Determinación de la actividad de las enzimas antioxidantes del plasma seminal y su relación con la calidad espermatica en tres razas ovinas bajo condiciones de tropico alto colombiano

El objetivo del presente estudio fue determinar las diferencias en la calidad seminal, la actividad de las enzimas antioxidantes, la expresión de bandas de proteínas, y las interacciones con la calidad seminal en tres tipos raciales ovinos, considerando el efecto de las variables ambientales, a través del índice de temperatura humedad – ITH, bajo condiciones de Trópico Alto Colombiano. Se realizaron seis colectas consecutivas a intervalos de una semana, a 13 machos adultos (4 -Criollos, 4 - Romney Marsh y 5 –Hampshire). La calidad seminal y los parámetros de cinemática espermática se evaluaron con la ayuda de un Sistema Computarizado de Análisis Seminal (IVOS; Hamilton Thorne Research, Beverly, MA); la actividad de las enzimas antioxidantes Superóxido Dismutasa (SOD), Glutatión Peroxidasa (GPx) y Glutatión Reductasa (GR) fueron medidas en ensayos de espectrofotometría; la separación de las proteínas del plasma se realizó mediante doble centrifugación a 1200Xg durante 15 minutos en una micro-centrifuga (Hermle), bajo condiciones de refrigeración. El sobrenadante fue sometido a cuantificación de proteína con el método colorimétrico de Bradford, y a mediante electroforesis por el método descrito por Leammil (1970). Las variables ambientales consideradas fueron temperatura máxima y humedad para la construcción de un Índice de Temperatura-Humedad (ITH). Se ejecutó un análisis de covarianza para determinar las diferencias entre individuos dentro de raza y entre razas, teniendo en cuenta el ITH obtenido como covariable. Se observan diferencias en las variables de calidad seminal (volumen, motilidad total y progresiva, concentración y vitalidad) entre individuos dentro de razas (P0,05) y entre razas (P0,05). Para las variables de morfología espermática (cola doblada (BT), cola enrollada (CT), gota citoplasmática distal (PDC), y proximal (DCD)), no se presenta diferencias entre individuos dentro de raza, pero si diferencias entre razas (P0,05); probablemente lo anterior esté elacionado a la habilidad de fertilizar de cada raza, especialmente para Criollos y Hampshire, quienes presentan valores superiores de normalidad espermática. La actividad de las enzimas antioxidantes no presenta diferencias estadísticas (P0,05) entre individuos dentro de razas y entre razas. La raza criolla presenta correlación negativa para concentración, ALH y VAP con la enzima GR, mientras que la raza Romney Marsh presenta correlación negativa para LIN, STR, VSL y VAP, y correlación positiva para BT y CT con GR. En la raza Hampshire, no se presentó correlaciones con las enzimas. El ITH afecta (P0,05) la concentración espermática, la amplitud del movimiento lateral de la cabeza (ALH) y oscilación (WOB) espermático, como medidas cinemáticas. Se evidencio la actividad antioxidante en el plasma seminal de los tres tipos raciales ovinos bajo condiciones de Trópico Alto Colombiano, y su efecto protector está asociado a los parámetros de calidad seminal. Se observó que existen diferencias individuales en los parámetros de calidad seminal en las razas introducidas como Hampshire y Romney Marsh, mientras que la raza Criolla presenta mayor homogeneidad entre sus individuos, explicando el potencial fértil de los machos de la raza. El análisis SDS-PAGE evidencia la presencia de 32 bandas de proteína con pesos moleculares entre 9 kDa y 334 kDa. Se presentan diferencias (P0,05) entre razas para 4 bandas de proteína de 43 kDa; 25 kDa; 22 kDa; 20 kDa, donde la raza Criolla presento la menor concentración relativa para las 4 proteínas. El efecto del ambiente se evidencio en las bandas de proteínas de 103; 88; 79; 68; 58; 52; 31; 27; 25; 24; 22 y 18 kDa. Se presentan 24 correlaciones entre las variables de calidad seminal y las bandas de proteína en las tres razas. Se sugiere hacer estudios de identificación específica de las proteínas para poder resaltar la función de estas sobre las células espermáticas y la calidad seminal.Abstract.The aim of this study was to determine the differences in semen quality, the activity of antioxidant enzymes, the expression of band protein and their relationship with seminal quiality in three racial types sheep, considering the effect of environmental variables under conditions High Colombian Tropic. Six consecutive collections at weekly intervals, 13 adult males (4 -Creole, 4- Romney and 5 -Hampshire) were performed. Semen quality and sperm kinematic parameters were evaluated with the aid of a computerized semen analysis (IVOS; Hamilton Thorne Research, Beverly, MA); the activity of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (GR) was measured spectrophotometry assays; The supernatant was subjected to quantification of protein by the colorimetric method of Bradford, and separation by electrophoresis with the method described by Leammil (1970). Environmental variables considering were maximum temperature and humidity for the construction of a temperature humidity index (THI). A covariance analysis was executed to determine differences between individuals within breeds and between breeds, considering the ITH obtained as a covariate. Differences in semen quality parameters (volume, total and progressive motility, concentration and vitality) between individuals within breeds (P0.05) and between breeds (P0.05) was observed. For parameters of sperm morphology (proximal bent tail (BT), coiled tail (CT), Proximal citoplasmatic droplet (PCD), and distal cytoplasmic droplet (DCD)), no differences between individuals within breed show, but whether differences between breeds (P0.05), probably related to the ability to fertilize each breed, especially for Creole and Hampshire, those with higher values of normal sperm. The activity of antioxidant enzymes no statistical difference (P0.05) among individuals within breeds and between breeds. Creole presents negative correlation between concentration, ALH and VAP with the enzyme GR, while Romney Marsh has a negative correlation for LIN, STR, VSL and VAP, and positive correlation for BT and CT with GR. The Hampshire, no correlations with enzymes was presented. The ITH affected (P0.05) sperm concentration, the amplitude of lateral head movement (ALH) and wobbed (WOB) spermatic, as cinematics measures. It evidence that antioxidant activity in seminal plasma of the three racial types sheep under conditions of High-Colombian Tropic, and its protective effect is associated with semen quality parameters. It was also noted that there are individual differences in semen quality parameters in races introduced as Hampshire and Romney Marsh, while the Creole has greater homogeneity among individuals, probably explaining the potential fertile males of the breed. SDS-PAGE analysis showed the presence of 32 protein bands with molecular weights between 334 kDa and 9 kDa. Differences (P0.05) between breeds in 4 protein bands of 43 kDa; 25 kDa; 22 kDa; 20 kDa, were presented, where the Creole showed the lowest relative concentration for the 4 proteins. The effect of the environment was evident in the protein bands 103; 88; 79; 68; 58; 52; 31; 27; 25; 24; 22 and 18 kDa. 24 correlations between variables of seminal quality and the protein bands in the three breeds are presented. It is suggested that studies identifying proteins to highlight the role of these on sperm cells and semen quality.Maestrí

Does melatonin exert its effect on ram sperm capacitation through nitric oxide synthase regulation?

Nitric oxide (NO·), synthesized from L-arginine by nitric oxide synthase (NOS), is involved in sperm functionality. NOS isoforms have been detected in spermatozoa from different species, and an increment in NOS activity during capacitation has been reported. This work aims to determine the presence and localization of NOS isoforms in ram spermatozoa and analyse their possible changes during in vitro capacitation. Likewise, we investigated the effect of melatonin on the expression and localization of NOS and NO· levels in capacitated ram spermatozoa. Western blot analysis revealed protein bands associated with neuronal NOS (nNOS) and epithelial NOS (eNOS) but not with inducible NOS (iNOS). However, the three isoforms were detected by indirect immunofluorescence (IFI), and their immunotypes varied over in vitro capacitation with cAMP-elevating agents. NO· levels (evaluated by DAF-2-DA/PI staining) increased after in vitro capacitation, and the presence of L-arginine in the capacitating medium raised NO· production and enhanced the acrosome reaction. Incubation in capacitating conditions with a high-cAMP medium with melatonin modified the NOS distribution evaluated by IFI, but no differences in Western blotting were observed. Melatonin did not alter NO· levels in capacitating conditions, so we could infer that its role in ram sperm capacitation would not be mediated through NO· metabolism

Effect of the constant photoperiod and melatonin on the ram seminal characteristics of breeds reared in equatorial areas

La estacionalidad reproductiva de la especie ovina, ligada al fotoperiodo, es considerada como un factor limitante de la producción ovina en países cuya latitud determina la existencia de estaciones astronómicas bien diferenciadas. En estas zonas, los cambios en el fotoperiodo, a través de variaciones en la secreción de melatonina nocturna, regulan la actividad de la reproducción ovina tanto en hembras como en machos. En el caso del morueco, a pesar de que la producción de semen es continua a lo largo del año, se aprecian cambios significativos tanto en los componentes del plasma seminal, como en los parámetros de calidad y funcionalidad espermática entre la época reproductiva y la no reproductiva. Durante los últimos años, nuestro grupo de investigación ha estudiado el efecto de la melatonina sobre la reproducción del morueco en condiciones de fotoperiodo variable o estacional. Estos trabajos han evidenciado variaciones en la concentración de melatonina en el plasma seminal de esta especie entre las distintas estaciones. Además, se ha demostrado la síntesis de melatonina extrapineal en el testículo, al igual que la presencia de receptores de melatonina (MT1 y MT2) tanto en este órgano como en la membrana plasmática de los espermatozoides, lo que sugiere que la melatonina estaría relacionada con la calidad seminal del morueco. El hecho de que la incubación de los espermatozoides ovinos con melatonina disminuya los marcadores apoptóticos y niveles de ROS apoya esta hipótesis. Además, esta hormona es capaz de modular la capacitación espermática en función de su concentración, posiblemente a través de su unión al receptor MT2 en la membrana del espermatozoide. Sin embargo, los ovinos se encuentran ampliamente distribuidos a nivel mundial, y algunas razas se hallan ubicadas en latitudes donde el fotoperiodo es constante, es decir, la variación de la luz a lo largo del año es mínima o casi nula. En esta tesis se planteó como hipótesis que, aunque la melatonina no regulé la estacionalidad reproductiva en los moruecos de la zona ecuatorial, esta hormona ejerce una función importante en la reproducción de estos animales. Por ello, el objetivo de la presente tesis fue evaluar el efecto del fotoperiodo constante y de la melatonina en las características seminales de moruecos ubicados en la zona ecuatorial. Colombia es un país situado en la zona ecuatorial, donde el fotoperiodo es constante (12L:12D), con solo 32 minutos de diferencia entre el día más largo y el más corto del año. Sin embargo, los factores climáticos, como las precipitaciones, sí que pueden variar a lo largo del año, presentando un patrón bimodal de lluvias, alternadas con dos periodos de sequía. Este y otros factores podrían, de algún modo, modular la actividad reproductiva de los ovinos y otras especies ganaderas de esta zona. En Colombia, dependiendo de la altura sobre el nivel del mar, se crían ovinos de lana o de pelo. Tres de las principales razas ovinas de lana que se distribuyen en las zonas de altura son la raza Criolla de lana, autóctona y derivada de cruces indiscriminados de razas introducidas por los colonizadores desde el siglo XVI, y dos razas ovinas especializadas, Romney Marsh y Hampshire, de origen británico, que fueron introducidas en el país en el último siglo. Para comprobar si en condiciones ecuatoriales de fotoperiodo constante existían variaciones en la concentración de melatonina en plasma seminal a lo largo del año, tal y como se había observado en moruecos situados en latitudes medias con fotoperiodo variable, el primer objetivo de esta tesis fue evaluar la concentración de melatonina en el plasma seminal de los moruecos ubicados en la zona ecuatorial a lo largo del año. El estudio se llevó a cabo en las tres razas anteriormente nombradas (Criolla de lana, Romney Marsh y Hampshire), y se analizaron también los niveles de testosterona y la actividad de las enzimas antioxidantes, ya que en razas de latitudes medias se había observado una correlación con los niveles de melatonina. Los resultados (Artículo 1) demostraron que, a pesar de estar en condiciones de fotoperiodo constante, la concentración de melatonina en el plasma seminal de estos moruecos varía a lo largo del año en todos los animales estudiados, independientemente de su raza. El plasma seminal obtenido durante las épocas de sequía presentó mayores niveles de melatonina que el obtenido en las épocas de lluvia. Debido a que la distribución de las lluvias afecta la disponibilidad y la calidad del alimento, es probable que los cambios en la concentración de melatonina en el plasma seminal se deban a cambios en la disponibilidad y concentración de fitomelatonina en el forraje, lo que explicaría la falta de diferencia entre razas (Artículo 1). Además, a diferencia de lo observado en moruecos de latitudes medias, en condiciones de fotoperiodo ecuatorial la concentración de melatonina no correlaciona con la de testosterona o la actividad de las enzimas antioxidantes. En relación a la concentración de testosterona sólo se observó variación anual en las razas introducidas (Romney Marsh y Hampshire), pero el incremento de testosterona ocurrió antes que el incremento en los niveles de melatonina, por lo que su variación no reflejaría una activación del eje hipotálamo-hipofisario-gonadal por la melatonina. Con objeto de dilucidar si el régimen fotoperiódico puede afectar a la composición del plasma seminal (objetivo 2), se llevó a cabo un estudio comparativo de los componentes de este fluido entre moruecos ubicados en latitud ecuatorial (Colombia; razas Criolla de lana y Romney Marsh) y en una zona de latitud media (España; raza Rasa Aragonesa), durante el mismo periodo de tiempo (artículo 2). El plasma seminal fue obtenido entre septiembre y noviembre, que coincide con el inicio de la época reproductiva en los moruecos de Rasa Aragonesa, y con la segunda época de lluvias en los moruecos de la zona ecuatorial. La concentración de melatonina y de testosterona detectada en plasma seminal de los moruecos ubicados en la zona ecuatorial fue menor que la de moruecos de latitudes medias. También se encontraron diferencias en la concentración de enzimas antioxidantes, pero no en la concentración total de proteína ni en la composición proteica.Dadas las diferencias en la concentración de melatonina en plasma seminal entre moruecos ubicados en zonas de fotoperiodo constante y zonas de fotoperiodo variable y, puesto que la melatonina puede tener un origen pineal o testicular, nos planteamos como tercer objetivo determinar el origen de la melatonina del plasma seminal de moruecos ubicados tanto en latitudes medias como en la zona ecuatorial. Para ello, se analizó el plasma seminal de moruecos enteros y vasectomizados de las razas Criolla de la lana y Romney Marsh (ubicadas en Colombia), y de la raza Rasa Aragonesa (ubicada en España), y se determinó, además de la concentración de melatonina, la de testosterona, la actividad de enzimas antioxidantes y la cantidad de proteínas (artículo 2). Los resultados mostraron que la concentración de melatonina era significativamente menor en moruecos vasectomizados, pero solo en aquellos situados en latitudes medias. Esto sugiere que, en machos enteros en estas latitudes, la melatonina del plasma seminal tiene un doble origen, testicular y pineal. Sin embargo, en moruecos de la zona ecuatorial no se observaron diferencias en la concentración de melatonina en plasma seminal entre machos enteros y vasectomizados, lo que podría sugerir que, o bien no hay síntesis de melatonina testicular, o bien esta no es secretada al plasma seminal. Por otro lado, la concentración de testosterona disminuyó tras la vasectomía en animales ubicados en ambas latitudes. También disminuyó la concentración de proteínas, sobre todo a nivel de las proteínas de alto peso molecular, que tendrían origen en el epidídimo y testículos. Finalmente, la actividad de las enzimas antioxidantes no se vio afectada por la vasectomía, lo que corrobora su origen en las glándulas accesorias.Una vez identificada la presencia de melatonina en el plasma seminal de moruecos de la zona ecuatorial, y dado que esta hormona ejerce gran parte de sus funciones a través de sus receptores de membrana, el cuarto objetivo de esta tesis fue identificar la presencia y la distribución de los receptores de melatonina MT1 y MT2, en la membrana de espermatozoides de moruecos de la zona ecuatorial y evaluar su posible variación entre las épocas de lluvia y de sequía (artículo 3). Los resultados evidenciaron la presencia de ambos receptores en los espermatozoides de las tres razas (Criolla de lana, Romney Marsh y Hampshire), identificándose los mismos inmunotipos descritos para MT1 en machos de latitudes medias, además de dos nuevos inmunotipos para el receptor MT2. Se observaron diferencias en los porcentajes de inmunotipos, tanto para el receptor MT1 como para el MT2, con respecto a lo descrito previamente en moruecos de latitud media. También se observaron diferencias entre razas y entre épocas para la distribución de ambos receptores, a diferencia de lo que sucede en fotoperiodo variable, en los cuales sólo se habían observado diferencias estacionales para el receptor MT2. Sin embargo, en cuanto a la densidad de receptores evidenciada por estudios densitométricos, únicamente la raza Criolla de lana presentó diferencias entre épocas en la cantidad del receptor MT1, lo que sugiere que, salvo esta excepción, las diferencias en la distribución de este receptor no estarían acompañadas de cambios en la cantidad del mismo. Además, la raza Criolla de lana también presentó una densidad del receptor MT2 significativamente menor que las razas introducidas, independientemente de la época climática, y que podría estar relacionada con su mayor adaptación al fotoperiodo ecuatorial. Los resultados también mostraron la tendencia de MT2 a formar homodímeros o heterodímeros con otros receptores de la familia GPCR, pero no con MT1, a diferencia de lo observado en moruecos de latitudes medias, donde se evidenciaron heterodímeros de MT1 y MT2.Una vez detectada la presencia de melatonina en el plasma seminal y de los receptores para la misma en la membrana espermática, nos planteamos como quinto y último objetivo evaluar si la melatonina podía regular la capacitación espermática en estas razas, al igual que lo hace en razas localizadas en zona de fotoperiodo variable. Previamente a la consecución de este objetivo, se hizo necesario estudiar los requisitos y la respuesta a la capacitación in vitro de las razas Criolla de lana, Romney Marsh y Hampshire ubicadas en latitudes ecuatoriales, ya que no se había estudiado hasta el momento. Este estudio se llevó a cabo tanto en época de lluvias como de sequía (artículo 4). Nuestros resultados demostraron que la adición al medio de capacitación de sustancias que elevan el AMPc intracelular (medio cocktail) es capaz de incrementar de forma significativa el porcentaje de espermatozoides capacitados de moruecos de la zona ecuatorial, al igual que sucede en los de latitudes medias, aunque se observaron diferencias entre razas y épocas. La melatonina, tanto a concentración 100 pM como 1 µM evitó parcialmente el incremento de espermatozoides capacitados después de la incubación en las tres razas estudiadas, a diferencia de los descrito en moruecos de latitudes medias, donde sólo la concentración alta previno la capacitación. En las tres razas de la zona ecuatorial se observaron diferencias entre épocas para el efecto de la melatonina, siendo mayor en general en la época lluviosa, pero en cualquier caso este efecto de la melatonina fue menos aparente en la raza Criolla de lana. Esto podría estar relacionado con la menor densidad del receptor MT2, que fue observada en el artículo 3 de esta tesis. La adición de melatonina en el medio de capacitación también tuvo un efecto positivo sobre el porcentaje de espermatozoides vivos sin inversión de fosfatidilserina, que también fue más evidente en la estación de lluvias. Se ha descrito previamente que el receptor MT1 es el encargado de mediar el efecto antiapoptotico de la melatonina, al igual que el MT2 se ha relacionado en la especie ovina con su efecto modulador de la capacitación. Es probable que la mayor concentración de melatonina en el plasma seminal en época de sequía, como se ha demostrado en el artículo 1, de lugar a una menor respuesta de los espermatozoides a la adición exógena de la misma, por la desensibilización de los receptores tras la exposición previa a la alta concentración melatonina presente en este fluido. En conclusión, los resultados obtenidos en esta tesis doctoral evidencian variaciones en la concentración de melatonina en plasma seminal de moruecos situados en latitudes de fotoperiodo constante, además de la presencia de receptores de melatonina MT1 y MT2 en sus espermatozoides. Estos resultados, junto con los obtenidos tras capacitar in vitro los espermatozoides en presencia de melatonina, sugieren que, en estos animales, la melatonina ejercería otras funciones distintas a la regulación de la estacionalidad, como la modulación de la capacitación espermática o un efecto antiapoptótico, lo que abre nuevas líneas de investigación sobre el uso de melatonina para la mejora de la fertilidad en razas ovinas en latitudes ecuatoriales.  <br /

Improvement of the Seminal Characteristics in Rams Using Agri-Food By-Products Rich in Phytomelatonin

The aim of this study was to evaluate the effect of a phytomelatonin-rich diet, including by-products from the food industry, on ram sperm quality and seminal plasma composition. Melatonin content in several by-products before and after in vitro ruminal and abomasal digestion was determined by HPLC-ESI-MS/MS. Finally, 20% of a mix of grape pulp with pomegranate and tomato pomaces was included in the rams’ diet, constituting the phytomelatonin-rich diet. Feeding the rams with this diet resulted in an increase in seminal plasma melatonin levels compared with the control group (commercial diet) in the third month of the study. In addition, percentages higher than those in the control group of morphologically normal viable spermatozoa with a low content of reactive oxygen species were observed from the second month onwards. However, the antioxidant effect does not seem to be exerted through the modulation of the antioxidant enzymes since the analysis of the activities of catalase, glutathione reductase and glutathione peroxidase in seminal plasma revealed no significant differences between the two experimental groups. In conclusion, this study reveals, for the first time, that a phytomelatonin-rich diet can improve seminal characteristics in ram

Testicular Ultrasound Analysis as a Predictive Tool of Ram Sperm Quality

Testicular ultrasound is a non-invasive technique that could be very useful for predicting ram seminal quality. Recent software developments allow macroscopic and microscopic evaluation of testicular parenchyma. Thus, the aim of this study was to evaluate the testicular echotexture using ultrasound-video analysis and investigate its possible correlation with semen quality. Nine rams were evaluated for one year using a portable ultrasound scanner and the echotexture was analyzed with ECOTEXT&reg; software. The number of black (Ec1), white (Ec2), and grey pixels (Ec3), tubular density (TD), lumen area (LA), and lumen diameter (LD) were analyzed. Semen was collected by an artificial vagina the same day and the sperm concentration, morphology, motility, viability, phosphatidylserine (PS) translocation, reactive-oxygen-species (ROS) levels, DNA damage and capacitation state were evaluated. Ec2 and Ec3 correlated positively with &ldquo;bad quality&rdquo; sperm parameters (the percentage of spermatozoa with high ROS levels, with PS translocation and proximal cytoplasmic droplets), and negatively with motility. In contrast, TD and LA showed a positive correlation with &ldquo;good quality&rdquo; parameters (motility or normal morphology) and a negative correlation with spermatozoa with high ROS levels, with DNA fragmentation, and proximal or distal cytoplasmic droplets. Thus, echotexture analysis by ultrasound-video analysis could be a valuable tool for assessing ram fertility

Efecto de dietas ricas en fitomelatonina sobre el daño oxidativo en espermatozoides ovinos

La ganadería ovina, sobre todo los sistemas extensivos, puede considerarse como un agroecosistema que actualmente se ve amenazado por factores económicos, ambientales y sociales. Además, un factor limitante de la producción en estos sistemas es la estacionalidad reproductiva, que está regulada por la secreción nocturna de melatonina. Esta hormona se ha utilizado en forma de implantes subcutáneos para modular esa estacionalidad. Sin embargo, con el fin de adaptar la producción a las nuevas demandas del consumidor sería interesante sustituir la melatonina sintética de los implantes por otras fuentes naturales de melatonina, como por ejemplo la fitomelatonina, presente en las plantas, y que se puede administrar con la dieta. De este modo, el objetivo principal de este trabajo fue evaluar el efecto del consumo de dietas ricas en fitomelatonina sobre la calidad seminal y la composición del plasma seminal del morueco.Para ello, durante cinco meses, 9 moruecos de raza Rasa Aragonesa fueron alimentados con una dieta comercial y otros 9 con una dieta rica en fitomelatonina. Se obtuvieron muestras seminales por vagina artificial cada 15 días, y se evaluó la motilidad, la viabilidad, los niveles intracelulares de especies reactivas de oxigeno (ROS) y marcadores apoptóticos (inversión de la fosfatidilserina, PS), así como la concentración de melatonina y la actividad de las enzimas antioxidantes (glutatión reductasa, glutatión peroxidasa, catalasa y superóxido dismutasa) en el plasma seminal. Además, una vez al mes se obtuvieron muestras de sangre para evaluar la actividad de estas enzimas en plasma sanguíneo.La dieta rica en fitomelatonina aumentó la concentración de melatonina en plasma seminal, aunque este aumento no fue estadísticamente significativo. A partir del segundo mes de alimentación se observó un aumento en el porcentaje de espermatozoides viables y espermatozoides viables con bajos niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) en comparación con el grupo control (Pactuaría por esta vía, ya que no se observaron cambios al comparar con el grupo control.En conclusión, este trabajo sugiere que una dieta rica en fitomelatonina aumenta la viabilidad espermática y disminuye los niveles intracelulares de ROS, y es capaz de ejercer este efecto de forma directa sobre los espermatozoides, y no a través de la modulación de la actividad de enzimas antioxidantes.<br /

Efecto de la adición de antioxidantes en los diluyentes para la preservación de semen ovino

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto sobre la calidad espermática de tres substancias antioxidantes (50 µM de trolox/108 espermatozoides, 50 µg de catalasa/ml de eyaculado y cisteamina 5mM) en una base de diluyente comercial Triladyl™, bajo condiciones de refrigeración y congelación/descongelación en semen ovino. Se congeló semen de seis machos adultos en una base del diluyente comercial Triladyl™. El eyaculado de cada macho fue puesto en cuatro diferentes alícuotas: una para control, y a las demás se les adicionó con la base del diluyente 50 µM de trolox/108 espermatozoides, 50 µg de catalasa/ml de eyaculado y cisteamina 5 mM. La calidad espermática precongelación (5 °C) y poscongelación se evaluó con la ayuda de un sistema de análisis computarizado (IVOS II®), con lo cual se eliminó la subjetividad a la prueba. Se observó que 50 µM de trolox/108 SPZ y 50 µg de catalasa/ml tienen la capacidad de mantener valores (p \u3c 0,05) superiores de motilidad total (64,26 ± 0,82 y 55,54 ± 0,85) y motilidad progresiva (47,26 ± 0,75 y 44,32 ± 1,13) en condiciones de precongelación, y para motilidad total (67,60 ± 1,91 y 63,47 ± 3,40), motilidad progresiva (50,87 ± 2,58 y 38,88 ± 2,31) y viabilidad (66,97 ± 2,25 y 61,16 ± 4,31) en poscongelación, comparados con los tratamientos control o la adición de 5 mM de cisteamina. La adición de 50 µM de trolox/108 espermatozoides y de 50 µg de catalasa/ml de semen mejora la motilidad total y progresiva del semen ovino refrigerado a 5 °C y la viabilidad en semen congelado/descongelad

Efecto de la adición de antioxidantes en los diluyentes para la preservación de semen ovino

Abstract The present study aimed to evaluate the effect on sperm quality of three antioxidant substances (50 μM of trolox/108 spermatozoa, 50 μg of catalase/ml of ejaculate, and 5mM cysteamine) in a Triladyl™ commercial diluent base, under conditions of refrigeration and freezing/thawing in sheep semen. Semen from six adult males was frozen in a commercial Triladyl™ diluent base. The ejaculate of each male was placed in four different aliquots: one for control, and the other three with additional 50 μM of trolox/108 spermatozoa, 50 μg of catalase/ml of ejaculate, and 5 mM cysteamine, respectively, in the diluent base. Pre-freezing (5 °C) and post-freezing sperm quality was evaluated using a computerized analysis system (IVOS II®), which eliminated subjectivity during the test. It was observed that 50 μM of trolox/108 SPZ and 50 μg of catalase/ml are able to maintain higher values (p < 0.05) of total motility (64.26 ± 0.82 and 55.54 ± 0.85 ) and progressive motility (47.26 ± 0.75 and 44.32 ± 1.13) under pre-freezing conditions, and of total motility (67.60 ± 1.91 and 63.47 ± 3.40), progressive motility (50.87 ± 2.58 and 38.88 ± 2.31), and viability (66.97 ± 2.25 and 61.16 ± 4.31) in the post-freezing period, compared to control treatments or the addition of 5 mM of cysteamine. The addition of 50 μM of trolox/108 spermatozoa and 50 μg of catalase/ml of semen improves the total and progressive motility in ovine semen refrigerated at 5 °C, as well as viability in frozen/thawed semen.Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito sobre a qualidade espermática de três substancias antioxidantes (50 µM de trolox/108 espermatozoides, 50 µg de catalasa/ml de ejaculado e cisteamina 5mM) numa base de diluente comercial Triladyl™, sob condições de refrigeração e congelamento/descongelamento em sêmen ovino. Sêmen de seis machos adultos foi congelado numa base do diluente comercial Triladyl™. O ejaculado de cada macho foi posto em quatro diferentes alíquotas: uma para controlo e nas outras foi adicionada a base do diluente 50 µM de trolox/108 espermatozoides, 50µg de catalasa/ml de ejaculado e cisteamina 5mM. A qualidade espermática precongelação (5 °C) e pós-congelação avaliou-se com ajuda de um sistema de análise computadorizado (IVOS II®), eliminando assim a subjetividade ao teste. Observou-se que 50 µM de trolox/108 SPZ e 50 µg de catalasa/ml têm a capacidade de manter valores (p < 0,05) superiores de motilidade total (64,26 ± 0,82 e 55,54 ± 0,85) e motilidade progressiva (47,26 ± 0,75 e 44,32 ± 1,13) em condições de pre-congelação, e para motilidade total (67,60 ± 1,91 y 63,47 ± 3,40), motilidade progressiva (50,87 ± 2,58 e 38,88 ± 2,31) e viabilidade (66,97 ± 2,25 e 61,16 ± 4,31) em pós-congelação, comparados com os tratamentos controle ou a adição< de 5 mM de cisteamina. A adição de 50 µM de trolox/108 espermatozoides e 50 µg de catalasa/ml de sêmen melhora a motilidade total e progressiva do sêmen ovino refrigerado a 5 °C e a viabilidade em sêmen congelado/descongelado.Resumen El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto sobre la calidad espermática de tres substancias antioxidantes (50 µM de trolox/108 espermatozoides, 50 µg de catalasa/ml de eyaculado y cisteamina 5mM) en una base de diluyente comercial Triladyl™, bajo condiciones de refrigeración y congelación/descongelación en semen ovino. Se congeló semen de seis machos adultos en una base del diluyente comercial Triladyl™. El eyaculado de cada macho fue puesto en cuatro diferentes alícuotas: una para control, y a las demás se les adicionó con la base del diluyente 50 µM de trolox/108 espermatozoides, 50 µg de catalasa/ml de eyaculado y cisteamina 5 mM. La calidad espermática precongelación (5 °C) y poscongelación se evaluó con la ayuda de un sistema de análisis computarizado (IVOS II®), con lo cual se eliminó la subjetividad a la prueba. Se observó que 50 µM de trolox/108 SPZ y 50 µg de catalasa/ml tienen la capacidad de mantener valores (p < 0,05) superiores de motilidad total (64,26 ± 0,82 y 55,54 ± 0,85) y motilidad progresiva (47,26 ± 0,75 y 44,32 ± 1,13) en condiciones de precongelación, y para motilidad total (67,60 ± 1,91 y 63,47 ± 3,40), motilidad progresiva (50,87 ± 2,58 y 38,88 ± 2,31) y viabilidad (66,97 ± 2,25 y 61,16 ± 4,31) en poscongelación, comparados con los tratamientos control o la adición de 5 mM de cisteamina. La adición de 50 µM de trolox/108 espermatozoides y de 50 µg de catalasa/ml de semen mejora la motilidad total y progresiva del semen ovino refrigerado a 5 °C y la viabilidad en semen congelado/descongelado

Evaluación de los parámetros de calidad seminal y cinemática espermática en tres razas ovinas de lana en condiciones de trópico alto colombiano

This study aimed to evaluate the effect of the ejaculate, race, and sperm collections on semen quality and kinematic parameters in three wool sheep breeds in conditions of high tropics in Colombia. Semen was collected from 12 males of Creole, Romney marsh, and Hampshire sheep breeds ranging from 2 to 5 years of age, with artificial vagina, during 4 collections with a time of abstinence of 3 days. Motility analysis was performed with the help of a computer-assisted semen analysis (CASA) in combination with a fluorescent Hoechst 33259 stain for the study of viability and morphology. An analysis of measures repeated over time was performed with the SAS statistical package, using the Proc Mixed method. There were no significant differences (p > 0.05) in the percentage of total motility and progressive motility for the first and second ejaculates, but there were differences (p 0.05), since the Creole breed is superior in all these variables, which could suggest that the sperm cells of this breed have the ability to travel greater distance in less time, compared with sperm from the other two breeds, under the conditions of the present experiment.O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da ejaculação, a raça e as coletas sobre os parâmetros de qualidade seminal e cinemática em 3 tipos raciais ovinos de lã sob condições de trópico alto colombiano. Foram colhidas amostras de sêmen de 12 machos da raça crioulo, romney marsh e hampshire de 2 a 5 anos de idade, com vagina artificial, durante 4 coletas com um tempo de abstinência de 3 d. Realizou-se a análise da motilidade com ajuda de um sistema computarizado de análise seminal (CASA) em combinação com uma tinção de florescência Hoeschst 33259 para o estudo da viabilidade e a morfologia. Realizou-se um análise de medidas repetidas no tempo com o paquete estadístico SAS, empregando o método Proc Mixed. Não houve diferenças significativas (p > 0,05) na porcentagem de motilidade total e motilidade progressiva para a primeira e segunda ejaculação, mas, sim houve diferenças (p 0,05) no que a raça crioula é superior em estas variáveis, o que poderia sugerir que as células espermáticas desta raça têm a capacidade de percorrer maior distância em menor tempo, comparado com os espermatozoides das outras dois raças, nas condições desta experiência.El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del eyaculado, la raza y las colectas sobre los parámetros de calidad seminal y cinemática en 3 tipos raciales ovinos de lana bajo condiciones de trópico alto colombiano. Se colectó semen de 12 machos de la raza criollo, romney marsh y hampshire de 2 a 5 años de edad, con vagina artificial, durante 4 colectas con un tiempo de abstinencia de 3 d. Se realizó el análisis de la motilidad con ayuda de un sistema computarizado de análisis seminal (CASA) en combinación con una tinción de fluorescencia Hoeschst 33259 para el estudio de la viabilidad y la morfología. Se realizó un análisis de medidas repetidas en el tiempo con el paquete estadístico SAS, empleando el método Proc Mixed. No hubo diferencias significativas (p > 0,05) en el porcentaje de motilidad total y motilidad progresiva para el primer y segundo eyaculado, pero sí hubo diferencias (p 0,05) en el que la raza criolla es superior en estas variables, lo que podría sugerir que las células espermáticas de esta raza tienen la capacidad de recorrer mayor distancia en menor tiempo, comparado con los espermatozoides de las otras dos razas, en las condiciones del presente experimento

Evaluación de los parámetros de calidad seminal y cinemática espermática en tres razas ovinas de lana en condiciones de trópico alto colombiano

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del eyaculado, la raza y las colectas sobre los parámetros de calidad seminal y cinemática en 3 tipos raciales ovinos de lana bajo condiciones de trópico alto colombiano. Se colectó semen de 12 machos de la raza criollo, romney marsh y hampshire de 2 a 5 años de edad, con vagina artificial, durante 4 colectas con un tiempo de abstinencia de 3 d. Se realizó el análisis de la motilidad con ayuda de un sistema computarizado de análisis seminal (CASA) en combinación con una tinción de fluorescencia Hoeschst 33259 para el estudio de la viabilidad y la morfología. Se realizó un análisis de medidas repetidas en el tiempo con el paquete estadístico SAS, empleando el método Proc Mixed. No hubo diferencias significativas (p \u3e 05) en el porcentaje de motilidad total y motilidad progresiva para el primer y segundo eyaculado, pero sí hubo diferencias (p \u3c 05) para la concentración, volumen y viabilidad el primer eyaculado fue significativamente superior al segundo, independiente de la raza y la colecta. Las variables de cinemática espermática relacionadas con el movimiento progresivo y la velocidad (ALH, VAP, LIN) no difieren entre eyaculados, pero sí hay un efecto racial (p \u3e 05) en el que la raza criolla es superior en estas variables, lo que podría sugerir que las células espermáticas de esta raza tienen la capacidad de recorrer mayor distancia en menor tiempo, comparado con los espermatozoides de las otras dos razas, en las condiciones del presente experimento