ANALISIS DE LA SECCION 8 DEL CROMOSOMA X DE Drosophila melanogaster MEDIANTE EL USO DE CLONES YAC DE Saccharomyces cerevisiae*

En Drosophila melanogaster, los genes estructurales que codifican para hexoquinasas A y B, se ubican estrechamente ligados en el cromosoma I (X). Estos loci corresponden a la región citológica 8D4-E1 en el mapa citogenético de dicho cromosoma.Con el objetivo de determinar la ubicación exacta de los loci para hexoquinasas A y B se realizó un análisis molecular, mediante el uso de cromosomas artificiales de levadura, que contienen DNA de la sección 8 del cromosoma X.  Para tal efecto, se aisló DNA cromosómico intacto de siete clones YAC de S. cerevisiae que cubren  dicha región. El DNA fue resuelto mediante electroforesis de campo pulsado y analizado por hibridación con DNA del plásmido pBR322 y con un fragmento de DNA de 0,67 Kb de D. melanogaster, amplificado por PCR con partidores heterólogos específicos para hexoquinasas.Los resultados de estos experimentos permitieron concluir que, la sonda  homóloga es capaz de hibridar con el YAC II, lo cual coincide con la cobertura de este clon en la región citológica esperada

Estrategias didácticas para la enseñanza de la biología molecular y la biotecnología, en estudiantes de educación media

El proyecto tuvo como objetivo contribuir a la formación científica, desarrollo de habilidades y destrezas experimentales en estudiantes de educación media, mediante la realización de módulos experimentales en biología molecular y en biotecnología. Los estudiantes, a través de la metodología científica, resolvieron la situación problema de aislar, clonar y expresar un gen de interés industrial en una levadura. Para ello, manipularon y caracterizaron, citológica y bioquímicamente, los microorganismos empleados en el proyecto. Luego, aislaron, amplificaron y secuenciaron el gen que codifica por la enzima alfa-acetolactato descarboxilasa, a partir de un plásmido bacteriano. Posteriormente, clonaron el gen en un vector de expresión dual y, realizaron ensayos de transformación genética en levadura y, evaluaron la actividad enzimática, mediante ensayo in vitro

Aislamiento de secuencias de replicación autónoma de Xanthophyllomyces dendrorhous en Saccharomyces cereviciae

Xanthophyllomyces dendrorhous (=Phaffia rhodozyma ), es una levadura basidiomicética carotenogénica, en la cual aspectos importantes de su biologia, como la organización general su genoma, número de cromosomas y nivel de ploidía, aún no son completamente entendidos. En atención a esto, se han orientado esfuerzos hacia la obtención de marcadores genéticos de auxotrofia, pigmentación y resistencia a antibióticos. Además. se ha progresado lentamente en estudios moleculares con el objetivo de aumentar el conocimiento de su genética,mediante el desarrollo de procedimientos de transformación genética, los cuales tienen una eficiencia baja.Con el objeto de construir un vector de clonado de X. dendrorhous, se describen los experimentos para lograr el clonamiento de Secuencias de Replicación Autónoma (ARS) de este basidiomicete en la levaduraSaccharomyces cerevisiae. Para ello se procedió a transformar la cepa FBL1 -8B de S. cerevisiae con clones recombinantes de la genoteca de X. dendrorhous construida en el vector de integración YIp5. Como resultado se lograron 4 transformantes URA3+ de S.cerevisiae, denominados 6(1), 37(1), 38(1) Y 38(4). Adicionalmente se realizaron experimentos de rescate de plásmidos mediante transformación de E. coli DH5a con DNA total de los transformantes de levadura, rescatándose 6 clones recombinantes. El análisis de restricción de los plásmidos, indicó que 5 son idénticos, estando formados por el vector YIp5 (5.4 kb) Y 3 fragmentos BamHI de 7.7, 2.4 Y J.5 kb. El otro carece del inserto de 2.4 kb. La retransformación de S. cerevciae con estos plásmidos se presentó en alta frecuencia y sugiere la presencia de un ARS. El subclonado de los insertos indica que la función ARS radica en el mayor y corresponde a un rearreglo del vector e inserto

Integrity of the Oral Tissues in Patients with Solid-Organ Transplants

The relationship between the use of immunosuppressants in solid-organ transplant patients and oral tissue abnormalities has been recognized. The objective of this study was to determine the state of oral tissue integrity in renal, heart, and liver transplant patients who are on continuous medical and dental control. Forty patients of both sexes were clinically evaluated at the Clinical Hospital of the University of Chile to identify pathologies of oral mucosa, gingival enlargement (GE), decayed, missing, filled teeth (DMFT) index, and salivary flow. The average age of the transplant subjects was 49.4 years, and the age range was 19 to 69 years. Most subjects maintained a good level of oral hygiene, and the rate mean of DMFT was 14.7. The degree of involvement of the oral mucosa and GE was low (10%). Unlike other studies, the frequency of oral mucosal diseases and GE was low despite the fact that these patients were immunosuppressed. Care and continuous monitoring seem to be of vital importance in maintaining the oral health of transplant patients

Presencia de plasmidos de DNA de doble hebra en Phaffia rhodozyma

El análisis mediante electroforesis en gel de agarosa, de los ácidos nucleicos de tres cepas silvestres de Phaffia rhodozyma, permitió determinar la presencia de elementos genéticos extracromosómicos de DNA de doble hebra en una de ellas, la cepa UCD 67-210. Esta cepa es portadora de al menos 6 bandas de DNA que migran más rápido que el DNA cromosómico y cuyos tamaños moleculares corresponden a 6.5, 5.9, 5.0, 4.4, 3.2 y 2.5 kb. Con el objetivo de determinar el tipo deácido nucleico que contituye estos elementos, se estudió su comportamiento frente a diferentes nucleasas. El tratamiento con ribonucleasa A, ya sea en alta o baja fuerza iónica, no tiene efecto sobre las bandas electroforéticas, así como el tratamiento con nuecleasaS1 . Por el contrario, el tratamiento con desoxiribonucleasa pancreática conduce a una degradación completa de las bandas y del DNA  cromosómico. Estos resultados sugieren que la naturaleza química de losplásmidos corresponde a DNA de doble hebra.Por otra parte, la visualización de los plásmidos en gel de agarosa,  depende de la utilización de proteinasa K y SDS en el procedimiento de purificación de los plásmidos y en las condiciones de corrida electroforética, sugiriendo la presencia de un complejo DNA plasmidial- proteína en cada uno de estos elementos.Finalmente, el análisis mediante enzimas de restricción de dos de estos plásmidos, sugiere que estos elementos no están relacionados

Determination of susceptibility to sensitization to dental materials in atopic and non-atopic patients

Introduction: Some studies report that atopic patients have a greater frequency of delayed-type sensitization than non-atopic patients. Objective: To determine the influence of the atopic condition on delayed sensitization to dental materials. Design: cross-sectional study. Methods: Forty (40) atopic subjects and forty (40) non-atopic subjects, of both sexes, between 20 and 65 years of age were included. The determination of delayed sensitization to dental materials was performed using patch test. An oral exam was also carried out to check for lesions of the oral mucosa. Results: 61.25% of the patients were positive for delayed-type sensitization to one or more allergens, being palladium chloride (21.25%), ammoniated mercury (20%), benzoyl peroxide (12.5%) and amalgam (10%) the most frequent. The frequency of sensitization was 67.5% in the group of atopic patients, compared to 55% in the non atopic group (p>0.05). The materials with the greatest difference of sensitization in atopic compared to non-atopic patients were ammoniated mercury, benzoyl peroxide, amalgam and Bisphenol A Dimethacrylate (BIS-GMA). Conclusion: The atopic condition is not related to a higher frequency of delayed sensitization to a battery of dental materials. © Medicina Oral

Cuantificación de papilas fungiformes en pacientes sanos

Objective: The study aims to quantify the density and the diameter of fungiform papillae (FP) in healthy patients of different age ranges.  Material and Methods: A dental chart of all participants was created, and subsequently informed consent was obtained from those who met the inclusion criteria (n = 16, 7 women and 9 men, from 8 to 57 years of age). Blue food-dye was applied to the back of their tongues, followed by a 12mm diameter metal ring that was placed in the anterior tongue dorsal surface, and photographs were taken3. The density of FP in the ring and the diameter of the largest FP within the circle were determined. Quantification and measurement were carried out in Photoshop digital program4. Data were analyzed descriptively using the STATA v12.0 program. The association between variables was determined by Student's t-test and Pearson's correlation, with a significance level of 5%.Results: The average FP density was 15 ± 7 PF / cm2, and the average of the largest FP diameter was 0.74 ± 0.1mm. The age of the patients was negatively correlated with the FP density (R = -0.56, p = 0.02) and positively with the mean of the largest FP diameter (R = 0.56, p = 0.02). There was no significant association found between density and the mean number of the largest diameter of PF with the sex of the participants.Conclusion: The density and the largest diameter of FP are negatively and positively correlated with the age of the patients, respectively. Objetivo: El objetivo del estudio es cuantificar la densidad y el diámetro mayor de papilas fungiformes en pacientes sanos de distintos rangos etarios. Materiales y métodos: Se realizó una ficha clínica a los participantes, posteriormente, se hizo toma de consentimiento informado a las personas que cumplieran con requisitos de inclusión y exclusión. Se aplicó colorante azul de comida en el dorso lingual, luego, se ubicó un aro metálico de 12mm de diámetro en el sector anterior de la cara dorsal de la lengua y se tomaron fotografías3. Posteriormente, se determinó densidad de papilas fungiformes (PF) en el aro y el diámetro mayor de cada PF dentro del círculo. Cuantificación y medición se realizó en programa digital Photoshop, siguiendo criterios previamente descritos4. Con el programa STATA v12.0 se analizaron los datos descriptivamente. La asociación entre variables se determinó mediante test t de Student y correlación de Pearson, con un nivel de significación del 5%. Resultados: El promedio de densidad de PF fue de 15 ± 7 PF/cm² y el promedio del diámetro mayor de PF fue de 0,74 ± 0,1mm. La edad de los pacientes se correlacionó negativamente con la densidad de PF (R=-0,56 p=0,02) y positivamente con el promedio del diámetro mayor de PF (R=0,56,p=0.02). No se encontró asociación significativa entre densidad y promedio del diámetro mayor de PF con el sexo de los participantes. Conclusión: La densidad y el diámetro mayor de PF se correlacionan de forma negativa y positiva con la edad de los pacientes, respectivamente

ESTUDIO GENETICO MOLECULAR DE LEVADURAS DE DIVERSOS AMBIENTES

Se describe la presencia de polimorfismo genético en levaduras nativas aisladas de diferentes ambientes, tales como: agua de mar, suelos forestales con poca intervención antrópica, suelos de viñedos, otros ambientes naturales y desde pacientes con funge-mia severa. Se detectó la presencia de elementos gené-ticos extracromosómicos en cuatro cepas diferentes de levaduras. El análisis de amplificación de una region ITS utilizando partidores específicos para el ITS2 (partidores ITS3 e ITS4), permite determinar una banda de amplificación de rDNA que varia de tamaño entre 450 y 560 pb, dependiendo del género de levadura analizada. En una cepa de Cryptococcus terreus se observó la presencia de tres bandas de amplificación ITS que sugieren una organización compleja de los genes de rDNA en esa cepa. Finalmente el análisis del cariotipo electroforético de cepas ambientales y clínicas de Pichia anomala mostró un marcado poli-morfismo cromosómico en esta levadura emergente

Diversity of clinical, radiographic and genealogical findings in 41 families with amelogenesis imperfecta

Amelogenesis imperfecta (AI) is a group of enamel development disorders that alter the structure and chemical composition of the tissue. There is great variability in the clinical presentation; according to Witkop, AI can be categorized into 14 subtypes, which makes its diagnosis extremely complex. Objective: This study aimed to describe and determine the frequency of clinical and radiographic features and inheritance patterns found in 41 Chilean families diagnosed with diverse types of AI. Material and Methods: We analyzed the clinical records, photographs, pedigrees and radiographs of 121 individuals recruited between 2003 and 2016. All of the information was included in a database that was analyzed using the application Stata 14. Results: The 72 affected individuals had average age of 16 years, and no sex association with the presence of AI was found. The most frequent clinical subtypes were as follows: 43% hypomature, 25% hypoplastic, 21% hypomature/hypoplastic, 7% hypocalcified and 4% hypocalcified/hypoplastic. The number of severely affected teeth was 22, which occurred in the patients with hypocalcified and hypocalcified/hypoplasic AI who presented the highest number of damaged teeth. Caries and periodontal disease were found in 47 and 32% of the patients, respectively. Malocclusions were observed in 43% of the individuals with AI, with open bite being the most frequent. Radiographically, the thickness of the enamel decreased in 51% of the patients, and 80% showed decreased radiopacity of the enamel compared to that of dentin. Autosomal dominant inheritance pattern was found in 37% of the families with hypoplastic AI, and autosomal recessive pattern was present in 56% of the other clinical subtypes, but more frequently in those affected with hypomature and hypocalcified AI. Conclusion: Of the five clinical subtypes, autosomal recessive hypomature, autosomal dominant hypoplastic and autosomal recessive hypomature/hypoplastic AI were the most prevalent subtypes in this group