Determinação da atividade gelatinolítica de metaloproteases de matriz em diferentes linhagens celulares

Orientador: Silvio Marques ZanataCoorientadora: Michele DietrichMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasResumo : A matriz extracelular (MEC) é constituída por uma rede complexa de macromoléculas, incluindo laminina, fibronectina, vitronectina, entactina, tenascina, agrecan, vários tipos de colágenos e proteoglicanos. Influencia processos celulares básicos como proliferação, sobrevivência, diferenciação, migração e adesão e atua como um reservatório para uma variedade de moléculas bioativas, citocinas e fatores de crescimento que direcionam o comportamento celular. A disposição das macromoléculas na matriz é de crucial importância e a sua proteólise é um dos principais fatores que levam ao remodelamento da MEC. É neste contexto em que se destacam as metaloproteases de matriz (MMP), uma família de enzimas com mais de 25 membros identificados até hoje. As MMPs são responsáveis pela remodelação da matriz extracelular em vários processos fisiológicos e patológicos como ovulação, implantação do blastocisto, crescimento ósseo, cicatrização, angiogênese, invasão de tumores, metástase, arteriosclerose, artrite reumatóide, doença periodontal, esclerose múltipla e doença de Alzheimer. A expressão de diversos membros da família das MMPs pode ser detectada no sistema nervoso central em todos os tipos celulares, desde neurônios até astrócitos, microglia e oligodendrócitos. Foi demonstrado que a modelação da arquitetura da matriz extracelular intrasináptica por MMPs é capaz de afetar eventos como a aprendizagem, memória e plasticidade sináptica, desencadeados pelo neurotransmissor glutamato, no hipocampo. Por este motivo, foi investigado o efeito da droga anti-glutamatérgica lamotrigina na atividade gelatinolítica de MMPs. Conhecendo a importância da matriz extracelular e das MMPs nos processos de migração, adesão e desenvolvimento neural, resolveu-se investigar também o possível envolvimento de PrPc, sialoglicoproteína de membrana, altamente expressa no sistema nervoso central que pode atuar como molécula de adesão, na atividade gelatinolítica de MMPs. Para isso foi necessário padronizar um ensaio baseado em microplacas de poliestireno para determinação da atividade gelatinolítica de MMP, que emprega gelatina biotinilada. O princípio consiste na capacidade da estreptavidina capturar a biotina ligada aos fragmentos de gelatina digeridos por MMPs, de tal forma que quanto maior a concentração de enzima na amostra, maior será a digestão do substrato e consequentemente menor a absorbância. Foram escolhidas quatro linhagens celulares: uma de fibroblastos imortalizados e três tumorais. Da linhagem imortalizada de fibroblasto murino (MEF), foi utilizada uma cepa selvagem (WT) e outra nocaute (KO) para a proteína príon celular PrPc. Das três linhagens tumorais, uma é proveniente de um adenocarcinoma cervical humano (HeLa), e as duas restantes são provenientes de tecido do sistema nervoso: uma de glioblastoma multiforme humano (T98G) e outra de neuroblastoma murino (N2a). Através do presente trabalho podemos concluir que todas as linhagens celulares aqui analisadas provavelmente secretam uma mistura complexa de várias proteases capazes de digerir colágeno tipo I desnaturado. Além disso, verificamos que, nas condições e métodos aqui utilizados, essa atividade proteolítica é aumentada na ausência da proteína príon celular na superfície da célula, mas não é alterada pela presença da droga antiglutamatérgica lamotrigina no meio de cultivo. No entanto, mais estudos são necessários para o isolamento e caracterização das enzimas aqui detectadas

Análise da expressão e atividade da Metaloprotease - 9 em Fibroblastos do tipo selvagem e nocaute para a Proteína Príon Celular.

Orientador : Dr. Prof. Silvio Marques ZanataDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba,24/02/2011Bibliografia: fls. 88-97Resumo: A proteína príon celular (PrPC) é uma proteína de membrana ancorada por glicosilfosfatidilinositol de distribuição ubíqua. Embora se saiba que a sua isoforma anormal scrapie (PrPSc) é o agente etiológico das encefalopatias espongiformes transmissíveis, a função fisiológica de PrPC permanece em debate. Dados na literatura sugerem que as funções de PrPC incluem sobrevivência neuronal, europroteção, formação e manutenção de sinapses, atividade anti-oxidante e anti-apoptótica, participação em processos imunológicos e nos fenômenos de adesão celular, invasão e metástase de células tumorais. Sabe-se que PrPC interage com uma ampla gama de ligantes, como as proteínas da matriz extracelular (MEC) laminina e vitronectina. A disposição destas e outras proteínas de MEC é constantemente remodelada por uma família de enzimas proteolíticas conhecidas como Metaloproteases de Matriz (MMPs). Entre as MMPs, a MMP-9 tem recebido especial atenção na literatura devido à sua participação nos processos de aprendizado e memória, neuroplasticidade, neuroproteção, resposta imune, adesão célula-matriz, migração, invasão e metástase de células tumorais. O objetivo deste trabalho é investigar uma ossível relação funcional entre a proteína príon celular e a metaloprotease 9, duas proteínas que são expressas nos mesmos tipos celulares e participam dos mesmos processos fisiopatológicos. Para isso, analisamos a expressão e atividade de MMP-9 em células tipo selvagem e nocaute para PrPC. Não foi encontrada uma diferença significativa entre a expressão ou atividade gelatinolítica da MMP-9 entre as duas linhagens celulares. Analisamos então o efeito da superexpressão de PrPC em células HEK 293T sobre a secreção de MMP-9. Os resultados que obtivemos sugerem que superexpressão de PrPC não altera a atividade de MMP-9 em HEK 293T. Por último, a expressão de PRNP foi silenciada em células de tumor de mama MDA-MB-435 com RNA de interferência para e a expressão gênica de MMP-9 analisada. Os ados obtidos indicam que silenciamento do gene que codifica PrPC em células tumorais MDA-MB-435 não altera a expressão gênica de MMP-9. Concluindo, nos modelos experimentais utilizados neste trabalho, a expressão e atividade gelatinolítica de MMP- 9 parece ser independente da proteína príon celular.Abstract: The cellular príon protein (PrPC) is a glycosylphosphatidylinositol-anchored membrane protein of ubiquitous distribution. Although it is known that its abnormal isoform scrapie (PrPSc) is the ethiological agent of transmissible spongiform encephalopathies, the physiological function of PrPC is still under debate. Data in the literature suggest that PrPC functions include neuronal survival, neuroprotection, formation and maintenance of synapses, antioxidant and antiapoptotic-activity, participation in immunological processes and in cell adhesion, invasion and metastasis of tumor cells phenomena. It is known that PrPC interacts with a wide range of ligands, such as the extracellular matrix (ECM) proteins laminin and vitronectin. The arrangement of these and other ECM proteins is constantly remodeled by a family of proteolitic enzymes known as Matrix Metalloproteinases (MMPs). Among the MMPs, MMP-9 has received special attention in the literature due to its participation in learning and memory processes, neuroplasticity, neuroprotection, immune response, cell-matrix adhesion, migration, invasion and metastasis of tumor cell. The aim of this study is to investigate a possible functional relationship between the cellular prion protein and etaloprotease-9, two proteins that are expressed in the same cell types and participate in the same physiopathological processes. In order to do that, we analysed MMP-9 expression and activity in PrPC wild type and knockout cells. A significant difference between the two cell lines in MMP-9 expression or gelatinolytic activity was not found. Then we analysed the effect of PrPC overexpression in MMP-9 secretion in HEK 293T cell. Our results suggest that MMP-9 activity is not altered by PrPC overexpression in HEK 293T cells. Finally, PRNP expression was silencied in MDA-MB-435 breast cancer cells with interfering RNA and the MMP-9 gene expression was analysed. Our data indicate that MMP-9 gene expression is not altered by PrPC encoding gene silencing in MDA-MB 435 tumor cells. In conclusion, in the experimental models used in his study, MMP-9 expression and gelatinolytic activity seems to be independent of PrPC

Adolescents' sleep/wake patterns and school schedules: towards flexibility

In the literature, two main trends may be identified in the countermeasures associated to adolescents’ sleep restriction: sleep education and changes in the school start times (SSTs). However, school educational programmes have been able to increase knowledge about sleep, which did not necessarily result in behavioural changes. Later SSTs have been proposed as a strategy to reduce the adolescents’ sleep restriction, but there is no consensus about the change. Longitudinal studies in adolescent populations are urgently needed in order to determine the efficacy of interventions aiming at a change in SSTs. Academic, behavioural, health and well-being variables could be monitored for an extensive period before and after implementing the new school schedule options, thereby enabling a within-subject experimental design. It is no longer acceptable to impose the “one-size-fits-all” approach on the SSTs

Bullying in old age: A qualitative study on older adults’ perceptions about being bullied

Significant demographic changes and a growing aging population increasingly emphasize the importance of assessing phenomena of violence against older adults, who constitute a vulnerable population. Therefore, bullying in old age is a poorly studied phenomena, but of growing importance. This study aims to analyze the perspectives of bullying in old age, using qualitative research at a cross-national level. We interviewed 173 older participants aged 65–91 years. Participants were Portuguese and English and lived in the community. Participants were subjected to semi-structured interviews. All the interviews went through a process of content analysis. Sample recruitment occurred through initial telephone contact, followed by a request to participate. Outcomes of content analysis produced seven themes, all of them associated with bullying experiences such as compromised learning capacity, loss of sense of agency and decision-making, asexuality, less attractive appearance, less social skills, gender discrimination, and less financial resources. Portuguese older adults felt mostly bullied for their loss of sense of agency and decision-making, less attractive appearance, less social skills, and less financial resources, while English participants mostly felt bullied for their compromised learning capacity, gender discrimination, and asexuality. The themes identified as being the most prominent in bullying are valuable guidelines for social policies and interventions toward bullying among older adults. Considering the scarcity of studies on bullying in older adults, this study is relevant for understanding the experience of older adults in relation to being bullied and for implementing psychosocial intervention programs including bullying situations that affect community-dwelling older adults.Fundação para a Ciência e Tecnologia - FCTinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio

Re-examining sleep׳s effect on motor skills: How to access performance on the finger tapping task?

AbstractHere our goal was to determine the magnitude of sleep-related motor skill enhancement. Performance on the finger tapping task (FTT) was evaluated after a 90min daytime nap (n=15) or after quiet wakefulness (n=15). By introducing a slight modification in the formula used to calculate the offline gains we were able to refine the estimated magnitude of sleep׳s effect on motor skills. The raw value of improvement after a nap decreased after this correction (from ~15% to ~5%), but remained significantly higher than the control. These results suggest that sleep does indeed play a role in motor skill consolidation

Re-examining sleep׳s effect on motor skills: How to access performance on the finger tapping task?

AbstractHere our goal was to determine the magnitude of sleep-related motor skill enhancement. Performance on the finger tapping task (FTT) was evaluated after a 90min daytime nap (n=15) or after quiet wakefulness (n=15). By introducing a slight modification in the formula used to calculate the offline gains we were able to refine the estimated magnitude of sleep׳s effect on motor skills. The raw value of improvement after a nap decreased after this correction (from ~15% to ~5%), but remained significantly higher than the control. These results suggest that sleep does indeed play a role in motor skill consolidation

Project management practices in private Portuguese organizations

Organizations are experiencing increasing pressure that is amplified by the current economic crises we are facing, where innovation, cost reduction, resource optimization, quality and customer satisfaction are increasingly even more important issues. Likewise, project management appears as a subject that has been growing over the years helping organizations to meet their goals, through the implementation of their projects, following good practices that are documented in various standards and methodologies. This research focuses on such practices. The goal was to find which are the most used project management tools and techniques in Portuguese Private Organizations and what factors influence their use

Úlcera Por Pressão, Custos da Doença e Impacto Orçamental

A preocupação em analisar custos com a prevenção e tratamento das UPP pelas organizações é rara, não existindo plataformas fiáveis de registo que traduzam a sua magnitude e impacto na qualidade de vida. Objetivo: Determinar os custos totais de uma UPP de categoria IV numa unidade hospitalar em dez anos de existência (2008, 2012, 2017, 2018). Metodologia: Estudo retrospetivo de um utente com UPP, há 10 anos. Recolha de dados, SCLINICO, GLINTT e serviços financeiros. Os custos totais englobaram: custos diretos fixos (internamento/consulta externa) e custos variáveis. O custo de material de pensos envolveu o preço de cada apósito, periodicidade e duração do tratamento. Excluíram-se área da ferida e custos indiretos. Na qualidade de vida recorreu-se à análise custo-utilidade, QALYs. Resultados: Em 2008, internamento com UPP (IV), material de penso (60€), custo direto total 193 478,22€. 2012, UPP (II) tratamento local (23€), custo direto total 87 755,30€. 2017, UPP (IV) internamento/consulta externa, custo direto total 107 907,06€/2056,10€. 2018, internamento/consulta externa, custo material de penso (2361€/973,50€) custo direto total 61 947,02€/1567,50€. Nos últimos 2 anos, perdeu 1 ano de qualidade de vida. Conclusões: 2008, ano com custos totais mais elevados e 2018 com custos totais mais baixos, apesar dos custos com material de pensos serem mais elevados, representando 2,47% da despesa total do serviço de cirurgia. Quanto mais elevados os custos com o material, menor o tempo de internamento. O ano QALY perdido nem sempre representa perda de vida com qualidade. Despesa total nos 10 anos, 454 711,20€.N/

Antibacterial hydrogel dressings and their applications in wound treatment

Antimicrobial hydrogels, both in semi-stiff sheets and amorphous form, have been extensively studied for wound management mainly owing to their high-water content, lower wound adherence, promoted autolysis debridement, epithelial migration, and granulation growth. Benefiting from the recent advances in materials science, biotechnology, and a growing understanding of wound microbiology, an extensive variety of antimicrobial hydrogels have been developed. These novel antimicrobial hydrogels can prevent and control microbial infection. In addition, they possess wound healing functions for improved wound management. This chapter will provide a comprehensive summary of the current studied antimicrobial hydrogels in literature and available hydrogel dressings in the market, including their design, fabrication method, and wound management efficacy in vitro or in vivo. The detailed and critical discussion of the advantages and disadvantages of each type of hydrogel dressing will provide insights into the future design of antimicrobial hydrogels for better management of wounds in clinical application

12º Congresso Nacional de Psicologia da Saúde: Promover e Inovar em Psicologia da Saúde: Actas

Promover e inovar em psicologia da saúde é o tema proposto para o Nacional de Psicologia da Saúde, que se realiza em Lisboa, no ISPA – Instituto Universitário de Ciências Psicológicas, Sociais e da Vida, numa organização conjunta da Sociedade Portuguesa de Psicologia do Saúde e do William James Center for Research do ISPA – Instituto Universitário. Como habitualmente, o primeiro objectivo deste congresso que se realiza a cada dois anos, e juntar os investigadores e profissionais que desenvolvem a sua actividade neste extenso campo designado como de Saúde e que, cobrindo os tradicionais contextos de saúde – hospitais e centros de saúde – se espraiam depois em direcções muito diversas em que a saúde e considerada um valor de todos os dias: a educação, o mundo organizacional, as instituições de iniciativa privada, empresarial, social, de apoio e assistenciais. Claro que o juntar num mesmo espaço físico todos estes investiga - dores, académicos, professores, alunos e profissionais da psicologia permitindo interacções directas esta ao serviço daquilo que tem sido apanágio da Sociedade Portuguesa de Psicologia da Saúde nestes mais de 20 anos de actividade: a promoção e divulgação da Psicologia da Saúde e da investigação científica. Serve, sobretudo, como forma de partilha de conhecimento e de experiencias. Pretende-se, assumidamente, possibilitar a partilha do estado da arte daquilo que são as práticas, reflexões, contributos teóricos e dados de investigação em direcção ao desenvolvimento continuado e alicerçado do conhecimento científico adentro da Psicologia da Saúde. A Sociedade Portuguesa de Psicologia da Saúde junta-se na organização deste congresso o William James Center for Research do ISPA – Instituto Universitário, numa pratica já consagrada pelos muitos anos de realização de diferentes congressos e que consiste em rodar por diferentes universidades e unidades de investigação o palco desta iniciativa. Em 2018, o 12o Congresso Nacional de Psicologia da Saúde, contara com 461 comunicações, sendo 6 delas conferencias proferidas por conferencistas convidados e 455, submetidas e aceites pela Comissão Cientifica do congresso e apresentadas em simpósios e comunicações livres nos formatos orais e escritos. Das comunicações apresentadas, cujos resumos são apresentados num suplemento da revista Psicologia, Saúde & Doenças, órgão oficial da SPPS, alguns dos autores submeteram os artigos respectivos a apreciação do Conselho Cientifico que procedeu a revisão de todos os trabalhos e escolheu 29 textos para serem apresentados no 1o numero de 2018 da revista Psicologia, Saúde & Doenças e 88 para serem publicados no livro de Actas do Congresso. Algumas das comunicações submetidas, e ainda um maior numero de artigos, não foram aceites para apresentação e publicação, por diversas razoes que vão desde a não observância das normas propostas, a fragilidade teórica e/ ou metodológica, ate a impossibilidade dos autores procederem as alterações propostas no curto tempo disponível para a preparação dos textos. O desafio que a SPPS coloca a si mesma em cada novo congresso e de conseguir num tempo recorde, disponibilizar o livro de atas do congresso no primeiro dia do mesmo, exigindo da parte da Comissão Cientifica, uma notável colaboração que aqui se reconhece e agradece. Promover a Psicologia da Saúde e inovar, num tempo em que a saúde não tem sido uma prioridade dos poderes estabelecidos, e um desafio que se coloca a todos e que esperamos que este 12o Congresso Nacional de Psicologia da Saúde possa ser um marco de encontros, caminhos e soluções.info:eu-repo/semantics/publishedVersio