Cytoadherence capabilities of Plasmodium berghei ANKA and NK65 infected red blood cells in different malaria models

Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências. 2011Malaria is an infectious disease caused by an intracellular parasite (genus Plasmodium). Sequestration of mature erythrocytic forms of P. falciparum is a key factor in the development of severe malaria-associated pathologies, namely CM. Brains of patients that died of CM show a preferential sequestration of the MF, and blood-smears of malaria patients at hospital admission show exclusively immature erythrocytic forms. Recently, it was demonstrated that in PbA-infected C576BL/6 mice, an experimental cerebral malaria model, there is accumulation of pRBCs in the brain, as well as CD8+T cells. On the contrary, PbA-infected Balb/C mice, which don‟t develop ECM, don‟t accumulate these cell-populations. PbNK65-infected C57BL/6 mice also don‟t develop ECM, though they accumulate CD8+T cells in the brain, but not infected erythrocytes. Using these models of malaria, our main goal was to study the blood-stage dynamics and sequestration capabilities of both parasite strains and associate that pattern with the pathology. Results show that MF of both parasite strains are not seen in circulation at a certain point in infection. Also, this disappearance from circulation is concomitant with sequestration of PbA schizonts in the spleen and lungs (C57BL/6 mice), as well as in the fat tissue and liver (both hosts). In addition, we wanted to clarify the importance of parasite versus host in cytoadherence of pRBCs to the brain microvasculature. Our results suggest that the absence of PbNK65 sequestration in the brain of C57BL/6 mice is mainly due to differences between this parasite and PbA in its intrinsic cytoadherence capability. Moreover, we observed a significant difference in numbers of merozoites formed per schizont between PbNK65 and PbA infections, which might account for the differences in parasitaemia growth rates and infectivity that have been described for these strains.A malária é uma doença infecciosa responsável por mais de 225 milhões de infecções e 781 000 mortes por ano, a grande maioria de crianças até aos 5 anos de idade [1]. O seu impacto faz-se sentir não só a nível social, mas também a nível económico, sendo umas das causas da perpetuação do ciclo de pobreza que é vivido nos países afectados por esta doença [2]. A malária é causada por um parasita eucariota intracelular, do género Plasmodium, transmitido através da picada de um mosquito do género Anopheles, que pode infectar mamíferos, répteis e aves. No Homem, a malária pode ser decorrente da infecção por cinco espécies diferentes: P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale e P. knowlesi [3]. Os parasitas do género Plasmodium têm um ciclo de vida complexo que se divide entre a fase sexuada, no vector invertebrado, e a fase assexuada, no mamífero. A infecção inicia-se quando o mosquito se alimenta de sangue de um mamífero e deposita na sua derme os esporozoítos [4]. Estes entram na corrente sanguínea, através da qual migram até atingir o fígado, onde irão dar início à fase hepática da infecção, clinicamente silenciosa. Dentro dos hepatócitos, cada esporozoíto irá desenvolver-se, dando origem a milhares de outros parasitas – merozoítos. Estes acabarão por sair da célula-hospedeira em grupos de uma a duas centenas, em vesículas envoltas por membranas do próprio hepatócito [5, 6], chamadas merosomas. Os merosomas entram na corrente sanguínea [5] e tendem a acumular-se a nível dos alvéolos pulmonares [6], onde irão lisar e libertar os merozoítos. Estes infectam eritrócitos, dando início à fase sanguínea da infecção, a fase sintomática da malária [6]. Dentro dos glóbulos vermelhos, o parasita aumenta de tamanho, desenvolvendo-se da forma imatura, em anel, até ao trofozoíto. Nesta fase, o parasita continua a aumentar de tamanho, iniciando-se a replicação de DNA e a produção de cristais de hemozoína, como resultado da digestão da hemoglobina da célula-hospedeira [7]. O momento de passagem a esquizonte dá-se quanto se inicia a esquizogenia. Este processo consiste num conjunto de mitoses assimétricas e assíncronas consecutivas que dão origem a múltiplos parasitas (merozoítos) dentro do eritrócito infectado [8]. Os merozoítos, aquando da lise da célula-hospedeira, libertam-se na corrente sanguínea e infectam outros eritrócitos, dando assim início a um novo ciclo de desenvolvimento sanguíneo. Durante a fase sanguínea, alguns parasitas intraeritrocíticos podem diferenciar-se em gametócitos femininos e masculinos, em resposta a stress ou outros factores. Os gametócitos, ao serem ingeridos por um mosquito numa refeição de sangue, sofrem fusão meiótica e um complexo processo de desenvolvimento que culmina na acumulação de esporozoítos nas glândulas salivares do mosquito. Estes podem ser introduzidos no hospedeiro mamífero na próxima refeição de sangue, assegurando assim a perpetuação da espécie [9]. As formas sanguíneas maturas (FSM) de P. falciparum podem ser sequestradas em vários órgãos [10] e esta característica está associada ao grau de severidade da doença [11]. A capacidade de citoaderência tem vindo a ser considerada um factor-chave no desenvolvimento de patologias severas associadas à malária, nomeadamente no desenvolvimento de malária cerebral (MC) [12, 13]. No cérebro de doentes que morreram de MC há sequestração prefencial das FSM, e os parasitas encontrados nos esfregaços de sangue de pacientes que deram entrada em hospitais com malária severa apresentam exclusivamente formas imaturas em anel [10]. Ratinhos C57BL/6 infectados com P. berghei ANKA (PbA) são o modelo de MC mais usado. Foi recentemente demonstrado neste modelo a sequestração de eritrócitos parasitados (EP) no cérebro, assim como de células T CD8+, durante o desenvolvimento da patologia [14]. No entanto, ratinhos Balb/C infectados com o mesmo parasita não desenvolvem malária cerebral experimental (MCE). Foi descrito que no cérebro destes ratinhos não ocorre sequestração, nem de células T CD8+, nem de EP [14]. Curiosamente, ratinhos C57BL/6 infectados com P. berghei NK65 também não desenvolvem MCE nem sequestram EP, embora sequestrem células T CD8+ no cérebro [14]. Não é ainda claro se, durante a MCE, as FSM são as únicas que sequestram ou se estão presentes em circulação, tal como na MC humana. Usando os modelos murinos de malária referidos acima, o objectivo principal deste trabalho é o estudo da dinâmica das formas sanguíneas e a capacidade de citoaderência das duas estirpes de P. berghei, e a sua possível relação com sinais de doença observados nestes animais. Os nossos resultados mostram que, nas combinações de parasita-hospedeiro estudadas, as FSM de PbA e de PbNK65 dimiminuem proporcionalmente em circulação, em determinados fases da infecção in vivo e voltam a aumentar em proporção mais tarde na infecção. Para determinar se o desaparecimento de circulação das FSM de PbA é devido à sua sequestração em algum órgão ou à eliminação do parasita no baço, infectámos ratinhos C57BL/6 ou Balb/C com uma linha de PbA que expressa uma proteína de fusão, a Luciferase-GFP, apenas nas FSM. Em diferentes fases da infecção, e após perfusão para eliminar os parasitas circulantes, determinados órgãos foram extraídos (baço, fígado, pulmões e tecido adiposo) e o conteúdo em luciferase foi determinado por técnicas de bioimagiologia. Os nossos resultados mostram que as FSM de PbA sequestram a nível do baço e dos pulmões (nos ratinhos C57BL/6 infectados), assim como no tecido adiposo e fígado (em ambos os hospedeiros), sequestrando proporcionalmente muito mais no baço e no tecido adiposo. Esta sequestração é concomitante com uma diminuição da proporção destas formas em circulação. É de referir que os baços de ratinhos Balb/C eram mais escuros e de maiores dimensões do que os baços de ratinhos C57BL/6, o que pode indicar um maior conteúdo em hemozoína e uma maior proliferação celular. Isto sugere uma maior eliminação do parasita pelo baço nos ratinhos Balb/C comparativamente com os ratinhos C57BL/6. No entanto, a quantidade de esquizontes viáveis sequestrados é significativamente inferior nos ratinhos Balb/C do que nos ratinhos C57BL/6. Pretendíamos também esclarecer a importância relativa do parasita versus hospedeiro na citoaderência de EP à microvasculatura cerebral, durante o desenvolvimento de MC. Especificamente, pretendíamos perceber se a ausência de sequestração de EP de PbNK65 no cérebro de ratinhos C57BL/6 é devida à incapacidade destes EP aderirem ao endotélio activado, ou se poderão haver diferenças no micro-ambiente gerado no cérebro em resposta ao parasita que possam explicar esse fenótipo. Para isso, co-infectámos ratinhos C57BL/6 com PbNK65-GFP e PbA. Usando PCR-quantitativo em tempo real, medimos a expressão de GFP (e portanto a presença do parasita PbNK65) nos cérebros destes ratinhos, na fase final de MC. Os nossos resultados sugerem que os EP por PbNK65 não são sequestrados no cérebro de ratinhos C57BL/6, devido à sua incapacidade intrínsica de aderir ao endotélio activado. Este projecto pretendia clarificar a dinâmica das formas circulantes e a capacidade de citoaderência de duas estirpes de P. berghei, e a forma como estes padrões se podem correlacionar com a patologia. Os resultados não são conclusivos e mais experiências têm de ser realizadas para elucidar este assunto. No entanto, consideramos que indiciam diferenças entre os mecanismos de sequestração no cérebro em relação a outros órgãos, de PbA, assim como de PbNK65. Os nossos resultados também sugerem que existem diferenças intrínsecas ao parasita na capacidade de citoaderência de EP por PbA versus EP por PbNK65 à microvasculatura cerebral. Além disto, observámos uma diferença significativa no número de merozoítos formados por cada esquizonte, entre a infecção sanguínea por PbA e por PbNK65. Sugerimos que este facto pode estar na origem das diferenças já descritas [15] entre as duas estirpes de P. berghei no que diz respeito à taxa de crescimento de parasitémia e infecciosidade

TIC e contextos lúdicos de aprendizagem: recursos para docentes da educação especial

Projecto de investigação no âmbito da Pós-Graduação em TIC em Contextos de Aprendizagem da Escola Superior de Educação de Paula FrassinettiO presente projeto de investigação debruça-se sobre a importância do lúdico com o apoio às TIC no processo ensino aprendizagem com alunos portadores de NEE, e pretende disponibilizar aos docentes um conhecimento mais amplo das diferentes ferramentas tecnológicas que podem ser utilizadas na estruturação e planeamento de uma pedagogia diferenciada, nomeadamente na utilização de guiões/tutoriais que lhes permitirá a criação e inovação dos seus próprios recursos didáticos. Numa primeira fase do projeto, partiu-se para um estudo sobre a importância dada ao lúdico com apoio das TIC para crianças com NEE, abordando várias temáticas. Numa segunda fase, e de forma a aferir qual o grau de importância dado ao lúdico, por parte dos docentes da educação especial, bem como perceber se estes recorrem a guiões ou tutoriais de utilização de diferentes recursos TIC para elaborarem os ses próprios recursos procedeu-se à elaboração de uma entrevista com um guião semiestruturado, cujos resultados foram alvo de tratamento de informação. De acordo com essa análise e retiradas as respetivas conclusões, foi elaborado um site que permite visualizar guiões e tutoriais sobre ferramentas lúdicas passíveis de serem utilizadas em contexto de sala de aula para professores da educação especial. Ficará também aberto a comentários para partilha de experiências através dos seus testemunhos. O site está disponível em http://fuisusana.wix.com/recursos-para-docentes.This research project focuses on the importance of playfulness with the support of ICT in the learning process with students with SEN and aims to provide teachers a broader knowledge of various technological tools that can be used in structuring and planning a differentiated pedagogy, including the use of guides / tutorials that will allow the creation and innovation of their own teaching resources. In the first phase of the project, we did a study on the importance given to play with ICT support for children with SEN, covering various topics. In a second step, in order to assess the degree of importance given to play on the part of teachers of special education, and see if they resort to guides or tutorials for using different ICT resources for preparing their own resources, we proceeded to the elaboration of a semistructured interview with a script, whose results were the target of processing information. According to this analysis and the respective conclusions drawn, we designed a site that lets you view scripts and tutorials on tools capable of recreational use in the context of the classroom for special education teachers. It will also be open to feedback and to share experiences through their testimonies. The site is available in http://fuisusana.wix.com/recursos-para-docentes

Positive Mathematical Programming: a Comparison of Different Specification Rules

In this paper, the prescriptive capacity of different types of positive mathematical programming models applied to the Alentejo agricultural sector is analysed. Model results are compared for 2000 and 2004 agricultural price and subsidies scenarios, regarding optimal combination of activities. Thus, it is tested, on one hand, models capacity to reproduce Alentejo agricultural sector behaviour, and by the other hand, their response and adjustment capacities to changes in prices and in agricultural policy.Positive mathematical programming, agricultural supply, Alentejo, Research Methods/ Statistical Methods,

Ensinar a traduzir - uma perspectiva

1996 foi o ano em que teve início no ISCAP o CESE em Tradução Especializada, que viria, depois, a converter-se na actual Licenciatura. Coube-me a mim, dois anos mais tarde, assumir as cadeiras de Tradução de Textos Económicos - Língua Alemã, Tradução de Textos Científicos e Técnicos - Língua Alemã, Linguística - Língua Alemã e Estilística Comparada - Língua Alemã. O curso, segunda etapa da Licenciatura, é, assim, composto por um suporte teórico, em conjunto com aulas práticas, onde se exercitam os conhecimentos previamente adquiridos nas aulas teóricas. Após três semestres de aulas, os alunos desenvolvem um trabalho final, que consiste numa tradução. Inicialmente de uma obra literária, com cerca de cem páginas, o número de páginas foi, entretanto, reduzido para entre 40 a 60 e têm sido apresentados trabalhos de diversa índole 1 ,Tratam-se de trabalhos feitos com bastante maturidade . pelo que talvez se justificasse atribuir-lhe maior valor na sua percentagem final, uma vez que se trata de um esforço em assumir uma postura quase profissional, sendo, sem a menor dúvida, o melhor trabalho que os alunos realizam ao longo de todo o curso

Entornos verdes y saludables : la contribución de los trabajadores comunitarios de salud en Sao Paulo

Este artigo trata-se de uma descrição do trabalho dos Agentes Comunitários de Saúde, junto ao Projeto “Ambientes Verdes e Saudáveis: construindo políticas públicas integradas na cidade de São Paulo”, cuja proposição surge de uma articulação entre as Secretarias Municipais do Verde e do Meio Ambiente, da Saúde, da Assistência e Desenvolvimento Social, e da Educação. O objetivo central do projeto é articular a integração das políticas públicas voltadas para a inclusão das questões ambientais no conjunto das ações de promoção da saúde desenvolvidas no âmbito dos territórios nas 31 sub-prefeituras, distribuídas nas cinco regionais de saúde do município. Evidencia-se que o trabalho dos 6.000 Agentes Comunitários de saúde vem contribuindo com novas práticas, efetivas, de criação de oportunidades para a incorporação e a abordagem de questões ambientais nas ações de promoção da saúde. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACTThis article deals with a description of the work of the Community Health Agents, joined together to the Project Green and Healthiness environments: building integrated public politics in the city of São Paulo, whose proposal appears from a joint within the Green and the Environment, Health, Assistance and Social Development and Education Municipal districts departments, The main objective of the project is to articulate the integration of the public politics towards the inclusion of environmental issues in the collective of the actions related to the advancement in health developed in the scope of the area of 31 subcity halls, distributed in five regional of health in the municipal district. It is obvious that the work of 6000 Community Health Agents have been contributing with new effective know how, developing opportunities to the incorporation and the boarding of environment issues of health advancement. _______________________________________________________________________________________ RESUMENEste artículo es una descripción de la obra de Trabajadores de la Salud de la Comunidad, con el proyecto “Ambientes Verdes y Saludables: la construcción de políticas públicas integradas en São Paulo”, que surge de una propuesta conjunta de los Verdes Municipal y Medio Ambiente, Salud, Bienestar Social y Desarrollo, y Educación. El objetivo principal del proyecto es articular la integración de las políticas públicas para la inclusión de temas ambientales en la acción global de promoción de la salud desarrolladas en el territorio de los 31 sub-prefecturas, distribuidos en cinco distritos sanitarios del municipio. Es evidente que el trabajo de los trabajadores de la salud 6000 de la Comunidad ha contribuido a las prácticas nuevas y eficaces, la creación de oportunidades para la incorporación de los problemas ambientales en las acciones de promoción de la salud

Os Judeus no espaço alemão e a procura de uma pátria

A história dos Judeus é constituída por uma série de migrações. Inicia-se na Palestina, ou como os Judeus hoje designam, Eretz Israel. Sob o domínio romano foram expulsos da Palestina no ano de 135 d.C.1 e estabeleceram-se como comerciantes no antigo Império Romano. Devido ao anti-semitismo, fenómeno de longa data, cujas manifestações e motivos têm variado, consoante a época e o local, os Judeus mantiveram-se unidos durante séculos por uma crença e uma tradição comuns.Nos primeiros séculos depois de Cristo, os Judeus chegaram à Europa Central, que viria a constituir o espaço geo-político que é a Alemanha de hoje, via Galileia3. Estava-se ainda sob o domínio romano. Nas margens do Reno e do Danúbio, em Mainz, Speyer, Worms, Trier, Augsburg e Regensburg existiam colónias judaicas, onde viviam comerciantes e artesãos. Os Judeus já constituíam um povo, antes que os alemães tivessem começado a sê-lo4. Com efeito, o espaço físico alemão era alvo de constantes invasões e perseguições. As primeiras referências que temos relativamente aos povos que habitaram o solo alemão datam de 44 a.C. e falam de um povo guerreiro a quem Júlio César e o seu historiador Tácito deram o nome de Germanos. Estes eram uma fusão de Godos, Vândalos e Bardos. O solo alemão é depois invadido pelos Romanos, Hunos, Saxões, Bávaros e Alemânicos. Só a partir do século IX é que se começa a formar o Império Alemão. Cerca do ano 900, os Judeus estavam envolvidos no comércio com a Boémia. Ao contrário dos Cristãos, que eram maioritariamente agricultores, os Judeus viviam do comércio. Os soberanos queriam usar o comércio para engrandecer o seu poder e prometiam aos Judeus protecção, em troca de altos impostos. Este "privilégio" fez dos Judeus um povo dependente da vontade dos soberanos