Expresión del marcador óseo CD44 en hueso alveolar previamente injertado.

Objetive: To determine the expressions of the bone surface marker CD44 in samples of alveolar bone previously regenerated with allograft, xenograft, and mixed, using the technique of guided bone regeneration. Material and Methods: This exploratory study was approved by the institutional research and ethics committee. By means of intentional sampling and after obtaining informed consent for tissue donation, 20 samples of alveolar bone previously regenerated with guided bone regeneration therapy with particulate bone graft and membrane were taken during implant placement. The samples were stained with hematoxylin-eosin for histological analysis, and by immunohistochemistry for the detection of CD44. Results: Sections with hematoxylin-eosin showed bone tissue with the presence of osteoid matrix and mature bone matrix of usual appearance. Of the CD44+ samples, 80% were allograft and 20% xenograft. The samples with allograft-xenograft were negative. There were no differences in the intensity of CD44 expression between the positive samples. The marker was expressed in osteocytes, stromal cells, mononuclear infiltrate, and some histiocytes. Eighty percent of the CD44+ samples and 100% of the samples in which 60 or more cells were labelled corresponded to allografts (p=0.000). A total of 67% of the samples from the anterior sector, and 40% from the posterior sector were CD44+ (p=0.689). Conclusion: This study shows for the first time that guided bone regeneration using allografts is more efficient for the generation of mature bone determined by the expression of CD44, compared to the use of xenografts and mixed allograft-xenograft, regardless of the regenerated anatomical area.Objetivo: Determinar la expresión del marcador de membrana óseo CD44 en muestras de hueso alveolar previamente regenerado con aloinjerto, xenoinjerto y mezcla mediante la técnica de regeneración ósea guiada. Material y Métodos: Con aval del Comité de Investigación y Ética, se realizó un estudio exploratorio. Por muestreo intencional y firma de consentimiento informado de donación, se tomaron durante la colocación del implante, 20 muestras de hueso alveolar previamente regenerado con terapia de regeneración ósea guiada con injerto óseo particulado y membrana. Las muestras fueron teñidas con hematoxilina-eosina para el análisis histológico y por inmunohistoquímica para la detección del CD44. Resultados: : Los cortes con hematoxilina-eosina mostraron tejido óseo con presencia de matriz osteoide y matriz ósea madura de aspecto usual. De las muestras CD44+, 80% fueron de aloinjerto y 20% de xenoinjerto. Las muestras con aloinjerto-xeoninjerto fueron negativas. No hubo diferencias en la intensidad de la expresión del CD44 entre las muestras positivas. El marcador se expresó en osteocitos, células estromales, infiltrado mononuclear y algunos histiocitos. El 80% de las muestras CD44+ y el 100% de las muestras con marcación de 60 o más células correspondían a aloinjertos (p=0,000). El 67% de las muestras del sector anterior y el 40% del sector posterior fueron CD44+ (p=0,689). Conclusión: Este estudio muestra por primera vez que la regeneración ósea guiada usando aloinjertos, es más eficiente para la generación de hueso maduro determinado por la expresión de CD44, comparado con el uso de xenoinjertos y mezcla de aloinjerto-xenoinjerto, independientemente del sector anatómico regenerado

Expresión del marcador óseo CD44 en hueso alveolar previamente injertado

Objetivo: Determinar la expresión del marcador de membrana óseo CD44 en muestras de hueso alveolar previamente regenerado con aloinjerto, xenoinjerto y mezcla mediante la técnica de regeneración ósea guiada. Material y Métodos: Con aval del Comité de Investigación y Ética, se realizó un estudio exploratorio. Por muestreo intencional y firma de consentimiento informado de donación, se tomaron durante la colocación del implante, 20 muestras de hueso alveolar previamente regenerado con terapia de regeneración ósea guiada con injerto óseo particulado y membrana. Las muestras fueron teñidas con hematoxilina-eosina para el análisis histológico y por inmunohistoquímica para la detección del CD44. Resultados: : Los cortes con hematoxilina-eosina mostraron tejido óseo con presencia de matriz osteoide y matriz ósea madura de aspecto usual. De las muestras CD44+, 80% fueron de aloinjerto y 20% de xenoinjerto. Las muestras con aloinjerto-xeoninjerto fueron negativas. No hubo diferencias en la intensidad de la expresión del CD44 entre las muestras positivas. El marcador se expresó en osteocitos, células estromales, infiltrado mononuclear y algunos histiocitos. El 80% de las muestras CD44+ y el 100% de las muestras con marcación de 60 o más células correspondían a aloinjertos (p=0,000). El 67% de las muestras del sector anterior y el 40% del sector posterior fueron CD44+ (p=0,689). Conclusión: Este estudio muestra por primera vez que la regeneración ósea guiada usando aloinjertos, es más eficiente para la generación de hueso maduro determinado por la expresión de CD44, comparado con el uso de xenoinjertos y mezcla de aloinjerto-xenoinjerto, independientemente del sector anatómico regenerado.Objetive: To determine the expressions of the bone surface marker CD44 in samples of alveolar bone previously regenerated with allograft, xenograft, and mixed, using the technique of guided bone regeneration. Material and Methods: This exploratory study was approved by the institutional research and ethics committee. By means of intentional sampling and after obtaining informed consent for tissue donation, 20 samples of alveolar bone previously regenerated with guided bone regeneration therapy with particulate bone graft and membrane were taken during implant placement. The samples were stained with hematoxylin-eosin for histological analysis, and by immunohistochemistry for the detection of CD44. Results: Sections with hematoxylin-eosin showed bone tissue with the presence of osteoid matrix and mature bone matrix of usual appearance. Of the CD44+ samples, 80% were allograft and 20% xenograft. The samples with allograft-xenograft were negative. There were no differences in the intensity of CD44 expression between the positive samples. The marker was expressed in osteocytes, stromal cells, mononuclear infiltrate, and some histiocytes. Eighty percent of the CD44+ samples and 100% of the samples in which 60 or more cells were labelled corresponded to allografts (p=0.000). A total of 67% of the samples from the anterior sector, and 40% from the posterior sector were CD44+ (p=0.689). Conclusion: This study shows for the first time that guided bone regeneration using allografts is more efficient for the generation of mature bone determined by the expression of CD44, compared to the use of xenografts and mixed allograft-xenograft, regardless of the regenerated anatomical area.https://orcid.org/0000-0002-7147-425Xhttps://orcid.org/0000-0002-6640-3975N/

Inmunidad celular y humoral frente a microrganismos cariogénicos y sus factores de virulencia en caries dental en humanos naturalmente sensibilizados / Cellular and Humoral Immunity to Cariogenic Microorganisms and their Virulence Factors in Dental Caries

La caries dental es una enfermedad infecciosa multifactorial. Actualmente se estudia y comprende la mayoría de sus factores etiológicos, su progreso y su tratamiento preventivo y curativo; pero el conocimiento de cómo desencadena la respuesta inmune en humanos no se ha esclarecido. En este artículo se presenta un análisis del conocimiento sobre la respuesta inmune innata y adaptativa o específica frente a los microrganismos cariogénicos y sus antígenos más relevantes como factores de virulencia en caries dental. Los resultados muestran que la mayoría de los estudios se han realizado con Streptococcus mutans y sus antígenos; pero poco se conoce acerca de la respuesta frente a otros microrganismos cariogénicos. La respuesta proliferativa de las células T y el polimorfismo de la β-defensina-1 son los únicos elementos del sistema inmune que muestran algún papel en la resistencia o susceptibilidad a la enfermedad. Los otros elementos no pueden asociarse claramente con un papel protector en caries dental en humanos naturalmente sensibilizados. Dental caries is a multifactorial infectious disease; currently, most of its etiological factors, progress and preventive and curative treatment are understood, but knowledge of how the immune response is triggered in humans has not been elucidated. This article analyzes the innate and adaptive or specific immune response against cariogenic microorganisms and their most relevant antigens as virulence factors in dental caries. Findings show that most of the studies have been performed with Streptococcus mutans and their antigens but little is known about the response to other cariogenic microorganisms. The proliferative response of T cells and polymorphism of β-defensin-1 are the only elements of the immune system that show some role in resistance or susceptibility to disease. The other elements cannot be associated clearly with a protective role in dental caries in naturally sensitized humans

Inmunidad celular y humoral frente a microrganismos cariogénicos y sus factores de virulencia en caries dental en humanos naturalmente sensibilizados / Cellular and Humoral Immunity to Cariogenic Microorganisms and their Virulence Factors in Dental Caries

La caries dental es una enfermedad infecciosa multifactorial. Actualmente se estudia y comprende la mayoría de sus factores etiológicos, su progreso y su tratamiento preventivo y curativo; pero el conocimiento de cómo desencadena la respuesta inmune en humanos no se ha esclarecido. En este artículo se presenta un análisis del conocimiento sobre la respuesta inmune innata y adaptativa o específica frente a los microrganismos cariogénicos y sus antígenos más relevantes como factores de virulencia en caries dental. Los resultados muestran que la mayoría de los estudios se han realizado con Streptococcus mutans y sus antígenos; pero poco se conoce acerca de la respuesta frente a otros microrganismos cariogénicos. La respuesta proliferativa de las células T y el polimorfismo de la β-defensina-1 son los únicos elementos del sistema inmune que muestran algún papel en la resistencia o susceptibilidad a la enfermedad. Los otros elementos no pueden asociarse claramente con un papel protector en caries dental en humanos naturalmente sensibilizados. Dental caries is a multifactorial infectious disease; currently, most of its etiological factors, progress and preventive and curative treatment are understood, but knowledge of how the immune response is triggered in humans has not been elucidated. This article analyzes the innate and adaptive or specific immune response against cariogenic microorganisms and their most relevant antigens as virulence factors in dental caries. Findings show that most of the studies have been performed with Streptococcus mutans and their antigens but little is known about the response to other cariogenic microorganisms. The proliferative response of T cells and polymorphism of β-defensin-1 are the only elements of the immune system that show some role in resistance or susceptibility to disease. The other elements cannot be associated clearly with a protective role in dental caries in naturally sensitized humans

Respuesta de células T, citocinas y anticuerpos frente al péptido (365-377) de la proteína de adhesión celular de Streptococcus mutans / Cell, Cytokine, and Antibody Response to Streptococcus mutans Cell Surface Protein Antigen Peptide (365-377)

Antecedentes: en la búsqueda de un antígeno vacunal óptimo contra la caries dental en humanos se ha utilizado el péptido PAc(365-377) de la proteína PAc de S. mutans, el cual presenta epítopes T y B para ratones. Poco se conoce acerca de la respuesta en humanos naturalmente sensibilizados. Objetivo: analizar la respuesta inmune humoral y celular frente a PAc(365-377) en relación con el estado de la caries dental. Métodos: se tomaron 30 muestras distribuidas en tres grupos: caries activa, historia de caries y libres de caries. A cada paciente se le cuantificaron las concentraciones de inmunoglobulina A y G (IgA e IgG) salivales y séricas frente al péptido por ELISA y las células productoras de las citocinas IFN-g e IL-2 (perfil TH1), IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 (perfil TH2) por la técnica de estimulación antígeno-específica por citometría de flujo. Resultados: se encontró una respuesta de memoria celular y de anticuerpos frente al péptido PAc(365-377) en humanos naturalmente sensibilizados. Se detectaron tres perfiles de citocinas: TH0, TH1 y TH2, con predominio del perfil TH0 por LTCD4+ y T1 por LTCD8+ en sujetos libres de caries. El 54 % de los individuos no respondió a las citocinas analizadas por LTCD4+ y el 70 % por LTCD8+. No se observaron diferencias estadísticamente significativas en la producción de anticuerpos salivales y séricos entre los grupos. Conclusiones: la respuesta inmune humoral y celular específica frente al péptido PAc(365-377) de S. mutans no muestra diferencia entre pacientes con caries e individuos resistentes a la enfermedad, en humanos naturalmente sensibilizados. Background: PAc(365-377) peptide derived of S. mutans PAc protein has been used in the search for a vaccine against dental caries in humans. This peptide has T and B epitopes in animal model (mice) but this is unknown in naturally sensitized humans. Purpose: analyze the humoral and cellular immune response to the PAc(365-377) peptide regarding dental caries status. Methods: 30 subjects were classified into three groups: active cavities, history of cavities, and caries free subjects. Blood and saliva samples were obtained from each subject. Measures included total amount of salivary and serum IgA and IgG against the PAc(365-377) peptide through ELISA and detection of functional populations of memory T cells that reacted to the PAc(365-377) peptide through frequency of IFN-g and IL-2 (TH1 profile), IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13 (TH2 profile) with antigen-specific immune function assays through flow cytometry. Results: a memory cellular and humoral immune response against the PAc(365-377) peptide in naturally sensitized humans was observed. TH0, TH1, and TH2 profiles were detected with TH0 profile prevalence for LTCD4+ and TH1 profile prevalence for LTCD8+ in the caries free group. 54 % of subjects did not react to LTCD4+ analyzed cytokines and 70 % for LTCD8+. There were no statistically significant differences between the groups studied. Conclusions: Cellular and humoral immune response to the PAc(365-377) synthetic peptide from S. mutans did not show association with health or disease in naturally sensitized humans

Respuesta de células T, citocinas y anticuerpos frente al péptido (365-377) de la proteína de adhesión celular de Streptococcus mutans / Cell, Cytokine, and Antibody Response to Streptococcus mutans Cell Surface Protein Antigen Peptide (365-377)

Antecedentes: en la búsqueda de un antígeno vacunal óptimo contra la caries dental en humanos se ha utilizado el péptido PAc(365-377) de la proteína PAc de S. mutans, el cual presenta epítopes T y B para ratones. Poco se conoce acerca de la respuesta en humanos naturalmente sensibilizados. Objetivo: analizar la respuesta inmune humoral y celular frente a PAc(365-377) en relación con el estado de la caries dental. Métodos: se tomaron 30 muestras distribuidas en tres grupos: caries activa, historia de caries y libres de caries. A cada paciente se le cuantificaron las concentraciones de inmunoglobulina A y G (IgA e IgG) salivales y séricas frente al péptido por ELISA y las células productoras de las citocinas IFN-g e IL-2 (perfil TH1), IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 (perfil TH2) por la técnica de estimulación antígeno-específica por citometría de flujo. Resultados: se encontró una respuesta de memoria celular y de anticuerpos frente al péptido PAc(365-377) en humanos naturalmente sensibilizados. Se detectaron tres perfiles de citocinas: TH0, TH1 y TH2, con predominio del perfil TH0 por LTCD4+ y T1 por LTCD8+ en sujetos libres de caries. El 54 % de los individuos no respondió a las citocinas analizadas por LTCD4+ y el 70 % por LTCD8+. No se observaron diferencias estadísticamente significativas en la producción de anticuerpos salivales y séricos entre los grupos. Conclusiones: la respuesta inmune humoral y celular específica frente al péptido PAc(365-377) de S. mutans no muestra diferencia entre pacientes con caries e individuos resistentes a la enfermedad, en humanos naturalmente sensibilizados. Background: PAc(365-377) peptide derived of S. mutans PAc protein has been used in the search for a vaccine against dental caries in humans. This peptide has T and B epitopes in animal model (mice) but this is unknown in naturally sensitized humans. Purpose: analyze the humoral and cellular immune response to the PAc(365-377) peptide regarding dental caries status. Methods: 30 subjects were classified into three groups: active cavities, history of cavities, and caries free subjects. Blood and saliva samples were obtained from each subject. Measures included total amount of salivary and serum IgA and IgG against the PAc(365-377) peptide through ELISA and detection of functional populations of memory T cells that reacted to the PAc(365-377) peptide through frequency of IFN-g and IL-2 (TH1 profile), IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13 (TH2 profile) with antigen-specific immune function assays through flow cytometry. Results: a memory cellular and humoral immune response against the PAc(365-377) peptide in naturally sensitized humans was observed. TH0, TH1, and TH2 profiles were detected with TH0 profile prevalence for LTCD4+ and TH1 profile prevalence for LTCD8+ in the caries free group. 54 % of subjects did not react to LTCD4+ analyzed cytokines and 70 % for LTCD8+. There were no statistically significant differences between the groups studied. Conclusions: Cellular and humoral immune response to the PAc(365-377) synthetic peptide from S. mutans did not show association with health or disease in naturally sensitized humans

Respuesta de células T, citocinas y anticuerpos frente al péptido (365-377) de la proteína de adhesión celular de Streptococcus mutans / Cell, Cytokine, and Antibody Response to Streptococcus mutans Cell Surface Protein Antigen Peptide (365-377)

Antecedentes: en la búsqueda de un antígeno vacunal óptimo contra la caries dental en humanos se ha utilizado el péptido PAc(365-377) de la proteína PAc de S. mutans, el cual presenta epítopes T y B para ratones. Poco se conoce acerca de la respuesta en humanos naturalmente sensibilizados. Objetivo: analizar la respuesta inmune humoral y celular frente a PAc(365-377) en relación con el estado de la caries dental. Métodos: se tomaron 30 muestras distribuidas en tres grupos: caries activa, historia de caries y libres de caries. A cada paciente se le cuantificaron las concentraciones de inmunoglobulina A y G (IgA e IgG) salivales y séricas frente al péptido por ELISA y las células productoras de las citocinas IFN-g e IL-2 (perfil TH1), IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 (perfil TH2) por la técnica de estimulación antígeno-específica por citometría de flujo. Resultados: se encontró una respuesta de memoria celular y de anticuerpos frente al péptido PAc(365-377) en humanos naturalmente sensibilizados. Se detectaron tres perfiles de citocinas: TH0, TH1 y TH2, con predominio del perfil TH0 por LTCD4+ y T1 por LTCD8+ en sujetos libres de caries. El 54 % de los individuos no respondió a las citocinas analizadas por LTCD4+ y el 70 % por LTCD8+. No se observaron diferencias estadísticamente significativas en la producción de anticuerpos salivales y séricos entre los grupos. Conclusiones: la respuesta inmune humoral y celular específica frente al péptido PAc(365-377) de S. mutans no muestra diferencia entre pacientes con caries e individuos resistentes a la enfermedad, en humanos naturalmente sensibilizados. Background: PAc(365-377) peptide derived of S. mutans PAc protein has been used in the search for a vaccine against dental caries in humans. This peptide has T and B epitopes in animal model (mice) but this is unknown in naturally sensitized humans. Purpose: analyze the humoral and cellular immune response to the PAc(365-377) peptide regarding dental caries status. Methods: 30 subjects were classified into three groups: active cavities, history of cavities, and caries free subjects. Blood and saliva samples were obtained from each subject. Measures included total amount of salivary and serum IgA and IgG against the PAc(365-377) peptide through ELISA and detection of functional populations of memory T cells that reacted to the PAc(365-377) peptide through frequency of IFN-g and IL-2 (TH1 profile), IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13 (TH2 profile) with antigen-specific immune function assays through flow cytometry. Results: a memory cellular and humoral immune response against the PAc(365-377) peptide in naturally sensitized humans was observed. TH0, TH1, and TH2 profiles were detected with TH0 profile prevalence for LTCD4+ and TH1 profile prevalence for LTCD8+ in the caries free group. 54 % of subjects did not react to LTCD4+ analyzed cytokines and 70 % for LTCD8+. There were no statistically significant differences between the groups studied. Conclusions: Cellular and humoral immune response to the PAc(365-377) synthetic peptide from S. mutans did not show association with health or disease in naturally sensitized humans

Comparison of mechanical, enzymatic and mechanical-enzymatic dissagregation tecniques in extraction of lymphocytary populations and macrophagues in tissues with chronic advanced periodontitis

ANTECEDENTES: En este estudio se compararon tres técnicas de disgregación en la recuperación de poblaciones linfocitarias y macrófagos en tejidos con periodontitis crónica avanzada. OBJETIVO: comparar, por citometría de flujo, el recuento de poblaciones linfocitarias y macrófagos de biopsias de tejidos periodontalmente afectados, con tres procesos previos de disgregación celular (mecánica, enzimática con colagenasa y mecano-enzimática) para observar cuál de éstos es más efectivo en la recuperación celular y produce menos alteraciones en los marcadores de superficie. MÉTODOS: Se realizó un estudio descriptivo comparativo donde se eligió una muestra de 11 biopsias de tejidos con periodontitis crónica avanzada. El procedimiento consistió en tomar las biopsias por medio de biseles internos que se colocaban en un Eppendorf con el medio de transporte. En el grupo 1 se realizó la técnica de disgregación mecánica Medimachine®, en el grupo 2 técnica enzimática (colagenasa 2%), y el en grupo 3 técnica mecano-enzimática (Medimachine® y colagenasa 2%). Posteriormente las muestras fueron analizadas por un citómetro de flujo FACS- Aria (Becton Dickinson San José California). RESULTADOS: No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre las tres técnicas de disgregación en la recuperación de poblaciones linfocitarias; sin embargo, hubo una mayor recuperación de macrófagos con la técnica mecano-enzimática comparada con la mecánica, siendo estas diferencias estadísticamente significativas. CONCLUSIONES: Las tres técnicas estudiadas presentaron resultados comparables en cuanto a recuperación y daño a los marcadores de superficie, por lo cual, por tiempo y costo, se aconseja realizar una técnica mecánica con Medimachine®.BACKGROUND: Three disaggregation techniques for the recovery of lymphocyte and macrophage populations from tissues with advanced chronic periodontitis were analyzed. OBJECTIVE: Compare by flow cytometry the recovery of lymphocyte and macrophage populations from biopsies of periodontal tissues with periodontitis by using three processes of cellular disaggregration (mechanical, enzymatic with colagenase and mechanical-enzymatic) to observe which of these is more effective and produces fewer alterations in the surface markers. METHODS: A comparative descriptive study was carried out with a sample of 11 biopsies of tissues taken from 23sites with advanced chronic periodontitis. The procedure consisted of taking the biopsies by means of internal bevels and placing them in an Eppendorf for transportation. In group 1, the mechanical technique of disaggregation (Medimachine®) was carried out. In group 2, the enzymatic technique (colagenase 2%) was used. In group 3, the mechanical-enzymatic technique (Medimachine® and colagenase 2%) was perfomred. Later on, the samples were analyzed with a FACS-Aria cytometer (Becton Dickinson San José California). RESULTS: There were not statistically significant differences among the three disaggregation techniques for the recovery of lymphocyte populations. However, there was a bigger recovery of macrophages with the mechanical-enzymatic technique when compared to the other two techniques, being statistically significant. CONCLUSIONS: The three techniques studied produce similar results in the recovery and damage to the surface markers; hence, considering time and cost constrains, it is advisable to carry out the mechanical technique with Medimachine®

Comparación de técnicas de disgregación mecánica, enzimática y mecano-enzimática en la extracción de poblaciones linfocitarias y macrófagos en tejidos con periodontitis crónica avanzada

BACKGROUND: Three disaggregation techniques for the recovery of lymphocyte and macrophage populations from tissues with advanced chronic periodontitis were analyzed. OBJECTIVE: Compare by flow cytometry the recovery of lymphocyte and macrophage populations from biopsies of periodontal tissues with periodontitis by using three processes of cellular disaggregration (mechanical, enzymatic with colagenase and mechanical-enzymatic) to observe which of these is more effective and produces fewer alterations in the surface markers. METHODS: A comparative descriptive study was carried out with a sample of 11 biopsies of tissues taken from sites with advanced chronic periodontitis. The procedure consisted of taking the biopsies by means of internal bevels and placing them in an Eppendorf for transportation. In group 1, the mechanical technique of disaggregation (Medimachine®) was carried out. In group 2, the enzymatic technique (colagenase 2%) was used. In group 3, the mechanical-enzymatic technique (Medimachine® and colagenase 2%) was perfomred. Later on, the samples were analyzed with a FACS-Aria cytometer (Becton Dickinson San José California). RESULTS: There were not statistically significant differences among the three disaggregation techniques for the recovery of lymphocyte populations. However, there was a bigger recovery of macrophages with the mechanical-enzymatic technique when compared to the other two techniques, being statistically significant. CONCLU SIONS: The three techniques studied produce similar results in the recovery and damage to the surface markers; hence, considering time and cost constrains, it is advisable to carry out the mechanical technique with Medimachine®.ANTECEDENTES: En este estudio se compararon tres técnicas de disgregación en la recuperación de poblaciones linfocitarias y macrófagos en tejidos con periodontitis crónica avanzada. OBJETIVO: comparar, por citometría de flujo, el recuento de poblaciones linfocitarias y macrófagos de biopsias de tejidos periodontalmente afectados, con tres procesos previos de disgregación celular (mecánica, enzimática con colagenasa y mecano-enzimática) para observar cuál de éstos es más efectivo en la recuperación celular y produce menos alteraciones en los marcadores de superficie. MÉTODOS: Se realizó un estudio descriptivo comparativo donde se eligió una muestra de 11 biopsias de tejidos con periodontitis crónica avanzada. El procedimiento consistió en tomar las biopsias por medio de biseles internos que se colocaban en un Eppendorf con el medio de transporte. En el grupo 1 se realizó la técnica de disgregación mecánica Medimachine®, en el grupo 2 técnica enzimática (colagenasa 2%), y el en grupo 3 técnica mecano-enzimática (Medimachine® y colagenasa 2%). Posteriormente las muestras fueron analizadas por un citómetro de flujo FACSAria (Becton Dickinson San José California). RESULTADOS: No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre las tres técnicas de disgregación en la recuperación de poblaciones linfocitarias; sin embargo, hubo una mayor recuperación de macrófagos con la técnica mecano-enzimática comparada con la mecánica, siendo es tas diferencias estadísticamente significativas. CONCLUSIONES: Las tres técnicas estudiadas presentaron resultados comparables en cuanto a recuperación y daño a los marcadores de superficie, por lo cual, por tiempo y costo, se aconseja realizar una técnica mecánica con Medimachine