Localisation of aphidicolin-induced break points in Holstein-Friesian cattle (Bos taurus) using RBG-banding

Fragile sites (FS) seem to play a role in genome instability and may be involved in karyotype evolution and chromosome aberrations. The majority of common fragile sites are induced by aphidicolin. Aphidicolin was used at two different concentrations (0.15 and 0.30 μM) to study the occurrence of FS in the cattle karyotype. In this paper, a map of aphidicolin induced break points and fragile sites in cattle chromosomes was constructed. The statistical analysis indicated that any band with three or more breaks was significantly damaged (P < 0.05). According to this result, 30 of the 72 different break points observed were scored as fragile sites. The Pearson correlation test showed a positive association between chromosome length and the number of fragile sites (r = 0.54). On the contrary, 21 FS were identified on negative R bands while 9 FS were located on positive R bands

Descondensación de la heterocromatina en bovinos criollos portadores de la translocación robertsoniana (rob1; 29). acción del inductor 5 - azacitidina - C

La translocación Robertsoniana (rob1; 29) está ampliamente distribuida en razas comerciales y en reservas genéticas de bovinos Criollos americanos. Se ha descrito un enlentecimiento en el desarrollo de embriones portadores de esta aneuploidía, frente a embriones normales. La acción de la 5–aza–C, como agente desmetilante, permitiría descondensar la heterocromatina constitutiva o facultativa. En este trabajo se realiza inducción con el análogo de base 5–aza–C(10mM, 2 hrs) en cultivos linfocitarios de una hembra y un macho portadores de la rob1; 29, frente a bovinos Criollos normales. Se controla la acción desmetilante del inductor al identificar la despiralización del cromosoma X de replicación tardía en hembras y permitir el análisis de la despiralización de la cromatina en múltiples regiones de los autosomas (grandes, medianos, pequeños); de la rob1; 29 y del BTA1. Se discute la correlación existente entre regiones desmetiladas con la descondensación de la heterocromatina facultativa (condicional), relacionándola con la inestabilidad genómica, y la reprogramación epigenética.The Robertsonian translocation (rob1; 29) is widely spread in commercial breeds and specially in genetic reserve of American Creole cattle. It is also described a delay on embryo development in front of normal ones. The action of 5–aza–C, as an hypomethylated agent, could permitted to decondensate the constitutive or facultative heterochromatin. In this work we made induction with the 5–aza–C(10mM, 2 hrs) analogs, in lymphocyte cultures of female and male carriers and normal Creole cattle. The DNA hypometilation is found in the inactive X chromosome of late replication as it is incorporated during the last hours of cell culture. The decondensing effects of 5–aza–C analogs is observed in multiple regions of the autosomes chromatin, the rob1; 29 and the BTA1. A correlation between hypometilated regions and decondensed of facultative (conditional) heterochromatin is related with genomic instability, and epigenetic reprogramming

Manifestación citomorfológica y frecuencias de la fragilidad del Cromosoma sexual X (fra xg3.1) en Holstein-Friesian)

La presencia de fragilidad en el cromosoma X del bovino fue relacionada con problemas reproductivos, sindrome de bakfy en temeros y diversas alteraciones fenotipicas. Recientemente, estudios previos realizados en Holando Uruguayo (Holstein-Friesian) mostraron la presencia de un sitio frágil en la región Xq 3.1 (banda G negativa). En este trabajo, se presenta la frecuencia de expresión espontánea del Fra Xq3.1 en diferentes muestras de bovinos. Las muestras sanguíneas se procesaron por la técnica estándar de cultivo linfocitario en medio completo RPM11640. La realización del bandeo de replicación RBG mostró una banda particular R positiva. La muestra se subdividió en: (A) 46 hembras de diferentes edades con problemas reproductivos (repetidoras de servicio, freemartins, anestro, aborto); (B) 15 hembras de diferentes edades con reproducción normal; y (C) 8 machos (7 co-mellizos de hembras, 1 con paladar hendido). Se examinaron 2758 placas metafásicas de las cuales 82 presentaron Fra Xg3.1.(2,97 p. cien). En la muestra A, la freecuencia fue de 3,2 p. cien, en la B de 1,32 p. cien y en la C de 5,2 p. cien. En cuanto a la manifestación citomorfológica se encontró: 79,3 p. cien fracturas de cromátida, 11 p. cien de gap de cromátida, 4,9 p. cien fracturas cromosómicas y 4,9 p. cien de gap de iso-cromátida. La Banda de replicación temprana (RBG) expresó una interbanda en la región R positiva del Fra Xg3.1, sugiriendo la presencia de una pequeña zona de replicación

Manifestación citomorfológica y frecuencias de la fragilidad del Cromosoma sexual X (fra xg3.1) en Holstein-Friesian)

La presencia de fragilidad en el cromosoma X del bovino fue relacionada con problemas reproductivos, sindrome de bakfy en temeros y diversas alteraciones fenotipicas. Recientemente, estudios previos realizados en Holando Uruguayo (Holstein-Friesian) mostraron la presencia de un sitio frágil en la región Xq 3.1 (banda G negativa). En este trabajo, se presenta la frecuencia de expresión espontánea del Fra Xq3.1 en diferentes muestras de bovinos. Las muestras sanguíneas se procesaron por la técnica estándar de cultivo linfocitario en medio completo RPM11640. La realización del bandeo de replicación RBG mostró una banda particular R positiva. La muestra se subdividió en: (A) 46 hembras de diferentes edades con problemas reproductivos (repetidoras de servicio, freemartins, anestro, aborto); (B) 15 hembras de diferentes edades con reproducción normal; y (C) 8 machos (7 co-mellizos de hembras, 1 con paladar hendido). Se examinaron 2758 placas metafásicas de las cuales 82 presentaron Fra Xg3.1.(2,97 p. cien). En la muestra A, la freecuencia fue de 3,2 p. cien, en la B de 1,32 p. cien y en la C de 5,2 p. cien. En cuanto a la manifestación citomorfológica se encontró: 79,3 p. cien fracturas de cromátida, 11 p. cien de gap de cromátida, 4,9 p. cien fracturas cromosómicas y 4,9 p. cien de gap de iso-cromátida. La Banda de replicación temprana (RBG) expresó una interbanda en la región R positiva del Fra Xg3.1, sugiriendo la presencia de una pequeña zona de replicación

Caracterización genética de los bovinos criollos del Uruguay.

El alto grado de adaptabilidad fitness y la variación encontrada en el color del pelaje de los bovinos Criollos Americanas justifica realizar un análisis genético a efectos de ser comparados con sus razas ancestrales Ibéricas. Los estudios citogenéticos de la única reserva de bovinos Criollos del Uruguay han comenzado con la búsqueda de marcadores citogenéticos. La caracterización citogenética se realizó en 99 animales fenotipicamente normales (73 hembras, 26 machos) de una población de 600. Se cultivó sangre periférica en medio completo Rf MI 1640. Entre los cariotipos normales (2n _ 80,XX. XY1 se encontraron dos relaciones madres/crias con la fórmula cromosómica 2n = 59/rob (1;29), confirmándose por bandeo cromosómico RBG. El modelo de bandeo C mostró un bloque de heterocromatina (HC) en la región proximal del brazo q de la rob(1;29). La expresión del sitio frágil Xg3.1 se determinó en un 6 p, cien de las metafases analizadas (N=710). Se observó un cromosoma Y metacéntrico en todos los machos estudiados, excluyendo, por lo tanto la introducción de Bos indicus a esta reserva

Caracterización genética de los bovinos criollos del Uruguay.

El alto grado de adaptabilidad fitness y la variación encontrada en el color del pelaje de los bovinos Criollos Americanas justifica realizar un análisis genético a efectos de ser comparados con sus razas ancestrales Ibéricas. Los estudios citogenéticos de la única reserva de bovinos Criollos del Uruguay han comenzado con la búsqueda de marcadores citogenéticos. La caracterización citogenética se realizó en 99 animales fenotipicamente normales (73 hembras, 26 machos) de una población de 600. Se cultivó sangre periférica en medio completo Rf MI 1640. Entre los cariotipos normales (2n _ 80,XX. XY1 se encontraron dos relaciones madres/crias con la fórmula cromosómica 2n = 59/rob (1;29), confirmándose por bandeo cromosómico RBG. El modelo de bandeo C mostró un bloque de heterocromatina (HC) en la región proximal del brazo q de la rob(1;29). La expresión del sitio frágil Xg3.1 se determinó en un 6 p, cien de las metafases analizadas (N=710). Se observó un cromosoma Y metacéntrico en todos los machos estudiados, excluyendo, por lo tanto la introducción de Bos indicus a esta reserva

Methylation-specific PCR analysis in Col8A1 promoter in Creole cattle carrier of rob(1;29)

Robertsonian translocation (rob(1;29)) is the most frequent structural chromosomal abnormality in cattle. Heterozygous carriers have a normal phenotype but show a 3-5% decrease in fertility. Chromatin decondensation was evaluated similar to the inactive X chromosome when submitted to demethylating agent. Based on this result, and the concept that imprinted genes are essential in embryonic development, we decided to query genes located on BTA1 and BTA29 that could undergo genome imprinting. The collagen typeVIII-α1 (Col8A1) acted on extracellular matrix structural proteins. DNA bisulfite conversion and sequentiation methods were used to compare its differential methylation patterns. It was performed on eight Creole cattle DNA blood samples from normal and rob(1;29) carriers. An in silico screening for CpG islands in its promoter uncovered a single region of 454 bp prone to methylation. BiQ-Analizer software was used to show the selective conversion of unmethylated cytosines to uracils obtaining the following results: unmethylated CpGs: 0.000 (0 cases), methylated CpGs: 0.802 (77 cases) and CpGs not present: 0.198 (19 cases). No differences between samples were observed in this highly methylated region. This technique was successfully applied so it is a straightforward methodology that can be utilized to evaluate different tissue associated to specific gene expression

Polimorfismos de los codones 136 y 171 del gen prp en una majada de ovino criollo del uruguay

Scrapie is a transmissible neurodegenerative disorder of sheeps and goats. It is characterized by the deposition in the central nervous system of an abnormal isoform of a normal cellular protein (PrP c ), coded by the PrP gene. Mutations at 136, 154 and 171 codons of exon 2, are described. Combinations of these codons show different levels of association with the susceptibility to this disease; from highly resistants (ARR/ARR) to highly susceptibles (VRQ/VRQ). Codons 171 and 136 are the main determinant of scrapie susceptibility while codon 154 plays a minor role. In the present communication, a sample of Uruguayan Creole sheeps (N=28) was analysed for 136 and 171 codons. Samples of genomic DNA were processed by PCR-RFLP. The results were obtained by electrophoresis in polyacrylamide gel (10.5%) stained with AgNO 3 . Genotypic frequen- cies for the 136 and 171 codons were analysed. The results revealed 5 different genotypes. The most frequent genotypes were those associated with more susceptibility to the disease: VQ/AQ= 0.39 y AQ/AQ= 0.29. The analysis of genetic risk revealed a 72% of highly susceptible individuals, in case of proper environmental conditions.El scrapie es una enfermedad neuro- degenerativa transmisible de ovinos y caprinos. Se caracteriza por la acumulación en el sistema nervioso central de una isoforma anómala de una proteína celular normal (PrP c ) codificada por el gen PrP. En el exón 2 del gen se han identificado mutaciones en los codones 136, 154 y 171. La combinación de estos codones muestran diferen- tes niveles de asociación con la susceptibilidad a la enfermedad, desde muy resistentes (ARR/ ARR) a muy susceptibles (VRQ/VRQ). Los codones 171 y 136 son los mayores determinantes de la susceptibilidad al scrapie, mientras que el codón 154 juega un rol menor. En el presente trabajo se estudió una muestra de ovinos Criollos Uruguayos (N=28) para los codones 136 y 171. Las muestras de ADN genómico se procesaron por PCR-RFLP. Los resultados se obtuvieron por electroforesis en geles de poliacrilamida (10,5%) teñidos con AgNO 3 . Se analizaron las frecuencias genotípicas para los codones 136 y 171. Cinco genotipos diferentes fueron obtenidos, encontrándose en mayor frecuencia los genotipos de alta suscepti- bilidad: VQ/AQ= 0,39 y AQ/AQ= 0,29. El análisis de riesgo genético de esta majada según los genotipos obtenidos, reveló un 72% de animales muy sus- ceptibles a la enfermedad en caso de manifestar- se las condiciones ambientales propicias