Padronização de ELISA indireto para a detecção de anticorpos anti-Leptospira em soros bovinos / Indirect ELISA standardization for the detection of antibodies anti-Leptospira in bovine serum

A leptospirose bovina está distribuída em todo o mundo, e o sorovar hardjo é o maior causador da enfermidade. O teste de soroaglutinação microscópica (MAT) é recomendado para o diagnóstico laboratorial da leptospirose, mas possui limitações. Diante disso, um ELISA indireto, utilizando o sorovar Hardjo como antígeno, foi comparado ao MAT, em uma avaliação inicial para o diagnóstico individual da leptospirose bovina. Dos 60 soros bovinos analisados, 13 (21,6%; IC95% 13,3-33,6) foram reagentes no MAT. Os titulos variaram de 1:100 a 1:1600 para os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Hardjo e Grippotyphosa. No ELISA, seis (10%; IC95% 4,6-20,1) soros foram considerados reagentes. De acordo com a análise estatística realizada foi possível detectar uma alta especificidade no teste (97,87%), mas uma sensibilidade baixa (38,46%). Assim, o ELISA indireto descrito é promissor, mas apresenta limitações quanto à sensibilidade. Futuras avaliações para aumentar o espectro de detecção de anticorpos anti-Leptospira em soros bovinos serão realizadas. 

Padronização de Dot-ELISA para detecção de anticorpos anti-Leptospira em soro bovino / Dot-ELISA standardization for the detection of antibodies anti-Leptospira in bovine serum

A leptospirose é reconhecida como uma importante causa de abortos em bovinos no mundo. Bovinos assintomáticos podem eliminar leptospiras através da urina por longos períodos. O teste de soroaglutinação microscópica (MAT) é recomendado como a principal ferramenta de diagnóstico no rebanho, mas não é adequado para a detecção de portadores. Diante disso, um Dot-ELISA foi comparado ao MAT, em uma avaliação inicial para o diagnóstico individual e rápido da leptospirose bovina. Trinta e quatro soros bovinos, sendo 17 reagentes e 17 não reagentes no MAT, foram usados. Os títulos de anticorpos variaram de 100 a 1600 para os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Hardjo e Grippotyphosa. De acordo com os resultados obtidos neste estudo, o Dot-ELISA foi capaz de detectar anticorpos anti-Leptospira em 16 (94%) soros bovinos reagentes no MAT. Embora os resultados sejam promissores, ensaios adicionais são necessários a fim de padronizar a técnica para uso em larga escala, visando a triagem rápida de casos de leptospirose em bovinos a campo. 

Anticorpos anti-Leptospira em fêmeas bovinas com problemas reprodutivos / Anti-Leptospira antibodies in bovine females with reproductive problems

A leptospirose animal é endêmica no mundo, principalmente em países de clima tropical e subtropical. Nos bovinos ela é uma importante doença infecciosa, a qual pode causar problemas reprodutivos, além da queda de produção de carne e leite. O presente trabalho teve como objetivo detectar anticorpos anti-Leptospira em soros de fêmeas bovinas com problemas reprodutivos, provenientes de uma propriedade rural do RS, sem histórico de vacinação contra a leptospirose. Neste estudo, 71 amostras de soro bovino, provenientes de fêmeas da raça Braford, foram avaliadas no teste de soroaglutinação microscópica (MAT). O MAT foi realizado utilizando-se um painel contendo 12 sorovares patogênicos e um saprófita. Das 71 amostras analisadas, 48 (67,6%) foram reagentes para pelo menos um sorovar no teste, com os títulos de anticorpos variando de 100 a 400. Os sorovares mais reagentes foram Canicola (26,5%), Pomona (20,2%), Hardjo (12,6%), Copenhageni (10,2%) e Icterohaemorrhagie (8,8%). Embora o resultado do diagnóstico laboratorial tenha sido relevante, não foi possível afirmar que a leptospirose causou a queda nos índices de produtividade da propriedade, devido principalmente pela impossibilidade de uma investigação in loco, visando obter informações epidemiológicas e clínicas.  

Leptospirose em uma égua com uveíte recorrente/Leptospirosis in a mare with recurrent uveitis

A uveíte recorrente equina (ERU) é uma importante causa de cegueira em equinos, podendo afetar um ou ambos os olhos. A infecção com leptospiras patogênicas é considerada a causa mais comum de ERU em todo o mundo. Este relato descreve um caso de leptospirose em uma égua com ERU, baseado nas manifestações clínicas, no diagnóstico laboratorial e na investigação epidemiológica

Avaliação da formação de biofilme por cepas de Salmonella spp. Isoladas de linguiça frescal / Evaluation of the biofilm formation by strains of Salmonella spp. Isolated from fresh sausage

Biofilmes são ecossistemas complexos. Eles consistem em um ponto de contaminação constante, causando grandes problemas para as indústrias alimentícias. As salmonelas são consideradas como um dos principais agentes patogênicos de produtos alimentares. Produtos cárneos em geral, são comumente implicados com a transmissão desse patógeno aos suscetíveis. Devido a essa importância, este estudo objetivou avaliar a formação de biofilme por cepas de Salmonella spp. nas temperaturas de 25°C e 37°C. Foram avaliadas 9 cepas, as quais foram isoladas, previamente, de linguiça frescal oriundas de diferentes marcas adquiridas no comércio da região de Pelotas-RS. A quantificação foi realizada utilizando um espectofotômetro de placas de microtitulação. Todas as cepas quando testadas a 25°C mostraram-se incapazes de formar biofilmes. Por outro lado, quando testadas a 37 °C, 33,33% (n=3) foram capazes de formar biofilme. Bactérias formadoras de biofilme são um ponto de contaminação constante e um potencial problema para as indústrias alimentícias e para a saúde pública, por isso os procedimentos de limpeza nas superfícies de equipamentos e utensílios devem ser rigorosos a fim de diminuir o risco de transmissão do agente aos alimentos

Potencial antigênico de proteínas recombinantes de Leptospira Interrogans / Antigenic potential of recombinant proteins from Leptospira Interrogans

A leptospirose é uma zoonose generalizada no mundo. Atualmente, as vacinas comerciais disponíveis não oferecem proteção heteróloga contra todos os sorovares leptospirais. Assim, é importante identificar alvos conservados e capazes de induzir imunidade protetora de amplo espectro. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a antigenicidade de proteínas recombinantes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni, a fim de selecionar candidatos para o desenvolvimento de uma vacina recombinante contra a leptospirose. Após análise in silico, cinco lipoproteínas foram selecionadas (LIC10463, LIC10498, LIC10666, LIC11889 e LIC12666), clonadas e expressas em Escherichia coli e purificadas por cromatografia de afinidade. As proteínas recombinantes rLIC10463, rLIC10498, rLIC10666 e rLIC11889 obtidas demonstraram potencial antigênico e, portanto, podem ser utilizadas em ensaios de imunogenicidade e imunoproteção em modelo animal.

Avaliação da função renal e hepática em hamsters infectados experimentalmente com Leptospira interrogans / Evaluation of renal and hepatic function in hamsters experimentally infected with Leptospira interrogans

Hamsters (Mesocricetus auratus) são amplamente usados como modelo animal experimental para o estudo da leptospirose. Apesar disso, informações sobre os parâmetros bioquímicos da função renal e hepática em animais menores de 6 semanas, assim como as alterações sofridas nesses níveis durante a infecção por leptospiras patogênicas, são escassas na literatura. Neste trabalho avaliamos os níveis de bilirrubina total (BT), alanina aminotransferase (ALT) e creatinina (CR) antes e depois da infecção por Leptospira interrogans. Em nosso estudo preliminar, descrevemos valores normais para parâmetros não encontrados em bibliografia. Porém, não foi encontrada nenhuma diferença estatística significativa entre os valores de BT, ALT e CR apresentados pelos grupos após a infecção. 

Campylobacter coli in Swine Slaughtering Flowchart and Research of cdt Genes

Background: Campylobacter spp. are among the microorganisms most commonly associated with foodborne disease. Campylobacter spp. isolation from pigs during the slaughter and final products have been reported in several countries, including Brazil. However, very little is known about the sources of contamination in the slaughtering flowchart and how these microorganisms are spread in processing plants. Considering the possibility of the pigs carry Campylobacter spp. since the farm or its products are contaminated in the slaughterhouse, this study had as aim to track Campylobacter spp. in pig slaughtering flowchart to understand the behavior of these pathogens in the production line.Materials, Methods & Results: Forty animals of 10 lots, four from each lot, were followed during slaughter. Stool samples were collected from the floor of each enclosure where the pigs were housed on the farm and immediately after stunning on slaughterhouse. Samples from carcass surface were collected after removal of the animals from scrap machine, after evisceration and before the refrigeration chamber. It was also collected surface samples from jowls and samples from the scalding tank water before and after the passage of animals. The swabs containing samples were plated onto Columbia agar supplemented with activated charcoal, oxygen reduction solution and antibiotics supplement, and incubated at 42°C for 48 h under microaerobic conditions. The colonies which presented with a shiny and moist appearance were analyzed by Gram staining for identification of Campylobacter by morphology, and then tested for catalase and oxidase. The Campylobacter isolates were identified for species C. jejuni or C. coli by PCR. Bands profiles were determined by rep-PCR and used to compare the strains. Campylobacter was isolated from 19 (9.5%) of the 200 pig samples analyzed, seven (36.8%) of the rectum, seven (36.8%) after evisceration and five (26.3%) before the refrigeration chamber. Campylobacter was not isolated from jowls and from scalding tank water. All isolates were C. coliand cdtnegative.Persistence of strains originating from the farm and cross contaminations during the slaughtering flowchart was identified by the analysis of the bands profiles obtained by rep-PCR.Discussion: C. coli was the species of Campylobacter present in the swine intestinal tract and in the swine slaughterhouse. The animals, once contaminated, can carry the microorganism during the stages of the slaughtering flowchart. The farm where the animals came from is an important source of contamination during processing, however cross contamination also plays a relevant role. The evisceration was considered the most critical stage, due to the greater number of isolates obtained after this procedure, what emphasize the importance of the hygienic-sanitary management in this stage. Campylobacter spp. can survive, despite not being able to multiply, in foods at refrigeration temperatures (-1 to 5°C) for one to three weeks. Therefore, the high percentage of isolates obtained from the carcass before the refrigeration chamber may represent a problem, since the contamination of the carcasses that enter in this sector can be maintained until the food reaches the consumer. There was no similarity between strains isolated from different lots, indicating that there were no persistence of strains both in the farm and in the slaughterhouse

Isolamento e perfil de suscetibilidade a antimicrobianos de isolados de Salmonella obtidos durante o abate de ruminantes/Isolation and antimicrobial susceptibility pattern of Salmonella isolates recovered from ruminant slaughter

O Brasil possui um dos maiores rebanhos de ruminantes do mundo e destaca-se como um grande exportador de carne. Entretanto, para que a exportação brasileira de carne e seus derivados a outros mercados seja consolidada é de fundamental importância que o produto tenha segurança alimentar. Entre os micro-organismos usados como indicadores de segurança alimentar, Salmonella se destaca por causar doenças em animais e humanos. Assim, este estudo foi realizado com o objetivo de isolar Salmonella em três diferentes pontos do abate de ruminantes e avaliar sua suscetibilidade a oito antimicrobianos usados comumente para seu controle. Cento e cinquenta amostras foram coletadas de três pontos diferentes do abate: couro do animal após a sangria (P1), carcaça após a evisceração (P2) e conteúdo cecal (P3). Os isolados foram testados quanto à suscetibilidade antimicrobiana in vitro usando trimetoprim, amoxicilina, ceftriaxona, ampicilina, tetraciclina, gentamicina, norfloxacina e estreptomicina. Como resultados, duas (1,33%) cepas foram isoladas de bovinos e classificadas como Salmonella. Os dois isolados foram sensíveis à ampicilina, gentamicina e norfloxacina. De acordo com os resultados, conclui-se que existe o risco da bactéria ser incorporada na linha de abate pelos ruminantes e gerar a contaminação das carcaças. Assim, os programas de autocontrole devem ser revisados

Isolamento de Leptospira em feto equino abortado/Isolation of Leptospira in an aborted equine fetus

Estudos sorológicos da leptospirose em equinos demonstram que a doença ocorre em todo o mundo. A frequência de aglutininas anti-Leptospira varia entre os países e existe uma grande susceptibilidade dos animais em relação aos sorovares predominantes. A maioria das infecções permanece assintomática, mas o aborto e a morte fetal são sequelas comuns da leptospirose equina. Este relato descreve um aborto em uma égua no município de Pelotas (RS), onde foi possível isolar leptospiras do feto, caracterizar a virulência do isolado em modelo animal e realizar uma caracterização genotípica preliminar da cepa isolada