Couplage du récepteur à sept domaines transmembranaires GABA-B1 aux voies intracellulaires de signalisation en absence de GABA-B2

Le GABA est le principal neurotransmetteur inhibiteur du SNC et est impliqué dans le développement du cerveau, la plasticité synaptique et la pathogénèse de maladies telles que l’épilepsie, les troubles de l’anxiété et la douleur chronique. Le modèle actuel de fonctionnement du récepteur GABA-B implique l’hétérodimérisation GABA-B1/B2, laquelle est requise au ciblage à la surface membranaire et au couplage des effecteurs. Il y est cependant des régions du cerveau, des types cellulaires et des périodes du développement cérébral où la sous-unité GABA-B1 est exprimée en plus grande quantité que GABA-B2, ce qui suggère qu’elle puisse être fonctionnelle seule ou en association avec des partenaires inconnus, à la surface cellulaire ou sur la membrane réticulaire. Dans le cadre de cette thèse, nous montrons la capacité des récepteurs GABA-B1 endogènes à activer la voie MAPK-ERK1/2 dans la lignée dérivée de la glie DI-TNC1, qui n’exprime pas GABA-B2. Les mécanismes qui sous-tendent ce couplage demeurent mal définis mais dépendent de Gi/o et PKC. L’immunohistochimie de récepteurs endogènes montre par ailleurs que des anticorps GABA-B1 dirigés contre la partie N-terminale reconnaissent des protéines localisées au RE tandis des anticorps C-terminaux (CT) marquent une protéine intranucléaire. Ces données suggèrent que le domaine CT de GABA-B1 pourrait être relâché par protéolyse. L’intensité des fragments potentiels est affectée par le traitement agoniste tant en immunohistochimie qu’en immunobuvardage de type western. Nous avons ensuite examiné la régulation du clivage par le protéasome en traitant les cellules avec l’inhibiteur epoxomicine pendant 12 h. Cela a résulté en l’augmentation du marquage intranucléaire de GABA-B1-CT et d’un interacteur connu, le facteur de transcription pro-survie ATF-4. Dans des cellules surexprimant GABA-B1-CT, l’induction et la translocation nucléaire d’ATF-4, qui suit le traitement epoxomicine, a complètement été abolie. Cette observation est associée à une forte diminution du décompte cellulaire. Étant donné que les trois derniers résidus de GABA-B1-CT (LYK) codent un ligand pseudo-PDZ et que les protéines à domaines PDZ sont impliquées dans la régulation du ciblage nucléaire et de la stabilité de protéines, en complément de leur rôle d’échaffaud à la surface cellulaire, nous avons muté les trois derniers résidus de GABA-B1-CT en alanines. Cette mutation a complètement annulé les effets de GABA-B1-CT sur l’induction d’ATF-4 et le décompte cellulaire. Cette deuxième série d’expériences suggère l’existence possible de fragments GABA-B1 intranucléaires régulés par le traitement agoniste et le protéasome dans les cellules DI-TNC1. Cette régulation d’ATF-4 dépend des résidus LYK de GABA-B1-CT, qui modulent la stabilité de GABA-B1-CT et favorisent peut-être la formation d’un complexe multiprotéique incluant GABA-B1-CT, ATF-4, de même qu’une protéine d’échaffaudage inconnue. En somme, nous démontrons que les sous-unités GABA-B1 localisées au RE, lorsque non-hétérodimérisées avec GABA-B2, demeurent capables de moduler les voies de signalisation de la prolifération, la différentiation et de la survie cellulaire, via le couplage de protéines G et possiblement la protéolyse régulée. Les mécanismes de signalisation proposés pourraient servir de nouvelle plate-forme dans la compréhension des actions retardées résultant de l’activation des récepteurs 7-TMs.GABA is the principal inhibitory neurotransmitter in the CNS and is implicated in brain development, synaptic plasticity and the pathogenesis of diseases such as epilepsy, anxiety disorders and chronic pain. In the current model of GABA-B function, there is a requirement for GABA-B1/B2 dimerization for targetting to the cell surface and effector coupling. However, there are certain brain regions (putamen), cell types (glial cells) and times during brain development where GABA-B1 is expressed in higher amounts than GABA-B2, suggesting that GABA-B1 might be functional alone or in association with unidentified partners, either at the cell surface or on the ER membranes. In this thesis, we first show the capacity of endogenous GABA-B1 receptors to activate the MAPK-ERK1/2 pathway in the DI-TNC1 glial-derived cell line which does not express GABA-B2. The underlying mechanisms remain incompletely defined but depend on Gi/o and PKC. Immunohistochemistry of endogenous receptors shows that GABA-B1 N-terminal antibodies recognize ER-localized proteins and that C-terminal (CT) antibody shows intranuclear distribution. This data suggests that fragments of the GABA-B1 receptor are generated by proteolysis and indeed we show that agonist treatment affects the intensity of certain C-terminal GABA-B1 fragments both in immunohistochemistry and western blots suggesting that the GABA-B1 receptor is subjected to regulated proteolysis. Since a 13-residue potential PEST sequence was localized immediately distal to the ER retention motif in the GABA-B1 CT, we examined proteasome regulation of the cleavage event. Following a 12h treatment with the proteasome inhibitor, epoxomicin, we detected increases in intranuclear staining for both GABA-B1 and a known interactor, the pro-survival transcription factor ATF-4, using confocal microscopy and by western blotting of nuclear extracts. These increases are due either to proteasome inhibition or activation of the ER stress pathway. In cells overexpressing GABA-B1-CT, ATF-4 induction and nuclear translocation, which normally follows epoxomicin treatment, was completely abolished. This observation was associated to a strong decrease in cell number. Since the last three residues of GABA-B1-CT (LYK) encode a pseudo-PDZ ligand and that PDZ domain protein regulate nuclear targeting and protein stability, in complement to their role in scaffolding at the cell surface, we mutated the last three residues of GABA-B1-CT to alanines. This mutation completely reversed the effect of GABA-B1-CT on ATF-4 induction and on cell number. This second set of data suggests the existence of agonist and proteasome-regulated intranuclear GABA-B1 fragments in DI-TNC1 cells. Further, the GABA-B1-CT pseudo-PDZ ligand appears to be critically important in regulating ATF-4 induction by modulating GABA-B1-CT stability and perhaps by favoring the formation of a multiprotein complex with ATF-4, ATF-4 interactors and an unknown scaffolding protein. Overall, we show that ER-localised GABA-B1 subunits, when not dimerized with GABA-B2, can still modulate proliferation, differentiation and survival pathways, both through G-protein coupling and regulated proteolysis. The signalling mechanisms which we propose could serve as a new platform in understanding the long term effects of 7-TM receptor activation

Impact of classic and paradoxical low flow on survival after aortic valve replacement for severe aortic stenosis

BackgroundLow flow (LF) can occur with reduced (classic) or preserved (paradoxical) left ventricular ejection fraction (LVEF). ObjectivesThe objective of this study was to compare outcomes of patients with low ejection fraction (LEF), paradoxical low flow (PLF), and normal flow (NF) after aortic valve replacement (AVR). MethodsWe examined 1,154 patients with severe aortic stenosis (AS) who underwent AVR with or without coronary artery bypass grafting. ResultsAmong these patients, 206 (18%) had LEF as defined by LVEF of 35 ml · m2. Aortic valve area was lower in low flow/LVEF groups (LEF: 0.71 ± 0.20 cm2 and PLF: 0.65 ± 0.23 cm2 vs. NF: 0.77 ± 0.18 cm2; p < 0.001). The 30-day mortality was higher (p < 0.001) in LEF and PLF groups than in the NF group (6.3% and 6.3% vs. 1.8%, respectively). SVi and PLF group were independent predictors of operative mortality (odds ratio [OR]: 1.18, p < 0.05; and OR: 2.97, p = 0.004; respectively). At 5 years after AVR, overall survival was 72 ± 4% in LEF group, 81 ± 2% in PLF group, and 85 ± 2% in NF group (p < 0.0001). ConclusionsPatients with LEF or PLF AS have a higher operative risk, but pre-operative risk score accounted only for LEF and lower LVEF. Patients with LEF had the worst survival outcome, whereas patients with PLF and normal flow had similar survival rates after AVR. As a major predictor of perioperative mortality, SVi should be integrated in AS patients’ pre-operative evaluation

Discordance de la gradation de la sévérité de la sténose aortique : prédicteurs échocardiographiques de bénéfice de survie associé au remplacement valvulaire aortique

INTRODUCTION : Il existe une discordance entre l’aire valvulaire aortique (AVA<1.0cm²) et le gradient moyen (GM<40mmHg) lors de l’évaluation de la sévérité de la sténose aortique (SA). OBJECTIF: Définir le bénéfice de survie associé au remplacement valvulaire aortique (RVA) en fonction des marqueurs échocardiographiques de sévérité de la SA. MÉTHODES : 1710 patients avec SA ont été séparés en 4 strates de sévérité selon AVA, AVA indexée, GM ou la vélocité aortique maximale (Vmax). Nous avons comparé la survie entre les groupes traités avec ou sans RVA dans chaque strate. RÉSULTATS : Les patients avec une AVA entre 0.8 et 1cm² avaient un bénéfice de survie significatif du RVA en multivarié. Un bénéfice était observé chez les patients avec strates de GM/Vmax non sévères et AVA<1cm². CONCLUSION : Le RVA peut être bénéfique chez un nombre substantiel de patients avec une AVA7<1cm², malgré des gradients non sévères

Overview of retrogressive landslide risk analysis in sensitive clay slope

Sensitive clays are known for producing retrogressive landslides, also called spread or flowslides. The key characteristics associated with the occurrence of these landslides on a sensitive clay slope must be assessed, and the potential retrogressive distance must be evaluated. Common risk analysis methods include empirical methods for estimating the distance of potential retrogression, analytical limit equilibrium methods, numerical modelling methods using the strength reduction technique, and the integration of a progressive failure mechanism into numerical methods. Methods developed for zoning purposes in Norway and Quebec provide conservative results in most cases, even if they don’t cover the worst cases scenario. A flowslide can be partially analysed using analytical limit equilibrium methods and numerical methods having strength reduction factor tools. Numerical modelling of progressive failure mechanisms using numerical methods can define the critical parameters of spread-type landslides, such as critical unloading and the retrogression distance of the failure. Continuous improvements to the large-deformation numerical modeling approach allow its application to all types of sensitive clay landslides

Compte-rendu : La figure de l'auteur : autorité et auctorialité dans l'Antiquité. Journée d'études du laboratoire junior ERAMA : Lyon, École Normale Supérieure, 26 mars 2013.

International audienceCompte-rendu des communications suivantes : Le bouvier comme didaskalos: enquête sur une posture auctoriale de la poésie bucolique, Hamidou RICHER (ENS de Lyon – HiSoMA – ERAMATite-Live: quelle auctoritas pour quel historien?, Gérard SALAMON (ENS de Lyon – HiSoMA)Auctoritatis esse scito gratia (Phèdre, Fables, 5, prol. 3): stratégies d’autorité chez le fabuliste Phèdre, Gwénaëlle HUBERT (Univ. Paris-Sorbonne– EA 1491 – ERAMA)Pompée auctor et l’auctoritas ou: la dure vie du commentateur, Anna ZAGO (Sc. Norm. Sup., Pisa)De la subjectivité auctoriale de la culture imprimée à l’intersubjectivité des cultures manuscrites et digitales, Claire CLIVAZ (Univ. Lausanne – IRSB

Deciphering of Adult Glioma Vulnerabilities through Expression Pattern Analysis of GABA, Glutamate and Calcium Neurotransmitter Genes

Adult infiltrating gliomas are highly aggressive tumors of the central nervous system with a dismal prognosis despite intensive multimodal therapy (chemotherapy and/or radiotherapy). In this study, we studied the expression, methylation and interacting miRNA profiles of GABA-, glutamate- and calcium-related genes in 661 adult infiltrating gliomas available through the TCGA database. Neurotransmitter-based unsupervised clustering identified three established glioma molecular subgroups that parallel major World Health Organization glioma subclasses (IDH-wildtype astrocytomas, IDH-mutant astrocytomas, IDH-mutant oligodendroglioma). In addition, this analysis also defined a novel, neurotransmitter-related glioma subgroup (NT-1), mostly comprised of IDH-mutated gliomas and characterized by the overexpression of neurotransmitter-related genes. Lower expression of neurotransmission-related genes was correlated with increased aggressivity in hypomethylated IDH-wildtype tumors. There were also significant differences in the composition of the tumor inflammatory microenvironment between neurotransmission-based tumor categories, with lower estimated pools of M2-phenotype macrophages in NT-1 gliomas. This multi-omics analysis of the neurotransmission expression landscape of TCGA gliomas&mdash;which highlights the existence of neurotransmission-based glioma categories with different expression, epigenetic and inflammatory profiles&mdash;supports the existence of operational neurotransmitter signaling pathways in adult gliomas. These findings could shed new light on potential vulnerabilities to exploit in future glioma-targeting drug therapies