Genetic diversity reflects geographical origin of Ralstonia solanacearum strains isolated from plant and water sources in Spain

The characterization and intraspecific diversity of a collection of 45 Ralstonia solanacearum strains isolated in Spain from different sources and geographical origins is reported. To test the influence of the site and the host on strain diversity, phenotypic and genotypic analysis were performed by a polyphasic approach. Biochemical and metabolic profiles were compared. Serological relationship was evaluated by Indirect-ELISA using polyclonal and monoclonal antibodies. For genotypic analysis, hrpB and egl DNA sequence analysis, repetitive sequences (rep-PCR), amplified fragment length polymorphism (AFLP) profiles and macrorestriction with XbaI followed by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) were performed.The biochemical and metabolic characterization, serological tests, rep-PCR typing and phylogenetic analysis showed that all analysed strains belonged to phylotype II sequevar 1 and shared homogeneous profiles. However, interesting differences among strains were found by AFLP and macrorestriction with XbaI followed by PFGE techniques, some profiles being related to the geographical origin of the strains. Diversity results obtained offer new insights into the biogeography of this quarantine organism and its possible sources and reservoirs in Spain and Mediterranean countries.Keywords: Bacterial wilt · potato · soil · PFGE · AFL

Diversidad genética de cepas españolas de Xanthomonas arboricola pv. pruni agente causal de la mancha bacteriana de los frutales de hueso y del almendro

PublishedTrabajo financiado por el Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria, proyecto RTA2011-00140-d03-0

Xanthomonas prunicola sp. nov., a novel pathogen that affects nectarine (Prunus persica var. nectarina) trees

Three isolates obtained from symptomatic nectarine trees (Prunus persica var. nectarina) cultivated in Murcia, Spain, which showed yellow and mucoid colonies similar to Xanthomonas arboricola pv. pruni, were negative after serological and real-time PCR analyses for this pathogen. For that reason, these isolates were characterized following a polyphasic approach that included both phenotypic and genomic methods. By sequence analysis of the 16S rRNA gene, these novel strains were identified as members of the genus Xanthomonas, and by multilocus sequence analysis (MLSA) they were clustered together in a distinct group that showed similarity values below 95 % with the rest of the species of this genus. Whole-genome comparisons of the average nucleotide identity (ANI) of genomes of the strains showed less than 91 % average nucleotide identity with all other species of the genus Xanthomonas. Additionally, phenotypic characterization based on API 20 NE, API 50 CH and BIOLOG tests differentiated the strains from the species of the genus Xanthomonas described previously. Moreover, the three strains were confirmed to be pathogenic on peach (Prunus persica), causing necrotic lesions on leaves. On the basis of these results, the novel strains represent a novel species of the genus Xanthomonas, for which the name Xanthomonas prunicola is proposed. The type strain is CFBP 8353 (=CECT 9404=IVIA 3287.1)

La amenaza de enfermedades emergentes: situación actual y avances científicos en HLB

La enfermedad denominada Huanglongbing (HLB), también conocida como “greening”, que fue observada por primera vez en Asia hace más de un siglo, está considerada hoy en día como la más destructiva de los cítricos, debido a su complejidad, su capacidad de devastación y su resistencia a ser controlada, ya que la mayoría de las especies y cultivares comerciales de cítricos son susceptibles a la misma. Los cítricos constituyen uno de los frutales más importantes del mundo, tanto en cuanto a su mercado de producción y transformación como a su comercio global (Liu et al., 2012). China es el mayor productor mundial, seguida de Brasil, la India, Estados Unidos, México y España (FAO, 2017a, b). De estos seis países, solo España está libre, hoy por hoy, de HLB, enfermedad que ha llegado a erigirse en el mayor desafío que tienen los productores de cítricos, ya que reduce el rendimiento y la calidad de la fruta y debilita mucho el árbol (Qureshi y Stansly, 2009)

MARTX of Vibrio vulnificus biotype 2 is a virulence and survival factor

Vibrio vulnificus biotype 2 is a polyphyletic group whose virulence for fish relies on a plasmid. This plasmid contains an rtxA gene duplicated in the small chromosome that encodes a MARTX (Multifunctional, Autoprocessing Repeats-in-Toxin) unique within the species in domain structure (MARTX type III). To discover the role of this toxin in the fitness of this biotype in the fish-farming environment, single- and double-knockout mutants were isolated from a zoonotic strain and analysed in a series of in vivo and in vitro experiments with eel, fish cell lines and amoebae isolated from gills. Mice, murine and human cell lines were also assayed for comparative purposes. The results suggest that MARTX type III is involved in the lysis of a wide range of eukaryotic cells, including the amoebae, erythrocytes, epithelial cells and phagocytes after bacterium¿cell contact. In fish, MARTX type III may act as a toxin involved in the onset of septic shock, while in mice it may promote bacterial colonization by preventing phagocytosis of bacterial cells. Moreover, this toxin could protect bacteria from predation by amoebae, which would increase bacterial survival outside the host and would explain the fitness of this biotype in the fish-farming environment

Consideraciones sobre la situación de Xylella fastidiosa en la Unión Europea y en España. Conclusiones y perspectivas

La primera reflexión que surge es que, desgraciadamente, se ha cumplido la premonición que A. H. Purcell escribió hace ahora veinte años (Purcell, 1997). El mayor experto norteamericano en X. fastidiosa y sus vectores argumentaba que, aunque esta bacteria solo se había encontrado en países americanos y en Taiwán, el hecho de que se hubiera detectado en la década de 1990 en cítricos y en adelfa, causando nuevas enfermedades que se extendían con gran rapidez, sugería que fuera de América se debían mantener medidas de vigilancia fitosanitaria, para evitar su introdución: Previously unrecorded plant diseases in citrus and oleander caused by Xylella fastidiosa have rapidly spread, suggesting that vigilant phytosanitary measures outside America, should be maintained against its introduction. Y él se hacía las preguntas clave: ¿es esta bacteria una amenaza potencial para otros continentes? ¿Es un problema regional o una amenaza global? Ahora es fácil responder, tras las detecciones europeas en Italia, Alemania, Francia y España: se trata de una amenaza global, por tratarse de una bacteria con mucha más capacidad de afectar a múltiples especies vegetales y que está causando muchas más pérdidas, al menos en Italia, de lo que se podía sospechar en 1997. La advertencia de Purcell no tuvo suficiente eco, ya que los países de la UE parecían más interesados en aprovechar las ventajas del comercio global que en protegerse de las graves enfermedades y de las plagas que podían ser introducidas con los productos importados. Así debió introducirse X. fastidiosa en la UE, siendo transportada en avión o en barco con plantas ornamentales u otros tipos de material vegetal infectado, procedente de países del continente americano

Plant-associated microbiota as a source of antagonistic bacteria against the phytopathogen Erwinia amylovora

Control of bacterial plant diseases is a major concern, as they affect economically important species and spread easily, such as the case of fire blight of rosaceous caused by Erwinia amylovora. In the search for alternatives to the use of agrochemicals and antibiotics, this work presents a screening of natural bacterial antagonists of this relevant and devastating phytopathogen. We recovered bacterial isolates from different plant tissues and geographical origins and then selected those with the strongest ability to reduce fire blight symptoms ex vivo and remarkable in vitro antagonistic activity against E. amylovora. None of them elicited a hypersensitivity reaction in tobacco leaves, most produced several hydrolytic enzymes and presented other biocontrol and/or plant growth-promoting activities, such as siderophore production and phosphate solubilization. These isolates, considered as biocontrol candidates, were identified by 16S rRNA sequencing as Pseudomonas rhizosphaerae, Curtobacterium flaccumfaciens, Enterobacter cancerogenus, Pseudomonas azotoformans, Rosenbergiella epipactidis and Serratia plymuthica. This is the first time that the last five bacterial species are reported to have biocontrol potential against E. amylovora

Xylella fastidiosa y las enfermedades que causa. Un problema global

Xylella fastidiosa está considerada como la bacteria que constituye la principal amenaza hoy día para distintos cultivos de gran importancia estratégica, en todos los países donde aún no está presente. Por ello, es una bacteria de cuarentena en la Unión Europea (UE) desde el año 2000, según la Directiva 2000/29/EC, y también está incluida en la lista A1 de la Organización Europea y Mediterránea de Protección de Plantas (EPPO) (http://www.eppo.org/ QUARANTINE/listA1.htm). Su peligro radica en que es el agente causal de numerosas enfermedades muy graves, que podrían tener enormes repercusiones económicas para distintos cultivos europeos y muy especialmente para la economía española, dado que puede afectar a olivo, vid, cítricos, frutales de hueso, almendro y numerosas especies ornamentales y forestales. Su nombre específico denota dos características de esta bacteria: que habita en el xilema de las plantas hospedadoras (Xylella) y que tiene un crecimiento muy lento en los medios de cultivo microbiológicos (fastidiosa). Es transmitida de forma persistente por distintas especies de insectos chupadores del xilema de los huéspedes a los que afecta (Capítulo 4). De hecho, X. fastidiosa coloniza dos hábitats: el xilema de las plantas hospedadoras y el intestino anterior de los insectos chupadores de savia bruta que son vectores de la bacteria (Almeida y Nunney, 2015). Actualmente, X. fastidiosa es la bacteria de mayor resonancia mediática a nivel internacional, con especial relevancia en la UE, donde ha pasado de ser una bacteria de cuarentena solamente conocida por los fitopatólogos a ser considerada el principal peligro para importantes cultivos. En Europa la alarma se disparó en 2013 con la detección de un importante brote de X. fastidiosa en el sur de Italia (Saponari et al., 2013), donde ha arrasado miles de hectáreas de olivar en Apulia. Sin embargo, como veremos a lo largo de este libro, también supone un grave riesgo para la vid, los frutales de hueso (ciruelo, melocotonero), los cítricos, el almendro y numerosas especies frutales, ornamentales y forestales de los países mediterráneos. No obstante, el impacto real de esta bacteria en los distintos países de la UE dependerá de las circunstancias concretas del lugar de su introducción y de los huéspedes y vectores locales. No puede descartarse que el patógeno esté ya presente en diversos países, en zonas localizadas, y que pase inadvertido debido a la falta de especificidad de los síntomas, la ausencia de vectores eficientes, o a que no se hayan utilizado los procedimientos diagnósticos sensibles y específicos que son estrictamente necesarios para su diagnóstico. En este primer capítulo se resumen algunas características de las enfermedades causadas por esta bacteria en sus principales huéspedes. Pero es necesario señalar que X. fastidiosa se ha convertido en la bacteria más imprevisible de todas las que afectan a las plantas cultivadas, dada la gran diversidad de sus cepas, los numerosos vectores que la transmiten, que pueden ser distintos en cada país, y la larga lista de huéspedes a los que puede afectar y que, además, varía de un país a otro en función de los vectores y las subespecies presentes. Aunque se sabe mucho sobre X. fastidiosa, hay todavía muchas más preguntas por responder que respuestas para ellas, tanto respecto a la biología de las distintas subespecies de esta especie como a su epidemiología en distintos huéspedes. Y, desgraciadamente, hoy por hoy se carece de métodos eficientes y sostenibles para su control integrado