Preocupações de carreira e adaptabilidade : estudo exploratório com uma amostra de candidatos a sargentos e oficiais do Exército Português

Tese de mestrado, Psicologia (Psicologia dos Recursos Humanos, do Trabalho e das Organizações), Universidade de Lisboa, Faculdade de Psicologia, 2010O presente trabalho consiste num estudo exploratório sobre as preocupações de carreira e as dimensões da adaptabilidade, baseando-se na Perspectiva de Desenvolvimento da Carreira de Donald Super e na Perspectiva Construtivista de Mark Savickas. Pretende-se, ainda, contribuir para a investigação acerca do Inventário sobre Adaptabilidade, que se encontra ainda em estudo no âmbito de um Projecto Internacional. Foram aplicados o Inventário das Preocupações de Carreira e o Inventário sobre Adaptabilidade a uma amostra de 75 adultos candidatos a Sargentos e Oficiais do Exército Português. Os resultados obtidos tendem a confirmar as hipóteses de investigação formuladas, apontando para a relação entre a variável idade e as tarefas de desenvolvimento das fases da carreira Exploração e Estabelecimento, para a predominância das dimensões Confiança e Cooperação, e para a relação entre preocupações de carreira e dimensões da adaptabilidade. Apresentam-se as conclusões do presente estudo, algumas limitações deste e futuras linhas de investigação. Tecem-se também algumas considerações sobre as implicações do estudo para as práticas de gestão de carreira.This work is an exploratory study about the career concerns and the dimensions of adaptability, based on the Perspective of the Career Development of Donald Super and the Constructivist Perspective of Mark Savickas. It is also intended to contribute to the research on the Career Adapt-Abilities Inventory, which is still under investigation as part of an International Project. The Career Concerns Inventory and the Career Adapt-Abilities Inventory were applied to a sample of 75 adult candidates to Sergeants and Officers of the Portuguese Army. The results seem to confirm the research hypotheses, pointing to the relation between the variable age and the developmental tasks of the Exploration and Establishment career phases, to the predominance of the dimensions Cooperation, and Confidence and also to the relation between career concerns and adaptability dimensions. The findings of this study, some of its limitations and future research paths are presented. Some reflections are also discussed in what concerns the study's implications for the career management practices

Microglial clearance function: dependence on phenotypes

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e BiomedicinaMicroglia are active sensors of the brain and respond promptly to even minor disturbance in their microenvironment. A feature of this response is the accumulation of these cells at the site of lesion. Neonatal jaundice is a common condition of the newborn and may determine injury to neurons and glial cells, such as microglia, when levels of unconjugated bilirubin (UCB) are excessive. With the objective to evaluate whether microglia have a protective or deleterious role, we decided to assess, using the Boyden chamber, the chemotactic effect of free unbound UCB (fUCB), as well as the migration ability of UCB-treated microglia in the absence or in the presence of chemotatic compounds, such as ATP and S100B. Also, we intended to evaluate the effect of glycoursodeoxycholic acid (GUDCA) as a modulator. To characterize our usual model of microglia isolation, phenotypic evaluation of cultures with different days in vitro (DIV) was performed by estimating cell morphology, nuclear factor-kappaB (NF-κB) activation and phagocytic ability. We observed that fUCB did not act as a chemotactic compound for microglia and that cells treated with UCB showed decreased migration ability. Co-incubation with GUDCA prevented this effect and enhanced microglia migration. However, reduced effects were observed in the presence of ATP and abolished when using S100B. Isolated microglia with 2 DIV showed features of activation, but presentedramified morphology of the “resting” state, less NF-κB activation and increased phagocytosis at 13 DIV. Data indicate that microoglia exposure to UCB leads to a reduced migration ability and that co-incubation with GUDCA prevents this deleterious effect, resulting in an increased migration. Characterization of microglia phenotypes, along the time in culture, point to 13 DIV cells as the most suitable for studies intended to evaluate microglia reactivity to UCB, and probably to other stimuli

EEG neurometric indexes in the assessment of mass media campaigns effectiveness: application to anti-tobacco Public Service Announcement

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2017A epidemia mundial do tabaco é uma das maiores ameaças à saúde pública matando atualmente mais de 7 milhões de pessoas e com um aumento previsto até 2030. O programa MPOWER, elaborado pela Organização Mundial de Saúde em 2008, consiste num conjunto de políticas práticas, rentáveis e completas de controlo do tabagismo. As políticas estabelecidas, abrangem a monitorização do consumo de tabaco e das politicas preventivas; a proteção da exposição ao fumo do tabaco; a oferta de ajuda na cessação tabágica; a informação sobre os riscos associados ao tabagismo; a proibição total da publicidade, promoção e patrocínios dos produtos de tabaco e o aumento dos impostos sobre os produtos de tabaco. No âmbito de informar sobre os riscos associados ao tabagismo, o programa MPOWER recomenda a utilização de campanhas mass media na promoção da consciencialização dos efeitos nocivos do tabaco e dos perigos da exposição passiva; no incentivo à cessação tabágica; no apoio da implementação de ambientes 100% livres de tabaco e na prevenção da iniciação do tabagismo. As campanhas anti-tabagismo têm a capacidade de influenciar diretamente as intenções, decisões e atitudes do fumador relativamente à cessação tabágica e indiretamente através do aumento das discussões interpessoais e da influência nas normas sociais. Consequentemente, o aumento de comportamentos associados à cessação tabágica tem o potencial impacto de diminuir a prevalência de fumadores, bem como o número de cigarros consumidos. Contudo, vários estudos evidenciam que a eficácia destas campanhas está dependente de quatro fatores: duração e intensidade da campanha; canais mass media onde é comunicada; tipos de comunicação utilizados e o público-alvo a que se destina. Atualmente, a má gestão destes fatores e os métodos utilizados para a avaliação da eficácia das campanhas fazem com que apenas uma pequena parte dos investimentos realizados pelos governos tenham o retorno esperado. Os métodos tradicionais que avaliam a eficácia das campanhas baseiam-se em questionários que reportam de forma subjetiva as perceções conscientes do público-alvo, dependendo da vontade e capacidade de expressão do mesmo. Posto isto, torna-se necessária a adoção de uma nova metodologia de estudo que avalie objetivamente o sucesso de uma campanha anti-tabagismo antes que esta seja divulgada e os investimentos tenham sido feitos. O neuromarketing é um ramo da neurociência que se foca na aplicação de métodos neurológicos e biológicos para avaliar os processos cognitivos, comportamentais e neurológicos resultantes de estímulos de marketing. Uma das técnicas neurométricas mais utilizadas é o eletroencefalograma (EEG) que efetua medições das variações da atividade elétrica do cérebro através das diferentes ondas cerebrais. Esta metodologia tem como vantagem refletir, simultaneamente ao estímulo, os processos cognitivos e emocionais do público-alvo, fornecendo informações do consciente e inconsciente que contribuem para o sucesso da campanha. O objetivo deste projeto é validar o eletroencefalograma (EEG) como uma metodologia neurofisiológica objetiva capaz de avaliar a eficácia de campanhas anti-tabagismo através de variações da atividade cerebral. Este estudo também pretende contribuir para uma melhor compreensão dos diferentes tipos de comunicação utilizados. Como tal, o presente estudo utiliza dois índices que refletem as variações da atividade cerebral, a aproximação-rejeição e o esforço mental. Ambos foram aplicados numa amostra populacional de fumadores e não fumadores para a avaliação da eficácia de três categorias de campanhas de serviço público: eficazes, ineficazes e premiadas. Os resultados comprovam relativamente ao índice aproximação-rejeição, que as campanhas consideradas interessantes (eficazes e premiadas) ativaram o lóbulo frontal esquerdo como consequência de uma diminuição da atividade alpha. Em contrapartida, as campanhas consideradas desinteressantes (ineficazes) ativaram o lóbulo frontal direito comparativamente ao esquerdo. Os diferentes resultados neste índice podem ser justificados considerando os tipos de comunicação utilizados. Tendem a ser consideradas mais interessantes pela amostra populacional em estudo as campanhas que estimulam sentimentos negativos no público-alvo, que utilizam temas de mensagem relacionados com a exposição passiva e os riscos associados ao tabagismo e que no seu estilo de produção revelam a presença de crianças ou uma forte componente visual. Contudo, os tipos de comunicação pelo enorme impacto no sucesso da campanha devem ser considerados um foco de futuras investigações. O índice que reflete o esforço mental confirmou que um aumento da atividade tetha no lóbulo frontal ocorre quando o participante, aquando da visualização de campanhas de difícil perceção (ineficazes), diminui progressivamente a sua atenção devido à fadiga mental induzida. Seria interessante, no futuro, realizar o estudo com mais estímulos de marketing, com diversas técnicas de neuromarketing e com uma amostra populacional maior, que refletisse as diferentes condições socioeconómicas e o género dos participantes. O presente trabalho dá suporte à validação dos índices de neuromarketing para avaliar com objetividade e economicamente a eficácia de campanhas anti-tabagismo, prevendo uma melhor aplicação dos fundos estatais nas campanhas mass media anti-tabagismo.Global tobacco epidemic is one of the biggest public health threats the world has ever faced. Tobacco use kills more than 7 million people a year and this number is projected to increase by 2030. Remarkable progress has been made in global tobacco control since MPOWER was implemented by World Health Organization. In this practical, cost-effective and comprehensive set of tobacco control policies, countries are commanded to use mass media campaigns to promote public awareness about the harmful effects of tobacco use and second-hand exposure; influence the smoker’s intentions about quitting; promote free-tobacco policies and prevent smoking initiation. However, high costs are being invested by the governments in anti-tobacco campaigns which only a small part is successfully employed. In addition, the current methods to evaluate the effectiveness of a campaign are based on the will and consciousness of the target to report. Facing this, a new methodology is necessary to ensure the success of an anti-tobacco campaign. This work intends to validate an objective neurophysiological tool, the electroencephalographic, capable of assessing the effectiveness of anti-tobacco campaigns through brain activity variations. This method reflects the cognitive and emotional processes of the target predicting its effectiveness. Additionally, this project intends to contribute for a better comprehension of the different types of communication used in anti-tobacco campaigns. The study was performed using two electroencephalographic indexes, approach-withdrawal and mental effort, for the evaluation of the efficacy of three categories of public service announcements (effective, awarded, and ineffective) in an adult sample of heavy-smokers and non-smokers. Concerning the results exposed for approach-withdrawal index, public service announcements considered interesting by the participants activated the left frontal lobe showing a desynchronization of the alpha activity. The mental effort index confirmed that an increase of theta activity in the frontal lobe occurs when the participant has a progressive withdrawal of attention induced by mental fatigue during the observation of public service announcements considered ineffective. The types of communication used for anti-tobacco mass media campaigns have a huge impact in its effectiveness and are work material for future research

Assessment of antibiotic and biocide resistance in Campylobacter jejuni and Campylobacter coli isolates from human and broiler origin

Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011In 2008 the European Food Safety Authority, EFSA, reported that Campylobacter was one of the most frequently observed bacterial gastrointestinal pathogen in humans. Poultry meat is an extremely important foodborne source of Campylobacter spp. Although self-limiting, campylobacteriosis occasionally requires treatment and macrolides and fluoroquinolones are the drugs of choice. For the past few decades resistant C. jejuni and C. coli strains have emerged at an alarming rate due, at least partly, to the large-scale use of these agents in food production animals and passed on to humans through poultry meat products. The purpose of this work was the phenotypic and genotypic characterization of isolates from two different origins: poultry and human, in order to perceive the general panorama regarding antimicrobial resistance for C. jejuni and C. coli strains in Portugal. Disc diffusion tests results provided comprehensive information about antimicrobial resistance for the tested products and made selection of multiple drug resistant strains possible. Antibiotic and disinfectant minimum inhibitory concentrations were determined and the effect an efflux pump inhibitor in restoring ciprofloxacin susceptibility was analyzed. High resistance frequency to fluoroquinolones was observed reaching, for ciprofloxacin, levels as high as 92% (retail isolates), 30% to 40% of studied isolates were erythromycin resistant and resistance patterns for tetracycline ranged from 37% to 91%. Human isolates showed high level percentage of resistant isolates to both therapeutic alternatives. Multiple drug resistance was one of the major issues to be considered in the present work, which occurred in 86.3% to 93.2% of tested strains. Erythromycin and ciprofloxacin high level resistance (HLR) strains were among the selected isolates, and the respective HLR associated point mutations, were detected. The effect of the efflux pump inhibitor (PAβN) on ciprofloxacin resistance revealed that susceptibility to this antibiotic could be restored for mostly all, except for HLR ciprofloxacin strains.Campylobacter spp. é reconhecido como um dos principais agentes responsáveis por gastroentrites de etiologia bacteriana em humanos. Entre as espécies deste género patogenicamente mais relevantes incluem-se Campylobacter jejuni e Campylobacter coli sendo que a primeira é responsável por cerca de 80 - 90% dos casos de campilobacteriose registados, enquanto os restantes casos são, na sua maioria, da responsabilidade de C. coli (Fitzgerald et al., 2008). Tipicamente os casos de campilobacteriose são auto-limitantes e não requerem terapêutica antimicrobiana. Esta é apenas efectivamente necessária num relativamente reduzido número de situações: Caso a infecção ocorra em indivíduos imunocomprometidos, na eventualidade de se verificarem complicações secundárias extra intestinais ou em caso de persistência dos sintomas gastrointestinais (Nachamkin et al., 1998; Skirrow et al., 2000). Os macrólidos e fluoroquinolonas surgem como os principais agentes terapêuticos indicados na resolução das situações anteriormente descritas. A resistência a estes agentes terapêuticos tem, no entanto, crescido a um ritmo alarmante nas últimas décadas verificando-se inclusivamente resistências simultâneas a diferentes grupos de antibióticos por parte de estirpes isoladas numa das principais fontes de infecção como sucede com a carne de aves (Vliet & Ketley, 2001; Gibreel et al., 2006). Os macrólidos são antibióticos bacterioestáticos que actuam por inibição da síntese proteica ligando-se à subunidade 23S rARN da subunidade ribossomal 50S, onde, perante a ocorrência de mutações pontuais, se verifica a alteração do alvo deste agente terapêutico inibindo assim a sua actividade. Estas mutações ocorrem ao nível do domínio V do gene 23S rARN, nas posições 2075 e 2074 ocorrendo, de forma geral, respectivamente uma transição (A2075G) e uma transversão (A2074C). Tipicamente esta primeira mutação pontual é predominante e será por isso um dos alvos neste estudo (Engberg et al., 2001; Gibreel & Taylor, 2006). As fluoroquinolonas são agentes antimicrobianos de largo espectro que actuam por inibição das topoisomerases. No caso de Campylobacter spp. é particularmente importante o seu efeito na topoisomerase II, ADN girase responsável pela manutenção do supercoil negativo da dupla hélice da molécula de ADN durante a replicação e transcrição. A ocorrência de uma mutação pontual ao nível da região determinante de resistência a quinolonas (QRDR, do ing. Quinolone Resistance Determining Region) afectando o aminoácido 86Thr (Thr-Ile), é o principal mecanismo de desenvolvimento de resistência a fluoroquinolonas. Não existem actualmente evidências da existência da topoisomerase IV em Campylobacter (Engberg et al., 2001; Fàbrega et al., 2008). Para além da ocorrência de mutações pontuais observa-se o desenvolvimento de resistência, tanto a fluoroquinolonas como a macrólidos devido à actividade de mecanismos de efluxo. A bomba de efluxo CmeABC pertencente à família de transportadores RND (do ing. Resistance Nodulation Division), inicialmente descrita por Pumbwe e Piddock (2002) e Lin et al. (2002) encontra-se actualmente associada a mecanismos de resistência intrínseca e a baixos nível de resistência, LLR (do ing. Low Level Resistance) a estes agentes terapêuticos. A actividade da bomba de efluxo é inibida na presença do inibidor de bombas de efluxo, EPI (do ing., efflux pump inhibitor) (Webber & Piddock, 2003; Akiba et al., 2006; Piddock, 2006). O aumento de estirpes que apresentam resistência múltipla é actualmente uma relevante fonte de preocupação sob o ponto de vista clínico, sendo necessário determinar se a resistência apresentada por estirpes de origem animal se estende a outros antimicrobianos, nomeadamente desinfectantes uma vez que estes são utilizados frequentemente nos programas de higienização de matadouros, nas salas de desmancha de onde provêem as carcaças e peças de frango para consumo humano. O objectivo deste trabalho prendia-se com a caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Campylobacter de diferentes origens, amostras de produtos para consumo humano e amostras com origem em pacientes com campilobacteriose, de forma a captar o estado actual deste importante agente em relação a resistências a antimicrobianos tanto na carne para consumo humano como no próprio homem, em Portugal. Pretendia-se igualmente avaliar a resposta dos isolados a dois desinfectantes diferentes, utilizados rotineiramente na limpeza e desinfecção dos matadouros e salas de desmancha. Por fim era também pretendido apreciar o efeito de um inibidor de bomba de efluxo, PAβN (fenilalanina arginina β-naftilamida) no restabelecimento da susceptibilidade, neste caso especifico, à ciprofloxacina. Tendo por base os objectivos descritos foram seguidas as metodologias que se consideraram mais adequadas. A identificação dos isolados foi inicialmente feita pelo teste do hipurato e posteriormente corroborada por PCR multiplex, de acordo com Dennis et al. (1999) e Samorsornsuk et al. (2007). Testes de susceptibilidade a antibióticos por difusão de disco foram realizados, de modo a proceder à elaboração dos perfis de resistência dos isolados obtidos, provenientes de amostras de frangos (pele do peito, intestino e peito de frangos de produção extensiva indoor, intensiva e biológica e de carcaças de frangos ‘pronto a cozinhar’ adquiridas em grandes superfícies comerciais) para 11 antibióticos, eritromicina, tetraciclina, gentamicina, amoxacilina e ácido clavulânico, ácido nalidixíco, ciprofloxacina, norfloxacina, ofloxacina, trimetropim-sulfametoxazole, cloranfenicol e ampicilina. A selecção de estirpes com resistência múltipla era então possivel. Ás estirpes seleccionadas for aplicada a técnica de concentração mínima inibitória, CMI, por diluição em agar, para eritromicina, ciprofloxacina, tetraciclina e gentamicina, assim como para os dois desinfectantes: hipoclorito de sódio e cloreto de benzalcónio. A gama de concentrações para os antibióticos está de acordo com o normativo CA-SFM 2010. A gama de concentrações a que os desinfectantes foram testados variou entre 0,5 a 32 μg/mL, de acordo com Peyrat et al. (2008). A ocorrência de mutações pontuais, nomeadamente à mutação A2075G que surge ao nível do domínio V do gene responsável pela subunidade 23S rRNA, tipicamente perdominante em comparação à ocorrência da mutação A2074C na mesma região foi testada recorredo-se á técnica de RFLP-PCR (Restriction Fragment Length Polymorphism) de acordo com Kurinčič et al., 2007. As mutações pontuais ao nível da região QRDR do gene responsável pela DNA girase, gyrA foram avaliadas pela técnica de MAMA-PCR (Mismatch Amplification Mutation Assay) de acordo com o trabalho de Payot et al. (2004). O efeito da bomba de efluxo foi avaliado na presença de diferentes concentrações de ciprofloxacina e de diferentes concentrações de inibidor, PAβN (Phe-Arg-β-naftilamida) realizado de acordo com o estudo descrito por Payot et al. (2004). Do numero total inicial de isolados, 75% tinham origem alimentar enquanto que os restantes tinham origem humana. Do número inicial de isolados, 258, 43% foram identificados como C. jejuni enquanto os restantes 57% foram identificados como C. coli. Testes de difusão de disco providenciaram a informação necessária, relativamente à resistência a antibióticos, para os produtos testados. Foi possível constatar uma particular elevada frequência de resistência às fluoroquinolonas, 58% a 92%. Para o macrólido eritromicina, 30% a 40% dos isolados estudados eram resistentes. Foram também identificados níveis de resistência para a gentamicina e tetraciclina que variavam respectivamente entre: 6% a 45% e de 37% a 91%. Isolados com origem em amostras de frangos de produção extensiva apresentaram, comparativamente aos isolados com origem em amostras de frangos de produção biológica, níveis mais baixos de resistência a ciprofloxacina enquanto os isolados de amostras de produtos prontos a cozinhar apresentavam os mais altos níveis de resistência a este antibiótico. O mesmo padrão de resistência foi observado para a tetraciclina onde se evidenciaram níveis de resistencia mais reduzidos para os isolados com origem em frangos de produção extensiva e os mais altos para isolados de amostras de produtos prontos a cozinhar. No caso especifico da eritromicina foi possível constatar, que os isolados de produtos prontos a cozinhar apresentavam-se mais susceptíveis (40% de isolados resistentes) que os isolados de frangos de produção extensiva (75% de isolados resistentes). Os isolados de amostras de fezes humanas provenientes de indivíduos com campilobacteriose apresentavam níveis de resistencia particularmente elevados para as alternativas terapêuticas tipicamente utilizadas: 32% e 37% dos isolados eram resistentes respectivamente a eritromicina e à tetraciclina e mais de 70% eram resistentes à ciprofloxacina. Apenas 19% dos isolados apresentavam resistência a gentamicina, no entanto, devido à elevada toxicidade deste agente a sua aplicação é altamente limitada mas persiste enquanto alternativa terapêutica. A questão da resistência múltipla era um ponto fulcral no desenvolvimento desta dissertação. Foi possível observar que para todos os isolados testados a maioria apresentava resistência para 4 ou mais das 7 classes de antibióticos testadas, tipicamente para quinolonas, macrólidos, tetraciclina e β-lactâmicos. Constatou-se que entre 86% e 93% das estirpes testadas apresentavam resistencia múltipla. Estirpes de origem humana e de origem em produtos prontos a cozinhar não apresentaram nenhuma estirpe totalmente susceptível a todas as classes de antibióticos testadas. Todas as estirpes avaliadas como HLR para a ciprofloxacina e eritromicina eram portadoras das mutações pontuais, respectivamente gyrA (Thr86) e A2075G. As concentrações mínimas inibitórias mais altas foram obtidas para estirpes de origem em frangos de produção biológica. Para a eritromicina foi de 128 mg/L e de 512 mg/L para a ciprofloxacina. Foi também possível constatar algum paralelismo entre estirpes classificadas como HLR para a ciprofloxacina e os padrões de resistencia obtidos para os desinfectantes em estudo. As mais elevadas concentrações mínimas inibitórias foram de 64 mg/L para o cloreto de benzalcónio e de 512 mg/L para o hipoclorito de sódio. É relevante mencionar que as estirpes com origem em produtos prontos a cozinhar estudadas, apresentavam-se totalmente resistentes à actividade do hipoclorito de sódio. Relativamente ao funcionamento da bomba de efluxo e à actividade do respectivo inibidor foi possível constatar que tipicamente a presença do inibidor devolvia inteiramente, até a concentração máxima de 40 mg/L, a susceptibilidade à ciprofloxacina. Para as estirpes classificadas como HLR, no entanto, a resistência a ciprofloxacina persistiu mesmo perante a concentração de inibidor mais alta testada: 120 mg/L. È actualmente inquestionável a necessidade crescente de melhor compreender o processo subjacente ao desenvolvimento de resistências a antimicrobianos. O uso inadequado destes compostos levou ao aparecimento disseminado de estirpes resistentes associado a padrões de resistencia múltipla indicando a rápida perda de eficácia dos agentes actualmente disponíveis no tratamento de infecções em humanos. A necessária introdução de mecanismos de regulação e controlo deverá ser feita paralelamente à combinação de informações epidemiológicas disponíveis num contexto mundial em que Portugal não será a excepção

The role of chromatin on RNA polymerase II transcription termination

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012Tem-se tornado cada vez mais evidente que a transcrição no ambiente da cromatina é um processo extremamente complexo e finamente regulado. É agora claro que a maquinaria transcricional eucariótica está adaptada para explorar a presença de nucleossomas de variadíssimas e sofisticadas maneiras. Após activação, os genes sofrem drásticas mudanças na estrutura da cromatina. Isto é possível devido a um sistema de montagem da cromatina dependente da transcrição que integra a acção coordenada de numerosos factores proteicos capazes de modificar as propriedades da cromatina. Estes factores vão cooperar ou competir de forma a alterar o estado da cromatina entre permissivo e não permissivo, levando à activação ou repressão da transcrição. O trabalho apresentado nesta tese focou-se na terminação da transcrição. O objectivo foi investigar de que forma está a cromatina implicada na fase final da transcrição. Assim, levantou-se a hipótese que características específicas da cromatina são observadas nas regiões do DNA onde a RNA polimerase II se dissocia do DNA molde. Para testar esta hipótese, foram utilizadas técnicas bioquímicas, como por exemplo, imunoprecipitação de cromatina e digestão com nucleases. Os resultados revelaram um comportamento dinâmico da RNA polimerase II dependente da transcrição em regiões downstream do limite 3´ dos genes. Além disto, os resultados sugerem que os nucleossomas localizados nesta região são desmontados ineficientemente pelos complexos transcricionais da RNA polimerase II. De facto, experiências adicionais demonstraram que regiões a jusante do local de poliadenilação, onde a terminação ocorre, exibem reduzido recrutamento de chaperones de histonas. Finalmente, foi possível confirmar um enriquecimento de modificações específicas de histonas nas regiões 3’ que flanqueiam os genes. Em conjunto, os resultados aqui apresentados permitem sugerir um modelo pelo qual o estado da cromatina a jusante do local de poliadenilação facilita os eventos moleculares que levam à terminação da transcrição.It has become increasingly evident that transcription in a chromatin environment is an extremely complex and finely tuned process. It is now clear that the eukaryotic transcriptional machinery is adapted to exploit the presence of nucleosomes in a variety of sophisticated ways. Nucleosomes are now seen as a crucial component of this process, rather than a simple passive barrier. Upon activation, genes undergo severe changes in chromatin structure. This is achieved through a transcription-dependent chromatin assembly system that involves the orchestrated action of numerous protein factors capable of modifying chromatin properties. These proteins will cooperate or compete to change the chromatin state between permissive and non-permissive, leading to activation or repression of transcription. Herein we focused on transcription termination. We aimed at investigating whether chromatin is a determinant of the final stage of transcription. In this sense, we hypothesized that specific chromatin features are observed at the DNA regions where RNA Polymerase II dissociates from the transcribed template. To test this hypothesis, we used a biochemical approach, which includes techniques such as chromatin immunoprecipitation and nuclease digestion assays. Our results reveal a transcription-dependent dynamic behavior of RNA Polymerase II molecules in regions downstream the 3’ boundary of genes. Our data further suggest that the nucleosomes occupying this region are inefficiently disassembled by the RNA polymerase II transcription complexes. Notably, the regions downstream the poly(A) site, where termination takes place, exhibited reduced recruitment of histone chaperones. Finally, we were able to confirm the presence of histone modifications enriched at the 3’ flanking region of genes. Altogether, these data allow us to envisage a model by which the chromatin landscape downstream the poly(A) site facilitates the molecular events that drive transcription termination

Prevalência de resistência a antimicrobianos em isolados ambientais de Escherichia coli e enterococos

A água é um recurso escasso e indispensável à vida, podendo ser um importante veículo de microrganismos patogénicos com origem fecal. A matéria fecal é também uma fonte de microrganismos resistentes a antimicrobianos e contribui para a sua disseminação e dos seus genes de resistência no ambiente e entre as comunidades microbianas comensais e microrganismos patogénicos humanos e animais. A qualidade microbiológica da água é monitorizada recorrendo à utilização de bioindicadores como Escherichia coli, enterococos e microrganismos totais. O presente estudo apresentou como principal objetivo determinar a prevalência de ESBLs e AmpCs e ainda avaliar a prevalência de estirpes de enterococos com resistência à vancomicina (VRE) em águas do rio Douro e da orla costeira da cidade do Porto. As amostragens de água foram realizadas em quatro locais localizados no estuário do rio Douro e orla costeira da cidade do Porto entre o mês de Abril e Julho. A deteção e quantificação dos bioindicadores foram realizadas pelo método de filtração por membrana. A suscetibilidade das estirpes de E. coli e enterococos foi testada pelo método de difusão em disco relativamente a várias classes de antimicrobianos. As contagens microbianas mais elevadas foram determinadas entre Abril e Junho e em amostras de água doce. Foram isoladas 62 estirpes de E. coli e 49 estirpes de enterococos que apresentaram prevalências de resistência a antimicrobianos de 90,3% (56/62) e 83,7% (41/49), respetivamente. As estirpes de E. coli apresentaram altas frequências de resistência à ampicilina (74,2%) e tetraciclina (61,3%). Nestas estirpes verificou-se ainda fenótipos associados a multirresistência a um mínimo de três classes de antimicrobianos em 56,5% (35/62) dos isolados. Verificou-se que as estirpes de enterococos apresentaram altos níveis de resistência à rifampicina (34,7%) e azitromicina (40,8%), detetando-se ainda a manifestação de fenótipo de resistência à vancomicina em 26,5% das estirpes. Observou-se uma prevalência de 36,7% (18/49) de estirpes de enterococos associadas a fenómenos de multirresistência antimicrobiana. Ana Martins vi Os resultados obtidos sugerem que o rio Douro e orla costeira, bem como os ambientes aquáticos, constituem reservatórios de bactérias e genes de resistência a antimicrobianos e possuem um papel preponderante na sua disseminação.Water is a scarce resource and essential to life that can be an important vehicle of pathogenic enteric bacteria. Fecal matter is also a source of antimicrobial resistant bacteria and contributes to its spread and their resistance genes into the environment and among commensal communities and human and animal pathogenic bacteria. The microbiological quality of water is monitored by the use of fecal indicator bacteria such as Escherichia coli, enterococci and total microorganisms. The main objective of this study has to determine the prevalence of ESBLs and AmpC in environmental isolates of E. coli and also evaluate the prevalence of vancomycin-resistant enterococci strains (VRE).from Douro river estuary and coastline of Oporto city. In the present study water samples were collected at four sites located in the Douro river estuary and coastline between April and July. The detection and quantification of biomarkers was performed by the filter membrane method. The susceptibility of strains of E. coli and enterococci was tested by the disk diffusion method to various classes of antimicrobials. The higher microbial counts were determined between April and June in freshwater samples. There were isolated 62 E. coli strains and 49 enterococci strains that showed 90,3% (56/62) and 83,7% (41/49) antimicrobial resistance, respectively. E.coli strains showed higher frequencies of resistance to ampicillin (74,2%) and tetracycline (61,3%). In these strains it was found phenotypes associated with multiple antimicrobial resistance to at least three classes of antimicrobial agents in 56,5% (35/62) of the isolates. It has been found that enterococci strains showed high resistance levels to rifampicin (34,0%) and azithromycin (40,8%), and was detected the expression of vancomycin resistance phenotype in 26,5% of the strains. We found a prevalence of 36,7% (18/49) of enterococci strains associated with multidrug resistance phenomens. The results suggest that the Douro river and aquatic environments, constitute reservoirs of resistant bacteria and genes and have a leading role in their dissemination

Relatório de Estágio

O presente Relatório de Estágio, integrado na unidade curricular de Prática Educativa Supervisionada no Mestrado em Educação Pré-Escolar e 1.º Ciclo do Ensino Básico visa, descrever de forma analítica e reflexiva, a ação pedagógica desenvolvida ao longo da prática educativa em ambos os níveis educativos. Com efeito, este documento, requisito obrigatório para a obtenção do grau de mestre de perfil duplo (Decreto-Lei n.º 79/2014, de 14 de maio) mobiliza em si um quadro concetual e legal que sustentou essa mesma prática, auxiliando no desenvolvimento de competências fundamentais do processo de dupla docência. Neste sentido, ao longo deste processo e sempre numa perspetiva socioconstrutivista, a criança foi o centro de todo este processo, escutando-a atentamente em todos os momentos, explanados na metodologia investigação- -ação, processo cíclico que permitiu estruturar e desenvolver, com base nos interesses e necessidades de todas as crianças, atividades e sequências didáticas, a referenciar neste documento. Posto isto, este Relatório de Estágio visa descrever, analisar e refletir sobre a ação desenvolvida ao longo do último ano, aprofundando as especificidades referentes a cada nível educativo, bem como dos grupos de crianças, realçando a postura crítica e reflexiva desenvolvida ao longo da Prática Educativa Supervisionada. Em término, este processo desenvolvido ao longo do último ano permitiu aprofundar as especificidades referentes a cada nível educativo, bem como a continuidade educativa entre ambos, promovendo o desenvolvimento de competências profissionais e pessoais, culminando na construção de um perfil duplo, incrementado pelo trabalho colaborativo desenvolvido, enriquecedor da ação educativaThe present Internship Report, integrated in the curricular unit of Supervised Educational Practice in the Master's Degree in Pre-School Education and 1st Cycle of Basic Education, aims to describe, in an analytical and reflexive way, the pedagogical action developed throughout the educational practice in both educational levels. In fact, this document, which is a compulsory requirement for obtaining a dual profile master's degree (Decree-Law 79/2014, of May 14), mobilizes in itself a conceptual and legal framework that underpinned this same practice, assisting in the development of competences of the dual teaching process. In this sense, throughout this process and always in a socioconstructivist perspective, the child was the center of this whole process, listening carefully to the child at all times, explained in the methodology research-interaction, cyclical process that allowed structure and develop, based interests and needs of all children, activities, and didactic sequences, to be referenced in this document. Having said this, this Internship Report aims to describe, analyze and reflect on the action developed over the last year, deepening the specifics regarding each educational level, as well as the groups of children, highlighting the critical and reflexive stance developed throughout the Practice Educational Supervision. In the end, this process developed over the last year allowed us to deepen the specificities regarding each educational level, as well as the educational continuity between both, promoting the development of professional and personal skills, culminating in the construction of a double profile, enhanced by collaborative work developed, enriching the educational action

Electric cars impact in the economic growth and the CO2 : case of European Union

Mestrado em EconomiaEsta dissertação apresenta uma análise do impacto dos veículos elétricos tanto no crescimento económico, como nas emissões de dióxido de carbono na União Europeia. Realizou-se um micro painel, com dados anuais de 2008 a 2016, em que se estimaram dois modelos utilizando o modelo Autoregressive Distributed Lag (ARDL). O primeiro modelo, com 26 países, tem como variável dependente as emissões de dióxido de carbono, e no segundo, com 24 países, a variável dependente é o produto interno bruto, utilizada como proxy para o crescimento económico. Os resultados deste estudo sugerem que investir em carros elétricos, no longo prazo, é benéfico para a União Europeia, ambientalmente e economicamente. Ao aumentar a frota de veículos elétricos, há uma melhoria na qualidade do ar, e o PIB aumenta.This dissertation presents an analysis of the impacts of electric vehicles in economic growth and carbon dioxide emissions in the European Union. It was executed a micro panel with annual data from 2008 to 2016, and two models were estimated using the Autoregressive Distributed Lag (ARDL) model. The first one with 26 countries, where the dependent variable is the carbon dioxide emissions, and the second one, with 24 countries, the dependent variable is the gross domestic product, as a proxy for economic growth. The findings in this study suggest that investing in electric vehicles, in the long run, is beneficial to the European Union, economically and environmentally. Increasing the fleet of EVs, improves the quality of air, and increases the GDP.info:eu-repo/semantics/publishedVersio