Detection of protease inhibitors in seeds of Punica granatum

The use of plants as a way to prevent and treat disease comes from ancient times. With the increasing return on consumption of plants for medicinal purposes, the plant-based medicines have gained greater appreciation. Protease inhibitors are compounds that can decrease activity of an enzyme. They are found in plants, especially in Fabaceae, Poaceae, and Solanaceae families, and show satisfactory use to treat diseases due to their regulatory activities and selective proteolytic degradation of target substrates. This study aimed to obtain protease inhibitors in the seeds of Punica granatum, due its use in traditional medicine. The alcohol-acid solution was used to extract and isolate the protease inhibitors in P. granatum seeds and Glycine max grains. The extract of P. granatum seeds showed similar concentration of protease inhibitors when compared to G. max. A 14 kDa band was detected by electrophoresis on polyacrylamide gel, which was characterized by high-performance liquid chromatography as protease inhibitors. The extract of P. granatum seeds showed a potent trypsin inhibitor activity (EC50 18.2 ng mL-1). This study showed for the first time the extraction, purification, and identification of protease inhibitors in Punica granatum seeds.

Estudos da atividade antioxidante de novas tinturas mãe homeopáticas de plantas medicinais da região de Governador Valadares-MG: Studies of the antioxidant activity of new homeopathic mother tinctures of medicinal plants from the region of Governador Valadares-MG

As tinturas mães (TM’s) são extratos etanólicos obtidos a partir de plantas, sendo um tipo de formulação muito comum a ser utilizado na produção de medicamentos homeopáticos. Seu efeito terapêutico está parcialmente atribuído à presença de fitoquímicos e associados, muitas vezes, ao saber popular. Neste trabalho foram estudadas treze tinturas mães obtidas a partir de diferentes plantas coletadas na região de Governador Valadares-MG. As TM’s foram preparadas pelo processo de maceração de material vegetal fresco das plantas em solução hidroalcoólica. A viabilidade celular e a produção de óxido nítrico das TM’s foram obtidas pelo método MTT nas linhagens de macrófagos murinos RAW 264.7. Foram testados também teor de compostos fenólicos totais (TPC) e a atividade antioxidante (AA) usando radicais livres. De modo geral, as TM’s não apresentaram citotoxicidade à cultura de células RAW 264.7. Não houve redução significativa da viabilidade celular da linhagem de macrófagos testadas pelas TM’s, o que pode demonstrar baixa toxicidade celular. Todos os extratos das TM’s inibiram a produção de NO em determinadas concentrações testadas, porém os extratos das TMs 6, 7, 12, e 13 foram os que tiveram os melhores resultados para este teste. As TM’s que tiveram maior teor de compostos fenólicos foram: TM’s 5, 6 e 12. Já as TM’s,  que apresentaram maior atividade antioxidante foram:7, 3; 6 12. Podemos destacar neste estudo a importância da presença de compostos fenólicos com potencial atividade antioxidante observado nas TM’s. Assim, pode-se concluir que algumas TM’s estudadas, além da atividade antioxidante também apresentaram capacidade de inibição da produção de NO, sendo, portanto, amostras promissoras para estudos posteriores

Tumor necrosis factor α, and agonist and antagonists of cannabinoid receptor type 1 and type 2 alter the immunophenotype of stem cells from human exfoliated deciduous teeth

ABSTRACT Objective To verify the involvement of the endocannabinoid system in the immunomodulatory profile of stem cells from human exfoliated deciduous teeth, in the presence or absence of TNF-α, and agonist and antagonists of CB1 and CB2. Methods Stem cells from human exfoliated deciduous teeth were cultured in the presence or absence of an agonist, anandamide, and two antagonists, AM251 and SR144528, of CB1 and CB2 receptors, with or without TNF-α stimulation. For analysis of immunomodulation, surface molecules linked to immunomodulation, namely human leukocyte antigen-DR isotype (HLA-DR), and programmed death ligands 1 (PD-L1) and 2 (PD-L2) were measured using flow cytometry. Results The inhibition of endocannabinoid receptors together with the proinflammatory effect of TNF-α resulted in increased HLA-DR expression in stem cells from human exfoliated deciduous teeth, as well as, in these cells acquiring an anti-inflammatory profile by enhancing the expression of PD-L1 and PD-L2. Conclusion Stem cells from human exfoliated deciduous teeth respond to the endocannabinoid system and TNF-α by altering key immune response molecules

Lower production of IL-17A and increased susceptibility to Mycobacterium bovis in mice coinfected with Strongyloides venezuelensis

The presence of intestinal helminths can down-regulate the immune response required to control mycobacterial infection. BALB/c mice infected with Mycobacterium bovis following an infection with the intestinal helminth Strongyloides venezuelensis showed reduced interleukin-17A production by lung cells and increased bacterial burden. Also, small granulomas and a high accumulation of cells expressing the inhibitory molecule CTLA-4 were observed in the lung. These data suggest that intestinal helminth infection could have a detrimental effect on the control of tuberculosis (TB) and render coinfected individuals more susceptible to the development of TB

Avaliação do efeito de derivados lipofílicos da genisteína na ativação de macrófagos in vitro e na modulação da resposta imune no modelo de EAE

Multiple Sclerosis (MS) is a severe and disabling chronic autoimmune inflammatory demyelinating disease of the central nervous system (CNS), that affect around one million people at entire world. Among the therapeutic agents currently approved for the treatment of MS can be cited the interferon beta (IFN-β) and the glatiramer acetate, however, these agents do not promote the cure or full recovery of patients in advanced stages. Several studies showed that hormones, such as estradiol and progesterone, could reduce the severity of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The isoflavones share many structural similarities with endogenous estrogens. Studies with genistein showed the beneficial effects of isoflavones in EAE. However, the chemical structure of genistein has characteristics that limit its clinical application, such as rapid excretion and decreased serum levels. This study aimed evaluate the effect of seven lipophilic derivatives of genistein in the modulation of in vitro response of murine J774A.1 macrophages activated with lipopolysaccharide and IFN-g, and verify the performance of one in vitro selected analogue on modulating in vivo the immune response in EAE. The lipophilic derivatives were evaluated in LPS+IFN-g-activated J774A.1 macrophage cultures to their effects on cytotoxicity and nitric oxide, IL-12 and TNF-α production. The effects of the selected genistein derivative 3 (7-O-genistein-tetradecanoil - TDG) on the development of EAE induced in C57BL/6 mice immunized with MOG35-55 were performed. At 14th day after induction, mice were treated with TDG for seven days. At 21st day the percentage of mononuclear cells isolated from brains expressing CD4+, CD3+, CTLA-4+ and Foxp3+ and producing IL-17+ and IL-10+ were determined by flow cytometry. The concentration of IL-6, IFN-g and IL-10 in brain and spinal cord were determined by ELISA. Histological analysis of brain and spinal cord were performed by hematoxylin and eosin staining. The results showed that the modification of genistein enables the generation of non-cytotoxic compounds with increased IL-12 inhibition, despite of failed TNF-α inhibition. The NO production was inhibited by the monoester (2,3) and monoether (6,7) compounds in a dose-dependent manner. The in vivo data indicated that treatment with TDG improved the clinical signs of EAE which can be correlated with a reduction in the percentage of cells producing IL-17 and the increment of Foxp3+CD4+ cell population at brain. Furthermore, treatment with TDG increased the release of IL-10 and expression of CTLA-4 and reduced the release of IFN-g and IL-6. Altogether, the data suggest an immunomodulatory role of the TDG in EAE and possibly MS.A Esclerose Múltipla (EM) caracteriza-se por ser uma doença inflamatória crônica desmielinizante do Sistema Nervoso Central (SNC), que afeta aproximadamente um milhão de pessoas em todo o mundo. Entre os agentes terapêuticos aprovados atualmente para o tratamento da EM podemos citar o interferon beta (IFN-β) e o acetato de glatirâmer, entretanto, estes agentes não promovem a cura da doença ou a recuperação total dos pacientes que estão em fase avançada. Diversos estudos demonstram a propriedade que os hormônios sexuais, como o estradiol e progesterona possuem em diminuir a gravidade da Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE). Estruturalmente, as isoflavonas compartilham muitas similaridades com os estrógenos endógenos. Estudos realizados com genisteína mostram os efeitos benéficos deste isoflavonóide na EAE. Entretanto, alguns fatores limitam sua aplicação clínica, como por exemplo, sua rápida excreção e declínio dos níveis séricos, sendo que estas características podem estar relacionadas à sua estrutura química. Dentro deste contexto, este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de sete derivados lipofílicos da genisteína na modulação da resposta in vitro de macrófagos murinos J774.A1 ativados com lipopolissacarídeo e IFN-g, e verificar a atuação de um análogo selecionado na etapa in vitro na modulação da resposta imune in vivo no modelo de EAE. Na etapa in vitro foi avaliada a citotoxicidade dos compostos, no sobrenadante da cultura foram dosados óxido nítrico, IL-12 e TNF-α. Na etapa in vivo foi investigado o uso do derivado da genisteína 3 (7-Otetradecanoil-genisteína – TDG) na evolução da EAE induzida em camundongos C57Bl/6 através da aplicação do MOG35–55. No 14° dia após a indução com o MOG, os camundongos foram tratados com TDG por sete dias. No 21° dia após a indução, as porcentagens de células mononucleares isoladas de cérebro expressando marcadores de superfície (CD4+, CD3+ e CTLA-4) e produzindo citocinas IL- 17+CD4+, IL-10+CD4+ ou fator de transcrição Foxp3+CD4+ foram determinadas por citometria de fluxo. A concentração de IL-6, IFN-γ e IL-10 em macerado de cérebro e medula foram determinadas por ELISA. As análises histológicas de cérebro e medulas foram realizadas por coloração de Hematoxilina e Eosina. Os resultados apresentados indicam que a modificação estrutural da genisteína originou derivados não citotóxicos, com elevada capacidade de inibir a concentração de IL-12. Entretanto, estes derivados da genisteína não foram capazes de inibir TNF-α. A produção de NO foi significativamente inibida pelos derivados monoésteres (2,3) e monoéter (6,7) de maneira dose-dependente. Os dados obtidos in vivo indicam que o tratamento com o TDG melhora os sinais clínicos da EAE e isto pode ser correlacionado com uma redução na porcentagem de células produzindo IL-17 e um aumento de células Foxp3+CD4+ no cérebro. Além disso, o tratamento com o TDG aumentou a liberação de IL-10 e a expressão de CTLA-4 além de reduzir a liberação de IFN-γ e IL-6. Desta forma, os dados sugerem um papel imunomodulatório do TDG na EAE e possivelmente na EMCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorCNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerai

Análogo da mitoxantrona melhora a encefalomielite autoimune experimental através do aumento das citocinas IL-17A/IL-10 e inibição da quimiocina CCL5

A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença inflamatória de etiologia autoimune, com resposta imunológica contra proteínas de mielina do cérebro e da medula espinhal. É a doença humana desmielinizante do sistema nervoso central (SNC) mais comum, que atinge 1,4 milhão de pessoas em todo o mundo. Um grande número de citocinas e quimiocinas têm um papel central no estabelecimento e manutenção de doenças autoimunes, atuando em redes de alta complexidade e diferentes tipos de células. A mitoxantrona (MIT) é um medicamento aprovado para o tratamento das várias formas de EM nos Estados Unidos da América e Europa, sendo um agente antineoplásico, cuja eficácia no tratamento da esclerose múltipla é creditado à inibição da proliferação de células T, células B e macrófagos. O tratamento com a MIT, dependendo da dose total acumulada, provoca efeitos colaterais adversos, tais como o desenvolvimento de cardiotoxicidade crônica. Neste estudo, foi investigado os efeitos clínicos e imunológicos de N, N’-didodecanoil-1,4-diaminoantraquinona [DDAAQ], um análogo lipofílico da MIT, no modelo de Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) induzido por MOG. Camundongos C57Bl/6 fêmeas foram imunizados ou não por via subcutânea em ambos os lados da base da cauda com 100 mg do peptídeo MOG35-55. Os camundongos foram pesados e observados diariamente para avaliação dos sinais clínicos da EAE até 21 dias pós-imunização (dpi). Camundongos imunizados receberam 1 mg/kg de peso da mitoxantrona ou análogo DDAAQ por via intraperitoneal diariamente, entre 14 a 21 dpi. Aos 21 dpi os camundongos foram sacrificados, os cérebros removidos e os hemisférios homogeneizados e os sobrenadantes foram coletados para determinação da concentração de IL-10, IL-17A e CCL5. Os camundongos imunizados apresentaram sinais de EAE, tais como fraqueza ou paralisia da cauda e dos membros, bem como perda de peso corporal. As injeções intraperitoneais de DDAAQ foram eficazes no tratamento de camundongos induzidos com EAE (grupo DDAAQ), mostrando diferença acentuada no escore clínico quando comparado aos camundongos imunizados com EAE e não tratados (grupo EAE). O grupo tratado com DDAAQ apresentou um aumento na produção de IL-17A e de IL-10 e uma diminuição na produção da quimiocina CCL5 no CNS. Os resultados sugerem que um dos mecanismos responsáveis pelo efeito clínico deste composto pode estar relacionado à indução de células Th17 reguladoras através de redução da migração celular para o SNC

Different MOG(35-55) concentrations induce distinguishable inflammation through early regulatory response by IL-10 and TGF-beta in mice CNS despite unchanged clinical course

Multiple sclerosis (MS) shows distinct clinical courses. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), a model to study multiple sclerosis, can be induced by different protocols, which show distinct cytokine and antibody production. the factors involved in this heterogeneity remain unclear. the relevance of MUG concentration in triggering a regulatory response in the chronic model of EAE is imprecise. the aim of this study was investigate if 100 or 300 mu g of MOG(35-55) could induce different EAE profiles. Modifications in the concentration of MUG were able to change the patterns of chemokines, cytokines, percentage of cells, inflammatory infiltrate and the development of a regulatory response. However, these changes were unable to modify the intensity of response, which explains the chronic progression of the disease in both concentrations. the results presented in this study contribute to understanding the intricate mechanisms that trigger EAE and provide insights into the pathogenesis of various forms of MS. (C) 2015 Elsevier Inc. All rights reserved.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Univ Fed Juiz de Fora, Inst Biol Sci, IMUNOCET, Dept Parasitol Microbiol & Immunol, BR-36036900 Juiz de Fora, MG, BrazilUniv Fed Juiz de Fora, Dept Pharm, Governador Valadares, BrazilFed Univ Valleys Jequitinhonha & Mucuri, Fac Med, Teofilo Otoni, BrazilUniv Fed Juiz de Fora, Dept Morphol, BR-36036900 Juiz de Fora, MG, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Biophys, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Biophys, São Paulo, BrazilCNPq: 481459/2009-0CNPq: 303369/2009-4CNPq: 306575/2012-4CNPq: 470768/2013-4FAPEMIG: 02236/10FAPEMIG: PPM 0216/10FAPEMIG: 00269-14CAPES: PNPD-2882/2011Web of Scienc

Lower production of IL-17A and increased susceptibility to Mycobacterium bovis in mice coinfected with Strongyloides venezuelensis

The presence of intestinal helminths can down-regulate the immune response required to control mycobacterial infection. BALB/c mice infected with Mycobacterium bovis following an infection with the intestinal helminth Strongyloides venezuelensis showed reduced interleukin-17A production by lung cells and increased bacterial burden. Also, small granulomas and a high accumulation of cells expressing the inhibitory molecule CTLA-4 were observed in the lung. These data suggest that intestinal helminth infection could have a detrimental effect on the control of tuberculosis (TB) and render coinfected individuals more susceptible to the development of TB

Intestinal Microbiota as Modulators of the Immune System and Neuroimmune System: Impact on the Host Health and Homeostasis

Many immune-based intestinal disorders, such as ulcerative colitis and Crohn’s disease, as well as other illnesses, may have the intestines as an initial cause or aggravator in the development of diseases, even apparently not correlating directly to the intestine. Diabetes, obesity, multiple sclerosis, depression, and anxiety are examples of other illnesses discussed in the literature. In parallel, importance of the gut microbiota in intestinal homeostasis and immunologic conflict between tolerance towards commensal microorganisms and combat of pathogens is well known. Recent researches show that the immune system, when altered by the gut microbiota, influences the state in which these diseases are presented in the patient directly and indirectly. At the present moment, a considerable number of investigations about this subject have been performed and published. However, due to difficulties on correlating information, several speculations and hypotheses are generated. Thus, the present review aims at bringing together how these interactions work—gut microbiota, immune system, and their influence in the neuroimmune system