Análisis genético y funcional de biomarcadores en cáncer colorrectal y estudio proteómico del papel de snail en fibroblastos tumorales

Tesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Ciencias Químicas, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, leída el 21-04-2015El cáncer colorrectal CCR, es el tercer cáncer más frecuente en el mundo con una alta mortalidad situándolo como el segundo cáncer con mayor número de fallecimientos en España. Esta alta mortalidad se debe al diagnosticó en estadios avanzados de la enfermedad en un amplio número de pacientes. Por ello, la investigación actual se centra en la identificación de biomarcadores para la detección temprana como el desarrollo de nuevas dianas terapéuticas. Para lograr estos objetivos es necesario un profundo conocimiento de la biología del tumor primario, el microambiente tumoral y el proceso metastásico. Esta Tesis Doctoral se ha dividido en dos bloques bien diferenciados. En primer lugar se analizó la expresión y las alteraciones genéticas de las proteínas FGFR4 y PIM1, que se identificaron mediante el análisis de la respuesta humoral en pacientes con CCR utilizando microarrays de proteínas de alta densidad. Los resultados obtenidos en este primer bloque han permitido determinar que la sobreexpresión de FGFR4 es el principal factor que provoca la respuesta humoral frente a este receptor en pacientes con CCR. Además, se encontró que el silenciamiento de FGFR4 provocaba una reversión de la transición epitelio-mesénquima y una disminución significativa de las propiedades tumorigénicas como proliferación, migración, invasión y adhesión de las células de CCR SW480 y SW48. También se encontró que FGFR4 podría ser una diana terapéutica en CCR, como se demostró mediante la utilización de inhibidores químicos multiquinasa y anticuerpos frente a FGFR4, que disminuían la proliferación de las células tumorales al mismo nivel que la provocada por el silenciamiento de FGFR4. Por otra parte, el análisis de las alteraciones de PIM1, permitió determinar que la respuesta humoral frente a este oncogén en CCR se debe principalmente a la presencia de mutaciones somáticas encontradas en tejido tumoral de CCR. Además, se encontró que las mutaciones encontradas en PIM1 estaban asociadas a un aumento de la capacidad proliferativa, invasión y supervivencia de las células tumorales de CCR. En segundo lugar, se analizó mediante proteómica cuantitativa el bloqueo de la diferenciación que produce el factor de transcripción sobreexpresado en el estroma tumoral de CCR Snail1, sobre las células madre mesenquimales y las células 3T3L1. Las técnicas proteómicas nos han permitido encontrar mediadores controlados por Snail1 responsables de los efectos producidos en la diferenciación y proliferación de estos tipos celulares. Los resultados encontrados indican que Snail regula la diferenciación adipocítica a través de la inhibición que provoca sobre el receptor huérfano Nr2f6 que provoca el aumento de la expresión de la citoquina pro-inflamatoria IL17. Por otra parte, se encontró que Snail inhibe la expresión de diferentes factores de transcripción y se confirmó este efecto mediante WB, PCR, ensayos de luciferasa y ChIP. Además, se encontró que Snail provoca el aumento en la expresión de diferentes componentes del complejo NuRD y otras proteínas asociadas a la cromatina. Estos resultados suponen la primera relación entre la expresión de Snail1, la inflamación y la adipogénesis, que influyen en la prognosis del paciente a través de la obesidad y la caquexia cancerosa. Globalmente, los trabajos derivados de esta Tesis Doctoral han demostrado por un lado que los microarrays de proteínas de alta densidad permiten identificar marcadores diagnósticos y pronósticos de cáncer, y también proteínas implicadas en la progresión tumoral y nuevas dianas terapéuticas de intervención. Por otra parte, en el segundo bloque de la Tesis Doctoral se ha descrito la conexión que existe entre la expresión de Snail1, y procesos de inflamación y adipogénesis. Los resultados encontrados en este estudio indican que Snail tiene un papel importante en obesidad más allá del control del proceso de la transición epitelio-mesénquima y la plasticidad del epitelio.Depto. de Bioquímica y Biología MolecularFac. de Ciencias QuímicasTRUEunpu

Antibodies on demand: a fast method for the production of human scFvs with minimal amounts of antigen

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Antibodies constitute a powerful tool to study protein function, protein localization and protein-protein interactions, as well as for diagnostic and therapeutic purposes. High-throughput antibody development requires faster methodologies with lower antigen consumption.</p> <p>Results</p> <p>Here, we describe a novel methodology to select human monoclonal recombinant antibodies by combining <it>in vitro </it>protein expression, phage display antibody libraries and antibody microarrays. The application of this combination of methodologies permitted us to generate human single-chain variable fragments (scFvs) against two proteins: green fluorescent protein (GFP) and thioredoxin (Trx) in a short time, using as low as 5 μg of purified protein. These scFvs showed specific reactivity against their respective targets and worked well by ELISA and western blot. The scFvs were able to recognise as low as 31 ng of protein of their respective targets by western blot.</p> <p>Conclusion</p> <p>This work describes a novel and miniaturized methodology to obtain human monoclonal recombinant antibodies against any target in a shorter time than other methodologies using only 5 μg of protein. The protocol could be easily adapted to a high-throughput procedure for antibody production.</p

Caracterización Proteómica del papel de Snail1 en diferenciación de fibroblastos murinos mediante SILAC

Comunicaciones a congreso

Utilización de medios RPAS en unidades de Ingenieros para levantamientos topográficos.

En este proyecto se analiza la viabilidad de la implementación de RPAS (Remotely Piloted Aircraft Systems) en una unidad de ingenieros para la realización de levantamientos topográficos. La utilización de estos medios para este fin implicaría, a priori, una mejora de la eficiencia en este tipo de actividades, aumentando los ritmos de trabajo y disminuyendo los riesgos del personal implicado en estas tareas, al no exponerlos en terrenos no reconocidos. Para conseguir este objetivo principal, se plantea alcanzar una serie de objetivos parciales: determinar las necesidades y medios actuales que se utilizan en la unidad de ingenieros donde se realizaron las prácticas externas para realizar un levantamiento topográfico, analizar los RPAS existentes en el mercado para estos fines, estudiar la normativa vigente, determinar las necesidades formativas para operar con estos instrumentos, analizar los riesgos que conlleva su implementación y, finalmente, analizar los costes. Como conclusión general de este trabajo se extrae que la implementación de sistemas RPAS para la realización de levantamientos topográficos en la unidad de ingenieros seleccionada presenta unas ventajas muy claras que aumentarían de manera notable la eficiencia de los trabajos y disminuirían los riesgos actuales, proponiéndose la adquisición de un modelo concreto de los muchos estudiados.<br /

Myoinvasive pattern as a prognostic marker in low-grade, early-stage endometrioid endometrial carcinoma

Low-grade and early Federation for Gynecology and Obstetrics (FIGO) stage endometrioid endometrial carcinomas (EEC) have an excellent prognosis. However, approximately 10% of patients develop recurrence, which cannot be correctly predicted at diagnosis. We evaluated myoinvasive patterns as a prognostic factor of relapse in low-grade, early-stage EEC. Two-hundred and fifty-eight cases were selected according to the following inclusion criteria: (i) endometrioid endometrial carcinomas, (ii) grade 1 or 2 with (iii) FIGO stage I or II, and (iv) clinical follow-up. Slides were reviewed to annotate the myoinvasive pattern present in each case (infiltrative glands, microcystic, elongated and fragmented –MELF-, broad front, adenomyosis-like and adenoma malignum). Microsatellite instability was studied by immunoexpression of mismatch repair proteins (MLH1, PMS2, MSH2, and MSH6). There were 29 recurrences (11.2%) among the 258 cases analysed. A predominant broad front myoinvasive pattern was significantly associated with tumour relapse (p = 0.003). The presence of a pattern of infiltrative glands (p = 0.001) and microsatellite instability (p = 0.004) were associated with lower disease-free survival, without having an impact on overall survival. Our observations suggest the potential value of the pattern of myoinvasion as a prognostic factor in low-grade, early-stage endometrioid endometrial carcinomaThis research was funded by the Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) (PI17/01723), co-financed by the European Development Regional Fund ‘A way to achieve Europe’ (FEDER)

Comparison of observed and modeled cloud-free longwave downward radiation (2010–2016) at the high mountain BSRN Izaña station

A 7-year (2010–2016) comparison study between measured and simulated longwave downward radiation (LDR) under cloud-free conditions was performed at the Izaña Atmospheric Observatory (IZO, Spain). This analysis encompasses a total of 2062 cases distributed approximately evenly between day and night. Results show an excellent agreement between Baseline Surface Radiation Network (BSRN) measurements and simulations with libRadtran V2.0.1 and MODerate resolution atmospheric TRANsmission model (MODTRAN) V6 radiative transfer models (RTMs). Mean bias (simulated - measured) of 10 mm, the observed night-time difference between models and measurements is +5Wm-2 indicating a scale change of the World Infrared Standard Group of Pyrgeometers (WISG), which serves as reference for atmospheric longwave radiation measurements. Preliminary results suggest a possible impact of dust aerosol on infrared radiation during daytime that might not be correctly parametrized by the models, resulting in a slight underestimation of the modeled LDR, of about -3Wm-2, for relatively high aerosol optical depth (AOD>0.20).AERONET Sun photometers at Izaña have been calibrated within the AERONET Europe TNA, supported by the European Union’s Horizon 2020 research and innovation program under grant agreement no. 654109 (ACTRIS-2). This research has benefited from the result of the project INMENSE (funded by the Ministerio de Economía y Competividad from Spain, CGL2016-8068

Clinicopathological features and prognostic significance of CTNNB1 mutation in low-grade, early-stage endometrial endometrioid carcinoma

Low-grade and early-stage endometrioid endometrial carcinomas (EECs) have an overall good prognosis but biomarkers identifying patients at risk of relapse are still lacking. Recently, CTNNB1 exon 3 mutation has been identified as a potential risk factor of recurrence in these patients. We evaluate the prognostic value of CTNNB1 mutation in a single-centre cohort of 218 low-grade, early-stage EECs, and the correlation with beta-catenin and LEF1 immunohistochemistry as candidate surrogate markers. CTNNB1 exon 3 hotspot mutations were evaluated by Sanger sequencing. Immunohistochemical staining of mismatch repair proteins (MLH1, PMS2, MSH2, and MSH6), p53, beta-catenin, and LEF1 was performed in representative tissue microarrays. Tumours were also reviewed for mucinous and squamous differentiation, and MELF pattern. Nineteen (8.7%) tumours harboured a mutation in CTNNB1 exon 3. Nuclear beta-catenin and LEF1 were significantly associated with CTNNB1 mutation, showing nuclear beta-catenin a better specificity and positive predictive value for CTNNB1 mutation. Tumours with CTNNB1 exon 3 mutation were associated with reduced disease-free survival (p = 0.010), but no impact on overall survival was found (p = 0.807). The risk of relapse in tumours with CTNNB1 exon 3 mutation was independent of FIGO stage, tumour grade, mismatch repair protein expression, or the presence of lymphovascular space invasion. CTNNB1 exon 3 mutation has a negative impact on disease-free survival in low-grade, early-stage EECs. Nuclear beta-catenin shows a higher positive predictive value than LEF1 for CTNNB1 exon 3 mutation in these tumoursThis research was funded by the Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) (PI17/01723), co-financed by the European Development Regional Fund ‘A way to achieve Europe’ (FEDER

Correlación entre la emoción expresada por padres de esquizofrénicos y su percepción por los hijos.

Se compara la Emoción Expresada con la Sobreprotección y el Cuidado evaluados con el Parental Bonding Instrument

Correlación entre la emoción expresada por padres de esquizofrénicos y su percepción por los hijos.

Se compara la Emoción Expresada con la Sobreprotección y el Cuidado evaluados con el Parental Bonding Instrument