Red light delays programmed cell death in non-host interaction between Pseudomonas syringae pv tomato DC3000 and tobacco plants

Light modulates almost every aspect of plant physiology, including plant-pathogen interactions. Among these, the hypersensitive response (HR) of plants to pathogens is characterized by a rapid and localized programmed cell death (PCD), which is critical to restrict the spread of pathogens from the infection site. The aim of this work was to study the role of light in the interaction between Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 (Pto DC3000) and non-host tobacco plants. To this end, we examined the HR under different light treatments (white and red light) by using a range of well-established markers of PCD. The alterations found at the cellular level included: i) loss of membrane integrity and nuclei, ii) RuBisCo and DNA degradation, and iii) changes in nuclease profiles and accumulation of cysteine proteinases. Our results suggest that red light plays a role during the HR of tobacco plants to Pto DC3000 infection, delaying the PCD process.Fil: Moyano, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Lopez Fernandez, Maria Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Carrau, Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Nannini, Julian Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Petrocelli, Silvana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Maldonado, Sara Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; Argentin

The LOV Protein of Xanthomonas citri subsp. citri Plays a Significant Role in the Counteraction of Plant Immune Responses during Citrus Canker

Pathogens interaction with a host plant starts a set of immune responses that result in complex changes in gene expression and plant physiology. Light is an important modulator of plant defense response and recent studies have evidenced the novel influence of this environmental stimulus in the virulence of several bacterial pathogens. Xanthomonas citri subsp. citri is the bacterium responsible for citrus canker disease, which affects most citrus cultivars. The ability of this bacterium to colonize host plants is influenced by bacterial blue-light sensing through a LOV-domain protein and disease symptoms are considerably altered upon deletion of this protein. In this work we aimed to unravel the role of this photoreceptor during the bacterial counteraction of plant immune responses leading to citrus canker development. We performed a transcriptomic analysis in Citrus sinensis leaves inoculated with the wild type X. citri subsp. citri and with a mutant strain lacking the LOV protein by a cDNA microarray and evaluated the differentially regulated genes corresponding to specific biological processes. A down-regulation of photosynthesis-related genes (together with a corresponding decrease in photosynthesis rates) was observed upon bacterial infection, this effect being more pronounced in plants infected with the lov-mutant bacterial strain. Infection with this strain was also accompanied with the up-regulation of several secondary metabolism- and defense response-related genes. Moreover, we found that relevant plant physiological alterations triggered by pathogen attack such as cell wall fortification and tissue disruption were amplified during the lov-mutant strain infection. These results suggest the participation of the LOV-domain protein from X. citri subsp. citri in the bacterial counteraction of host plant defense response, contributing in this way to disease development.Fil: Kraiselburd, Ivana. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnol.conicet - Rosario. Instituto de Biologia Molecular y Celular de Rosario;Fil: Daurelio, Lucas Damian. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnol.conicet - Rosario. Instituto de Biologia Molecular y Celular de Rosario;Fil: Tondo, Maria Laura. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnol.conicet - Rosario. Instituto de Biologia Molecular y Celular de Rosario;Fil: Merelo, Paz. INSTITUT VALENCIÀ D'INVESTIGACIONS AGRÀRIES (IVIA);Fil: Cortadi, Adriana Amalia. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnol.conicet - Rosario. Instituto de Biologia Molecular y Celular de Rosario;Fil: Talón, Manuel. INSTITUT VALENCIÀ D'INVESTIGACIONS AGRÀRIES (IVIA);Fil: Tadeo, Francisco R.. INSTITUT VALENCIÀ D'INVESTIGACIONS AGRÀRIES (IVIA);Fil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnol.conicet - Rosario. Instituto de Biologia Molecular y Celular de Rosario

Light modulates important physiological features of Ralstonia pseudosolanacearum during the colonization of tomato plants

Ralstonia pseudosolanacearum GMI1000 (Rpso GMI1000) is a soil-borne vascular phytopathogen that infects host plants through the root system causing wilting disease in a wide range of agro-economic interest crops, producing economical losses. Several features contribute to the full bacterial virulence. In this work we study the participation of light, an important environmental factor, in the regulation of the physiological attributes and infectivity of Rpso GMI1000. In silico analysis of the Rpso genome revealed the presence of a Rsp0254 gene, which encodes a putative blue light LOV-type photoreceptor. We constructed a mutant strain of Rpso lacking the LOV protein and found that the loss of this protein and light, influenced characteristics involved in the pathogenicity process such as motility, adhesion and the biofilms development, which allows the successful host plant colonization, rendering bacterial wilt. This protein could be involved in the adaptive responses to environmental changes. We demonstrated that light sensing and the LOV protein, would be used as a location signal in the host plant, to regulate the expression of several virulence factors, in a time and tissue dependent way. Consequently, bacteria could use an external signal and Rpsolov gene to know their location within plant tissue during the colonization process.Fil: Tano, María Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Ripa, Maria Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Tondo, Maria Laura. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; ArgentinaFil: Carrau, Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Petrocelli, Silvana. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; ArgentinaFil: Rodriguez, María Victoria. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; ArgentinaFil: Ferreira, Virginia. Universidad de la República. Facultad de Química; UruguayFil: Siri, María Inés. Universidad de la República. Facultad de Química; UruguayFil: Piskulic, Laura. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; ArgentinaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentin

Aportes en la elucidación de la respuesta promovida por Gluconacetobacter diazotrophicus como biocontrolador de Ralstonia solanacearum GMI1000

Gluconacetobacter diazotrophicus (Gd) es una bacteria endófita promotora del crecimiento vegetal (PGPBEs). La asociación planta-PGPBE beneficia a la planta hospedadora mediante la fitoestimulación, biofertilización y protección contra patógenos. Ralstonia solanacearum (Rso) es la bacteria responsable de la marchitez bacteriana en tomate, y causa enormes pérdidas económicas. El objetivo de este trabajo fue estudiar la acción de Gd PAL5 como agente de biocontrol evaluando los mecanismos antagónicos de esta bacteria durante el estrés biótico producido por Rso GMI1000. La motilidad bacteriana es de importancia en el proceso de colonización de la planta por parte del endófito, por eso se ensayaron las motilidades tipo swimming, swarmming y twiching en placas de Petri con medio LGI-P con concentraciones diferentes de agar y se observó la migración de las bacterias y la morfología de los bordes de las colonias. Los ensayos de biocontrol se realizaron mediante estudios in vivo e in vitro. Plantas de Arabidopsis thaliana Col0 se inocularon con 10^6 UFC/mL de Gd, luego de 3 semanas, se inocularon por raíz con 10^6 UFC/mL de Rso. Luego de 12 días: I- Las plantas se esterilizaron superficialmente y extractos de los distintos órganos se sembraron en medios selectivos para cada bacteria. II- Se tomaron muestras a distintos días post inoculación con Gd y Rso, se fijaron en FAA, cortaron y tiñeron con safranina-fast green y azul de toluidina (1%). III- Se cuantificó colorimétricamente el contenido de clorofila a y clorofila b en hojas de plantas sometidas a distintos tratamientos. Además, se buscaron posibles compuestos antimicrobianos mediante experimentos in vitro ensayando la actividad antibacteriana de fracciones de cultivo de la bacteria endófita (medio extracelular, contenido celular y cultivo bacteriano), con la técnica de superposición con soft agar. Bajo las condiciones ensayadas Gd presentó motilidad tipo swarming, que le permite una migración rápida y coordinada, que junto a la producción de exopolisacáridos juegan un rol sustancial en la interacción con la planta. Los ensayos de biocontrol in vivo muestran: a) estructuras anatómicas del tallo más conservadas en plantas con Gd evidenciándose aumento de xilema, mayor lignificación y mayor cantidad de tejido esclerosado entre los haces vasculares; b) técnicas histoanatómicas y los resultados de recuentos bacterianos revelaron mayor proliferación del fitopatógeno en plantas no tratadas con Gd; c) A su vez, se observó una concentración menor de pigmentos en plantas no inoculadas con Gd. En los ensayos in vitro se evidenció actividad antagonista de la fracción celular del cultivo de Gd contra Rso. Los resultados del presente trabajo muestran que Gd coloniza las plantas de A. thaliana ejerciendo un rol protector frente a Rso.Fil: Srebot, Maria Sol. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Botánica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rodriguez, María Victoria. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Botánica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ansaldi, Nazarena. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Botánica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Tano, María Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Carrau, Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Fernandez, Armando Eduardo. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Botánica; ArgentinaFil: Martinez, María Laura. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Botánica; ArgentinaFil: Cortadi, Adriana Amalia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Botánica; ArgentinaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaXV Congreso Argentino de Microbiología; V Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos: V Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos y XIV Congreso Argentino de Microbiología GeneralCiudad de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Microbiología Genera

La renovación de la palabra en el bicentenario de la Argentina : los colores de la mirada lingüística

El libro reúne trabajos en los que se exponen resultados de investigaciones presentadas por investigadores de Argentina, Chile, Brasil, España, Italia y Alemania en el XII Congreso de la Sociedad Argentina de Lingüística (SAL), Bicentenario: la renovación de la palabra, realizado en Mendoza, Argentina, entre el 6 y el 9 de abril de 2010. Las temáticas abordadas en los 167 capítulos muestran las grandes líneas de investigación que se desarrollan fundamentalmente en nuestro país, pero también en los otros países mencionados arriba, y señalan además las áreas que recién se inician, con poca tradición en nuestro país y que deberían fomentarse. Los trabajos aquí publicados se enmarcan dentro de las siguientes disciplinas y/o campos de investigación: Fonología, Sintaxis, Semántica y Pragmática, Lingüística Cognitiva, Análisis del Discurso, Psicolingüística, Adquisición de la Lengua, Sociolingüística y Dialectología, Didáctica de la lengua, Lingüística Aplicada, Lingüística Computacional, Historia de la Lengua y la Lingüística, Lenguas Aborígenes, Filosofía del Lenguaje, Lexicología y Terminología

A novel tool to compare microarray data from different experiments

In recent years there is a transition from experiments involving a small number of conditions, with an emphasis on specific genes induced or repressed, to experiments involving hundreds of conditions with patterns of global gene expression. This represents enormous amounts of information, and to compare data obtained in different experiments bioinformatic tools are required. Microarrays, for example, enable the transcript levels of an entire genome to be measured simultaneously, and have become important for crop species where yet little genome information is available. In these cases, comparative análisis of microarray results requires additional hard work. In this context, a Perl postprocessing tool was developed to compare several datasets obtained with the same chip platform. It was originally created to analyze results obtained from microarray experiments using a cDNA microarrays platform (MartinezGodoy M.A. et al. 2008. BMC.Genomics 9, 318) of citrus plants exposed to diverse biotic stresses. The result for each assay, alter preprocessing raw data with another software such as MapMan, is a tabdelimited text file with a list of spot or EST identifiers (ID) and their associated parameters. Optionally, their respective Arabidopsis thaliana orthologous genes can be assigned and functionally grouped, and finally differentially expressed genes are selected. The script searches for genes requested by the user, and allows to compare them between different experiments. The input file could be a citrus ID list or an Arabidopsis identifier (ATG) list, and the user is allowed to choose which parameters will be returned. The output file contains the ID/ATG, the selected parameters for each experiment, and may incluye annotations available for each spot if the user selected it. To aid in the implementation, particularly for biologists, a browser-based interface provides easier interaction with users. This interface was written Perl using CGI library. It could be deployed either to use local sites or shared bioinformatics resources. Considering results obtained by other oomics techniques or platforms, simple modifications of this script will enhance its applicability, to allow comparison among experiments performed on different platforms. The increasing number of pathogen genomes present great opportunities for the development of new diagnostics.Fil: Kurth, Daniel German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Microbiología; ArgentinaFil: Daurelio, Lucas Damian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Esteban, Luis. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Escuela de Ciencias médicas. Cátedra de Química Biologica; Argentina2do Congreso Argentino de Bioinformática y Biología ComputacionalCórdobaArgentinaAsociación Argentina de Bioiformática y Biología Computaciona

Functional Characterization of a LOV-Histidine Kinase Photoreceptor from Xanthomonas citri subsp. citri

The blue-light (BL) absorbing protein Xcc-LOV from Xanthomonas citri subsp. citri is composed of a LOV-domain, a histidine kinase (HK) and a response regulator. Spectroscopic characterization of Xcc-LOV identified intermediates and kinetics of the protein's photocycle. Measurements of steady state and time-resolved fluorescence allowed determination of quantum yields for triplet (ΦT = 0.68 ± 0.03) and photoproduct formation (Φ390 = 0.46 ± 0.05). The lifetime for triplet decay was determined as τT = 2.4-2.8 μs. Fluorescence of tryptophan and tyrosine residues was unchanged upon light-to-dark conversion, emphasizing the absence of significant conformational changes. Photochemistry was blocked upon cysteine C76 (C76S) mutation, causing a seven-fold longer lifetime of the triplet state (τT = 16-18.5 μs). Optoacoustic spectroscopy yielded the energy content of the triplet state. Interestingly, Xcc-LOV did not undergo the volume contraction reported for other LOV domains within the observation time window, although the back-conversion into the dark state was accompanied by a volume expansion. A radioactivity-based enzyme function assay revealed a larger HK activity in the lit than in the dark state. The C76S mutant showed a still lower enzyme function, indicating the dark state activity being corrupted by a remaining portion of the long-lived lit state.Fil: Kraiselburd, Ivana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Gutt, Alexander. Max‐Planck‐Institute for Chemical Energy Conversion; AlemaniaFil: Losi, Aba. Università di Parma; ItaliaFil: Gärtner, Wolfgang. Max‐Planck‐Institute for Chemical Energy Conversion; AlemaniaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentin

Bacteriophytochromes from Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 modulate the early stages of plant colonization during bacterial speck disease

Living organisms have evolved the ability to perceive and respond to light of different wavelengths within the visible spectrum by the generation of photoreceptor proteins. Recent studies revealed the participation of these proteins in the virulence of plant pathogenic bacteria. Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 (Pto) is responsible for the bacterial speck, which affects tomato crops. Pto genome contains two genes encoding red/far-red light photoreceptors (BphP1: PSPTO_1902 and BphP2: PSPTO_2652). This work demonstrates the participation of Pto phytochromes and light in the bacterial physiology and during the interaction with tomato plants. We found that Pto phytochromes are implicated in the control of some features related with the bacteria capability to enter into the plant apoplast and cause bacterial speck disease, such as motility, biofilm formation, adhesion and emulsification capability. Red light and bacteriophytochromes are important during the early colonization stage of tomato phyllosphere, affecting Pto virulence. In addition, the development of disease symptoms in infiltrated leaflets is affected by light, which may be the consequence of type-two secretion system regulation.Fil: Moyano, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Carrau, Analía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Petrocelli, Silvana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; ArgentinaFil: Kraiselburd, Ivana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Gärtner, Wolfgang. Max-Planck-Institute for Chemical Energy Conversion; AlemaniaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentin

An experimental protocol for teaching CRISPR/Cas9 in a post-graduate plant laboratory course: An analysis of mutant-edited plants without sequencing

The CRISPR/Cas9 system is widely used for editing genes in various organisms and is a very useful tool due to its versatility, simplicity, and efficiency. To teach its principles to post-graduate students we designed a laboratory activity to obtain and analyze PDS3 mutants in Arabidopsis thaliana plants consisting of: 1) Design of guide RNAs using bioinformatics tools; 2) plant transformation (which is optional depending on the length of the course); 3) observation and evaluation of the mutant's phenotypes in the Phytoene desaturase (PDS3) gene, which exhibit an albino phenotype and different degrees of mosaicism in the editing events we evaluated; 4) PCR amplification of a fragment that includes the mutated region followed by analysis of single-stranded DNA conformation polymorphisms (SSCP) using native polyacrylamide gel electrophoresis and silver nitrate staining to detect changes in the amplicon sequence due to gene editing. Through SSCP, the students were able to distinguish between homozygous and heterozygous edited plants. A highlight feature of this protocol is the visualization and detection of the mutation/edition without sequencing the edited fragment.Fil: Mayta, Martín Leonardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas.; Argentina. Universidad Adventista del Plata. Facultad de Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Dotto, Marcela Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Instituto de Ciencias Agropecuarias del Litoral. - Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Ciencias Agropecuarias del Litoral.; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas.; ArgentinaFil: Krapp, Adriana del Rosario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas.; ArgentinaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas.; Argentin

Protein O-linked glycosylation in the plant pathogen Ralstonia solanacearum

Ralstonia solanacearum is one of the most lethal phytopathogens in the world. Due to its broad host range, it can cause wilting disease in many plant species of economic interest. In this work, we identified the O-oligosaccharyltransferase (O-OTase) responsible for protein O-glycosylation in R. solanacearum. An analysis of the glycoproteome revealed that 20 proteins, including type IV pilins are substrates of this general glycosylation system. Although multiple glycan forms were identified, the majority of the glycopeptides were modified with a pentasaccharide composed of HexNAc-(Pen)-dHex3, similar to the O antigen subunit present in the lipopolysaccharide of multiple R. solanacearum strains. Disruption of the O-OTase led to the total loss of protein glycosylation, together with a defect in biofilm formation and reduced pathogenicity towards tomato plants. Comparative proteomic analysis revealed that the loss of glycosylation is not associated with widespread proteome changes. Only the levels of a single glycoprotein, the type IV pilin, were diminished in the absence of glycosylation. In parallel, disruption of glycosylation triggered an increase in the levels of a surface lectin homologous to Pseudomonas PA-IIL. These results reveal the important role of glycosylation in the pathogenesis of R. solanacearum.Fil: Elhenawy, Wael. University of Alberta; CanadáFil: Scott, Nichollas E.. University of British Columbia; CanadáFil: Tondo, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Orellano, Elena Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Foster, Leonard J.. University of British Columbia; CanadáFil: Feldman, Mario F.. University of Alberta; Canadá. University of Washington; Estados Unido