of the genus Culicoides. In Brazil, the identifcation of antibodies against the virus has been held for over thirty years, however clinicopathological diagnosis of the disease are scarce. The frst reported case occurred in the state of Paraná in 2001, confrmed by isolation and identifcation of serotype 12 of BTV. In the state of Rio Grande do Sul, in 2009, two outbreaks confrmed and was identifed the serotype 12. Serotype 4 was isolated during an outbreak in the state of Rio de Janeiro in 2013. This study describes the Diagnoses of ovine infection by the serotype-4 bluetongue virus in Minas Gerais, Brazil. Case: In a farm in the Southern region of the state of Minas Gerais, a group of 28 male sheep, was sent for necropsy at the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal de Lavras (SPV-UFLA). In a flock of 80 male sheep 28 died with clinical signs of respiratory distress, whereas other showed signs of anemia and hypoproteinemia, cough, sneezing, prostration, fever, mucopurulent nasal discharge, anemia and submandibular edema. At necropsy, the main changes observed were cranioventral pulmonary consolidation, hemorrhage at the base of the pulmonary artery and ulcerating lesions in the hard palate mucosa, rumen and reticulum. The histological changes consisted of bacterial bronchopneumonia, papillary necrosis associated with bacterial structures, multifocal vasculitis in the submucosa and thrombi in blood vessels of the serosa in the rumen and reticulum, hyaline and flocculate necrosis in esophageal muscle, skeletal and cardiac muscle fbers were also observed, associated with moderate mononuclear inflammatory infltrate between fbers and around blood vessels. Discussion: The diagnosis of BT was confrmed by the identifcation of nucleic acids of the virus in blood samples and from tissues of animals from the herd by RT-PCR and by the detection of antibodies against Bluetongue virus with the agar gel immunodiffusion (AGID) test using serum samples from the remaining herd animals. Serotype 4 was identifed in three of the samples inoculated into KC cells. The hemorrhage at the base of the pulmonary artery, one characteristic fndings, was found in three of the necropsied sheep. The pulmonary lesions observed in the present study strongly suggest the occurrence of pneumonia caused by opportunistic bacteria, especially Mannheimia haemolytica, which is commonly associated with pneumonia in sheep infected with BTV. This work is the frst in the state of Minas Gerais and the fourth in Brazil to report an outbreak of the disease with clinical signs. The economic impact of bluetongue results not only from the direct losses of animals to the disease, but also to the correlation among BTV infection and other problems including pneumonia, abortion and verminoses. In a study focused on the characteristics of ovine farming in Minas Gerais, farmers from the center-southwest reported that abortion and pneumonia were among their main problems. Thus, further epidemiological studies on BTV may improve the level of identifcation of infected herds and may help promote prophylactic measures. Necropsies and histopathology exams constitute crucial tools for diagnosis, because most cases present at a sub-clinical stage or in association with other, concomitant diseases. Keywords: BTV 4, viral diseases, sheep, RT-PCR e IDG

Avaliação da resposta imune humoral em camundongos para a proteína Glutationa S-transferase de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (GST-Bm), e de Haemaphysalis longicornis (GST-HI)

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, e é um dos principais causadores de prejuízos econômicos à pecuária. O principal método de controle baseia-se no uso de acaricidas. No entanto, devido à crescente preocupação com os problemas criados pela poluição química do meio ambiente, ao alto custo e toxicidade das drogas e ao aparecimento de carrapatos resistentes aos acaricidas, métodos alternativos para o controle do R. microplus devem ser encontrados. Um dos métodos alternativos estudados é o uso de vacinas. As Glutationa S-transferases (GST) são enzimas que estão presentes em organismos animais e vegetais e, entre suas funções, podem-se destacar transporte intracelular, participação em processos digestivos, síntese de prostaglandinas, e detoxificação de substâncias tóxicas e proteção contra estresse oxidativo. Neste estudo, foi analisada a resposta imunológica comparativa de camundongos para a GST de R. microplus (GST-Bm) e para a GST de Haemaphysalis longicornis (GST-Hl). Ambas as proteínas foram expressas em Escherichia coli linhagem AD494, e purificadas por cromatografia de afinidade por glutationa utilizando a coluna GSTrap FF. Para verificar a imunogenicidade das proteínas, foram utilizados 25 camundongos Balb/c divididos em 12 grupos. As condições testadas foram as inoculações das proteínas GST-Bm e GST-Hl com os adjuvantes Montanide, saponina ou sem adjuvantes. Camundongos controle foram inoculados com extrato de E. coli ou somente com os adjuvantes. Foi coletado sangue de todos os animais, com intervalos de sete dias, durante 70 dias. Os soros foram analisados por ELISA para acompanhar a cinética da produção de anticorpos de todos os animais imunizados. Os camundongos inoculados com GST-Hl emulsificada com Montanide mostraram aumento dos níveis de anticorpos a partir do dia 21. O nível máximo de anticorpos foi detectado no dia 42, e diminuiu após o dia 56. Todos os outros animais não apresentaram aumento nos níveis de anticorpos