Development of cationic polymeric nanoparticles for plasmid DNA vaccine delivery

Cancer is the second most prevalent cause of death in the world and does not yet have a universal cure. Human papillomavirus (HPV) is among the main carcinogenic pathogens and its infection is related to several cancers, such as cervical and oropharyngeal cancers. Cervical cancer is the 4th largest cause of cancer in women worldwide. Nowadays it is considered one of the most common public health issue, principally in middle-aged women group, especially in less developed countries. The two major infectious papillomavirus genotypes are HPV16 and HPV18, and they are considered to be the most oncogenic and responsible for more than 70% of cervical cancers. Among the HPV virus oncoproteins the E7 oncoprotein inhibits the activity of the retinoblastoma protein (pRb), leading to a deregulation of the cell cycle and consequent uncontrolled growth of cells. Vaccination is considered to be the greatest contribution to global public health interventions of the latest centuries. The evolution and consequent contribution of vaccines are responsible for an impressive increase in general life expectancy. However, the current vaccines against the HPV do not have a therapeutic effect when the patient is already infected. This means that the vaccine can only prevent the infection by the HPV, but cannot treat or revert cancers induced by pre-existing and persistent HPV infections. In this way, DNA vaccines can be a promising solution for the effective treatment of HPV-infected individuals, since they can induce preventive and therapeutic immune responses. In order to be effective, the naked DNA needs to be internalized into the eukaryotic cell nucleus without degradation and the target gene expression is also dependent on the non-degradation of the DNA molecule. However, the internalization efficiency is low, due to the repulsion of the DNA by the membrane. Intramuscular delivery is one of the main routes for DNA vaccine administration. Nevertheless, it requires large amounts of the DNA administered and external stimulation to encourage the internalization of the DNA into the eukaryotic cells. In this work, we consider biocompatible drug delivery systems that can protect, carry and help the cellular internalization of DNA vaccines. This can lead to alternative and less invasive administration routes, such as intranasal administration. In this context, Chitosan (CS) polyplexes using sodium tripolyphosphate (TPP) as a crosslinker were designed and prepared using the ionotropic gelation method. Several parameters that may affect the systems formulation were investigated, including different TPP and CS volumes and concentrations, DNA concentrations, flow rate speed addition of TPP/DNA/pDNA solution. These nanocarriers were characterized in terms of size, surface charge, encapsulation efficiency, morphology, stability and cellular viability exploring two different cell lines. Ultimately, the verification of cell internalization and consequent target gene expression encoded in the DNA vaccine was also verified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and reverse transcription-quantitative real-time. The results showed that the variation of parameters allowed to overcome an ordinary challenge regarding the CS systems achieving monodisperse nanoparticles (NPs) with good size, bellow 200 nm and encapsulation efficiency higher than 60%. The nanoparticles analyzed by scanning electron microscopy (SEM) present spherical or oval shapes in nano sizes. Stability studies demonstrated that the polyplexes are able to protect encapsulated DNA from serine proteases, trypsin, DMEM-F12 medium supplemented with 10% of fetal bovine serum, and Dulbecco´s Modified Eagle´s Medium with High Glucose (DMEM-HG) supplemented with 10% not inactivated fetal bovine serum. Resazurin assay showed that the systems are biocompatible supporting that no cytotoxicity is induced. In addition, the PCR and RT-qPCR results showed that produced nanoparticles have the desired and intended effect, showing that they are suitable for cell uptake, internalization, and gene expression. In conclusion, the presented results revealed that the CS-TPP-pDNA polyplexes are suitable as a good nanocarrier for plasmid DNA vaccine delivery.O cancro é a segunda causa de morte mais prevalente no mundo e ainda não tem cura universal. O papilomavírus humano (HPV) está entre os principais patógenos carcinogénicos e a sua infecção está relacionada com diversos tipos de cancro, como cancro do colo do útero e orofaríngeo. O cancro do colo do útero é a quarta maior causa de cancro em mulheres em todo o mundo. Atualmente é considerado um dos problemas mais comuns de saúde pública, principalmente no grupo de mulheres de meia-idade, principalmente nos países menos desenvolvidos. Os dois principais genótipos infecciosos do papilomavirus são HPV16 e HPV18, e são considerados os mais oncogénicos e responsáveis por mais de 70% dos cancros de colo do útero. Entre as oncoproteínas do vírus HPV a oncoproteína E7 inibe a atividade da proteína retinoblastoma (pRb), levando à desregulação do ciclo celular e consequente crescimento descontrolado de células. A vacinação é considerada a maior contribuição para as intervenções de saúde pública global dos últimos séculos. A evolução e consequente contribuição das vacinas são responsáveis por um aumento assentuado da expectativa geral de vida. No entanto, as vacinas atuais contra o vírus do HPV não têm efeito terapêutico quando o paciente já está infectado. Isso significa que a vacina só pode prevenir a infecção pelo HPV, mas não pode tratar ou reverter os cancros induzidos por infecções por HPV pré-existentes e persistentes. Dessa forma, as vacinas de DNA podem ser uma solução promissora para o tratamento eficaz de indivíduos infectados pelo HPV, uma vez que podem induzir respostas imunes preventivas e terapêuticas. Para ser eficaz, o DNA precisa ser internalizado no núcleo da célula eucariótica sem degradação e a expressão do gene alvo também depende da não degradação da molécula de DNA. Porém, a eficiência de internalização é baixa, devido à repulsão do DNA pela membrana. A administração intramuscular é uma das principais vias de administração da vacina de DNA. No entanto, requer grandes quantidades de DNA a ser administrado e estimulação externa para aumentar a internalização do DNA nas células eucarióticas. Neste trabalho, consideramos sistemas de entrega de fármacos biocompatíveis que irão proteger, transportar e auxiliar a internalização celular das vacinas de DNA. Isto pode oferecer uma via de administração alternativa e menos invasiva, como a administração intranasal. Neste contexto, poliplexos de quitosano usando tripolifosfato de sódio (TPP) como um agente reticulante foram desenvolvidos e aperfeiçoados usando o método de gelificação ionotrópica. Vários parâmetros que podem afetar a formulação do sistema foram investigados, incluindo diferentes volumes e concentrações de TPP e quitosano, concentrações de DNA, taxa de fluxo de adição de solução de TPP/DNA/pDNA. Esses nano-transportadores foram caracterizados em termos de tamanho, carga de superfície, eficiência de encapsulação, morfologia, estabilidade, viabilidade celular explorando duas linhagens celulares diferentes. Por fim, a verificação da internalização celular e consequente expressão do gene alvo codificado na vacina de DNA também foi verificada pelas técnicas de reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) e reverse transcription-quantitative real-time (RT-qPCR). Os resultados mostraram que a variação dos parâmetros permitiu superar um desafio comum em relação aos sistemas de quitosano, obtendo nanopartículas monodispersas com tamanhos reduzidos, abaixo de 200nm, e eficiência de encapsulação superior a 60%. As nanopartículas analisadas por microscopia eletrónica de varrimento apresentam formas esféricas ou ovais em nano tamanhos. Estudos de estabilidade demonstraram que os poliplexos são capazes de proteger o DNA encapsulado de proteases, tripsina, meio DMEM-F12 suplementado com 10% de soro fetal bovino e meio de Eagle modificado por Dulbecco com alta glicose (DMEM-HG) suplementado com 10% de soro fetal bovino não inativado. O ensaio de resazurina mostrou que os sistemas são biocompatíveis, garantindo que nenhuma citotoxicidade será induzida. Além disso, os resultados de PCR e RT-qPCR mostraram que as nanopartículas produzidas têm o efeito desejado e pretendido, mostrando que são adequadas para captação celular, internalização e expressão génica. Em conclusão, os resultados apresentados revelaram que os poliplexos quitosano-TPPpDNA são adequados como um bom nano-transportador para a entrega de vacina de DNA plasmídico

Mapeamento da covid-19 na região centro norte do Brasil: casos, incidência e mortalidade

Cartography has become an indispensable tool to understand the dynamics of the new coronavirus dispersion. This research mapping the Covid-19 dissemination in the Center-North region of Brazil (CNB), from April 1, 2020 to August 1, 2021. It was made a GIS using the free softwares QGIS and PostgreSQL/Postgis, which allowed the geoprocessing, production of thematic maps and temporal and spatial analyses. It were mapped accumulated cases, incidence per 100,000 inhabitants and mortality per 1,000 inhabitants. The main results indicate that the urban hierarchy played a fundamental role in the virus spread, and that the virus entered in the region by the large cities, which have the main airports of the region, and, latterly, the dissemination took place by roads. High incidence and mortality were also identified in cities with structures and services related to high people circulation, as well as, a relationship between low rates and relatively isolated areas, such as Jalapão. Thus, health control policies must consider these places with high concentration and movement of people.Com a pandemia do novo coronavírus (Sars-CoV-2) Covid-19 a cartografia se tornou ferramenta indispensável para compreender a dinâmica de dispersão do vírus. Neste contexto, esta pesquisa teve como objetivo mapear a disseminação da Covid-19 na região Centro Norte do Brasil (CNB), de 01 de abril de 2020 até 01 de agosto de 2021. Para tal análise, foi realizada a montagem de um SIG com a utilização dos softwares gratuitos QGIS e PostgreSQL/Postgis, que permitiram o geoprocessamento dos dados, a produção de mapas temáticos e de análises temporais e espaciais. Foram mapeados os casos acumulados, incidência para cada 100.000 habitantes e mortalidade para cada 1.000 habitantes. Os principais resultados demostram que a hierarquia urbana teve papel fundamental na disseminação do vírus na região, sendo que a entrada do vírus na região ocorreu pelos municípios de grande porte, que possuem aeroportos bem movimentados e, posteriormente, a disseminação ocorreu por vias terrestres. Também foram identificadas elevada incidência e mortalidade em municípios com estruturas e serviços relacionados a alta circulação de pessoas, e uma relação entre as baixas taxas e áreas relativamente isoladas, como no Jalapão. Desta maneira, políticas para controle sanitário devem considerar estas localidades com alta concentração e circulação de pessoas

AS NOVAS ENCRUZILHADAS DO TRABALHO PORTUÁRIO EM TEMPOS DE PANDEMIA

A pandemia levou a população mundial a adotar regras de isolamento social e normas de segurança que têm por objetivo “impedir” a disseminação do vírus. Nessa condição pandêmica, o trabalho, como central para reprodução do modo capitalista de produção foi severamente afetado pela impossibilidade de se manter nos moldes anteriores ao processo pandêmico. Trabalhadores foram declarados como essenciais, incluindo os portuários. Assim, este artigo tem como objetivo refletir sobre o trabalho portuário no contexto da pandemia de Covid-19. O artigo apresenta um breve contexto do trabalho portuário em nível mundial e suas respectivas realidades frente à pandemia e, por conseguinte, o trabalho portuário no Brasil, suas transformações históricas sucedidas com a adoção das políticas neoliberais, e finaliza abordando a situação dos trabalhadores portuários brasileiros em tempos de pandemia. As considerações finais indicam que mesmo o país passando por um dos momentos mais críticos de sua história, imerso numa crise de saúde pública, o interesse com a saúde e condições de trabalho dos portuários não é a pauta no meio empresarial e do Estado. Nesse cenário, os trabalhadores portuários têm no horizonte um caminho ainda mais intenso de luta e, portanto, de recomposição de seu trabalho nos portos nacionais

Entrepreneurship in the Favela of Rocinha, Rio de Janeiro: A Critical Approach

This article explores the reality of entrepreneurship in the favela of Rocinha, Rio de Janeiro. It contrasts the prescriptions of federal and state training programs and support policies for entrepreneurship with the reality of the practice of entrepreneurial activities in Rocinha. It shows that the logic of effectuation can explain microentrepreneurial trajectories in favelas, expanding its original reach from expert entrepreneurs in large firms. It also exposes the severe shortcomings in the training programs and support policies of the Serviço Brasileiro de Apoio às Micro e Pequenas Empresas (SEBRAE). It points to the urgency of reform of the very foundation of entrepreneurship policies in favelas. O artigo explora a realidade do empreendedorismo na favela da Rocinha, Rio de Janeiro. Ele contrasta as prescrições dos programas e políticas de apoio ao empreendedorismo do governo federal e estadual com a realidade da prática das atividades de empreendedorismo na Rocinha. O artigo mostra que a lógica da efeituação, ou 'effectuation', pode explicar as trajetórias dos microempreendedores nas favelas, expandindo sua abrangência original desde empreendedores experientes em grandes firmas. O artigo também expõe severas limitações nos programas de treinamento e políticas de apoio do Serviço Brasileiro de Apoio aos Micro e Pequenos Negócios (SEBRAE). O texto aponta para a urgência na reforma das fundações das políticas para empreendedorismo em favelas

Multidisciplinary Treatment of a Double First Mandibular Premolar

Gemination aka twinning and fusion, are rare occurrences in posterior mandibular teeth, often requiring endodontic and surgical treatment for functional, orthodontic or cosmetic reasons. The diagnosis and design of a precise treatment plan in cases involving double teeth are in most cases challenging. The purpose of this case report is to describe a successful multidisciplinary treatment protocol for a double tooth. Upon completion of the endodontic, restorative and orthodontic treatments, the clinical and radiographic three-year follow-up revealed that the rest of the transected premolar showed evidence of healing of the supporting tissues and satisfactory cosmetic result.Keywords: Double Tooth; Hemisection; Orthodontics; Root Canal Treatmen

LARGE FIRES AND FIRE DANGER INDICES IN ‘GOVERNADOR’ INDIGENOUS TERRITORY, MARANHÃO STATE

Large fires are global environmental problems, increasingly recurrent due to climate change, with severe perspectives for the future. The present study characterized the edaphoclimatic conditions of the Governador Indigenous Territory (TI), Amarante do Maranhão - MA, as well as analyzed the influence of these conditions on large burn scars (over 50 ha) and fire danger indices in the period from 2001 to 2018. The scars were mapped on TM and OLI Landsat images and the following fire danger indices were assessed: Telicyn Logarithmic Index; Nesterov Index; Monte Alegre Formula (FMA) and Modified Monte Alegre Formula (FMA +); and the Canadian Fire Weather Index (FWI). The results indicate that the Governador TI region is a critical area in terms of wildfires, with large impacted areas and climatic conditions with great fire risks. In addition, savanna formations, which predominate in the region, are highly prone to fires, as well as pastures in the surroundings. The Monte Alegre Formula index stands out with the best result, as well as the great correlation with climate and vegetation data, highlighting the period from June to August and savanna formations as the most critical conditions

Aspectos epistemológicos a luz da teoria antropológica do didático subjacentes ao tema transformação linear

Nosso propósito neste artigo foi revelar os aspectos epistemológicos a luz da Teoria Antropológica do Didático estão subjacentes ao tema transformação linear, no livro didático adotado para o ensino de Álgebra Linear no Instituto Federal do Pará, revelando indícios do modelo epistemológico dominante, analisando dois tipos de tarefas. A análise do livro didático é um referencial para a elaboração de conjecturas a respeito do tipo de ensino que está sendo desenvolvido de um determinado saber, em uma determinada instituição. A Teoria nos ajudou a discutir Organização Matemática e Didática do livro, em termos do gênero de tarefas e tipos de tarefas, técnicas e justificações da razão de ser do objeto matemático transformação linear. A razão de ser para se ensinar esse objeto se dá pela aplicação direta da definição, pois os alunos devem se perguntar ao lerem as propostas das tarefas enunciadas pelos autores, para que e porque se estudar tal temática? Algumas tarefas são resolvidas com os conteúdos vistos no ensino médio, como função como tecnologia, não deixando claro ao leitor que é uma transformação de um espaço vetorial em outro. Concluímos que nos tipos de tarefa discutidos foi possível dar indícios do modelo epistemológico dominante, o qual consideramos a utilização direta da definição de transformação linear