Cloning and purification of Banana streak OL virus coat protein fragment

O objetivo deste trabalho foi clonar e induzir a expressão de fragmento da proteína capsidial de Banana streak OL virus (BSOLV-CP) em Escherichia coli, bem como purificar a proteína recombinante obtida. Empregou-se um par de iniciadores específicos para amplificar, em PCR, um fragmento de aproximadamente 390 pb, da região codificadora da porção central da BSOLV‑CP. O fragmento obtido foi clonado em vetor pGEM-T Easy, subclonado em vetor pQE-30 e transformado em células de E. coli M15 (pREP4) por choque térmico. A expressão da proteína foi induzida por tiogalactopiranosídeo de isopropila (IPTG), e a proteína recombinante BSOLV-rcCP de 14 kDa foi detectada em Western blot e Dot blot. A expressão da proteína BSOLV‑rcCP abre novas possibilidades para a obtenção de antígenos para a produção de antissoros contra o BSOLV.The objective of this work was to clone and to induce the expression of a fragment of Banana streak OL virus coat protein (BSOLV-CP) in Escherichia coli, as well as to purify the obtained recombinant protein. Two specific primers were used for the PCR‑amplification of approximately 390‑bp fragment of the codifying region of the BSOLV-CP central portion. The obtained fragment was cloned in pGEM-T Easy vector, subcloned in pQE-30 expression vector and transformed into competent E. coli M15 (pREP4) cells by heat shock. The protein expression was induced by isopropyl thiogalactopyranoside (IPTG) and the 14-kDa BSOLV-rcCP recombinant protein was detected in Western and Dot blotting. The expression of the BSOLV-rcCP protein enables new approaches to the obtention of antigens for the antisera production against BSOLV

Selection of Trichoderma spp. strains for the control of Sclerotinia sclerotiorum in soybean

O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro e in vivo, o potencial de isolados de Trichoderma spp.no controle de Sclerotinia sclerotiorum em soja (Glycine max) e identificar molecularmente as estirpes que mais se destacaram. O efeito de 120 isolados de Trichoderma spp. sobre a viabilidade de escleródios de S. sclerotiorum foi avaliado in vitro, por imersão em suspensão de conídios dos antagonistas e plaqueamento em meio de cultura. As estirpes que mais se destacaram foram avaliadas, in vivo, em casa de vegetação, no controle do patógeno em plantas e sementes de soja 'Pintado'. Dos 120 isolados testados in vitro, 22 inibiram em 100% a germinação de escleródios. Em casa de vegetação, cinco estirpes inibiram os efeitos prejudiciais do patógeno na germinação das sementes e duas estirpes proporcionaram aumento de até 67% na massa de matéria seca das plantas. As melhores estirpes foram identificadas como T. koningiopsis (3 estirpes), T. asperelloides (3), T. atroviride (2) e T. virens (1). Trichoderma spp. conseguem proteger plantas de soja 'Pintado' do efeito prejudicial de S. sclerotiorum ao mesmo tempo em que podem promover o crescimento da parte aérea em condições de casa de vegetação.The objective of this work was to evaluate, in vitro and in vivo, the potential of Trichoderma spp. strains to control Sclerotinia sclerotiorum in soybeans (Glycine max) and to perform the molecular identification of the best performing strains. The effect of 120 strains of Trichoderma spp. on the viability of S. sclerotiorum sclerotia was evaluated in vitro through immersion in suspension of conidia from the antagonists and plating in culture medium. The best performing strains were evaluated in vivo, in a greenhouse, for control of the pathogen inoculated on 'Pintado' soybean seeds and plants. Of the 120 strains tested in vitro, 22 strains of Trichoderma spp. caused 100% inhibition of sclerotia germination. In the greenhouse, five strains inhibited the negative effect of the pathogen on seed germination and two strains increased in up to 67% plant dry matter. The best performing strains were identified as T. koningiopsis (3 strains), T. asperelloides (3), T. atroviride (2), and T. virens (1). Trichoderma strains are able to protect soybean plants from the harmful effect of S. sclerotiorum and, at the same time, they can promote the growth of the aerial part in greenhouse conditions

Behavioral investment in the neotropical fire ant Solenopsis saevissima (Smith, 1855) during the critical phase of colony establishment / Orçamento comportamental na formiga neotropical Solenopsis saevissima (Smith, 1855) durante a fase crítica de estabelecimento da colônia

Behavioral investment of fire ant queens during the foundation of a new colony may be related to alone foundation (haplometrosis) or a group foundation (pleometrosis). Thus, the objective of the present study was to evaluate, through behavioral records, how Solenopsis saevissima queens behave during preemergence until the 3rd post-emergence week, in haplometrosis and pleometrosis, in the initial periods of the colony. For this, an ethogram of queens and workers were elaborated, to later evaluate the behavioral budget in both types of foundations. From a total behavioral budget of 8014 minutes of observation, it can be seen that the queen's behavioral acts change according to the colony cycle period (Pre-Egg Period, Egg Period, Larvae Period, Pupal Period and Post-Emergence Period), and that at first are directed to behaviors of exploration and interaction with the environment, such as walking and atennating the container and the tube. From the appearance of the first eggs, larvae or pupae, the interaction with the offspring becomes more intense. The post-emergency was first hit by haplometrosis queens and the workers started to actively protect the immature as well as do other activities. Thus, the period of the colony's development cycle is a determining factor in the manifestation of queens' behavior, which shows whether the foundation is alone or in groups.

Promoção de crescimento e controle de tombamento de plântulas de pepino por rizobactérias

The aim of this work was to evaluate the rhizobacteria effect on cucumber seedling growth and in the control of damping-off disease Pythium aphanidermatum. In laboratory, the following tests were carried out: degradation of 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC); colonization of cucumber root system; and, the capacity to antagonize the pathogen. The best isolates were identified through determination of 16S rDNA gene sequences. Thirty-seven isolates, among 165 tested, enhanced the dry weight of cucumber plants in up to 63%. From these 37, only one isolate (N13 – Pseudomonas fluorescens) reduced the incidence of pre-emergence damping-off disease by 25%; 21 isolates antagonized P. aphanidermatum in vitro, colonized the cucumber roots, and degradated ACC, as the only source of nitrogen. Out of ten most effective isolates, five were identified as members of the genus Bacillus, four of Pseudomonas and one of Stenotrophomonas. Out of the 165 tested rhizobacteria isolates, seven have potential to promote cucumber plant growth, and one to control P. aphanidermatum damping-off disease.O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de rizobactérias, no crescimento de plântulas de pepino e no controle de tombamento, causado por Pythium aphanidermatum. Foram realizados em laboratório ensaios de: degradação de 1-aminociclopropano-1-carboxilato (ACC); colonização das raízes de plântulas de pepino; e pareamento de culturas. A identificação dos melhores isolados foi feita pela determinação das seqüências do gene 16S rDNA. Trinta e sete isolados, dos 165 testados, aumentaram a massa de matéria seca das plantas de pepino em até 63%. Desses, somente um isolado (N13 – Pseudomonas fluorescens) reduziu o tombamento de plântulas em 25%; 21 isolados inibiram o crescimento micelial de P. aphanidermatum, colonizaram o sistema radicular das plantas de pepino e cresceram em presença de ACC como única fonte de nitrogênio. Dos dez isolados que apresentaram resultados satisfatórios, cinco foram identificados como pertencentes aos gêneros Bacillus, quatro Pseudomonas e um Stenotrophomonas. Dos 165 isolados de rizobactérias testados, sete possuem potencial para promover o crescimento de plantas de pepino e um para controlar o tombamento causado por P. aphanidermatum

Experimental Frog Virus 3 infection using Brazilian strain: amphibians susceptibility

Um número alarmante de notificações globais sobre surtos de mortalidade de anfíbios tem sido realizado nos últimos anos. As doenças emergentes destacam-se como as principais causas potenciais. O ranavírus é uma doença altamente infecciosa disseminada em todo o mundo, capaz de afetar até outros animais ectotérmicos como peixes e répteis. Uma questão importante em relação a essa patologia é a falta de sinais clínicos antes de levar à morte. Com o objetivo de compreender melhor a suscetibilidade dos anuros, o presente trabalho analisou a taxa de sobrevivência de rãs-touro (Lithobates catesbeianus), desafiadas com três doses de uma estirpe brasileira do Frog virus 3 (FV3). A análise de qPCR indicou baixa taxa de infectividade nesses animais, tanto como larvas quanto como adultos. Procurando esclarecer os resultados, foram formuladas as seguintes hipóteses: 1) A quantidade de inóculo aplicada nas rãs foi insuficiente para desencadear uma infecção; 2) Para que o FV3 dê sinais clínicos nesta espécie, é necessário um cofator; 3) Os animais sofreram infecção por FV3, mas se recuperaram no decorrer do experimento, e 4) O inóculo utilizado pode ter sido de baixa virulência. Finalmente, foi discutida a presença de sinais clínicos reais de ranavírus e levantada a hipótese mais provável.An alarming number of global warnings concerning amphibian mortality outbreaks have been released in recent years. Emerging diseases stand out as the main potential causes. Ranavirus is a worldwide-spread highly infectious disease capable of affecting even other ectothermic animals such as fish and reptiles. One major issue regarding this pathology is the lack of clinical signs before it leads up to death. Aiming at having a better understanding of anurans susceptibility, this study analyzed bullfrog (Lithobates catesbeianus) survival rate, when challenged with three doses of a Brazilian strain of Frog Virus 3 (FV3). The qPCR analysis indicated a low infectivity rate in these animals both as larvae and as adults. To elucidate the results, the following hypothesis was performed: 1) The amount of inoculum used on the frogs was insufficient to trigger an infection; 2) For the FV3 to produce clinical signs in this species, there is the need for a cofactor; 3) The animals did undergo FV3 infection but recovered in the course of the experiment, and 4) The inoculum utilized might have been low-virulence. Finally, the presence of actual clinical signs of ranavirus is discussed, with the more likely hypothesis

Protection of coffee plants against brown eye spot by acibenzolar-S-methyl and harpin protein

O objetivo deste trabalho foi avaliar, em cafeeiro suscetível, a proteção contra a cercosporiose, pela aplicação da proteína harpina e acibenzolar-S-metil (ASM), e avaliar seu efeito na germinação de conídios e crescimento micelial in vitro. No primeiro experimento, cafeeiros tratados com ASM (25, 50, 100, 200 µg mL-1) receberam o inóculo de uma suspensão de conídios de Cercospora coffeicola, e a severidade da doença foi avaliada aos 30 e 60 dias após a inoculação. No segundo experimento, cafeeiros foram aspergidos com harpina (7,5, 15, 30, 60, 120 µg mL-1), tendo-se utilizado o mesmo procedimento. No terceiro experimento, plantas aspergidas previamente com ASM (200 µg mL-1) ou harpina (15 µg mL-1) foram tratadas novamente com esses produtos, aos 30 dias após terem recebido inóculo do patógeno. ASM e harpina protegeram os cafeeiros contra cercosporiose 30 dias após a inoculação com C. coffeicola. Entretanto, 60 dias após a inoculação, apenas o ASM (200 µg mL-1), com uma ou duas aplicações, protegeu as plantas contra C. coffeicola. Os cafeeiros foram protegidos contra cercosporiose, em reaplicação de harpina, 30 dias após o primeiro tratamento com essa proteína. Harpina e acibenzolar-S-metil não inibiram o desenvolvimento micelial nem a germinação in vitro dos conídios do patógeno.The objective of this work was to evaluate the protective effect of harpin protein and acibenzolar-S-methyl (ASM) against brown eye spot, in coffee plants, and its effect on in vitro conidial germination and mycelial growth of Cercospora coffeicola. In the first assay, plants treated with ASM (25, 50, 100, 200 µg mL-1) received the inoculum of a C. coffeicola conidial suspension, and the disease severity was evaluated 30 and 60 days after inoculation. In the second assay, plants were sprayed with harpin (7.5, 15, 30, 60, 120 µg mL-1) following the same procedure. In a third trial, plants previously sprayed with ASM (200 µg mL-1) or harpin (15 µg mL-1) were treated again with these products 30 days after pathogen inoculation. ASM and harpin protected the coffe plants against brown eye spot 30 days after inoculation with C. coffeicola. However, 60 days after inoculation, only ASM (200 µg mL-1), with one or two applications, conferred protection to plants against C. coffeicola. Coffee plants were protected against cercosporiosis, when harpin was reapplied on plants 30 days after a previous treatment with this protein. Harpin and acibenzolar-S-methyl did not inhibit the in vitro conidial germination and the mycelial growth of the pathogen

Growth promotion and resistance induction against anthracnose in cucumber using Trichoderma spp.

O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito de 60 isolados de Trichoderma e do produto Trichodermil na promoção do crescimento e na indução de resistência sistêmica à antracnose, causada por Colletotrichum lagenarium em pepineiro, além de identificar as espécies dos isolados de Trichoderma spp. efetivas como indutores de resistência. Nos experimentos de promoção de crescimento, os isolados de Trichoderma spp. foram submetidos à inoculação no substrato e, após 21 dias, a massa de matéria seca da parte aérea das plantas foi mensurada. Nos experimentos de indução de resistência, os isolados que promoveram crescimento foram introduzidos no substrato, na base das plantas, sete dias antes da inoculação de C. lagenarium nas folhas. O isolado que apresentou melhor desempenho foi avaliado quanto à redução dos sintomas de antracnose, em aplicações aos 3, 7 ou 14 dias antes da inoculação do patógeno, e quanto à capacidade de aumentar a atividade de peroxidase. Dezenove isolados e o Trichodermil promoveram o crescimento de pepineiro em até 100% e conferiram proteção à antracnose em até 88,39%. O isolado IB 31/06 reduziu a severidade da doença nos intervalos de tempo avaliados. Não foi observado aumento significativo de peroxidase, sete dias após o tratamento com IB 31/06, nas plantas tratadas e infectadas com o patógeno, em comparação às plantas infectadas. O sequenciamento gênico dos dezenove isolados permitiu a identificação de sete espécies distintas de Trichoderma. The objective of this work was to determine the effect of 60 isolates ofTrichoderma and the product Trichodermil on the growth promotion and on the induction of systemic resistance to anthracnose caused byColletotrichum lagenarium in cucumber, and to identify isolates ofTrichoderma spp. effective as resistance inductors. In the assays of growth promotion, the Trichoderma spp. isolates were inoculated in the substrate and, after 21 days, the shoot dry weight of the plants was measured. In the experiments of resistance induction, the isolates which promoted growth were inoculated in the substrate, at the base of the plants, seven days beforeC. lagenarium inoculation in the leaves. The isolate which showed the best performance was evaluated for anthracnose symptom reduction in applications at 3, 7 or 14 days before the pathogen inoculation, and for its ability of increasing the peroxidase activity. Nineteen isolates and Trichodermil promoted cucumber growth up to 100% and conferred plant protection against anthracnose up to 88.39%. The isolate IB 31/06 reduced the disease severity at the evaluated time intervals. No significant peroxidase increase was observed seven days after treatment with IB 31/06, in the plants treated and infected with the pathogen, in comparison to infected plants. Gene sequencing of the 19 isolates allowed for the identification of seven Trichoderma different species

Plant growth promotion of common bean and anthracnose control by Trichoderma spp.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de Trichoderma spp. em promover o crescimento de plantas de feijão e reduzir a severidade da antracnose do feijoeiro (Colletotrichum lindemuthianum), bem como identificar os isolados mais eficientes. Sessenta isolados de Trichoderma spp. foram avaliados quanto à capacidade de promoção do crescimento nas plantas. Os sete isolados que mais se destacaram foram adicionados ao substrato de cultivo e avaliados quanto à redução na severidade da antracnose em plantas de feijão tratadas com conídios de C. lindemuthianum. Os mais eficientes no controle da doença foram identificados por sequenciamento de DNA. O isolado IB 28/07 foi avaliado nas concentrações 0,5, 1, 1,5 e 2% (peso:volume), que reduziram a severidade da doença em 41,51, 55,15, 81,82 e 96,06%, respectivamente. Os isolados mais eficientes de Trichoderma spp. podem proporcionar aumentos superiores a 30% na produção de matéria seca da parte aérea das plantas e reduzir a severidade da doença entre 63 e 98%. Esses isolados foram identificados como pertencentes às espécies Trichoderma harzianum, T. strigosum e T. theobromicola.The objective of this work was to evaluate the ability of Trichoderma spp. to promote growth of common bean plants and to reduce severity of anthracnose (Colletotrichum lindemuthianum), as well as to identify the best performing isolates. Sixty Trichoderma spp. isolates were evaluated as to their capacity to promote growth in common bean. The seven isolates that stood out were added to the culture substrate and assessed for reduction in severity of anthracnose in bean plants treated with C. lindemuthianum conidia. The most efficient isolates in controlling the disease were identified by DNA sequencing. The IB 28/07 isolate was evaluated in the concentrations 0.5, 1, 1.5, and 2% (weight:volume), which reduced disease severity in 41.51, 55.15, 81.82, and 96.06%, respectively. The most efficient Trichoderma spp. isolates can promote increases above 30% in dry matter production and reduce disease severity between 63 and 98%. These isolates were identified as belonging to the species Trichoderma harzianum, T. strigosum, and T. theobromicola