Utilização de PCR em tempo real para desenvolvimento de método qualitativo e quantitativo do vírus da hepatite B, em soro de pacientes crônicos no estado de Rondônia

Dissertação de mestrado apresentada ao curso de Biologia Experimental do Núcleo de Saúde da Universidade Federal de Rondônia para obtenção do título de Mestre.Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), dois bilhões de pessoas já foram infectadas pelo vírus da hepatite B (HBV) e destes 400 milhões se tornaram portadores crônicos. A quantificação deste virus é amplamente utilizada para o monitoramento do tratamento antiviral da infecção. Um sistema de quantificação da carga viral do HBV foi desenvolvido, através da metodologia de PCR em tempo real, utilizando o sistema TaqMan. Como alvo um produto de 109 pb correspondente a região pré-core foi clonado e diluido seriadamente para construção da curva padrão. O método foi validado pela comparação dos resultados de quantificação da PCR em tempo real de sete amostras, com os resultados do Centro de Genomas, onde houve uma correlação significativa (r = 0,95) entre os dois métodos. O ensaio mostrou ampla faixa dinâmica linear entre 2x10² e 2×10⁷ cópias/ml. Amostras negativas para HBV foram utilizadas como controle nas reações, indicando a alta especificidade do ensaio. Os coeficientes de variação dos ensaios intra e interexperimental foram de 1% para ambas, os quais indicaram reprodutibilidade notável. O ensaio padronizado é aplicado a todos os genótipos, porém um número maior de amostras devem ser comparadas para melhor validação do método. Esse ensaio pode ser aplicado no monitoramento de pacientes infectados pelo HBV na rotina de diagnostico dos laboratórios e na prática clínica. Além disso, o estudo possibilitou a identificação da distribuição dos genótipos do HBV em 35 amostras de pacientes HBsAg-positivos. Um fragmento de 1306bp que corresponde parcialmente aos genes de superfície e da polimerase foi amplificado purificado e seqüenciado. As seqüências foram alinhadas com seqüências referência obtidas no GenBank usando software Clustal X e, em seguida, editadas com software SE-AL. As análises filogenéticas foram conduzidas pela Cadeia de Markov Monte Carlo (MCMC) usando BEASTv.1.5.3. A distribuição dos subgenótipos foi A1 (37,1%), D3 (22,8%), F2a(20,0%), D4 (17,1%) e D2 (2,8%). Esses resultados representam a primeira caracterização genotípica do HBV no estado de Rondônia e são consistentes com outros estudos no Brasil, mostrando a presença de vários genótipos, refletindo a origem mista da população, envolvendo descendentes de nativos americanos, europeus e africanos

Identificação de hepatite B oculta em indivíduos com anti-HBc isolado utilizando um método molecular ultrassensível

Tese apresentada ao Programa de Pós-graduação em Biologia Experimental – PGBIOEXP – do Núcleo de Saúde da Universidade Federal de Rondônia para obtenção do título de doutora. Orientador: Dr. Juan Miguel Villalobos Salcedo.Atualmente existe um risco significativo de transmissão do vírus da hepatite B (HBV) durante a transfusão de sangue e transplante de órgãos, em áreas endêmicas para essa infecção. Isso ocorre em duas situações em especial, a primeira pode acontecer na fase aguda, onde há um período de janela imunológica, quando o marcador sorológico HBsAg pode ser indetectável no soro. A outra situação, durante a fase crônica, na chamada infecção oculta, definida como a presença de DNA-HBV em indivíduos com teste para HBsAg negativo e geralmente com carga viral muito baixa. A hepatite B oculta é comum em indivíduos que apresentam apenas, o marcador sorológico anti-HBc total reagente, perfil definido como anti-HBc total isolado. A redução do risco de transmissão nessas situações depende da aplicação de testes mais sensíveis. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi identificar a hepatite B oculta em amostras de indivíduos com anti-HBc total isolado, utilizando um método de PCR em tempo real in house ultrassensível (qHBV), servindo como alternativa para teste de ácido nucleico (NAT). Para isso, os valores ensaio foram calibrados com o 1º padrão internacional estabelecido pela OMS (OptiQuant® DNA-HBV Quantificação Painel, AcroMetrix Europe B.V.). Além disso, foram realizados testes para avaliar a sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade. O limite de detecção para o qHBV calibrados com o OptiQuant foi de 2000/mL num volume total de reação de 30 μl. Foi observada uma forte correlação entre os dois métodos (r2 = 0,9965 e p <0,0001). A linha de regressão dá-nos a seguinte equação: Log 10 (UI / mL) = 0.9038Log 10 (cópias / mL) - 1,0643, sugerindo que 1 UI / mL = 15 cópias / mL. O método foi considerado sensível para identificação de hepatite B oculta, onde de 150 indivíduos com anti-HBc isolado, 42 foram positivas para DNA-HBV. Portanto, podemos afirmar que o qHBV pode detectar carga viral em indivíduos com hepatite B em qualquer estágio da doença, com alta capacidade para o rastreio de NAT para hepatite B em doadores de sangue e de órgãos. A sensibilidade deste método poderia proporcionar um avanço para a automação em bancos de sangue, centros de hemodiálise e em transplantes de órgãos, aumentando a segurança dos pacientes receptores

Dinâmica espacial e temporal das doenças tropicais negligenciadas no Arquipélago do Marajó, Amazônia-PA

Background and objective: the self-styled population of Marajoara is vulnerable due to the neglect of basic services governed by the constitution, such as basic sanitation, health and education. Therefore, the search and mapping of epidemiological data are necessary in order to have a real dimension of how certain diseases behave in the region. Therefore, this study aimed to analyze the space-time distribution of neglected tropical diseases and their relationship with socio-environmental indicators in the Marajó Archipelago, Pará, Amazon. Methods: this is a descriptive and ecological study, with a time series, with a quantitative approach, which assessed the incidence rate of neglected tropical diseases in the 16 municipalities that make up Marajó from 2007 to 2016. Analyzes of socioeconomic and population data were carried out, extracted from the Federation of the Industries of the State of Rio de Janeiro (FIRJAN System) and the Brazilian Institute of Geography and Statistics. Results: according to the survey, American cutaneous leishmaniasis, dengue and tuberculosis were the most reported diseases in total. All municipalities had at least one disease in the period. The spatial distribution of the numbers of cases of tropical diseases in all the municipalities that make up the Archipelago between 2007 and 2016 was carried out. Conclusion: the anthropization of the environment has favored the proliferation of vector agents and, consequently, the incidence of diseases related to inadequate basic sanitation, whose configuration is the result of a disorganized urbanization process and historically exclusive development, with a lack of investment, making this damage even more dramatic for the population.Justificación y objetivo: la población autodenominada marajoara es vulnerable debido a la desatención de los servicios básicos regulados en la constitución, como saneamiento básico, salud y educación. Por lo tanto, la búsqueda y el mapeo de datos epidemiológicos son necesarios para tener una dimensión real de cómo se comportan ciertas enfermedades en la región. Por lo tanto, el estudio tuvo como objetivo analizar la distribución espacio-temporal de las enfermedades tropicales desatendidas y su relación con los indicadores socioambientales en el Archipiélago de Marajó, en el estado de Pará, Amazonas. Métodos: se trata de un estudio descriptivo y ecológico, con serie temporal, con enfoque cuantitativo, que evaluó la tasa de incidencia de las enfermedades tropicales desatendidas en los 16 municipios que componen el Marajó de 2007 a 2016. Se realizaron análisis de datos socioeconómicos y poblacionales extraídos de la Federación de Industrias del Estado de Rio de Janeiro (Sistema FIRJAN) y del Instituto Brasileño de Geografía y Estadística. Resultados: según la encuesta, la leishmaniasis cutánea americana, el dengue y la tuberculosis fueron las enfermedades más notificadas en total. Todos los municipios presentaron al menos una enfermedad en el período. La distribución espacial de las cifras de casos de enfermedades tropicales en todos los municipios que conforman el Archipiélago se realizó entre 2007 y 2016. Conclusión: la antropización del medio ambiente viene favoreciendo la proliferación de agentes vectores y, consecuentemente, la incidencia de enfermedades relacionadas con saneamiento básico inadecuado, cuya configuración es fruto de un proceso de urbanización desordenado y desarrollo históricamente excluyente, con ausencia de inversiones, lo que hace aún más dramática esta pérdida para la población.  Justificativa e objetivo: a população autodenominada de marajoara encontra-se em vulnerabilidade devido às negligências de serviços básicos regidos na constituição, como saneamento básico, saúde e educação. Logo, a busca e o mapeamento de dados epidemiológicos são necessários para que se tenha uma dimensão real de como se comportam determinados agravos na região. Diante disso, o estudo objetivou analisar a distribuição espaço-temporal das doenças tropicais negligenciadas e sua relação com indicadores socioambientais no Arquipélago do Marajó, Pará, Amazônia. Métodos: este estudo é do tipo descritivo e ecológico, de série temporal, com abordagem quantitativa, que avaliou a taxa de incidência das doenças tropicais negligenciadas nos 16 municípios que compõem o Marajó no período de 2007 a 2016. Foram realizadas análises de dados socioeconômicos e populacionais extraídos da Federação das Indústrias do Estado do Rio de Janeiro (Sistema FIRJAN) e do Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística. Resultados: de acordo com o levantamento, a leishmaniose tegumentar americana, a dengue e a tuberculose foram os agravos de maior notificação no total. Todos os municípios apresentaram, ao menos, uma doença no período. Realizou-se a distribuição espacial dos números de casos de doenças tropicais em todos os municípios que compõem o Arquipélago entre 2007 e 2016. Conclusão: a antropização do ambiente vem favorecendo a proliferação de agentes vetoriais e, consequentemente, a incidência de doenças relacionadas ao saneamento básico inadequado, cuja configuração é fruto de um processo de urbanização desordenado e desenvolvimento historicamente excludente, com ausência de investimentos, tornando esse prejuízo ainda mais dramático para a população

Análise da estrutura fatorial do Audit em adolescentes entre 18 e 19 anos

OBJETIVO: Determinar a estrutura fatorial do instrumento Alcohol Use Disorders Identification Test (Audit) em uma amostra representativa de adolescentes de 18 a 19 anos. MÉTODOS: Estudo transversal realizado com adolescentes nascidos em São Luís (MA). A consistência interna do instrumento foi determinada pelo coeficiente alfa de Cronbach e a validade do construto foi avaliada por meio da Análise Fatorial Confirmatória (AFC). O índice de Kaiser-Meyer-Olkin (KMO) foi calculado para analisar a adequação da amostra. A qualidade de ajuste do modelo fatorial foi analisada de acordo com os índices dos testes qui-quadrado de ajustamento, comparative fit index (CFI), Tucker-Lewis index (TLI) e root mean square error of approximation (RMSEA). RESULTADOS: A amostra do estudo foi composta por 1.002 adolescentes entre 18 e 19 anos, sendo 56,8% meninas, 68,5% com 18 anos, 63,3% pardos ou mulatos, 48,6% pertencentes à classe C, 15,4% não trabalhavam e não estudavam e 52,1% tinham pais separados. A amostra foi adequada para a análise fatorial confirmatória (KMO = 0,79) e o coeficiente do alfa de Cronbach foi de 0,70, demostrando consistência interna satisfatória com cargas fatoriais acima de 0,5, com exceção do item 9 “Ficou ferido ou ficou alguém ferido por ter bebido”. A análise fatorial confirmatória revelou a validade do modelo de três fatores para a amostra em estudo com base nos índices de ajustes psicométricos. CONCLUSÃO: A estrutura fatorial do Audit com três fatores foi confirmada para a população de adolescentes entre 18 e 19 anos residentes em São Luís, ratificando os domínios conceituais originais propostos pela Organização Mundial da Saúde. O Audit apresentou-se como um instrumento confiável para a identificação do consumo de álcool.OBJECTIVE: To determine the factor structure of the instrument Alcohol Use Disorders Identification Test (AUDIT) in a representative sample of adolescents aged 18 to 19 years. METHODS: Cross-sectional study performed with adolescents born in São Luís (MA). The internal consistency of the instrument was determined by the Cronbach's alpha coefficient, and the validity of the construct was assessed by Confirmatory Factor Analysis (CFA). The Kaiser-Meyer-Olkin (KMO) was estimated to analyze the adequacy of the sample. The fit quality of the factor model was analyzed according to the indexes of the Chi-square adjustment test, comparative fit index (CFI), Tucker-Lewis index (TLI) and root mean square error of approximation (RMSEA). RESULTS: The sample of the study was composed of 1,002 adolescents aged from 18 to 19 years, being 56.8% girls, 68.5% with 18 years, 63.3% brown, 48.6% belonging to class C, 15.4% did not work or did not study, and 52.1% had divorced parents. The sample was suitable for confirmatory factor analysis (KMO = 0.79); Cronbach's alpha coefficient was 0.70, demonstrating satisfactory internal consistency with factor loads above 0.5, except for item 9, “was injured or someone else was injured due to drinking.” Confirmatory factor analysis revealed the validity of the three-factor model for the studied sample based on the indices of psychometric adjustments. CONCLUSION: The three-factor AUDIT factor structure was confirmed for the population of adolescents between 18 and 19 years old living in São Luís, ratifying the original conceptual domains proposed by the World Health Organization. AUDIT proved to be a reliable instrument to identify the consumption of alcohol

Uso do plasma rico em plaquetas em úlceras crônicas: Protocolo clinico / Use of platelet rich plasma in chronic ulcers: Clinical protocol

Introdução: O Plasma Rico em Plaquetas, consiste em um concentrado autólogo de plaquetas em um pequeno volume de plasma obtido através da centrifugação do sangue, pode ser uma alternativa importante nos casos em que tratamentos convencionais de úlceras crônicas não foram bem-sucedidos. Objetivo geral: Discorrer sobre o uso do Plasma Rico em Plaquetas (PRP) no tratamento de úlceras crônicas, assim como os métodos de obtenção do gel de PRP. Metodologia: Revisao integrativa nas seguintes bases de dados: PubMed/Medline, Embase, Scopus e Lilacs, a busca por estudos ocorreu em setembro de 2020. Os tesauros utilizados foram: Chronic ulcer; platelet-rich plasma; healing combinados entre si utilizando os operadores booleanos AND. Resultados: A maioria dos estudos incluiram úlceras venosas e/ou diabéticas.A frequência da aplicação do plasma rico em plaquetas nas úlceras variou de diária a  quinzenal, e a utilização do PRP sob forma tópica em gel no leito das úlceras foi o método mais citado nos estudos. Foram coletados entre 10-60mL de sangue dos pacientes, na maioria dos estudos por 10 minutos. E para formação do gel do PRP foram adicionados gluconato de cálcio, trombina ou Cloreto de Cálcio. O tamanho das úlceras acompanhadas pelos estudos foi de no mínimo de 3 a máximo de 100 cm² Conclusão: A obtenção do gel de PRP pode ser feita de forma simples e econômica, pode ser realizada em locais sem muitos recursos tecnológicos, mas que disponham de uma centrífuga e materiais usualmente presentes em ambientes hospitalares/ambulatoriais como seringas, agulhas e tubos de coleta de sangue. Estudos mais robustos e com desenho metodológico mais estruturado são necessários com a finalidade de melhor avaliar a efetividade do PRP no processo cicatricial de úlceras crônicas

Cistatina C e marcadores inflamatórios em receptores de transplante renal

OBJETIVO: O transplante renal é a melhor opção para pacientes renais crônicos em estágio terminal. Este estudo avaliou o perfil da cistatina C (CysC), interleucina 2 (IL-2), IL-6, e fator de necrose tumoral-α (TNF-α) como marcadores inflamatórios em 23 transplantados renais de doador vivo. MÉTODOS: Estudo descritivo, analítico e prospectivo conduzido entre 1o de janeiro (2007) e 30 de junho (2008) em 23 transplantados renais de doador vivo. Os biomarcadores foram avaliados no pré, com 30 e 180 dias do pós-transplante. RESULTADOS: A média de idade foi de 34,3 anos (± 11,7), 52% do sexo feminino e 61% de negros. Foi encontrada diferença significativa na CysC e creatinina antes do transplante e 30 dias após o procedimento (p < 0,0001) e antes do transplante e 180 dias após o procedimento (p < 0,0001). Houve uma diferença significativa na IL-2, entre 30 and 180 dias do pós-transplante (p = 0,0418) e no TNF-α antes do transplante e 30 dias após o procedimento (p = 0,0001). Foi observada uma correlação negativa entre CysC e TNF-α no pré-transplante, e entre CysC e IL-6 com 180 dias do pós-transplante. Em pacientes biopsiados houve uma diferença significante na creatinina e na CysC com 30 e 180 dias do pós-transplante. CONCLUSÃO: Em seguimento a curto prazo, não houve correlação relevante entre os níveis de CysC, IL-2, IL-6 e TNF-α em transplantados renais. Em pacientes biopsiados e não biopsiados, os níveis de CysC foram muito similares aos da creatinina, ao contrário de outros marcadores inflamatórios. Demais estudos são importantes para avaliar o perfil destes marcadores a longo prazo.OBJECTIVE: Kidney transplantation is the best option for patients with end-stage renal disease. This study evaluated the profile of cystatin C (CysC), interleukin 2 (IL-2), IL-6, and tumor necrosis factor-α (TNF-α) as inflammatory markers in 23 living donor kidney transplant recipients. METHODS: A descriptive, analytical and prospective study was conducted between January 1st, 2007 and June 30th, 2008 on 23 living donor kidney transplant recipients. The biomarkers were evaluated before and 30 and 180 days after transplantation. RESULTS: The mean age of the patients was 34.3 years (± 11.7), females (52%) and non-whites (61%). Significant difference was found in cystatin C and creatinine before and 30 days after transplantation (p < 0.0001) and before and 180 days after transplantation (p < 0.0001). There was a significant difference in IL-2 between 30 and 180 days post-transplant (p = 0.0418) and in TNF-α between pre-transplant and 30 days post-transplant (p = 0.0001). A negative correlation was observed between cystatin C and TNF-α at pre-transplant and between cystatin C and IL-6 at 180 days post-transplant. Comparison of biopsied and non-biopsied patients showed a significant difference in creatinine and cystatin C at 30 and 180 days post-transplant in biopsied patients. CONCLUSION: Our results showed no significant correlations between CysC, IL-2, IL-6 and TNF-α levels in kidney transplant recipients at short-term follow-up. Moreover, CysC levels were very similar to creatinine levels in contrast to other inflammatory markers studied in biopsied and non-biopsied patients. Further studies are important to evaluate the long-term profile of these markers