Jaburetox, peptídeo derivado de ureases : efeitos sobre as vias enzimáticas da barata Nauphoeta cinerea

Jaburetox é um peptídeo recombinante (~11 kDa) derivado de uma das isoformas de ureases da planta Canavalia ensiformis, popularmente conhecida como feijão-de-porco. O peptídeo induz efeitos variados em diferentes ordens de insetos, incluindo interferência na contração muscular em baratas da espécie Nauphoeta cinerea, ativação do sistema imunitário do vetor da doença de Chagas, Rhodnius prolixus e também, modula a atividade da enzima UDP-N-acetilglicosamina pirofosforilase (UAP) e da óxido nítrico sintase (NOS) no sistema nervoso central de R. prolixus e Triatoma infestans. Além disso, quando injetado, o Jaburetox é letal para ninfas de R. prolixus e insetos adultos de T. infestans. No presente trabalho foi avaliado o efeito inseticida do Jaburetox em baratas adultas da espécie N. cinerea, assim como, exploramos os efeitos induzidos pelo peptídeo no sistema nervoso central, focando na atividade enzimática das enzimas UAP, NOS, fosfatases ácidas (ACP) e acetilcolinesterase (AChE). Os ensaios enzimáticos foram realizados após tratamentos in vivo e in vitro com o Jaburetox, utilizando homogenatos de sistema nervoso central. Técnicas espectrofotométricas foram utilizadas para mensurar a atividade enzimática e a expressão proteica foi avaliada através de Western blot. Para o ensaio inseticida, Jaburetox foi administrado via oral e via injeção no inseto, utilizando uma dose de 50 μg de Jaburetox por g de inseto, ou o mesmo volume de tampão como controle. Em N. cinerea, ambos os tratamentos, in vivo e in vitro, inibiram parcialmente a atividade da NOS, sem modificar os níveis proteicos da mesma. Nenhuma alteração foi observada nos níveis da ACP após tratamentos com Jaburetox. A enzima UAP apresentou diminuição da atividade após 18 h de tratamento in vivo com o Jaburetox. Além disso, em todos os tratamentos in vivo com o peptídeo foi observado um aumento da atividade da AChE, sugerindo um possível mecanismo de resposta aos inseticidas. Contudo, mesmo após injeção e ingestão de Jaburetox as baratas adultas não tiveram taxas de mortalidade significativas, indicando resistência ao efeito inseticida do peptídeo. Em suma nossos resultados sugerem que o Jaburetox afeta as vias nitrinérgica, assim com a atividade da UAP e da AChE na barata. O fato do peptídeo afetar diferentemente as atividades enzimáticas dos R. prolixus e da N. cinerea podem explicar o porquê as baratas não são susceptíveis ao Jaburetox.Jaburetox is a recombinant peptide (~11 kDa) derived from one of the Canavalia ensiformis (Jack bean) urease isoforms. The peptide induces several effects on insects of different orders, including the interference on muscle twitch tension in the cockroach Nauphoeta cinerea, the activation of the immune system in the Chagas’ disease vector Rhodnius prolixus, and the modulation of the enzyme activities of the UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase (UAP) and nitric oxide synthase (NOS) in the central nervous system of R. prolixus and the related triatomine Triatoma infestans. Moreover, when injected, the peptide is lethal for R. prolixus nymphs and T. infestans adults. Here, we evaluated the insecticidal effect of Jaburetox on N. cinerea adult cockroaches and explored the effects induced by Jaburetox on the central nervous system, focusing on the enzymatic activities of UAP, NOS, acid phosphatases (ACP), and acetylcholinesterase (AChE). The enzymatic experiments were performed after in vitro and in vivo treatments with Jaburetox using central nervous system homogenates from adult cockroaches. Spectrophotometric assays were employed to measure the enzyme activities and the protein expression of UAP and NOS was evaluated by Western blot. The insecticidal assay was conducted by injection and ingestion of 50 μg of Jaburetox per g of insect or the same volume of buffer for the controls. In N. cinerea, both in vivo and in vitro treatments with the peptide partially inhibited the activity of NOS, without modifying the protein levels. No alterations on ACP activity were observed upon Jaburetox treatment. In addition, the enzyme activity of UAP only had its activity affected at 18 h after injection. The peptide increased the AChE activity, suggesting a possible mechanism involved in overcoming the toxic effects of the insecticide. Moreover, the cockroaches did not die after Jaburetox injection and ingestion, indicating resistance to the toxic action of the peptide. Taken together, our findings indicate that Jaburetox alters the nitrinergic signaling as well as the AChE and UAP activities. The fact that Jaburetox affects differently the enzyme activities in R. prolixus and N. cinerea may explain why the cockroach is not susceptible to the lethal effect of the peptide

Ocorrência e quantificação de salmonella sp. em cortes de frango congelados : levantamento epidemiológico no Estado do Paraná e perfil de suscetibilidade e antimicrobianos

Orientador : Prof. Dr. Luciano dos Santos BersotDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 23/02/2017Inclui referências : f. 83-102Linha de pesquisa: MicrobiologiaResumo: O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência, quantificar e identificar os sorotipos de Salmonella sp. presentes em cortes de frango congelados produzidos e comercializados em todo o Estado do Paraná. Foram avaliados 300 cortes de frango variados, coletados no varejo, em todas as regiões produtoras do estado do Paraná. Todas as amostras passaram por uma avaliação inicial de sua embalagem, onde foi verificada a integridade e o atendimento às normas legais. A quantificação de Salmonella sp. foi obtida por meio da metodologia de mNMP, determinada pela ISO/TS 6579-2:2012. Para verificação da presença/ausência utilizou-se a metodologia ISO/TS 6579:2002. Também foi realizada a quantificação de coliformes termotolerantes em 154 dessas amostras, avaliando sua conformidade em relação à RDC nº 12 de 2001. Além disso, foram realizados testes fenotípicos e genotípicos de suscetibilidade antimicrobiana e produção de enzimas ESBL. Das 300 amostras analisadas, 95 (31,5%) apresentaram Salmonella sp., sendo os sorotipos identificados como Typhimurium (43%), Heidelberg (39%), Ndolo (6%), Minnesota (4%), O:4,5 (2%), Thompson (2%), Schwarzengrund (2%), O:3, 10:e, h:- (1%) e Abony (1%). A quantificação demonstrou baixa carga de Salmonella sp., variando de 0,12 a 6,4 NMP/g. Todas a 154 amostras apresentam contagem de coliformes termotolerantes de acordo com os padrões legais. Foi contatada a presença de perfil multirresistente em 85 (86,7%) isolados de Salmonella sp., sendo que 13 desses demonstraram possuir genes que codificam enzimas ESBL, especialmente blaCTX-M-2 e blaTEM-1. Palavras-chave: blaCTX-M-2. Dose Infectante. Multirresistência. S. Heidelberg. S. Ndolo. S. Typhimurium.Abstract: The objective of this work was to verify the occurrence, quantify and identify the serotypes of Salmonella sp. present in frozen chicken parts produced and marketed throughout the State of Paraná. A total of 300 varied chicken parts were collected in the retail market in all producing regions of the state of Paraná. All the samples underwent an initial assessment of their packaging, where the integrity and compliance with legal regulations were verified. The quantification of Salmonella sp. was obtained using the methodology of mNMP, determined by ISO/ST 6579-2:2012. ISO/ST 6579:2002 methodology was used to verify presence/absence. Quantification of thermotolerant coliforms was also carried out in 154 of these samples, evaluating their compliance with RDC nº 12 of 2001. In addition, phenotypic and genotypic tests of antimicrobial susceptibility and ESBL production were performed. Of the 300 samples analyzed, 95 (31.5%) presented Salmonella sp., with serotypes identified as Typhimurium (43%), Heidelberg (39%), Ndolo (6%), Minnesota (4%), O: 4.5 (2%), Thompson (2%), Schwarzengrund (2%), 0: 3, 10: e, h :- (1%) and Abony (1%). Quantification showed low Salmonella sp. loading, ranging from 0.12 to 6.4 MPN/g. All the 154 samples present count of thermotolerant coliforms according to the legal standards. The presence of a multidrug-resistant profile in 85 (86.7%) of Salmonella sp. strains was reported, 13 of which were found to have ESBL-encoding genes, especially blaCTX-M-2 and blaTEM-1. Key-words: blaCTX-M-2. Infectant dose. Multiresistance. S. Heidelberg. S. Ndolo. S. Typhimurium.Abstract: The objective of this work was to verify the occurrence, quantify and identify the serotypes of Salmonella sp. present in frozen chicken parts produced and marketed throughout the State of Paraná. A total of 300 varied chicken parts were collected in the retail market in all producing regions of the state of Paraná. All the samples underwent an initial assessment of their packaging, where the integrity and compliance with legal regulations were verified. The quantification of Salmonella sp. was obtained using the methodology of mNMP, determined by ISO/ST 6579-2:2012. ISO/ST 6579:2002 methodology was used to verify presence/absence. Quantification of thermotolerant coliforms was also carried out in 154 of these samples, evaluating their compliance with RDC nº 12 of 2001. In addition, phenotypic and genotypic tests of antimicrobial susceptibility and ESBL production were performed. Of the 300 samples analyzed, 95 (31.5%) presented Salmonella sp., with serotypes identified as Typhimurium (43%), Heidelberg (39%), Ndolo (6%), Minnesota (4%), O: 4.5 (2%), Thompson (2%), Schwarzengrund (2%), 0: 3, 10: e, h :- (1%) and Abony (1%). Quantification showed low Salmonella sp. loading, ranging from 0.12 to 6.4 MPN/g. All the 154 samples present count of thermotolerant coliforms according to the legal standards. The presence of a multidrug-resistant profile in 85 (86.7%) of Salmonella sp. strains was reported, 13 of which were found to have ESBL-encoding genes, especially blaCTX-M-2 and blaTEM-1. Key-words: blaCTX-M-2. Infectant dose. Multiresistance. S. Heidelberg. S. Ndolo. S. Typhimurium

Efeito antifúngico e potencial mecanismo de ação do peptídeo PmUreβ em espécies de Candida

As infecções causadas pelo gênero Candida são consideradas emergentes, com aumento substancial de ocorrências e gravidade. Algumas espécies de Candida são comensais, porém quando há um desequilíbrio entre os microrganismos e seu hospedeiro, as infecções são favorecidas. Considerando o aumento da mortalidade por infecções fúngicas, assim como a taxa de resistência aos antifúngicos clássicos, o desenvolvimento de novas estratégias de controle se torna necessário. Nesse contexto, peptídeos com potenciais funções terapêuticas representam estratégias promissoras. A urease de Proteus mirabilis (PMU) consiste em um trímero de trímeros (ABC)3, denominados α, β e γ. Como visto para outras ureases, a PMU também induz efeitos independentes de sua ação enzimática, como ativação de plaquetas humanas, atividades antifúngicas e entomotóxicas. Além disso, análises com domínios isolados de PMU indicaram que a maior parte dessas atividades é desempenhada pelo domínio β (PmUreβ). Considerando a potencial aplicabilidade biotecnológica de PmUreβ como peptídeo antimicrobiano, o presente trabalho aprofundou os estudos nos efeitos e no mecanismo de ação do peptídeo frente a distintas espécies de Candida. Para a expressão heteróloga, a região codificadora do peptídeo foi clonada e expressa em Escherichia coli. O peptídeo foi purificado por cromatografia de afinidade de níquel. Ensaios in vitro foram realizados para avaliar os efeitos de PmUreβ na proliferação de leveduras, micromorfologia, produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), integridade de membrana e parede celular, além de toxicidade em células humanas. A concentração inibitória mínima (CIM) de PmUreβ variou de 4,5 a 9 μM. Além disso, há indícios que PmUreβ alterou a permeabilidade da membrana das leveduras. A produção de EROs pode estar envolvida na perturbação, tendo em vista que a produção de EROs foi elevada na presença do peptídeo, podendo causar peroxidação lipídica, resultando no aumento da permeabilidade. Análises por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) revelaram a presença de potenciais fibras da matriz extracelular envolvendo aglomerados de células e a possível presença de vesículas extracelulares. Além disso, as células de Candida tratadas com PmUreβ apresentaram superfícies celulares deformadas, sugerindo a parede celular como alvo. Numerosas cicatrizes de brotos não polares em células tratadas com o peptídeo foram observadas, o que sugere que o processo normal de divisão da levedura pode ter sido interrompido. Também é importante ressaltar que o peptídeo não apresentou efeito nocivo em células de mamíferos. Esses resultados sugerem que PmUreβ pode ter potencial como peptídeo fungitóxico, destacando seu interesse biotecnológico.Infections caused by Candida genus are considered emerging, with a substantial increase in occurrences and severity. Some species of Candida are commensals, however when there is an imbalance between microorganisms and their host, infections are favored. Considering that mortality from fungal infections has been rising, and that the rate of resistance to classic antifungal drugs increased, the development of new control strategies is highly necessary. In this context, interest in peptides with therapeutic functions has enhanced. Proteus mirabilis urease (PMU) consists of a trimer of (ABC)3 trimers, called α, β and γ. As seen for other ureases, PMU also induces effects independent of its enzymatic action, such as activation of human platelets, antifungal and entomotoxic activities. In addition, analyses with isolated domains of PMU indicated that most of these biological activities are performed by the β domain (PmUreβ). Considering the potential biotechnological applicability of PmUreβ as an antimicrobial peptide, the present work has deepened the studies on effects and mechanism of action of the peptide on Candida spp. For recombinant peptide production, the gene coding region was cloned and expressed in E. coli. The peptide was purified using nickel affinity chromatography. In vitro assays were carried out to test PmUreβ effects on yeast proliferation, yeast micromorphology, the production of reactive oxygen species (ROS), the effect on the cell membrane and wall, and toxicity on human cells. The minimum inhibitory concentration (MIC) of PmUreβ ranged from 4.5 to 9 μM. In addition, we demonstrated that PmUreβ can alter cell membrane permeability. ROS production may be involved in membrane perturbation, as ROS can cause lipid peroxidation, given that ROS production was increased in the presence of the peptide, which can alter the bilayer structure and increase its permeability. Scanning Electron Microscopy (SEM) revealed the presence of potential extracellular matrix fibers encompassing cell clusters and the possible presence of extracellular vesicles. Also, Candida cells appeared to be damaged by PmUreβ, as evidenced by the deformed cell surfaces, suggesting cell wall as a target. Numerous non-polar bud scars on cells treated with the peptide were observed which suggest that the normal yeast division process may have been disrupted. Importantly, the peptide did not present a harmful effect on mammalian cells. These results suggest that PmUreβ may have potential as a fungitoxic peptide, highlighting its biotechnological interest

Brasa : trajetos e processos criativos tomando forma

O presente projeto de graduação apresenta um memorial descritivo dos meus processos de composição e produção musical em home studio. Nele serão contemplados uma exposição, faixa a faixa, das três canções do meu primeiro EP, intitulado Brasa, contemplando escolhas e gestos, a partir de memórias e documentos de processo: manuscritos, esboços de letras, versões e gravações utilizando o celular. Cecília Almeida Salles, Gloria Anzaldúa e Clarissa Pinkola Estés são algumas das vozes que trago comigo no referencial teórico. A unicidade do EP se dá pela atmosfera espacial, flutuante, intimista, sensual, sensorial e imagética abordada pelo eu-lírico e posteriormente traduzida na escolha de timbres e efeitos de produção. Além dos meus processos, narro a minha trajetória com a arte, minha experiência no curso de Música Popular da UFRGS, minhas referências musicais e literárias, minha imersão no campo da produção musical durante o período de quarentena e minha reflexão sobre ser uma mulher artista detentora de subjetividade. Sendo escritora, formada em Escrita Criativa, escolhi trazer um tom livre e poético de escrita, como uma conversa reflexiva com a leitora/ o leitor.This project presents a descriptive memorial of my composition and music production processes in home studio. It will include an exposition, track by track, of the three songs of my first EP Brasa, contemplating choices and gestures, based on memories and process documents: manuscripts, letter sketches, versions and recordings using the cellphone. Cecília Almeida Salles, Gloria Anzaldúa and Clarissa Pinkola Estés are some of the voices that I bring with me in the theoretical framework. The EP's uniqueness is given by the spatial, floating, intimate, sensual, sensory and imagery atmosphere approached by the lyrical self and later translated into the choice of timbres and production effects. In addition to my processes, I narrate my trajectory with art, my experience in the Popular Music course at UFRGS, my musical and literary references, my immersion in the field of music production during the quarantine period and my reflection on being a female artist of subjectivity. As a writer, graduated in Creative Writing, I chose to bring a free and poetic tone of writing, like a reflective conversation with the reader

Magistério em cena: histórias de vida, tramas socioculturais e cotidiano escolar no cinema

Este artigo analisa a narrativa cinematográfica de dois filmes que têm como protagonistas o professor Mark Thackeray, de Ao mestre, com carinho (Direção: James Clavell, Reino Unido da Grã-Bretanha do Norte e Irlanda do Norte, 1967), e a professora Erin Gruwell, de Escritores da Liberdade (Direção: Richard LaGravenese, Estados Unidos, 2007), ambos inspirados em “histórias reais”. Esses dois filmes vinculam-se à perspectiva denominada aqui de professor-herói, por terem como características mais acentuadas dos docentes retratados a abnegação e o caráter redentor de sua prática, desconsiderando-se, muitas vezes, as condições de trabalho. Além disso, são produções que contemplam o início da carreira desses professores, mas evocam cenários, tramas, histórias de vida e problemáticas diversas que permitem refletir acerca das especificidades das situações, épocas, regiões e sujeitos biografados considerando diferentes concepções acerca da docência e dos significados dos processos de formação para as histórias de cada um que se articulam na constituição da “memória coletiva”, segundo Halbwachs (2013). Há, portanto, uma interface das trajetórias dos professores retratadas nos filmes, cuja repercussão no imaginário social é inegável, com a história e a memória da categoria, bem como da sociedade como um todo que permite identificar e discutir as representações disseminadas pelo cinema a respeito da docência

Ocorrência de Salmonella sp. em carcaças de frango avaliadas a partir do comércio varejista entre 2007 e 2013 no estado do Paraná, Brasil

Poultry meat is often involved as a vehicle for microorganisms that cause food-borne diseases. Salmonella sp. is a major pathogen involved in outbreaks around the world. Based on its importance, the objective of this study was to determine the occurrence of Salmonella sp. in frozen and chilled poultry carcasses slaughtered and marketed in the western region of Paraná state, Brazil. A total of 340 samples were collected between January 2007 and April 2013, with 66 (19.41%) carcasses positive for Salmonella sp. It can be concluded from the results obtained that the occurrence of Salmonella sp. in poultry carcasses remains high, even though it is a product marketed refrigerated or frozen, methods considered appropriate for food preservation. A lower occurrence result was expected due to the 14-year implementation of the national pathogen reduction program established by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply aimed at a gradual reduction in the occurrence of Salmonella sp. in these products through constant monitoring of carcasses immediately after slaughter.A carne de aves é um alimento que frequentemente encontra-se envolvido como veículo de micro-organismos causadores de enfermidades, sendo Salmonella sp. um desses agentes comumente envolvidos nessas enfermidades em todo o mundo. Com isso, o objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de Salmonella sp. em carcaças de frango congeladas e refrigeradas, abatidas e comercializadas na região oeste do estado do Paraná. Um total de 340 amostras foram coletadas entre janeiro de 2007 e abril de 2013. Das amostras analisadas, 66 (19,41%) das carcaças foram positivas para Salmonella sp. De acordo com os resultados obtidos pode-se concluir que a ocorrência de Salmonella sp. em carcaças de frangos permanece alta, mesmo sendo produtos comercializados refrigerados ou congelados, métodos consideradosadequados para conservação de alimentos. Um resultado de menor ocorrência era esperado devido à implementação de 14 anos do Programa Nacional de Redução de Patógenos estabelecido pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento visando uma redução gradual na ocorrência de Salmonella sp. nestes produtos através de monitoramento constante de carcaças imediatamente após o abate

O Brasil está passando por um processo de desindustrialização?

A discussão sobre se o Brasil está vivenciando, ou não, um processo de desindustrialização está presente na agenda econômica atual. O presente artigo objetiva aprofundar o debate sobre o processo de desindustrialização no Brasil, dado que os indícios sobre o futuro da estrutura industrial brasileira mostram um cenário complexo e sem respostas fáceis. Assim, inicialmente são analisadas as causas de um processo de desindustrialização e os impactos para o país. São, ainda, analisados dados e indicadores contemplando as diferentes categorias industriais brasileiras desde a segunda metade da década de 1990 e é evidenciado que o país passa por uma desindustrialização precoce e não generalizada, ainda que de caráter restritivo para o seu desenvolvimento econômico.  La discusión sobre si Brasil está pasando, o no, por un proceso de desindustrialización está presente en la agenda económica actual. El presente artículo tiene como objetivo profundizar el debate sobre el proceso de desindustrialización en Brasil, considerando que los indicios sobre el futuro de la estructura industrial brasileña apuntan a un escenario complejo y sin respuestas fáciles. De esa manera, inicialmente se analizan las causas del proceso de desindustrialización y sus impactos en el país. También son analizados datos e indicadores que contemplan las diferentes categorías industriales brasileñas a partir de la segunda mitad de la década de los 90 y se pone en evidencia que el país pasa por una desindustrialización precoz y no generalizada, aunque de carácter restrictivo para su desarrollo económico.An important economic issue is whether Brazil is under a deindustrialization process or not. This paper deepens the complex debate about Brazilian deindustrialization and the authors suggest that there is not a simple answer. The causes of the deindustrialization process are analyzed and its ramifications and its impacts to the industrial structure are considered. Data and information about five industrial groups are considered since the 90´s. The paper demonstrates that Brazil is going through a premature deindustrialization process which is not generalized, although it restricts the country development

¿Brasil está pasando por un proceso de desindustrialización?

[ES]La discusión sobre si Brasil está pasando, o no, por un proceso de desindustrialización está presente en la agenda económica actual. El presente artículo tiene como objetivo profundizar el debate sobre el proceso de desindustrialización en Brasil, considerando que los indicios sobre el futuro de la estructura industrial brasileña apuntan a un escenario complejo y sin respuestas fáciles. De esa manera, inicialmente se analizan las causas del proceso de desindustrialización y sus impactos en el país. También son analizados datos e indicadores que contemplan las diferentes categorías industriales brasileñas a partir de la segunda mitad de la década de los 90 y se pone en evidencia que el país pasa por una desindustrialización precoz y no generalizada, aunque de carácter restrictivo para su desarrollo económico

Pt(IV)/Re(I) Chitosan Conjugates as a Flexible Platform for the Transport of Therapeutic and/or Diagnostic Anticancer Agents

New chitosan derivatives modified with (3-carboxypropyl) trimethylammonium chloride (1) and coupled with (OC-6-44)-diammine(4-carboxypropanoato) dichloridoethanolatoplatinum(IV) (2), were synthesized and their preliminary biological evaluation carried out in human tumor cells. Some of these derivatives were also loaded with a chelating ligand (3) that was derived from bis(quinolin-2-ylmethyl) amine to obtain chitosan-based nanoparticles for an EPR-mediated delivery of Pt(IV) prodrugs and Re(I) tricarbonyl complexes (4), to explore a multimodal theranostic approach to cancer. The cytotoxicity of the different chitosan conjugates (C12, C123, and C1234), carrying different combinations of the Pt(IV) complex, the chelator and the Re(I) complex, was evaluated in the A2780 human ovarian cancer cell line using the MTT assay. The Pt(IV)-containing nanosystems showed low to moderate cytotoxic activity (IC50 values in the range 13.5-33.7 uM) and was comparable to that found for the free Pt(IV) complex (IC50 = 13.7 uM). Therefore, the Pt(IV)-chitosan conjugation did not enhance the cytotoxic activity of the Pt(IV) prodrug, which certainly reflects the inefficient cellular uptake of the nanoconjugates. Nevertheless, a clearer view of their potential for the delivery of anticancer agents requires further in vivo tests because the EPR effect increases extravasation and retention within the tumor tissue, not necessarily within the tumor cells