Molecular and physiological responses of Pichia pastoris to lignocellulosic hydrolysate components

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2021.Komagataella phaffii, anteriormente conhecida como Pichia pastoris, é um organismo modelo comummente usado na pesquisa e na indústria. Tem sido considerada para a produção de produtos de alto valor agregado, especialmente proteínas. Suas aplicações biotecnológicas envolvem principalmente a utilização de fontes clássicas de carbono como glicose, glicerol, sorbitol e metanol, embora muitos outros substratos também tenham sido pesquisados. As biomassas lignocelulósicas são ricas em açúcares fermentáveis, como a xilose, o segundo açúcar mais abundante na natureza, que pode ser usado para a produção de produtos químicos renováveis. No entanto, a utilização microbiana da xilose depende da capacidade inata de utilização desta pelo microrganismo, e de sua tolerância aos compostos inibidores presentes nos hidrolisados lignocelulósicos. Atualmente, entende-se que P. pastoris não é capaz de utilizar xilose como fonte de carbono a menos que seja modificada para isso, e sua sensibilidade a tais inibidores é pouco compreendida. Neste estudo, apresentamos as respostas moleculares e fisiológicas de P. pastoris aos principais componentes do hidrolisado lignocelulósico: inibidores derivados da lignocelulose, e a xilose. A análise fisiológica e transcricional de P. pastoris X33 para ácido acético, furaldeídos e hidrolisado de bagaço de cana-de-açúcar mostrou que eles afetam o metabolismo celular de forma dose-dependente, e se correlacionam positivamente com a quantidade de genes diferencialmente expressos. Ao contrário de outras leveduras industriais como Saccharomyces cerevisiae, P. pastoris pode consumir concomitantemente ácido acético com glicose como fonte de carbono, possivelmente ajudando a reduzir sua toxicidade para as células. A tolerância ao inibidor, e a capacidade de utilização da xilose de 25 isolados diferentes naturais e um de laboratório de Komagataella, de seis espécies diferentes, também foram avaliadas. Nenhum isolado com tolerância aos inibidores distintamente maior foi identificado, entretanto linhagens capazes de crescer em xilose foram. Três linhagens de melhor crescimento foram selecionadas e submetidas à engenharia adaptativa de laboratório (ALE) para otimização do consumo de xilose. A caracterização detalhada da assimilação da xilose pela via de oxirredução foi confirmada por ensaios utilizando marcação com isótopos de carbono 13C, apesar de precisar de mais de dez dias para duplicar. Por fim, uma estratégia de engenharia genética foi empregada para melhorar a tolerância de P. pastoris X33 ao ácido acético. Para isso, o gene homólogo HAA1, previamente descrito em S. cerevisiae como fator de transcrição envolvido na resposta ao estresse com ácido acético, foi identificado e superexpresso em P. pastoris X33. Isso melhorou o crescimento da levedura na presença de 2g.L-1 4,9 vezes após 24 h de cultivo. Juntos, os resultados apresentados aqui abrem caminho para a compreensão do metabolismo de P. pastoris na presença de hidrolisados lignocelulósicos, ácido acético, furaldeídos e xilose.Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Austrian Federal Ministry of Education, Science and Research (BMBWF).Komagataella phaffii, previously known as Pichia pastoris, is a common model organism used in research and industry. It has been considered for the production of high value-added products, especially proteins. Its biotechnological applications mostly involve the utilization of classical carbon sources like glucose, glycerol, sorbitol, and methanol, although many other substrates have also been researched. Lignocellulosic biomasses are rich in fermentable sugars, like xylose, the second most abundant sugar in nature, which can be used for the production of renewable chemicals. The microbial utilization of xylose is dependent on the innate utilization capacity by the microorganism, and its tolerance to inhibitory compounds present in lignocellulosic hydrolysates. The current understanding is that P. pastoris is not capable of utilizing xylose as a carbon source unless engineered towards it, and its sensitivity to such inhibitors is poorly understood. In this study, we present the molecular and physiological responses of P. pastoris to the major lignocellulosic hydrolysate components: lignocellulose-derived inhibitors, and xylose. The physiological and transcriptional analysis of P. pastoris X33 to acetic acid, furaldehydes, and sugarcane bagasse hydrolysate showed they affect cell metabolism in a dose-dependent way, and it positively correlates with the amount of differentially expressed genes. Unlike other industrial yeasts like Saccharomyces cerevisiae, P. pastoris can co-consume acetic acid with glucose as carbon source, possibly helping it reduce its toxicity to the cells. The inhibitor tolerance and xylose utilization capacity of 25 different natural and one laboratory Komagataella isolates of six different species was also evaluated. No isolates with higher tolerance towards inhibitors were identified, however, strains capable of growing on xylose were. The three best growing strains were selected and underwent adaptative laboratory evolution (ALE) for xylose consumption optimization. Detailed characterization of xylose assimilation via the oxidoreductase pathway was confirmed using carbon isotope 13C labeling, despite it needing more than ten days to duplicate. Finally, a genetic engineering strategy was employed to improve P. pastoris X33 tolerance towards acetic acid. For this, the homologous HAA1 gene previously described in S. cerevisiae as a transcriptional factor involved in acetic acid stress response was identified and overexpressed in P. pastoris X33. These improved yeast’s growth in the presence of 2g.L-1 4.9-fold after 24 h of cultivation. Altogether the results presented here paves the way to understanding P. pastoris’ metabolism in presence of lignocellulosic hydrolysates, acetic acid, furaldehydes, and xylose

Engenharia metabólica de Saccharomyces cerevisiae para aproveitamento de xilose na produção de etanol lignocelulósico

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015.O aumento na demanda por energias sustentáveis impulsiona o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas para a produção de biocombustíveis. Neste contexto, o aproveitamento eficiente da biomassa lignocelulósica como matéria prima é fundamental para a produção de etanol de segunda geração. A levedura Saccharomyces cerevisiae, organismo mais utilizado na produção industrial de bioetanol, é incapaz de utilizar pentoses, como a xilose, que é o segundo açúcar mais abundante em algumas biomassas. Neste trabalho, plasmídeos epissomais foram construídos para expressão de genes codificadores para xilose isomerase (XI) de Piromyces sp. e xiluloquinase (XK) de S. cerevisiae. As linhagens laboratoriais de S. cerevisiae CEN.PK 113.14A Δtrp1-289 (L2) e CEN.PK 113.3C Δtrp1-289, Δura-52 (L7) foram transformadas com os plasmídeos gerados. Desta forma, foram construídas linhagens recombinantes de S. cerevisiae expressando XI isoladamente (L2XI) ou em conjunto com XK (L7XIXK). Uma terceira linhagem, L7XIΦ, expressando XI e com o segundo plasmídeo vazio foi construída como controle. A linhagem L7XIXK apresentou melhores taxas fermentativas que as demais linhagens, confirmando o efeito positivo da expressão de XK. As linhagens L2XI, L7XIΦ e L7XIXK obtidas foram submetidas a um processo de condicionamento em meio seletivo contendo xilose como única fonte de carbono. Ao final do condicionamento, quando comparadas com as originais, apresentaram menor fase lag de crescimento e maior taxa de crescimento, maior consumo de xilose (entre 1,8 e 18,5 vezes) e rendimento de etanol (47% para L7XIXK), concomitante à diminuição do rendimento de xilitol (entre 87,6% e 91,8%). A linhagem L2XI, investigada anaerobicamente, também apresentou aumento no consumo específico de xilose (49,8%), rendimento de etanol (19%) e redução no rendimento de xilitol (75%). As linhagens condicionadas foram submetidas então a um processo de cura para remoção dos plasmídeos. Uma das linhagens obtidas, LC7, derivada de L7XIXK perdeu a capacidade de crescer em meio mínimo, indicando a perda dos plasmídeos. Entretanto o gene para XI ainda foi identificado na levedura. A retransformação desta levedura curada com os plasmídeos originais demonstrou que as melhorias da levedura condicionada podem estar associadas a mutações fora do plasmídeo. Esta linhagem curada tem grande potencial para desenvolvimento de uma linhagem de seleção para novas enzimas da via do catabolismo de xilose.The increasing demand for sustainable energy drives the development of biotechnological strategies for the production of biofuels. In this context, efficient utilization of lignocellulosic biomass as feedstock is essential for the production of second generation biofuels. The yeast S. cerevisiae, main organism utilized in the industrial production of bioethanol, is unable to use pentoses, such as xylose, which is the second most abundant sugar in some biomasses. In this work, multi-copy plasmids were constructed for the expression of genes coding xylose isomerase (XI) from Piromyces sp. and xylulokinase (XK) from S. cerevisiae. The laboratory strains of S. cerevisiae CEN.PK 113.14A Δtrp1-289 (L2) and CEN.PK 113.3C Δtrp1-289, Δura-52 (L7) were transformed with the generated plasmids. Thus, recombinant strains of S. cerevisiae expressing solely XI (L2XI), or combined with XK (L7XIXK) were obtained. A third strain, L7XIΦ, expressing XI and with an empty second plasmid, was constructed as control. The L7XIXK strain presented better fermentative rates than the other strains, confirming the positive effect of XK expression. The obtained strains L2XI, L7XIΦ and L7XIXK underwent a conditioning process in selective medium with xylose as sole carbon source. At the end of the process, when compared to the original strains, conditioned strains presented shorter lag growth phase, and increased growth rate, increased xylose consumption (1,8 to 18,5 fold) and ethanol yield (47% for L7XIXK), along with reduction in xylitol production (between 87,6 and 91,8%). The strain L2XI was investigated under anaerobic conditions and also has presented improved xylose specific consumption (49,8%), ethanol yield (19%) and xylitol reduction (75%). The conditioned strains underwent a curing process, in order to remove the plasmids. One of the obtained strains, LC7, which derived from L7XIXK, has lost its ability to grow on minimal medium, a result consistent with the loss of plasmids. However the XI gene was still identified in the yeast. The retransformation of this curated yeast with the originally constructed plasmids showed that the improvements observed in conditioned strains may be associated with mutations outside of the plasmids. The curated strain has a great potential for the development of a screening strain for new enzymes of the xylose catabolic pathway

Diagenesis of Holocene Beachrock in Northeastern Brazil: Petrology, Isotopic Evidence and Age

This work aims to understand beachrock formation during Holocene through petrology, geochemistry and dating of a core located 5,43m deep in relation to present-day sea-level in the Piedade Beach in Jaboatao dos Guararapes- PE. The core is located 143 meters distant from the coast line towards mainland. Four lithofacies have been identified, taking into account differences in texture and sedimentary structures. The framework grain size ranges from medium to very coarse sand, indicating variations in depositional energy. Petrographic data indicate that the beachrocks have values of 64.23% to 70.69% of framework composed of quartz grains. Carbonate cement (represents 13.5%) consisting of high magnesium calcite surrounding grains as isopachous fringe (4.15% to 11.95%), micritic cement (0.60% to 6.42%) and equant cement (0.26% to 7.01%), indicates marine environment precipitation. The results of the isotopic composition of carbon and oxygen present valuesof 3.09‰ to 3.89‰, with an average of 3.63‰ to δ13CPDB and of -0.91‰ to 0.96‰, with an average of 0.54‰ to δ18OPDB, suggesting that the cement is formed in a shallow marine environment with freshwater influence. The values obtained in paleotemperature vary from 21ºC to 30ºC, with an average of 23ºC, with little variation indicating precipitation in a shallow water environment. In the study area, the beachrocks are indicators of sea level and the results suggest that between 7.509 years B.P. and 5982 years B.P. there was a marine transgression process, with sea level 9.18 m lower than the current sea level

Ambiente virtual de aprendizagem:

Virtual platforms are technologies created to support the educating community in its pedagogical practices. Therefore, this work aims to analyze the possibili- ties and limits of the Pedagogical Focus Platform from the perspective of the 2nd Regional Education Unit (URE) in the city of Cametá-PA. To answer these questions, a bibliographic review was carried out focusing on the discussions by Alves, Kenski and Costa and Mendonça. The technique used for data collection was the semi-structured questionnaire with the reference technician of SisPAE / Plataforma Foco Pedagógico. The results obtained point to the increasing use of the platform by the educating community, being a pedagogical tool that is being disseminated in the state networks of Pará and that has a unique role in the proposal for reflecting on pedagogical practices.Las plataformas virtuales son tecnologías creadas para apoyar a la comunidad educativa en sus prácticas pedagógicas. Por tanto, este trabajo tiene como objetivo analizar las posibilidades y límites de la Plataforma de Enfoque Pedagógico desde la perspectiva de la 2ª Unidad Regional de Educación (URE) en la ciudad de Cametá-PA. Para dar respuesta a estas preguntas se realizó una revisión bibliográfica centrada en las discusiones de Alves, Kenski y Costa y Mendonça. La técnica utilizada para la recolección de datos fue el cuestionario semiestructurado con el técnico de referencia de SisPAE / Plataforma Foco Pedagógico. Los resultados obtenidos apuntan al creciente uso de la plataforma por parte de la comunidad educativa, siendo una herramienta pedagógica que se está difundiendo en las redes estatales de Pará y que tiene un rol único en la propuesta de reflexión sobre las prácticas pedagógicas.As plataformas virtuais são tecnologias criadas para subsidiar a comunidade educadora em suas práticas pedagógicas. Diante disso, este trabalho tem como objetivo analisar as possibilidades e limites da plataforma Foco Pedagógico a partir do olhar sobre a 2ª Unidade Regional de Educação (URE), na cidade de Cametá/PA. Para responder a tais questões, foi realizada revisão bibliográfica com enfoque nas discussões de Alves, Kenski e Costa e Mendonça. A técnica utilizada para coleta de dados foi o questionário semiestruturado com o técnico de referência do SisPAE/plataforma Foco Pedagógico. Os resultados obtidos apontam para o uso cada vez mais elevado da plataforma pela comunidade educadora, sendo uma ferramenta pedagógica que está em fase de disseminação nas redes estaduais do Pará e que possui um papel único na proposta pela reflexão das práticas pedagógicas

Evaluation of the metabolism of high energy phosphates in patients with Chagas' disease

FUNDAMENTO: Anormalidades do metabolismo miocárdico têm sido observadas em pacientes com insuficiência cardíaca de diferentes etiologias. A espectroscopia por ressonância magnética (ERM) com fósforo 31 é uma técnica não invasiva que permite a detecção de alterações metabólicas miocárdicas. OBJETIVO: Determinar o metabolismo de repouso dos fosfatos de alta energia em pacientes portadores de doença de Chagas (DC) pela ERM com fósforo 31. MÉTODOS: Foram estudados 39 pacientes com DC, sendo 23 com função ventricular preservada (Grupo FP) e 16 com disfunção ventricular (Grupo DV), avaliados pela ecodopplercardiografia. A ERM da região anterosseptal foi realizada nos 39 pacientes e em 8 indivíduos normais (Grupo C), por meio de um aparelho Phillips de 1,5 Tesla, obtendo-se a relação fosfocreatina/trifosfato de adenosina beta (PCr/&#946;-ATP) miocárdicos. RESULTADOS: Os níveis cardíacos de PCr/&#946;-ATP estavam reduzidos no Grupo DV em relação ao Grupo FP, e estes apresentaram níveis reduzidos em relação ao Grupo C (Grupo DV: 0,89 ± 0,31 vs Grupo FP: 1,47 ± 0,34 vs Grupo C: 1,88 ± 0,08, p < 0,001). Houve correlação entre a fração de ejeção do ventrículo esquerdo e a PCr/&#946;-ATP nos 39 pacientes estudados (r = 0,64, p < 0,001). Os pacientes em classe funcional I (n = 22) apresentaram PCr/&#946;-ATP de 1,45 ± 0,35, e aqueles em classes funcionais II e III (n = 17), PCr/&#946;-ATP de 0,94 ± 0,36 (p < 0,001). CONCLUSÃO: A ERM permitiu detectar de forma não invasiva alterações no metabolismo energético em pacientes com DC, mesmo sem disfunção sistólica; tais alterações estavam relacionadas com a gravidade do comprometimento cardíaco.BACKGROUND: Abnormalities in myocardial metabolism have been observed in patients with heart failure of different etiologies. Magnetic resonance spectroscopy (MRS) with phosphorus-31 is a noninvasive technique that allows detection of myocardial metabolic changes. OBJECTIVE: To determine the resting metabolism of high-energy phosphates in patients with Chagas' disease (CD) by MRS with phosphorus-31. METHODS: We studied 39 patients with CD, 23 with preserved ventricular function (PF Group) and 16 with ventricular dysfunction (VD Group), assessed by Doppler echocardiography. MRS of the anterosseptal region was performed in 39 patients and 8 normal subjects (C Group) through a Phillips 1.5 Tesla device, obtaining the phosphocreatine/beta-adenosine triphosphate myocardial ratio (PCr/&#946;-ATP). RESULTS: The levels of cardiac PCr/&#946;-ATP were reduced in VD Group in relation to PF Group, and the latter presented reduced levels compared to C Group (VD Group: 0.89 ± 0.31 vs PF Group: 1.47 ± 0.34 vs C Group: 1.88 ± 0.08, p < 0.001). A correlation was found between left ventricular ejection fraction and PCr/&#946;-ATP in 39 patients (r = 0.64, p < 0.001). Patients under functional class I (n = 22) presented PCr/&#946;-ATP of 1.45 ± 0.35, and those in functional classes II and III (n = 17), PCr/&#946;-ATP of 0.94 ± 0.36 (p < 0.001). CONCLUSION: The 31-phosphorus MRS was able to detect non-invasively changes in the rest energy metabolism of patients with Chagas' disease, with and without systolic dysfunction. These changes were related to the severity of heart impairment

One-neutron transfer, complete fusion, and incomplete fusion from the Be 9 + Au 197 reaction

In this work, one-neutron transfer (pickup and stripping), complete and incomplete fusion cross sections for the Be9+Au197 system were measured over a wide range of energies around the Coulomb barrier by the offline γ-ray detection method. Coupled-channel calculations were used to determine the elastic, inelastic, and transfer cross sections. Coupled reaction channel calculations were performed to derive the one-neutron stripping and pickup cross sections. Three-body continuum discretized coupled-channel calculations were used to determine the effect of the breakup channel on the other reaction mechanisms. The reduced complete and total fusion were found to be hindered above and enhanced below the Coulomb barrier compared with the universal fusion function due to the breakup plus transfer effects.Fil: Gollan Scilipotti, Fernando Daniel. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Abriola, Daniel Hugo. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; ArgentinaFil: Arazi, Andres. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cardona, Maria Angelica. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: de Barbará, Ezequiel. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; ArgentinaFil: de Jesús, Joaquín. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Hojman, Daniel Leonardo. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Id Betan, Rodolfo Mohamed. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Física de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Instituto de Física de Rosario; ArgentinaFil: Lubian, J.. Universidade Federal Fluminense; BrasilFil: Pacheco, Alberto Jorge. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Paes, Bárbara. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; ArgentinaFil: Schneider, David Marcelo. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Investigación y Aplicaciones No Nucleares. Gerencia Física (Centro Atómico Constituyentes). Proyecto Tandar; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Soler, H. O.. Universidade Federal Fluminense; Brasi

Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) na diferenciação entre a dermatite de contato alérgica e de contato irritante: um estudo da expressão de marcadores de superfície de linfócitos T

Introduction: The Local Lymph Node Assay (LLNA) was developed as an alternative to Buhler and Maximization assays. It is applied to discriminate substances that are able to induce contact dermatitis and the endpoint is cell quantification in mice auricular lymph nodes. Although recommended by international agencies involved in the development of alternative methodologies, LLNA still needs to be improved. Objective: In this context, the goal of this study was to investigate possible differences in lymphocyte subpopulation patterns among mice treated with irritants and dermosensitizers. Method: Animals were treated with sensitizers dinitrochlorobenzene (DNCB) and paraphenylenediamine (PPD) and irritants sodium lauryl sulfate (SLS) and tritonX-100 (TX-100) for 3 days, using dorsum area of both ears. The percentage of different lymphocyte subpopulations were analyzed by flow cytometry. Ears of animals were also evaluated for possible pathological alterations. Results: Differences were observed in CD4+ CD25+ and CD4+ CD69+ cells, as well as in the proliferation of these subpopulations. The histopathological analysis of the ears showed no difference between the treatment with either dermosensitizers or irritants. Conclusions: T lymphocyte phenotyping might still be a useful tool in the development of an assay to differentiate between dermosensitizers and irritants. Moreover, these results may contribute to improving knowledge on this field and helping in the search of a correlate in vitro assay.Introdução: O ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. O teste é utilizado com o objetivo de identificar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares. Embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas, o LLNA ainda necessita de aprimoramento. Objetivo: O objetivo do trabalho foi estudar possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e dermosensibilizantes. Método: Os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD), os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por três dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e possíveis alterações histopatológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Resultados: Foram observadas diferenças nas células CD4+CD25+ e CD4+CD69+, assim como na proliferação dessas subpopulações. Nenhuma diferença foi vista nos estudos histopatológicos das orelhas dos animais quando tratados com dermosensibilizantes ou irritantes. Conclusões: A fenotipagem de linfócitos T pode ser considerada útil no desenvolvimento de possíveis protocolos de ensaios que visem a diferenciação entre substâncias dermosensibilizantes e irritantes. Além disso, os resultados obtidos podem vir a contribuir com o aumento do conhecimento nesta área e auxiliar na busca por um ensaio in vitro correlato

Suplementação vitamínica durante a gestação: revisão sistemática

Introdução: O organismo da gestante sofre inúmeras mudanças fisiológicas e anatômicas para benefícios da saúde materna e fetal. Por essa razão, além de uma dieta adequada, é necessário considerar suplementação vitamínica evitando deficiência nutricional. Objetivo: Avaliar por meio de uma revisão a importância da adequada suplementação de vitaminas durante a gestação para o bem estar do binômio materno fetal. Métodos: A realização da busca se deu nas seguintes bases de dados: Medical Literature and Retrivial System onLine (MEDLINE/PubMed), Literatura Latino-americana e do Caribe em Ciências da Saúde (LILACS) e Scientific Electronic Library Online (SciELO), utilizando-se os descritores “Gestação” e “Suplementação Nutricional”, selecionados previamente no Descritores em Ciências da Saúde (DeCs). Resultados: Foram selecionados 20 artigos de estudos variados, dentre eles: ensaios clínicos randomizados, meta análise, estudo transversal analítico. Avaliou-se os seguintes suplementos:&nbsp; ácido fólico, cálcio, ômega 3, sulfato ferroso, vitamina A e vitamina D. Discussão: O trabalho em questão se dedicou à pesquisa de suplementos vitamínicos para o uso durante a gestação, expondo os principais indicadores no que tange o desenvolvimento saudável da gestante e do feto. As suplementações de ácido fólico, cálcio, ômega 3, sulfato ferroso e vitamina A, evidenciaram benefícios para esses grupos e estão relacionados à formação fetal adequada e prevenção de eventos como parto prematuro, aborto espontâneo e pré-eclâmpsia. Contudo, no caso da vitamina D, não existem estudos suficientes que comprovem a sua necessidade. Considerações Finais: A suplementação de vitaminas e minerais são importantes durante a gestação, apresentando diversos benefícios como redução da incidência de pré-eclâmpsia, parto prematuro e diabetes gestacional. Dessa forma, é necessário individualizar o pré-natal