Participação dos receptores opioides capa perifericos na modulação da resposta nociceptiva induzida pela administração de formalina na ATM de ratos de diferentes sexos e fases do ciclo estral

Orientadores: Claudia Herrera Tambeli, Maria Cecilia F. A. VeigaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Este estudo avaliou as diferenças sexuais na resposta nociceptiva induzida pela administração de formalina na articulação temporomandibular (ATM) com ou sem a co-administração do U50,488 (agonista do receptor opióide capa). As fases do ciclo estral das fêmeas foram citologicamente determinadas e apenas aquelas que apresentavam-se na fase diestro ou proestro, e machos foram incluídos. A formalina induziu um comportamento nociceptivo maior nas fêmeas em diestro do que nas fêmeas em proestro ou machos. O U50,488 reduziu significativamente as respostas nociceptivas induzidas pela formalina, e esta redução foi maior nas fêmeas, especialmente nas fêmeas da fase diestro do ciclo estral. A injeção do U50,488 na ATM contralateral não afetou na magnitude do comportamento induzido pela formalina, e o pré-tratamento com o antagonista seletivo do receptor opióide capa nor-binaltorphimine (norBNI) na ATM ipsilateral reduziu os efeitos antinociceptivos do U50,488. Estes resultados demonstram a ação dos receptores opióides capa periféricos na modulação da dor inflamatória. Além disso, considerando que os níveis plasmáticos dos hormônios ovarianos são baixos durante a fase diestro, estes resultados são consistentes com a hipótese de que os hormônios sexuais femininos podem ter uma ação analgésica na redução da dor inflamatória induzida pela formalina, assim como, também ter uma ação anti-analgésica nos efeitos mediados pelos receptores opióides capaAbstract: This study examined sex differences in nociceptive responses induced by intra-temporomandibular joint (TMJ) formalin with and without co-administration of the ?-opioid receptor agonist U50,488. The estrous phase of females was cytologically determined; only those in either proestrus or diestrus, and males, were included. Formalin elicited significantly greater nociceptive behavior in diestrus females than in either proestrus females or males. U50,488 significantly reduced formalin nociceptive responses, and this reduction was significantly greater in females, especially in the diestrus phase of the estrous cycle. U50,488 injection into the contralateral TMJ failed to affect the magnitude of formalininduced behavior, and preinjection of the selective kappa-opioid receptor antagonist nor-binaltorphimine (nor-BNI) into the ipsilateral TMJ significantly reduced the antinociceptive effect of U50,488. These findings support a role for peripheral kappa-opioid receptors in the modulation of inflammatory pain. Furthermore, since plasma levels of ovarian hormones are lowest during diestrus, these findings are consistent with the suggestion that female sex hormones may play an analgesic role in reducing formalin-induced inflammatory pain, and may also play an anti-analgesic role, at least in ?-mediated effectsMestradoFisiologia OralMestre em Odontologi

Evaluation of mechanisms involved in a sexual dimorphism of analgesia mediated by kappa opioid receptor in temporomandibular joint

Orientador: Claudia Herrera TambeliTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Recentemente foi demonstrado que a ativação de receptores capa opióides localizados na ATM de ratos reduz o comportamento nociceptivo induzido pela injeção se formalina na ATM de ratos, especialmente nas fêmeas na fase diestro do ciclo estral. Sendo a fase diestro aquela que representa baixos níveis hormonais, estes resultados indicam que os hormônios gonadais diminuem a antinocicepção mediada pelos receptores capa na ATM. O objetivo deste trabalho foi investigar o possível mecanismo pelo qual os hormônios gonadais poderiam diminuir a antinocicepção mediada pelos receptores capa opióides através das seguintes hipóteses: (a) Os hormônios gonadais diminuem a antinocicepção mediada pelos receptores capa na ATM por diminuírem a expressão de receptores capa opióides no gânglio trigeminal; (b) O efeito periférico antinociceptivo dos agonistas dos receptores capa opióides é mediado pela ativação da via L-Arginina/NO/GMPc em machos e fêmeas; (c) Os hormônios gonadais diminuem a antinocicepção mediada pelos receptores capa na ATM por diminuírem a ativação da via L-Arginina/NO/GMPc. A análise pela técnica Western blot demonstrou que a expressão protéica dos receptores capa opióides é maior em fêmeas do que em machos, sugerindo que a testosterona induz acentuada diminuição na expressão dos receptores capa opióides. Nas fêmeas, a expressão dos receptores capa opióides foi significativamente maior nas fêmeas em diestro em relação às fêmeas em proestro, sugerindo que os hormônios gonadais femininos também diminuem a expressão dos receptores capa opióides. A co-administração do inibidor da NO-sintase, L-NMMA, ou do inibidor da guanilil ciclase sensível ao NO, ODQ, com o agonista do receptor capa opióide U50,488 bloqueou a antinocicepção mediada pelos receptores capa na ATM de machos e fêmeas, sugerindo que a antinocicepção induzida pelos receptores capa opióides é mediada pela ativação da via L-Arginina/NO/GMPc em ambos os sexos. No entanto, a co-administração de baixas doses de L-NMMA e ODQ com U50,488 significativamente diminuiu a antinocicepção mediada por receptores capa apenas nas fêmeas em diestro. Estes resultados indicam que a antinocicepção mediada pelos receptores capa opióides depende da ativação da via L-Arginina/NO/GMPc em machos e fêmeas. No entanto, o dimorfismo sexual na antinocicepção mediada pelos receptores capa opióides na ATM se deve, pelo menos em parte, pela diminuição da expressão dos receptores capa opióides no gânglio trigeminal pelos hormônios gonadais, especialmente a testosterona. Apesar do envolvimento da via L-Arginin/NO/GMPc na antinocicepção mediada pelo receptor capa na ATM em ambos os sexos, os hormônios gonadais não diminuem a atividade desta via diminuindo o efeito antinociceptivo mediado por receptores capa opióides na ATMAbstract: We have previously demonstrated that activation of kappa opioid receptors located in the TMJ of rats suppresses formalin-induced TMJ nociception behavior especially in females of the diestrus phase of the estrous cycle. Since diestrus is a phase of low gonadal hormonal serum level, these findings indicate that gonadal hormones decrease kappa-mediated TMJ antinociception. The aim of this study was to investigate some of the mechanisms by which gonadal hormones might decrease kappa-mediated antinociception by testing the following hypothesis: (a) Gonadal hormones decrease kappa-mediated TMJ antinociception through a down regulation in the expression of kappa oipoid receptors in the trigeminal ganglia; (b) The peripheral antinociceptive effect of kappa opioid receptor agonists is mediate by the activation of the L-Arginine/NO/cGMP pathway in both males and females; (c) Gonadal hormones decrease kappa-mediated TMJ antinociception by diminishing the activity of the L-Arginine/NO/cGMP. Western blot analysis demonstrated that protein expression of KORs was significantly higher in females than in males, suggesting that testosterone induces a strong down-regulation in KOR expression. In females, KOR expression was significantly higher in those in diestrus than in proestrus suggesting that female gonadal hormones also down-regulate KOR expression in the trigeminal ganglia. Co-application of the NOS inhibitor L-NMMA or of the NO-sensitive guanylyl cyclase inhibitor ODQ with the kappa opioid receptor agonist U50,488 blocked kappa-mediated TMJ antinociception in males and females suggesting that antinociception induced by activation of peripheral kappa opioid receptors is mediated by the L-arginine/NO/cGMP pathway in both sexes. However, co-application of lower doses of L-NMMA and ODQ with U50,488 significantly diminished kappa -mediated TMJ antinociception only in diestrus females. These results indicate that kappa-mediated TMJ antinociception depends on activation of the L-Arginine/NO/cGMP pathway in both males and females. However, the sexual dimorphism in kappa-mediated TMJ antinociception is mediated, at least in part, by the down regulation in the expression of kappa-oipoid receptors in the trigeminal ganglia induced by gonadal hormones, especially testosterone. Despite the involvement of the L-Arginine/NO/cGMP pathway in kappa-mediated TMJ antinociception in both sexes, gonadal hormones do not diminish the activity of this pathway to decrease kappa-mediated TMJ antinociceptionDoutoradoFisiologia OralDoutor em Odontologi

Histological and mast cells evaluation after application of botulinum toxin type a in masseter muscles of rats

Botulinum Toxin Type A (BTX-A) has been largely used to reduce muscle strength of masseter and temporal muscles by producing a temporary weakening of their activity. This study aimed to evaluate the histological changes and the number of mast cells afte

Avaliação do padrão de clonalidade e virulencia de S. mutans isolados de individuos livres de carie e carie-ativos

Orientador: Reginaldo Bruno GonçalvesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaMestrad

Osteoclastogenesis induction RANK-independent by a lipid fraction from Porphyromonas gingivalis

Orientador: Reginaldo Bruno GonçalvesTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Porphyromonas gingivalis (Pg) sintetiza diversas classes de fosfolipídeos. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos biológicos que estes lipídeos exercem sobre a reabsorção óssea. Células precursoras de osteoclastos de camundongos, incluindo RAW264.7 e células da medula óssea, foram estimuladas com um lipídeo recém caracterizado isolado de Pg (F24), LPS de Pg, RANKL e um isômero estrutural isolado de mamíferos (DMPE), seguida de coloração das células por fosfatase ácida (TRAP) para detecção de osteoclastos. A formação de lacunas de reabsorção em discos de dentina foi realizados para identificar a presença de osteoclastos maduros. Proteínas de células precursoras RAW264.7 com afinidade a F24 foram identificadas como sendo nucleolin através de espectometria de massa, e confirmada sua presença através de ensaio em microscopia confocal. Utilizando Western-blot e RNAi, a sinalização intracelular desencadeada pela F24 durante a osteoclastogênese foi analisada. A F24 mas não o LPS ou DMPE induziu números significantemente maiores de células multinucleadas TRAP+ quando comparado ao RANKL, assim como a formação de lacunas de desmineralização em discos de dentina, o qual não foi inibida pelo repressor do RANKL, a OPG. LPS de Pg, mas não a F24, induziu a produção de TNF-a, IL-1ß e IL-6 pelas células RAW264.7. Microscopia confocal mostrou que a F24 está co-localizada com este receptor na superfície de células RAW264.7. A F24 induziu a fosforilação de maior intensidade do p38 e JNK comparado ao RANKL. Este novo fosfolipídeo isolado de P. gingivalis, distinto do LPS, mostrou-se capaz de induzir osteoclastogênese utilizando nucleolin como a molécula receptora através de uma via independente do RANKAbstract: Porphyromonas gingivalis (Pg) synthesizes several classes of complex phospholipids in addition to LPS. However, little is known about the biological effects of these phospholipids on bone resorption. Mouse osteoclast precursors cells including, RAW264.7 and bone marrow cells, were stimulated with phospholipids isolated from Pg (F24), Pg LPS, RANKL and a mammalian structural isomer (DMPE). Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining and a dentine-pit formation assay were used for the identification of activated mature osteoclasts. F24¿s counter-ligand expressed on RAW264.7 cells were identified by affinity purification and mass-spectrometry based proteomics, and counter-examined by a confocal microscopy. Using Western-blot, signaling pathways triggered by F24 during osteoclastogenesis were examined with RNAi technology. F24, but not LPS or DMPE, induced significantly higher number of TRAP+ multinuclear cells from osteoclast precursors than RANKL, along with dentine-pit formation, which was not inhibited by RANKL decoy receptor OPG. Pg LPS, but not F24, induced TNF-a, IL-1ß and IL-6 by RAW264.7 cells. Proteomics analyses identified nucleolin as a ligand for F24. Confocal microscopy revealed the co-localization of F24 and its ligand on the surface of RAW264.7 cells. F24 induced stronger phosphorylation of p38 MAP kinase than RANKL. A novel P. gingivalis phospholipid that is distinct from LPS represents a new class of RANK-independent osteoclast differentiation factorDoutoradoMicrobiologia e ImunologiaDoutor em Biologia Buco-Denta

15d-PGJ(2)-loaded solid lipid nanoparticles: physicochemical characterization and evaluation of pharmacological effects on inflammation

FAPESP - FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULOCNPQ - CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO15-deoxy-Delta(12,14)-prostaglandin J(2) (15d-PGJ(2)), a peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPAR-gamma) agonist, has physiological properties including pronounced anti-inflammatory activity, though it binds strongly to serum albumin. The use of solid lipid nanoparticles (SLN) can improve therapeutic properties increasing drug efficiency and availability. 15d-PGJ(2)-SLN was therefore developed and investigated in terms of its immunomodulatory potential. 15d-PGJ(2)-SLN and unloaded SLN were physicochemically characterized and experiments in vivo were performed. Animals were pretreated with 15d-PGJ(2)-SLN at concentrations of 3, 10 or 30 mu g.kg(-1) before inflammatory stimulus with carrageenan (Cg), lipopolysaccharide (LPS) or mBSA (immune response). Interleukins (IL-1 beta, IL-10 and IL-17) levels were also evaluated in exudates. The 15d-PGJ(2)-SLN system showed good colloidal parameters and encapsulation efficiency of 96%. The results showed that the formulation was stable for up to 120 days with low hemolytic effects. The 15d-PGJ(2)-SLN formulation was able to reduce neutrophil migration in three inflammation models tested using low concentrations of 15d-PGJ(2). Additionally, 15d-PGJ(2)-SLN increased IL-10 levels and reduced IL-1 beta as well as IL-17 in peritoneal fluid. The new 15d-PGJ(2)-SLN formulation highlights perspectives of a potent anti-inflammatory system using low concentrations of 15d-PGJ(2).15-deoxy-Delta(12,14)-prostaglandin J(2) (15d-PGJ(2)), a peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPAR-gamma) agonist, has physiological properties including pronounced anti-inflammatory activity, though it binds strongly to serum albumin. The use of solid lipid nanoparticles (SLN) can improve therapeutic properties increasing drug efficiency and availability. 15d-PGJ(2)-SLN was therefore developed and investigated in terms of its immunomodulatory potential. 15d-PGJ(2)-SLN and unloaded SLN were physicochemically characterized and experiments in vivo were performed. Animals were pretreated with 15d-PGJ(2)-SLN at concentrations of 3, 10 or 30 mu g.kg(-1) before inflammatory stimulus with carrageenan (Cg), lipopolysaccharide (LPS) or mBSA (immune response). Interleukins (IL-1 beta, IL-10 and IL-17) levels were also evaluated in exudates. The 15d-PGJ(2)-SLN system showed good colloidal parameters and encapsulation efficiency of 96%. The results showed that the formulation was stable for up to 120 days with low hemolytic effects. The 15d-PGJ(2)-SLN formulation was able to reduce neutrophil migration in three inflammation models tested using low concentrations of 15d-PGJ(2). Additionally, 15d-PGJ(2)-SLN increased IL-10 levels and reduced IL-1 beta as well as IL-17 in peritoneal fluid. The new 15d-PGJ(2)-SLN formulation highlights perspectives of a potent anti-inflammatory system using low concentrations of 15d-PGJ(2)118e0161796FAPESP - FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULOCNPQ - CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICOFAPESP - FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULOCNPQ - CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO2014/11016-8303555/2013-

AVALIAÇÃO DA PRESENÇA DE LEPTINA NO FLUIDO PERI-IMPLANTAR DE PACIENTES DIABÉTICOS TIPO 2

A leptina é um hormônio produzido principalmente pelo tecido adiposo capaz de regular a energia necessária para manter a homeostasia dos tecidos, tendo efeito regulatório sobre o sistema reprodutivo, neuroendócrino, imune e sobre o metabolismo ósseo. Sistemicamente, a leptina atua como um importante modulador da resposta do hospedeiro frente a estímulos infecciosos e inflamatórios, desencadeando no sistema imune, o aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias e a ativação de macrófagos. Essas citocinas pró-inflamatórias como, por exemplo, IL-6 e TNF, quando encontradas no plasma em elevadas concentração têm sido consideradas fatores de risco para problemas cardiovasculares, obesidade e diabetes. Apesar de alguns trabalhos investigarem o papel da leptina na progressão da doença periodontal, o papel dessa adipocina não foi investigado no fluido peri-implantar. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi de avaliar e comparar os níveis de leptina no fluido peri-implantar de pacientes sadios (n=10), pacientes diabéticos tipo 2 controlados (n=10) e pacientes diabéticos tipo 2 não controlados (n=10). As amostras foram coletadas do interior do sulco peri-implantar clinicamente sadio dos participantes, com o auxílio de cones de papel estéreis, e em seguida analisadas pelo método do ELISA. Os resultados da concentração de leptina não foram diferentes estatisticamente entre os grupos de participantes segundo os testes ANOVA one-way, seguido do teste de Tukey (p0,05). Em conclusão, pode-se sugerir que a variação de taxa glicêmica encontrada entre os grupos (pacientes diabéticos e sadios) parece não interferir na condição de osseointegração e na taxa de leptina ao redor de implantes dentais sadios

Microbiological Sealing Analysis of a Tapered Connection and External Hexagon System

Considering the variety of implant connection systems available in the market and the contrasting literature regarding tapered connection systems in terms of bacterial leakage, the aim of this in vitro study was to compare the effectiveness of the bacterial seal at the implant/abutment interface between an external hexagon and a tapered connection system. Twelve sets of indexed tapered connection components and twelve sets of external hexagon connection components were used for microbiological analysis. In addition, for each model, an implant with its respective prosthetic abutment was used as a negative control and another as a positive control of microbial contamination. Failure of the abutment/implant interface seal was observed via turbidity or presence of deposits in the culture. Descriptive analysis of the data and relative frequency (percentage) as well as Fisher’s exact test were used at a significance level of 5%. Two of ten (20%) external hexagon specimens showed contamination against 0/10 (0%) tapered connection implants. In conclusion, both implant/abutment connections were able to prevent bacterial leakage in vitro

Remodeling of gingival contour in the rehabilitation with fixed partial dentures – case report / Remodelação do contorno gengival em reabilitação com prótese parcial fixa – relato de caso

One of the most challenging aspects in rehabilitations is the correct manipulation of gingival tissues, aiming to achieve a natural contour, with interdental papillae and emergence profile, compatible with a natural tooth. The rehabilitation is impaired when there is loss of the interproximal papilla. To solve this problem, it is possible to use the gingival conditioning technique, which comprises relining the provisional crown with acrylic resin, applying gradual pressure, leading to formation of a gingival papilla. This paper presents a case of esthetic and functional recovery in a fixed partial denture by remodeling of the gingival contour by the gradual pressure technique, by gradual relining of the provisional crown. It is concluded that this gingival conditioning technique is simple, easy to accomplish and very effective for esthetic-functional reestablishment in rehabilitations with fixed partial dentures, provided the patient maintains correct hygiene and plaque control.