Cellularized hydrogel bioprinting to obtain prevascularised oral soft connective tissue scaffolds for tissue engineering

Introduction : Bien que la muqueuse orale présente un potentiel de régénération efficace, certaines pertes de substances nécessitent une augmentation chirurgicale de la quantité et/ou de la qualité du tissu. La greffe autologue est la thérapeutique de référence mais possède trois inconvénients majeurs : une morbidité et une quantité de tissu limitée au niveau du site donneur ainsi qu’une connexion vasculaire lente du greffon au niveau du site receveur. L’ingénierie tissulaire (IT) peut pallier en partie ces problématiques en produisant des substituts tissulaires se rapprochant le plus possible des tissus natifs en termes de macro et micro architectures. La bio-impression 3D est une technique d’IT particulièrement prometteuse car elle permet de positionner les éléments cellulaires de façon précise tout en conservant leur viabilité. L’objectif de ce travail de recherche était donc d’obtenir un tissu mou conjonctif contenant des canaux verticaux et une pré-vascularisation horizontale à l’aide de la bio-impression 3D par extrusion (EBB) dans lequel la viabilité des cellules serait préservée in vitro pendant au moins un mois avec une étude pour la mise en place d’une application in vivo.Méthodes : Suivant la triade de l’IT cellules/scaffold/molécules, le modèle a été construit de la façon suivante : (a) les cellules étaient des fibroblastes gingivaux humains (hGF) issus de cultures primaires d’explants et des cellules endothéliales issues de la veine ombilicale (HUVEC) ; (b) le matériau (ou scaffold) a été sélectionné parmi de nombreux hydrogels afin de se rapprocher le plus des propriétés mécaniques du tissu tout en autorisant l’impression et la viabilité des cellules ; (c) aucune molécule bioactive n’a été ajoutée en dehors de celles déjà présentes dans les milieux de culture et de celles sécrétées par les cellules. Deux bio-imprimantes à extrusion ont été utilisées : MultiPrint (IUT de Bordeaux) dans un premier temps pour la prise en main puis 3D Discovery (RegenHU) pour les expériences in vitro. Les substituts bio-imprimés ont été maintenus en culture pendant 28 jours sans bioréacteur. Différents tests ont été effectués pour les caractériser : viabilité et activité cellulaire, caractérisation des cellules (cytométrie en flux et immunocytofluorescence) et quantification des pré-vaisseaux obtenus.Résultats : Après avoir démontré que les hGF pouvaient être bio-imprimés par extrusion dans un hydrogel et maintenus vivants en culture dans les substituts, une revue systématique de la littérature a été ciblée sur les stratégies utilisées en IT orale pour fabriquer des vaisseaux sanguins in vitro. Les techniques les plus utilisées étaient les co-cultures de cellules stromales et endothéliales en suivant des paramètres spécifiques . La mise au point des cocultures hGF/HUVEC a permis de découvrir des propriétés de certains fibroblastes qui, au contact des cellules endothéliales, se comportaient comme des cellules péri-vasculaires. Ceci a rendu possible l’ organisation et la stabilisation du réseau d’HUVEC in vitro pendant 30 jours. Enfin, ces co-cultures ont été bio-imprimées dans des formes contenant des canaux verticaux et l’organisation des vaisseaux dans les constructions a été suivie dans le temps in vitro avec une proposition de protocole in vivo chez le rongeur.Conclusion : Des substituts conjonctifs contenant des canaux verticaux et un pré-réseau vasculaire qui se maintient dans le temps sans bioréacteur peuvent être obtenus par EBB. Les propriétés péri-vasculaires d’une certaine partie des hGF jouent un rôle primordial. Il est dans un premier temps nécessaire de finir la preuve de l’intérêt de ces pré-vaisseaux avec des expérimentations in vivo pour prouver la connexion accélérée et efficace de la construction pré-vascularisée. Il sera ensuite possible de complexifier le modèle en ajoutant d’autres types cellulaires, en modifiant la forme 3D et en travaillant sur le gros animal pour se rapprocher des applications cliniques.Introduction : Even though oral mucosa displays an efficient regenerative potential, tissue loss need a surgical increase of tissue quantity and/or quality. Autologous graft is the gold standard but possesses three major disadvantages : morbidity and limited quantity of tissue among the donor site and a slow vascular connection of the graft to the recipient site. Tissue engineering (TE) could partly help by manufacturing tissue substitutes that mimic native tissues in terms of macro and micro architecture. 3D bioprinting is a particularly promising TE technique because it enables cells positioning into precise patterns while keeping them alive. The aim of this research was to produce a gingival connective tissue substitute that contains vertical channels and a horizontal pre-vascularisation, using extrusion-based bioprinting (EBB). In this substitute, cell viability would be preserved in vitro during at least one month and the development of a protocol for future in vivo applications would be provided.Methods: Based on the TE triad cells/scaffold/molecules, the model was composed with the following features: (a) cells used were human gingival fibroblasts (hGF) from explant primary cultures and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC); (b) the scaffold was selected among various hydrogels in order to get the closest to native tissue properties while permitting cell printing and viability; (c) no bioactive molecule was used in addition to those already present in culture media and those secreted by cells. Two extrusion-based bioprinters were used : MultiPrint (Bordeaux IUT) first to get started then 3D Discovery (RgenHU) for in vitro experiments. Bioprinted substitutes were cultivated in vitro during 28 days without bioreactor. Different tests were performed to characterise them: cell viability and activity, cell characterisation (flow cytometry and immunocytochemistry) and preformed vessels quantification.Results: After showing that hGF could be bioprinted by extrusion within a hydrogel and could be kept alive in cultured substitutes, a systematic review of the literature focused on strategies used in oral TE to create blood vessels in vitro. The most reported techniques were cocultures of stromal and endothelial cells following specific parameters. The development of hGF/HUVEC cocultures allowed us to discover unusual properties of some fibroblasts which, when in close contact to HUVEC, displayed a perivascular cell behaviour. This made possible the organisation and stabilisation of the HUVEC network in vitro for 30 days. Finally, these cocultures were bioprinted and vessel organisation within constructions was followed throughout time in vitro and an in vivo protocol for rodents was proposed.Conclusion: Connective substitutes containing a pre-vessel network that remains throughout time without bioreactor were obtained using EBB. Perivascular properties of a part of hGF played a major role. First, it is necessary to finish the proof of concept by performing in vivo experiments in order to prove a faster and more efficient connection to the host vasculature with the pre-vascularised constructs. Then, it could be possible to complexify the substitutes by adding other cell types, modifying the 3D shape and working on bigger animal models to get closer to clinical applications

Bio‐impression d’un hydrogel cellularisé pour l'obtention de matrices conjonctives lâches orales pré-vascularisées utilisables en ingénierie tissulaire

Introduction : Even though oral mucosa displays an efficient regenerative potential, tissue loss need a surgical increase of tissue quantity and/or quality. Autologous graft is the gold standard but possesses three major disadvantages : morbidity and limited quantity of tissue among the donor site and a slow vascular connection of the graft to the recipient site. Tissue engineering (TE) could partly help by manufacturing tissue substitutes that mimic native tissues in terms of macro and micro architecture. 3D bioprinting is a particularly promising TE technique because it enables cells positioning into precise patterns while keeping them alive. The aim of this research was to produce a gingival connective tissue substitute that contains vertical channels and a horizontal pre-vascularisation, using extrusion-based bioprinting (EBB). In this substitute, cell viability would be preserved in vitro during at least one month and the development of a protocol for future in vivo applications would be provided.Methods: Based on the TE triad cells/scaffold/molecules, the model was composed with the following features: (a) cells used were human gingival fibroblasts (hGF) from explant primary cultures and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC); (b) the scaffold was selected among various hydrogels in order to get the closest to native tissue properties while permitting cell printing and viability; (c) no bioactive molecule was used in addition to those already present in culture media and those secreted by cells. Two extrusion-based bioprinters were used : MultiPrint (Bordeaux IUT) first to get started then 3D Discovery (RgenHU) for in vitro experiments. Bioprinted substitutes were cultivated in vitro during 28 days without bioreactor. Different tests were performed to characterise them: cell viability and activity, cell characterisation (flow cytometry and immunocytochemistry) and preformed vessels quantification.Results: After showing that hGF could be bioprinted by extrusion within a hydrogel and could be kept alive in cultured substitutes, a systematic review of the literature focused on strategies used in oral TE to create blood vessels in vitro. The most reported techniques were cocultures of stromal and endothelial cells following specific parameters. The development of hGF/HUVEC cocultures allowed us to discover unusual properties of some fibroblasts which, when in close contact to HUVEC, displayed a perivascular cell behaviour. This made possible the organisation and stabilisation of the HUVEC network in vitro for 30 days. Finally, these cocultures were bioprinted and vessel organisation within constructions was followed throughout time in vitro and an in vivo protocol for rodents was proposed.Conclusion: Connective substitutes containing a pre-vessel network that remains throughout time without bioreactor were obtained using EBB. Perivascular properties of a part of hGF played a major role. First, it is necessary to finish the proof of concept by performing in vivo experiments in order to prove a faster and more efficient connection to the host vasculature with the pre-vascularised constructs. Then, it could be possible to complexify the substitutes by adding other cell types, modifying the 3D shape and working on bigger animal models to get closer to clinical applications.Introduction : Bien que la muqueuse orale présente un potentiel de régénération efficace, certaines pertes de substances nécessitent une augmentation chirurgicale de la quantité et/ou de la qualité du tissu. La greffe autologue est la thérapeutique de référence mais possède trois inconvénients majeurs : une morbidité et une quantité de tissu limitée au niveau du site donneur ainsi qu’une connexion vasculaire lente du greffon au niveau du site receveur. L’ingénierie tissulaire (IT) peut pallier en partie ces problématiques en produisant des substituts tissulaires se rapprochant le plus possible des tissus natifs en termes de macro et micro architectures. La bio-impression 3D est une technique d’IT particulièrement prometteuse car elle permet de positionner les éléments cellulaires de façon précise tout en conservant leur viabilité. L’objectif de ce travail de recherche était donc d’obtenir un tissu mou conjonctif contenant des canaux verticaux et une pré-vascularisation horizontale à l’aide de la bio-impression 3D par extrusion (EBB) dans lequel la viabilité des cellules serait préservée in vitro pendant au moins un mois avec une étude pour la mise en place d’une application in vivo.Méthodes : Suivant la triade de l’IT cellules/scaffold/molécules, le modèle a été construit de la façon suivante : (a) les cellules étaient des fibroblastes gingivaux humains (hGF) issus de cultures primaires d’explants et des cellules endothéliales issues de la veine ombilicale (HUVEC) ; (b) le matériau (ou scaffold) a été sélectionné parmi de nombreux hydrogels afin de se rapprocher le plus des propriétés mécaniques du tissu tout en autorisant l’impression et la viabilité des cellules ; (c) aucune molécule bioactive n’a été ajoutée en dehors de celles déjà présentes dans les milieux de culture et de celles sécrétées par les cellules. Deux bio-imprimantes à extrusion ont été utilisées : MultiPrint (IUT de Bordeaux) dans un premier temps pour la prise en main puis 3D Discovery (RegenHU) pour les expériences in vitro. Les substituts bio-imprimés ont été maintenus en culture pendant 28 jours sans bioréacteur. Différents tests ont été effectués pour les caractériser : viabilité et activité cellulaire, caractérisation des cellules (cytométrie en flux et immunocytofluorescence) et quantification des pré-vaisseaux obtenus.Résultats : Après avoir démontré que les hGF pouvaient être bio-imprimés par extrusion dans un hydrogel et maintenus vivants en culture dans les substituts, une revue systématique de la littérature a été ciblée sur les stratégies utilisées en IT orale pour fabriquer des vaisseaux sanguins in vitro. Les techniques les plus utilisées étaient les co-cultures de cellules stromales et endothéliales en suivant des paramètres spécifiques . La mise au point des cocultures hGF/HUVEC a permis de découvrir des propriétés de certains fibroblastes qui, au contact des cellules endothéliales, se comportaient comme des cellules péri-vasculaires. Ceci a rendu possible l’ organisation et la stabilisation du réseau d’HUVEC in vitro pendant 30 jours. Enfin, ces co-cultures ont été bio-imprimées dans des formes contenant des canaux verticaux et l’organisation des vaisseaux dans les constructions a été suivie dans le temps in vitro avec une proposition de protocole in vivo chez le rongeur.Conclusion : Des substituts conjonctifs contenant des canaux verticaux et un pré-réseau vasculaire qui se maintient dans le temps sans bioréacteur peuvent être obtenus par EBB. Les propriétés péri-vasculaires d’une certaine partie des hGF jouent un rôle primordial. Il est dans un premier temps nécessaire de finir la preuve de l’intérêt de ces pré-vaisseaux avec des expérimentations in vivo pour prouver la connexion accélérée et efficace de la construction pré-vascularisée. Il sera ensuite possible de complexifier le modèle en ajoutant d’autres types cellulaires, en modifiant la forme 3D et en travaillant sur le gros animal pour se rapprocher des applications cliniques

Cellularized hydrogel bioprinting to obtain prevascularised oral soft connective tissue scaffolds for tissue engineering

Introduction : Bien que la muqueuse orale présente un potentiel de régénération efficace, certaines pertes de substances nécessitent une augmentation chirurgicale de la quantité et/ou de la qualité du tissu. La greffe autologue est la thérapeutique de référence mais possède trois inconvénients majeurs : une morbidité et une quantité de tissu limitée au niveau du site donneur ainsi qu’une connexion vasculaire lente du greffon au niveau du site receveur. L’ingénierie tissulaire (IT) peut pallier en partie ces problématiques en produisant des substituts tissulaires se rapprochant le plus possible des tissus natifs en termes de macro et micro architectures. La bio-impression 3D est une technique d’IT particulièrement prometteuse car elle permet de positionner les éléments cellulaires de façon précise tout en conservant leur viabilité. L’objectif de ce travail de recherche était donc d’obtenir un tissu mou conjonctif contenant des canaux verticaux et une pré-vascularisation horizontale à l’aide de la bio-impression 3D par extrusion (EBB) dans lequel la viabilité des cellules serait préservée in vitro pendant au moins un mois avec une étude pour la mise en place d’une application in vivo.Méthodes : Suivant la triade de l’IT cellules/scaffold/molécules, le modèle a été construit de la façon suivante : (a) les cellules étaient des fibroblastes gingivaux humains (hGF) issus de cultures primaires d’explants et des cellules endothéliales issues de la veine ombilicale (HUVEC) ; (b) le matériau (ou scaffold) a été sélectionné parmi de nombreux hydrogels afin de se rapprocher le plus des propriétés mécaniques du tissu tout en autorisant l’impression et la viabilité des cellules ; (c) aucune molécule bioactive n’a été ajoutée en dehors de celles déjà présentes dans les milieux de culture et de celles sécrétées par les cellules. Deux bio-imprimantes à extrusion ont été utilisées : MultiPrint (IUT de Bordeaux) dans un premier temps pour la prise en main puis 3D Discovery (RegenHU) pour les expériences in vitro. Les substituts bio-imprimés ont été maintenus en culture pendant 28 jours sans bioréacteur. Différents tests ont été effectués pour les caractériser : viabilité et activité cellulaire, caractérisation des cellules (cytométrie en flux et immunocytofluorescence) et quantification des pré-vaisseaux obtenus.Résultats : Après avoir démontré que les hGF pouvaient être bio-imprimés par extrusion dans un hydrogel et maintenus vivants en culture dans les substituts, une revue systématique de la littérature a été ciblée sur les stratégies utilisées en IT orale pour fabriquer des vaisseaux sanguins in vitro. Les techniques les plus utilisées étaient les co-cultures de cellules stromales et endothéliales en suivant des paramètres spécifiques . La mise au point des cocultures hGF/HUVEC a permis de découvrir des propriétés de certains fibroblastes qui, au contact des cellules endothéliales, se comportaient comme des cellules péri-vasculaires. Ceci a rendu possible l’ organisation et la stabilisation du réseau d’HUVEC in vitro pendant 30 jours. Enfin, ces co-cultures ont été bio-imprimées dans des formes contenant des canaux verticaux et l’organisation des vaisseaux dans les constructions a été suivie dans le temps in vitro avec une proposition de protocole in vivo chez le rongeur.Conclusion : Des substituts conjonctifs contenant des canaux verticaux et un pré-réseau vasculaire qui se maintient dans le temps sans bioréacteur peuvent être obtenus par EBB. Les propriétés péri-vasculaires d’une certaine partie des hGF jouent un rôle primordial. Il est dans un premier temps nécessaire de finir la preuve de l’intérêt de ces pré-vaisseaux avec des expérimentations in vivo pour prouver la connexion accélérée et efficace de la construction pré-vascularisée. Il sera ensuite possible de complexifier le modèle en ajoutant d’autres types cellulaires, en modifiant la forme 3D et en travaillant sur le gros animal pour se rapprocher des applications cliniques.Introduction : Even though oral mucosa displays an efficient regenerative potential, tissue loss need a surgical increase of tissue quantity and/or quality. Autologous graft is the gold standard but possesses three major disadvantages : morbidity and limited quantity of tissue among the donor site and a slow vascular connection of the graft to the recipient site. Tissue engineering (TE) could partly help by manufacturing tissue substitutes that mimic native tissues in terms of macro and micro architecture. 3D bioprinting is a particularly promising TE technique because it enables cells positioning into precise patterns while keeping them alive. The aim of this research was to produce a gingival connective tissue substitute that contains vertical channels and a horizontal pre-vascularisation, using extrusion-based bioprinting (EBB). In this substitute, cell viability would be preserved in vitro during at least one month and the development of a protocol for future in vivo applications would be provided.Methods: Based on the TE triad cells/scaffold/molecules, the model was composed with the following features: (a) cells used were human gingival fibroblasts (hGF) from explant primary cultures and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC); (b) the scaffold was selected among various hydrogels in order to get the closest to native tissue properties while permitting cell printing and viability; (c) no bioactive molecule was used in addition to those already present in culture media and those secreted by cells. Two extrusion-based bioprinters were used : MultiPrint (Bordeaux IUT) first to get started then 3D Discovery (RgenHU) for in vitro experiments. Bioprinted substitutes were cultivated in vitro during 28 days without bioreactor. Different tests were performed to characterise them: cell viability and activity, cell characterisation (flow cytometry and immunocytochemistry) and preformed vessels quantification.Results: After showing that hGF could be bioprinted by extrusion within a hydrogel and could be kept alive in cultured substitutes, a systematic review of the literature focused on strategies used in oral TE to create blood vessels in vitro. The most reported techniques were cocultures of stromal and endothelial cells following specific parameters. The development of hGF/HUVEC cocultures allowed us to discover unusual properties of some fibroblasts which, when in close contact to HUVEC, displayed a perivascular cell behaviour. This made possible the organisation and stabilisation of the HUVEC network in vitro for 30 days. Finally, these cocultures were bioprinted and vessel organisation within constructions was followed throughout time in vitro and an in vivo protocol for rodents was proposed.Conclusion: Connective substitutes containing a pre-vessel network that remains throughout time without bioreactor were obtained using EBB. Perivascular properties of a part of hGF played a major role. First, it is necessary to finish the proof of concept by performing in vivo experiments in order to prove a faster and more efficient connection to the host vasculature with the pre-vascularised constructs. Then, it could be possible to complexify the substitutes by adding other cell types, modifying the 3D shape and working on bigger animal models to get closer to clinical applications

Tissue Eng Regen Med

Background:Cocultures of human gingival fibrobasts (hGF) and endothelial cells could enhance regeneration and repair models as well as improve vascularization limitations in tissue engineering. The aim of this study was to assess if hGF could support formation of stable vessel-like networks. Methods:Explant primary hGF were isolated from gum surgical wastes collected from healthy patients with no history of periodontitis. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) cocultured in vitro with hGF at a cell ratio of 1:1 and medium of 1:1 of their respective media during at least 31 days. Vessel quantification of HUVEC networks was performed. In order to investigate the pericyte-like properties of hGF, the expression of perivascular markers α-SMA, NG2, CD146 and PDGFR-β was studied using immunocytochemistry and flow cytometry on 2D cultures. Results:hGF were able to support a long-lasting HUVEC network at least 31 days, even in the absence of a bioreactor with flow. As observed, HUVEC started to communicate with each other from day 7, constructing a network. Their interconnection increased significantly between day 2 and day 21 and lasted beyond the 31 days of observation. Moreover, we tried to explain the stability of the networks obtained and showed that a small population of hGF in close vicinity of HUVEC networks expressed perivascular markers. Conclusion:These findings highlight a new interesting property concerning hGF, accentuating their relevance in tissue engineering and periodontal regeneration. These promising results need to be confirmed using more 3D applications and in vivo testing

Cybergology and bioprinting: The biotechnological future of maxillofacial rehabilitation

International audienceMaxillofacial prostheses now benefit from the growing advances in converging technologies, such as nanotechnologies, biotechnologies, informatics and cognitivism (NBIC). Instead of being laid and passive, prostheses can now ensure true neurophysiological interactions with their wearers through complex phenomena of hybridization and vicariance. These new devices get closer to "maxillofacial amplification prostheses", by improving the world perception through restored sensory properties and new extra-sensory properties. These technological devices also benefit from the bioengineering revolution that will soon allow the bioprinting of graft prostheses with an intimate integration to the organic maxillofacial support. In this article, the authors would like to present some major advances in cybergology and bio-printing in maxillofacial hybridization contexts

Étude de faisabilité d’un greffon biofabriqué pour traiter des récessions parodontales

Introduction : L’ingénierie tissulaire permet d’envisager de nouvelles thérapeutiques pour le traitement des récessions gingivales. Cette étude de faisabilité proposait un protocole et une chronologie pour la biofabrication de greffons parodontaux sur mesure palliant ces défauts. Technique : L’impression d’une matrice en hydrogel collagénique a été réalisée grâce à un système d’éjection piézoélectrique Microdrop®. La mise au point des conditions optimales d’impression a été déterminée en fabriquant des échantillons de dimension et de morphologie compatibles avec une application clinique. L’ensemencement cellulaire de matrices a été réalisé par bioimpression assistée par laser, et la viabilité cellulaire post-impression testée. L’impression d’une matrice a été directement réalisée sur les membranes de collagène préfabriquées pour évaluer la facilité de manipulation du greffon. Les matrices obtenues ont la forme souhaitée, les cellules sont viables, et le greffon est aisément manipulable et suturable. Commentaires : L’impression de la matrice permet de choisir l’épaisseur du greffon. Il est attendu in vivo que l’organisation spatiale des fibroblastes au sein des greffons permette d’augmenter la résistance mécanique et l’esthétique des greffes parodontales. Conclusion : Cette étude de faisabilité préliminaire a permis de poser le concept. D’autres études seront nécessaires pour étudier le remodelage du greffon in vitro et in vivo

A Bibliometric Study to Assess Bioprinting Evolution

Bioprinting as a tissue engineering tool is one of the most promising technologies for overcoming organ shortage. However, the spread of populist articles among on this technology could potentially lead public opinion to idealize its readiness. This bibliometric study aimed to trace the evolution of bioprinting literature over the past decade (i.e., 2000 to 2015) using the SCI-expanded database of Web of Science® (WoS, Thomson Reuters). The articles were analyzed by combining various bibliometric tools, such as science mapping and topic analysis, and a Technology Readiness Scale was adapted to assess the evolution of this emerging field. The number of analyzed publications was low (231), but the literature grew exceptionally fast. The “Engineering, Biomedical” was still the most represented WoS category. Some of the recent fronts were “hydrogels” and “stem cells”, while “in vitro” remained one of the most used keywords. The number of countries and journals involved in bioprinting literature grew substantially in one decade, also supporting the idea of an increasing community. Neither the United States’ leadership in bioprinting productivity nor the role of universities in publications were challenged. “Biofabrication” and “Biomaterials” journals were still the leaders of the bioprinting field. Bioprinting is a young but promising technology

Nucleotide lipid-based hydrogel as a new biomaterial ink for biofabrication

One of the greatest challenges in the field of biofabrication remains the discovery of suitable bioinks that satisfy physicochemical and biological requirements. Despite recent advances in tissue engineering and biofabrication, progress has been limited to the development of technologies using polymer-based materials. Here, we show that a nucleotide lipid-based hydrogel resulting from the self-assembly of nucleotide lipids can be used as a bioink for soft tissue reconstruction using injection or extrusion-based systems. To the best of our knowledge, the use of a low molecular weight hydrogel as an alternative to polymeric bioinks is a novel concept in biofabrication and 3D bioprinting. Rheological studies revealed that nucleotide lipid-based hydrogels exhibit suitable mechanical properties for biofabrication and 3D bioprinting, including i) fast gelation kinetics in a cell culture medium and ii) shear moduli and thixotropy compatible with extruded oral cell survival (human gingival fibroblasts and stem cells from the apical papilla). This polymer-free soft material is a promising candidate for a new bioink design