Amelioration of mercury nephrotoxicity after pharmacological manipulation of organic anion transporter 1 (Oat1) and multidrug associated resistance protein 2 (Mrp2) with furosemide

Inorganic mercury is a major environmental contaminant. The primary site of mercuryinduced injury is the kidney due to the uptake of Hg(2+) -conjugated organic anions in the proximal tubule, primary across the organic anion transporter 1 (Oat1) at the basolateral membrane. At the luminal side, mercuric ions are eliminated by the multidrug resistanceassociated protein 2 (Mrp2). It was described that furosemide treatment induces up-regulation of Oat1 renal expression. As novel preventive and therapeutic strategies based in pharmacological manipulation of drug transporters are emerging, this study was designed to evaluate the impact of furosemide modulation of Oat1 on the nephrotoxicity induced by HgCl2. Wistar rats were treated with furosemide (6 mg/100 g/ day, s.c.) during 4 days or with HgCl2 (4 mg/kg, i.p.) 18 h before the experiments or with furosemide during 4 days before the HgCl2 injection. Furosemide treatment improved HgCl2-induced tubular injury as assessed by urinary alkaline phosphatase activity, urinary glucose, Oat5 urinary excretion and histopathological studies. Besides, administration of furosemide enhanced mercury urinary excretion, reduced mercury total renal accumulation and increased Mrp2 renal expression. In summary, furosemide improves HgCl2- induced proximal tubule injury up-regulating mercury transporters and thus, increasing renal elimination of the mercuric ions. Hence, pharmacological manipulation of mercury transporters with furosemide might be a preventive strategy to reduce mercury toxicity.Fil: Hazelhoff, Maria Herminia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Cs.bioquimicas y Farmaceuticas. Departamento de Cs.fisiologicas. Area Farmacologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Trebucobich, Mara S.. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Cs.bioquimicas y Farmaceuticas. Departamento de Cs.fisiologicas. Area Farmacologia; ArgentinaFil: Stoyanoff, Tania Romina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chevalier, Alberto A.. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. GIHON Laboratorios Químicos; ArgentinaFil: Torres, Adriana Monica. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Cs.bioquimicas y Farmaceuticas. Departamento de Cs.fisiologicas. Area Farmacologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Expresión diferencial de isoformas del factor inducible por hipoxia (hif-1α y hif-2 α) en bazo y médula ósea en un modelo murino

Los factores inducibles por hipoxia (HIFs) regulan la adaptación a la hipoxia (H) y protegen a las células induciendo la transcripción de múltiples genes. Se propone estudiar la expresión de las isoformas HIF1α y HIF2α en tejidos hematopoyéticos MO y Bz durante 15 días de Hipoxia Hipobárica (HH) relacionarlos con la cinética de expresión de EPO-R y factores determinantes de la eritropoyesis GATA-1 y NFE2. Se utilizaron ratones CF1, sometidos a HH 0,4 atm de 0 a 15 días. A cada tiempo, se extrajeron fémures y Bz para la obtención de extractos, fraccionamiento proteico e inmunoblotting. Se determinaron parámetros hematológicos standard. La apoptosis fue cuantificada por TUNEL. HIFα fue evaluado en sus dos isoformas. En MO y Bz el factor de transcripción aumenta y es mayor desde el día 1 de HH en Bz. Niveles máximos de HIF1α se verifican al día 3 en MO y a partir del día 5 en Bz. HIF2α en MO presenta expresión máxima al día 2 con posterior descenso, donde la MO retoma el control de la eritropoyesis. En Bz, HIF2 exhibe patrón irregular, conservando aumentos de su inmunodetección en función de la H. Epo-R se expresa desde día 1 en MO y Bz en un patrón similar de comportamiento a GATA-1. NFE2 tiene una cinética diferencial con progresión de ascenso en MO conforme aumentan los días de H observándose un máximo al día 15 mientras que el Bz muestra paulatino descenso en función de la adaptación medular a la H. Esto sugiere que en el Bz y MO se verifican procesos adaptativos coexistentes de expansión/sobrevivencia y apoptosis de progenitores eritroides. En Bz predomina una eritropoyesis compensatoria. En MO por el contrario predomina apoptosis temprana con posterior recomposición y control de la expansión del compartimiento eritroideo. HIF1 y HIF2 se sobreexpresan en ambos tejidos, sin embargo la eritropoyesis esplénica está ligada al control de HIF1α ya que aparentemente HIF2α estaría asociada a la supervivencia de otros tipos celulares esplénicos durante el estrés hipóxico

Evaluación histológica de ratones alimentados con dietas diseñadas a partir de harinas integrales de chía y lino

El objetivo de este trabajo fue evaluar histológicamente la adecuación de las dos dietas híbridas para ratones Balb/c a partir de harina integral de chia, lino y otros ingredientes naturales tipicos del NEA argentino. Ratones Balb/cfueron distribuidos en 3 grupos (n = 10) y alimentados con dieta A: control comercial, dietaB: harina integral de chía, y dieta C: harina integral de lino, durante 70 días. La adecuación nutricional de las dietas a nivel histológico se evaluó mediante tinciones H/E y PAS enmuestras de estómago, duodeno, hígado y riñón. Las dietas B y C no causaron alteracioneshistopatológicas en órganos del aparato digestivo, hígado y riñón.This work aimed to histologically evaluate the adequacy of the two-hybrid diets for Balb/c mice based on integral chia and flax flour and other natural ingredients typical of Northeast Argentina. Balb/c mice were randomly distributed into 3 groups (n=10/group) and fed diet A (commercial control), B (integral chia flour) and diet C (integral flax flour) for 70 days. The nutritional adequacy of the diets at the histological level was evaluated at the histological level using H/E and PAS stains in stomach, duodenum, liver, and kidney samples. Diets B and C did not cause histopathological alterations in organs of the digestive system, liver and kidney.Fil: Colussi, Narella Antonina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Laboratorio de Investigaciones Bioquímicas; ArgentinaFil: Todaro, Juan Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Laboratorio de Investigaciones Bioquímicas; ArgentinaFil: Olea, Gabriela Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Stoyanoff, Tania Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Aguirre, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina; Argentin

The hypoxic microenvironment induces stearoyl-coa desaturase-1 overexpression and lipidomic profile changes in clear cell renal cell carcinoma

Clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common histological subtype of renal cell carcinoma (RCC). It is characterized by a high cell proliferation and the ability to store lipids. Previous studies have demonstrated the overexpression of enzymes associated with lipid metabolism, including stearoyl-CoA desaturase-1 (SCD-1), which increases the concentration of unsaturated fatty acids in tumor cells. In this work, we studied the expression of SCD-1 in primary ccRCC tumors, as well as in cell lines, to determine its influence on the tumor lipid composition and its role in cell proliferation. The lipidomic analyses of patient tumors showed that oleic acid (18:1n-9) is one of the major fatty acids, and it is particularly abundant in the neutral lipid fraction of the tumor core. Using a ccRCC cell line model and in vitro-generated chemical hypoxia, we show that SCD-1 is highly upregulated (up to 200-fold), and this causes an increase in the cellular level of 18:1n-9, which, in turn, accumulates in the neutral lipid fraction. The pharmacological inhibition of SCD-1 blocks 18:1n-9 synthesis and compromises the proliferation. The addition of exogenous 18:1n-9 to the cells reverses the effects of SCD-1 inhibition on cell proliferation. These data reinforce the role of SCD-1 as a possible therapeutic target.Fil: Melana Colavita, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Mignolli, Francesco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Stoyanoff, Tania Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Aguirre, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Balboa, María A.. Consejo Superior de Investigaciones Científicas; España. Universidad de Valladolid; EspañaFil: Balsinde Rodríguez, Jesús. Consejo Superior de Investigaciones Científicas; España. Universidad de Valladolid; EspañaFil: Rodríguez, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentin

Tumor biology of non-metastatic stages of clear cell renal cell carcinoma; overexpression of stearoyl desaturase-1, EPO/EPO-R system and hypoxia-related proteins

Clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of renal carcinomas. There is great interest to know the molecular basis of the tumor biology of ccRCC that might contribute to a better understanding of the aggressive biological behavior of this cancer and to identify early biomarkers of disease. This study describes the relationship among proliferation, survival, and apoptosis with the expression of key molecules related to tumoral hypoxia (hypoxia-inducible factor (HIF)-1α, erythropoietin (EPO), vascular endothelial growth factor (VEGF)), their receptors (EPO-R, VEGFR-2), and stearoyl desaturase-1 (SCD-1) in early stages of ccRCC. Tissue samples were obtained at the Urology Unit of the J.R. Vidal Hospital (Corrientes, Argentina), from patients who underwent radical nephrectomy for renal cancer between 2011 and 2014. Four experimental groups according to pathological stage and nuclear grade were organized: T1G1 (n = 6), T2G1 (n = 4), T1G2 (n = 7), and T2G2 (n = 7). The expression of HIF-1α, EPO, EPO-R, VEGF, VEGFR-2, Bcl-xL, and SCD-1 were evaluated by immunohistochemistry, Western blotting, and/or RT-PCR. Apoptosis was assessed by the TUNEL in situ assay, and tumor proliferation was determined by Ki-67 immunohistochemistry. Data revealed that HIF-1α, EPO, EPO-R, VEGF, and VEGF-R2 were overexpressed in most samples. The T1G1 group showed the highest EPO levels, approximately 200 % compared with distal renal tissue. Bcl-xL overexpression was concomitant with the enhancement of proliferative indexes. SCD-1 expression increased with the tumor size and nuclear grade. Moreover, the direct correlations observed between SCD-1/HIF-1α and SCD-1/Ki-67 increments suggest a link among these molecules, which would determine tumor progression in early stages of ccRCC. Our results demonstrate the relationship among proliferation, survival, and apoptosis with the expression of key molecules related to tumoral hypoxia (HIF-1α, EPO, VEGF), their receptors (EPO-R, VEGFR-2), and SCD-1 in early stages of ccRCC.Fil: Stoyanoff, Tania Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Rodríguez, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Todaro, Juan Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Espada, Joaquin Diego. Hospital Vidal. Dpto. de Urología. Corrientes; ArgentinaFil: Melana Colavita, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Brandan, Nora Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Torres, Adriana Monica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Química Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Química Rosario; ArgentinaFil: Aguirre, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentin

Optimización de cultivos primarios de células de carcinoma renal de células claras como modelo “in vitro” para estudios metabólicos y determinantes de progresión neoplásica

El objetivo del presente estudio fue optimizar la implementación de cultivos primarios a partir de muestras de carcinoma renal de células claras (CRCC) para comprobar la conservación del fenotipo lipogénico contra cortes fijados del mismo origen.Se utilizaron muestras de pacientes con CRCC, evaluándose diversas metodologías y condiciones experimentales de digestión de muestras, adherencia y despegue celular, fenotipo lipogénico, potencial de clonación, proliferación y capacidad de migración. El mayor rendimiento y viabilidad celular se verificó mediante digestión con colagenasa. La adherencia inicial se logró a las 24 hs de incubación, utilizando placas plásticas de cultivo, recubiertas con colágeno comercial y gelatina 0,2% en la mayoría de las muestras analizadas (60% de los casos). Se obtuvieron monocapas, con potencial de migración, en un 40% de los casos, tras 5 ± 1 días de incubación. El promedio de subcultivos fue de 3 ± 1. Este estudio permitió estandarizar cultivos primarios de CRCC comprobándose la conservación de la fenotipia lipogénica, logrando de dicha manera una herramienta importante y útil para el estudio de la biología tumoral y el ensayo de nuevas terapéuticas.O objetivo deste trabalho foi otimizar a implementação de culturas primárias de amostras de carcinoma de células claras renal (CRCC) para verificar conservação fenótipo lipogenic contra os cortes previstos a mesma origem. As amostras dos pacientes foram utilizados CRCC, avaliando diferentes metodologias e as condições experimentais da digestão de amostras, adesão celular e fenótipo clonagem potencial take-lipogenic, proliferação e capacidade de migração. O maior rendimento e a viabilidade celular foi avaliada por digestão com colagenase. A adesão inicial foi obtida após 24 horas de incubação com colagénio e gelatina comercial 0,2% em 60% dos casos. As monocamadas foram obtidos em 40% após 5 ± 1 dias de incubação com o potencial de migração. As subculturas média foi de 3 ± 1. Este estudo nos permitiu padronizar culturas primárias de CRCC são verificados quanto à conservação da fenotipagem lipogenic, conseguindo desta forma um importante e útil para o estudo da biologia do tumor e teste de nova ferramenta terapêutica.The aim of this study was to optimize the implementation of primary cultures from samples of renal clear cell carcinoma (CRCC) to check the conservation of the lipogenic phenotype. CRCC Patient samples were used, in order to evaluate different methodologies and the experimental conditions of sample digestion, cell adhesion and lipogenic phenotype, proliferation and migration ability. The highest yield in cell number and viability was assessed using collagenase digestion. The initial adhesion was achieved after 24 hours of incubation in plastic plates recoverd with commercial collagen or 0.2% gelatin (60% of cases). Monolayers, with migration potential, were obtained in 40% of all cases, after 5 ± 1 days of incubation. The subcultures average was 3 ± 1. This study allowed us to standardize primary cultures of CRCC and check the conservation of the lipogenic phenotyping, achieving in this way an important and useful tool to study the tumor biology.Fil: Melana Colavita, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Rodriguez, J. P.. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Stoyanoff, Tania Romina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; ArgentinaFil: Espada, Joaquin Diego. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Todaro, Juan Santiago. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Aguirre, María Victoria. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; Argentin

Determinación de los mecanismos renoprotectivos de la eritropoyetina en un modelo preclínico de injuria renal aguda inducida por endotoxemia

El presente trabajo demuestra que EPO posee efectos renoprotectivos en un modelo experimental de IRA inducida por endotoxemia a través de mecanismos antiapoptóticos,\npro-angiogénicos y anti-inflamatorios mediados por sobreexpresión de EPO-R en el contexto hipóxico del tejido renal injuriado.\nLos resultados de este estudio aportan a nuevos conocimientos básicos, en especial referentes a la modulación de la vía intrínseca apoptótica, la actividad proangiogénica, la expresión de EPO-R, HIF-1α e iNOS, que podrían aplicarse a mejoras terapéuticas basadas en la administración de EPOrh en cuadros sépticos tempranos

Molecular Mechanisms Involved in Murine Bone Marrow Erythropietic response to Acute Anaemia by Bleeding

The underlying interactions among apoptosis, erythroid proliferation and differentiation involved in bone marrow erythropoietic response after an acute blood-loss have not yet been elucidated in detail. We hypothesized that Erythropoietin receptor, Bax, caspase-3, cytochrome c, Smac/DIABLO and Bcl-xL molecules play important roles at time of acute erythropoietic need to ameliorate the hypoxic stress. Experiments were performed using in vivo murine model of anaemia induced by blood-loss in a time course study of 15 days. Haematological parameters and bone marrow cellularities were determined. Bone marrow apoptotic assays included: double fluorescent staining (acridine orange/ethidium bromide) and TUNEL. Bone marrow clonogenic assays were performed for evaluating erythroid colony forming unit?s expansion. The Erythropoietin receptor, Bax, Bcl-xL, Smac/DIABLO, caspase-3 and cytochrome c expressions were assessed by immunoblottings. Caspase-3 activity was determined with a colorimetric assay kit. Bleeding induces bone marrow apoptosis from 1 to 3 days, concomitant with Bax over-expression and Bcl-xL decrease. The mitochondrial dysfunction caused cytochrome c and Smac/DIABLO release to cytosol and caspase-3 activation. Erythropoietic recovery was associated with Erythropoietin receptor over expression from the third day, concomitant with the erythroid progenitors and Bcl-xL/Bax ratio enhancements. Erythropoiesis after bleeding depends on a delicate balance among proapoptotic (Bax, caspase-3, cytochrome c, Smac/DIABLO) and prosurvival proteins (Erythropoietin receptor, Bcl-xL), as the crucial regulators in bone marrow erythroid recovery. These findings provide new insights into the homeostatic mechanisms which promote erythropoietic response post-bleeding.Fil: Todaro, Juan Santiago. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Stoyanoff, Tania Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Aguirre, María Victoria. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Brandan, Nora Cristina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentin

Cell stress, hypoxic response and apoptosis in murine adriamycin-induced nephropathy

Adriamycin (ADR)-induced nephropathy in rodents is an experimental model commonly used for studies of chronic human renal diseases. The molecular associations involved in renal apoptosis linked to hypoxia and cell stress response in this model are not completely known. The aim of this study was to determine the associations among the expression patterns of the Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS), the heat shock protein 60 (Hsp60) and the Hypoxia Inducible Factor-1 Alpha (HIF-1α) linked to apoptosis in renal cortex in the nephrotic syndrome progression induced by ADR administration. Male BALB/c mice were treated with a single dose of ADR (11 mg kg-1; i.v.). Tubulointerstitial nephrosis was monitored by histopathological assessment and by biochemical determinations on 7, 15 and 30 days following drug exposure. These results were evaluated in conjunction with renal expression of iNOS, Hsp60 and HIF-1α. Cortical apoptosis was examined by TUNEL assay. The increment of renal apoptotic cells in tubulointerstitial areas was accompanied by the decrease in Bcl-xL/Bax ratio and the enhancement of the active caspase-3 and Hsp60 expressions from day 7 onwards. iNOS and HIF-1α increased concomitant with the renal apoptosis and the tubule interstitial injury. Taking the previous information into account, data indicate that the over expression of renal HIF-1α, iNOS and Hsp60 are concurrent with the apoptotic events triggered by ADR. These results contribute to additional knowledge of the molecular complex events involved in the context of ADR-induced nephropathy progression.Fil: Stoyanoff, Tania Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Todaro, Juan Santiago. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Aguirre, María Victoria. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Brandan, Nora Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; Argentin

Amelioration of lipopolysaccharide-induced acute kidney injury by erythropoietin: involvement of mitochondria-regulated apoptosis

Sepsis remains the most important cause of acute kidney injury (AKI) in critically ill patients and is an independent predictor of poor outcome. The administration of lipopolysaccharide (LPS) to animals reproduces most of the clinical features of sepsis, including AKI, a condition associated with renal cellular dysfunction and apoptosis. Erythropoietin (EPO) is a well known cytoprotective multifunctional hormone, which exerts anti-inflammatory, anti-oxidant, anti-apoptotic and angiogenic effects in several tissues. The aim of this study was to evaluate the underlying mechanisms of EPO renoprotection through the expression of the EPO receptor (EPO-R) and the modulation of the intrinsic apoptotic pathway in LPS-induced AKI. Male inbred Balb/c mice were divided in four experimental groups: Control, LPS (8 mg/kg i.p.), EPO (3000 IU sc) and LPS+EPO. Assessment of renal function, histological examination, TUNEL in situ assay, immunohistochemistry and Western blottings of caspase-3, Bax, Bcl-xL, EPO-R and Cytochrome c were performed at 24h post treatment. LPS+EPO treatment significantly improved renal function and ameliorated histopathological injury when compared to the LPS treated group. Results showed that EPO treatment attenuates renal tubular apoptosis through: (a) the overexpression of EPO-R in tubular interstitial cells, (b) the reduction of Bax/Bcl-xL ratio, (c) the inhibition Cytochrome c release into the cytosol and (d) the decrease of the active caspase-3 expression. This study suggests that EPO exerts renoprotection on an experimental model of LPS-induced AKI. EPO induced renoprotection involves an anti-apoptotic effect through the expression of EPO-R and the regulation of the mitochondrial apoptotic pathwayFil: Stoyanoff, Tania Romina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Todaro, Juan Santiago. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Aguirre, María Victoria. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; ArgentinaFil: Zimmermann, Maria Carla. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Brandan, Nora Cristina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin