19 research outputs found

    Evaluación preclínica de la actividad hepatoprotectora de Ocimum basilicum L. y Allium sativum L.

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    Fundamento: la búsqueda de alternativas de tratamiento naturales, orientadas a proteger el hígado de los efectos nocivos de hepatotoxinas, es un tema importante dentro de las investigaciones médico-farmacéuticas. Objetivo: evaluar preclínicamente la actividad hepatoprotectora de las especies Ocimum basilicum L. y Allium sativum L. en un biomodelo de toxicidad inducido por paracetamol. Métodos: se realizó un estudio farmacológico preclínico para evaluar el efecto hepatoprotector de las especies Ocimum basilicum L. y Allium sativum L. frente a la toxicidad inducida por el paracetamol. Se emplearon ratones adultos machos NMRI a los que se administró por vía oral extractos blandos de las plantas de estudio a dosis de 200mg/kg y 400mg/kg, tres días consecutivos previos a la inducción de la hepatotoxicidad. Se evaluaron los signos clínicos de toxicidad, parámetros bioquímicos hepáticos; también se realizó el análisis morfológico del hígado. Resultados: los parámetros bioquímicos analizados mostraron diferencias altamente significativas, pero solo tres grupos presentaron un comportamiento similar al grupo control no tratado. No se confirmaron alteraciones macroscópicas del hígado. Microscópicamente, predominó la ausencia de alteraciones histopatológicas en los grupos donde se administró Ocimum basilicum L. a ambas dosis y Allium sativum L. a 200mg/Kg; también se observó daño leve al administrar 400mg/Kg de Allium sativum L, con diferencias significativas respecto al grupo control no tratado. Conclusión: los extractos blandos de las especies Ocimum basilicum L. y Allium sativum L. a 200mg/kg, poseen mayor actividad hepatoprotectora frente a la acción tóxica del paracetamol

    Preliminary experimental diuretic activity of plants used by cuban population

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    Diuretic activity of five medicinal plants (Cassia alata L., Zanthoxylum fagara L., Nectandra coriacea Sw, Costus pictus D. Don, and Persea americana Miller) used by Cuban population was assessed. Plants decoctions (30 %) were applied to Wistar male rats (400 mg/kg BW), based on total solids and completed with physiological saline solution up to a total constant administration volume of 40 ml/kg BW and administered to 7 experimental groups: 5 treated, a positive control (furosemide, 20 mg/kg) and a negative control (NaCl, 0,9 %). Animals were placed in metabolic cages, decoctions administered and urinary excretion quantified after ½, 1, 2, 3, 4, 5 and 6 h. After the urinary excretion, diuretic action and diuretic activity were calculated. Urine volumes were increased in all treated groups when compared to negative control, being superior in C. alata and P. americana and, at the same time, similar to the reference diuretic used.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

    Manual for training on experimental research topics in basic biomedical sciences

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    Fundamento: los contenidos referentes a los temas de investigación experimental en las diferentes especialidades de las ciencias básicas biomédicas son de elevada complejidad, y la literatura relacionada se encuentra de manera dispersa y escasa. Objetivo: diseñar un manual para la preparación en temas de investigación experimental de los residentes de las ciencias básicas biomédicas.Métodos: se realizó un estudio descriptivo transversal desde septiembre-2012 hasta junio2019 en la Unidad de Investigaciones Biomédicas de la Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara. Se emplearon los métodos teóricos: analítico-sintético, inductivo-deductivo,sistémico-estructural y modelación; empírico: análisis documental. Se seleccionaron 11 expertos para la valoración del manual en cuanto a su pertinencia, autenticidad, actualidad, estructura metodológica, cientificidad y posible generalización. Resultados: se diseñó un material de procedimientos que facilita la consulta de los residentes para su preparación en temas de investigación experimental con modelos biológicos. Está conformado por un prólogo, tres capítulos y un acápite para la literatura consultada, en los que la temática es abordada de forma didáctica con actualización de los aspectos conceptuales, teóricos e históricos. Contiene fotografías tomadas por los propios autores y un lenguaje sencillo, que facilitan la comprensión de procedimientos que se adaptan por primera vez a las condiciones de los centros experimentales de Cuba. Conclusiones: el manual diseñado propicia la preparación requerida en temas de investigación experimental en los especialistas en formación, como aspecto significativo en la educación de los residentes de las ciencias básicas biomédicas, acorde con las exigencias de la enseñanza médica superior.Background: the contents referring to experimental research topics in the different specialties of basic biomedical sciences are highly complex, and the related literature is scattered and scarce. Objective: to design a manual for the training of residents of basic biomedical sciences in experimental research topics. Methods: a cross-sectional descriptive study was carried out from September-2012 to June-2019 at the Biomedical Research Unit of Villa Clara University of Medical Sciences. Theoretical methods were used: analytical-synthetic, inductive-deductive, systemicstructural and modeling; empirical ones: documentary analysis. Eleven experts were selected to assess the manual in terms of its relevance, authenticity, timeliness, methodological structure, scientificity, and possible generalization. Results: a procedure material was designed that facilitates the consultation of the residents for their training in experimental research topics with biological models. It is made up of a prologue, three chapters and a section for the literature consulted, in which the subject is addressed in a didactic way with updating of the conceptual, theoretical and historical aspects. It contains photographs taken by the authors themselves and simple language, which facilitate the understanding of procedures that are adapted for the first time to the conditions of the experimental centers in Cuba. Conclusions: the designed manual promotes the preparation required in experimental research topics in training specialists, as a meaningful aspect in the education of residents of basic biomedical sciences, in accordance with the requirements of higher medical education.Fil: Gómez Hernández, Tahiry. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Béquer Mendoza, Leticia. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Freire Gómez, Cindy. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; Argentina. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Molina Martínez, José Luis. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Boffill Cárdenas, María. Universidad Central Marta Abreu de Las Villas; CubaFil: Quintero Agramonte, Maryoil. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; Cub

    Manual for training on experimental research topics in basic biomedical sciences

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    Fundamento: los contenidos referentes a los temas de investigación experimental en las diferentes especialidades de las ciencias básicas biomédicas son de elevada complejidad, y la literatura relacionada se encuentra de manera dispersa y escasa. Objetivo: diseñar un manual para la preparación en temas de investigación experimental de los residentes de las ciencias básicas biomédicas.Métodos: se realizó un estudio descriptivo transversal desde septiembre-2012 hasta junio2019 en la Unidad de Investigaciones Biomédicas de la Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara. Se emplearon los métodos teóricos: analítico-sintético, inductivo-deductivo,sistémico-estructural y modelación; empírico: análisis documental. Se seleccionaron 11 expertos para la valoración del manual en cuanto a su pertinencia, autenticidad, actualidad, estructura metodológica, cientificidad y posible generalización. Resultados: se diseñó un material de procedimientos que facilita la consulta de los residentes para su preparación en temas de investigación experimental con modelos biológicos. Está conformado por un prólogo, tres capítulos y un acápite para la literatura consultada, en los que la temática es abordada de forma didáctica con actualización de los aspectos conceptuales, teóricos e históricos. Contiene fotografías tomadas por los propios autores y un lenguaje sencillo, que facilitan la comprensión de procedimientos que se adaptan por primera vez a las condiciones de los centros experimentales de Cuba. Conclusiones: el manual diseñado propicia la preparación requerida en temas de investigación experimental en los especialistas en formación, como aspecto significativo en la educación de los residentes de las ciencias básicas biomédicas, acorde con las exigencias de la enseñanza médica superior.Background: the contents referring to experimental research topics in the different specialties of basic biomedical sciences are highly complex, and the related literature is scattered and scarce. Objective: to design a manual for the training of residents of basic biomedical sciences in experimental research topics. Methods: a cross-sectional descriptive study was carried out from September-2012 to June-2019 at the Biomedical Research Unit of Villa Clara University of Medical Sciences. Theoretical methods were used: analytical-synthetic, inductive-deductive, systemicstructural and modeling; empirical ones: documentary analysis. Eleven experts were selected to assess the manual in terms of its relevance, authenticity, timeliness, methodological structure, scientificity, and possible generalization. Results: a procedure material was designed that facilitates the consultation of the residents for their training in experimental research topics with biological models. It is made up of a prologue, three chapters and a section for the literature consulted, in which the subject is addressed in a didactic way with updating of the conceptual, theoretical and historical aspects. It contains photographs taken by the authors themselves and simple language, which facilitate the understanding of procedures that are adapted for the first time to the conditions of the experimental centers in Cuba. Conclusions: the designed manual promotes the preparation required in experimental research topics in training specialists, as a meaningful aspect in the education of residents of basic biomedical sciences, in accordance with the requirements of higher medical education.Fil: Gómez Hernández, Tahiry. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Béquer Mendoza, Leticia. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Freire Gómez, Cindy. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; Argentina. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Molina Martínez, José Luis. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; CubaFil: Boffill Cárdenas, María. Universidad Central Marta Abreu de Las Villas; CubaFil: Quintero Agramonte, Maryoil. Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara.; Cub

    Actividad de la mieloperoxidasa en un modelo experimental de síndrome metabólico

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    Introduction: the metabolic syndrome is a state of chronic inflammation of low degree in which a set of metabolic alterations coexist. The increased activity of the enzyme myeloperoxidase is considered a sensitive marker of neutrophil infiltration in the inflammatory process.Objective: to determine the activity of the enzyme myeloperoxidase in the serum of Wistar rats with metabolic syndrome induced by the intake of 35% sucrose.Methods: an experimental study was carried out at the Department of Biomedical Experimental Research and the Experimental Toxicology Unit of the University of Medical Sciences of Villa Clara between September 2018 and May 2019. The universe was constituted by Wistar rats from 180 to 200g from the National Center for the Production of Laboratory Animals. We worked with a sample of two experimental groups of 10 male animals each, one subjected to a hyperglycemic diet that developed the metabolic syndrome and the other with healthy conventional food, all of them randomly formed, which were determined the myeloperoxidase in serum, as well as cholesterol, triglycerides and glycemia.Results: myeloperoxidase values in the metabolic syndrome induction group were significantly higher than the healthy one (2.57±0.33 vs 0.78±0.13). A moderate positive correlation of triacylglycerides and glycemia was observed with the activity of the myeloperoxidase enzyme. Cholesterol did not increase in the group with metabolic syndrome.Conclusions: myeloperoxidase activity is increased in animals with metabolic syndrome.Introducción: el síndrome metabólico es un estado de inflamación crónica de bajo grado en el que coexisten un conjunto de alteraciones metabólicas. El aumento de actividad de la enzima mieloperoxidasa se considera un sensible marcador de la infiltración de neutrófilos en el proceso inflamatorio.Objetivo: determinar la actividad de la enzima mieloperoxidasa en el suero de ratas Wistar con síndrome metabólico inducido por la ingesta de sacarosa al 35%.Métodos: se realizó un estudio experimental en el Departamento de investigaciones experimentales biomédicas y en la Unidad de toxicología experimental de la Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara entre septiembre de 2018 y mayo de 2019. El universo estuvo constituido por ratas Wistar de 180 a 200g procedentes del Centro Nacional de producción de animales de laboratorio, se trabajó con una muestra de dos grupos experimentales de 10 animales machos cada uno, uno sometido a dieta hiperglucídica que desarrolló el síndrome metabólico y otro con alimentación convencional sano, todos formados aleatoriamente, a los que se les determinó la mieloperoxidasa en suero, así como el colesterol, los triglicéridos y la glicemia.Resultados: los valores de la mieloperoxidasa en el grupo de inducción del síndrome metabólico fueron significativamente mayores con respecto al sano (2,57±0,33 vs 0,78±0,13). Se observó una correlación moderada positiva de los triacilglicéridos y la glicemia, con la actividad de la enzima mieloperoxidasa. El colesterol no se incrementó en el grupo con síndrome metabólico.Conclusiones: la actividad de la mieloperoxidasa se encuentra incrementada en animales con síndrome metabólico

    Estudio etnobotánico de las plantas más utilizadas como diuréticas en la Provincia de Villa Clara, Cuba.

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    An ethnobotanic study was carried out combining methods and techniques characteristic of the qualitative and quantitative investigation, in 10 municipalities of Villa Clara province, Cuba. It was taken a heterogeneous sample of 250 people constituted for: experts of plants, herbalists and expert doctors in phytotherapy who identified the plants more used with these ends in the studied communities. The data obtained starting from the consent of informants, were analyzed by means of the index of use value (IVU) and the level of significant use (UST) of the Tradicional of the Medicine of the Island (TRAMIL). They registered 20 medicinal species contained in 14 botanical families and they met 8 plants with a bigger use level and a bigger IVU. 60% of the plants reported as diuretic lacked scientific validation, the rest of the identified species has been studied at preclinic level, although in its great majority they don't appear in the Cuban Pharmacopeia of Medicinal Plants neither they are authorized by the agency Cuban reguladora, Center for the State Control of the Quality of the Medications (CECMED). The documentation related with the uses of the medicinal plants in the study areas, reveal that the traditional knowledge continues deeply ingrained to the communities and the popular knowledge stays in the representative figures of the herbalists and the experts of plants. The present work intends to evaluate through the medical ethnobotany, the current state of the traditional knowledge on medicinal plants with diuretic activity attributed in several communities of Villa Clara province, Cuba.Se realizó un estudio etnobotánico, combinando métodos y técnicas propias de la investigación cualitativa y cuantitativa, en 10 municipios de la provincia de Villa Clara, Cuba. La muestra definida incluyó a 250 personas (conocedores de plantas, yerberos y médicos expertos en fitoterapia), quienes identificaron las plantas más utilizadas con estos fines en las comunidades estudiadas. Los datos obtenidos a partir del consenso de informantes, fueron analizados mediante el índice de valor de uso (IVU) y el nivel de uso significativo (UST) de Tradicional of the Medicine of the Island (TRAMIL). Se registraron 20 especies medicinales agrupadas en 14 familias botánicas y se encontraron 8 plantas con un mayor nivel de uso y un mayor IVU. El 60% de las plantas reportadas como diuréticas carecían de validación científica, el resto de las especies identificadas han sido estudiadas a nivel preclínico, aunque en su gran mayoría no constan en la Farmacopea Cubana de Plantas Medicinales ni su uso con fines terapéuticos está autorizado por la agencia reguladora cubana: Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos (CECMED). La documentación relacionada con los usos de las plantas medicinales en las áreas de estudio, revelan que el conocimiento tradicional continúa profundamente arraigado a las comunidades y se mantiene el saber popular en las figuras representativas del yerbero y los conocedores de plantas. El presente trabajo propone evaluar a través de la etnobotánica médica, el estado actual del conocimiento tradicional sobre plantas medicinales con actividad diurética atribuida en varias comunidades de la provincia de Villa Clara, Cuba

    Effect of phytohemagglutinin on cicatrization

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    La fitohemaglutinina es una proteína que ejerce un amplio espectro terapéutico. La misma es obtenida a partir de las semillas de Phaseolus vulgaris L. por un método extractivo establecido en el Laboratorio de Bioquímica del Instituto Superior de Ciencias Médicas de Villa Clara, el cual es una modificación del método de Rigas y Osgood. El uso de dicha proteína en concentración de 1 mg/ml presentó una significativa acción cicatrizante cuando se ensayó en ratones Balb/C en un modelo experimental con heridas abiertas. Se demostró una significativa disminución del tiempo de cicatrización y su acción sobre la contracción de la herida fue más positiva que la del resto de los controles; además evitó la presencia de infecciones, provocando de esta forma una cicatrización más funcional.Phytohemagglutinin is a protein with a wide therapeutical range. It is obtained from the seed of Phaseolus vulgaris L. by means of an extractive method developed in the Biochemistry Laboratory of the Higher Institute of Medical Sciences of Villa Clara. This method is a modification of the Rigas and Osgood's method. The use of the above mentioned protein in a concentration of 1 mg/ml of salin solution had a significant tissue replacement action when it was assayed in Balb/C mice in an experimental model with open wound; a significant improvement of the cicahization process and a production of a more functional scar were shown.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

    Effect of Diazepam on succinic dehydrogenase, Na<sup>+</sup>K<sup>+</sup> dependent ATPase and alcaline phosphatase activities

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    El diazepam se absorbe rápida y completamente después de la administración oral y atraviesa la barrera placentaria; su tasa de penetración en el tejido placentario es de 31,5% a las 4 horas, su vida media es prolongada y la existencia de metabolitos activos hace que su efecto sea acumulativo. Este estudio se efectuó en un modelo in vitro usando 20 placentas humanas, en donde se estudió el efecto del diazepam sobre la actividad de la succínico deshidrogenasa, la ATPasa Na+K+dependiente y la fosfatasa alcalina. Se comprobó que el diazepam produce inhibición sobre las 3 enzimas estudiadas; este efecto fue más intenso sobre la ATPasa Na+K+ dependiente y menos intenso sobre la fosfatasa alcalina; en todos los casos la afectación de la actividad dependió de la concentración del diazepam en el medio de reacción. Estos resultados pueden explicar desde el punto de vista molecular las afecciones que provoca dicho fármaco en cuanto a la disminución del peso al nacer y a la inmunodepresión de los neonatos cuyas madres han usado diazepam durante la gestación.The diazepam is completely and rapidly adsorbed after oral administration and goes through placental banier; its penetration rate is 31.5% at 4h, its half time life is long and has accumulative effect because of active metabolites. The present study was canied out in 20 human placentas using a in vitro model, in which the effect of diazepam on succinic dehydrogenase, Na+K+ dependent ATPase and allcaline phosphatase activities were studied. It was shown that diazepam produces inhibition on the three studied enzymes being more intense on ATPase and less intense on aikaline phosphatase. Inhibition in al1 cases depended on diazepam concentration in the reaction media. From a molecular point of view these findings could explain the metabolic way through which in the gestational period this drug induces a low birih weight and inmunodepression in neonates whose mothers had used diazepam during gestation.El diazepam se absorbe rápida y completamente después de la administración oral y atraviesa la barrera placentaria; su tasa de penetración en el tejido placentario es de 31,5% a las 4 horas, su vida media es prolongada y la existencia de metabolitos activos hace que su efecto sea acumulativo. Este estudio se efectuó en un modelo in vitro usando 20 placentas humanas, en donde se estudió el efecto del diazepam sobre la actividad de la succínico deshidrogenasa, la ATPasa N+K+dependiente y la fosfatasa alcalina. Se comprobó que el diazepam produce inhibición sobre las 3 enzimas estudiadas; este efecto fue más intenso sobre la ATPasa Na+K+ dependiente y menos intenso sobre la fosfatasa alcalina; en todos los casos la afectación de la actividad dependió de la concentración del diazepam en el medio de reacción. Estos resultados pueden explicar desde el punto de vista molecular las afecciones que provoca dicho fármaco en cuanto a la disminución del peso al nacer y a la inmunodepresión de los neonatos cuyas madres han usado diazepam durante la gestación.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

    Acute toxicity evaluation of an extract of Boldoa purpurascens Cav.

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    Se realizó un estudio experimental con el objetivo de evaluar el posible efecto tóxico de un extracto acuoso liofilizado de Boldoa purpurascens Cav. (nitro blanco). Para el desarrollo del mismo se utilizó el Método de las Clases de Toxicidad Aguda (CTA), utilizando una dosis límite de 2000 mg/kg de peso corporal. Los animales seleccionados fueron ratas de la línea Sprague Dawley, con un peso comprendido entre 180 y 220 g. El peso corporal se comportó acorde a la curva de crecimiento de la especie y no se apreciaron alteraciones macroscópicas en los órganos estudiados, todo lo que permite afirmar que la DL50 se ubica por encima de 2000 mg/kg PC, considerándose el producto como categoría 5.An experimental study to assess the toxic effects of an aqueous and later lyophilised extract of Boldoa purpurascens Cav. (nitro blanco) was carried out employing the alternative Acute Toxicity Class Method. Sprague Dawley rats weighing between 180 and 220 g were used, which received a limit dose of 2000 mg/kg body weight and were kept under standardized experimental conditions. Bodyweight behaved consistently with the growing curve of the species and there were no alterations in macroscopic observations on main organs. The LD50 of the extract is located above 2000 mg/kg body weight, classifying the product in category 5.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

    Uso tradicional de plantas medicinales con acción diurética en el Municipio de Quemado de Güines, Cuba

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    La flora de Cuba es muy rica en plantas medicinales, de las cuales se reportan aproximadamente 179 especies que la población utiliza para fines diuréticos, sin embargo, un gran número de ellas carece de validación experimental de su efecto farmacológico. El presente estudio se realizó con el propósito de documentar la importancia relativa de las especies medicinales más empleadas con fines diuréticos en el municipio de Quemado de Güines de la provincia de Villa Clara, Cuba. Se realizó un estudio etnobotánico en dos comunidades pertenecientes a ese municipio, para lo cual se realizó un muestreo a un total de 85 habitantes, y se aplicó aleatoriamente 80 encuestas a conocedores de plantas y 5 entrevistas entre yerberos y médicos practicantes de medicina tradicional, los cuales nos indicaron las plantas más utilizadas con estos fines en las comunidades estudiadas. La información etnofarmacológica fue registrada mediante la metodología TRAMIL y las especies de interés fueron identificadas y depositadas en el Herbario de la Universidad Central "Marta Abreu" de Las Villas. Los datos se analizaron mediante los índices cuantitativos de valor de uso para cada especie (IVU) y el nivel de uso significativo (UST). Este indicador expresa que aquellos usos medicinales que son citados con una frecuencia superior o igual al 20%, por las personas encuestadas pueden considerarse significativos desde el punto de vista de su aceptación cultural y, por lo tanto, merecen su validación científica en Cuba. Se identificaron 26 especies medicinales agrupadas en 19 familias botánicas y se encontraron 10 plantas con un mayor nivel de uso significativo y un mayor IVU. El 53.8% de las plantas reportadas como diuréticas no se han validado experimentalmente en Cuba, el resto de las especies identificadas han sido estudiadas a nivel preclínico, pero aún no está autorizado su empleo como fitomedicamento.<br>Tradicional use of medicinal plants with diuretic properties at Quemado de Güines Municipality, Cuba. Medicinal plants are highly rich in Cuba and an amount of 179 species have been reported to be used by the population for diuretic purposes, nevertheless, no experimental validation has supported this effect. This study presents the relative importance of the medicinal plant species most widely used for diuretic purposes in two communities of Quemado de Guines Municipality, Villa Clara province. The information was obtained through the application of an interview to 85 inhabitants, from which 80 were random surveys to people with a great knowledge of plants, and five to herbalists and doctors practicing natural medicine. The etnopharmacological information was registered (gathered) by means of the "Tradicional of the Medicine of the Island" (TRAMIL) methodology and the interesting species were identified by a botanist and deposited in the Herbarium of the Central University "Marta Abreu" from Villa Clara, registered in the Index Herbarium, published periodically by the International Association for Plant Taxonomy. The data was analyzed by means of the indexes of use values and significant use level after TRAMIL. From the total of 19 botanical families, 26 medicinal species were identified, and 10 plants resulted with higher significant use and higher indexes of use values. From the plants reported as diuretics, 53.8% have not been experimentally validated in Cuba, the rest of the identified species have been validated at a preclinical level in some centers in the country, but its use have not been authorized as phytochemicals by the Cuban Regulatory Agency. The documentation related to the use of medicinal plants in the studied areas reveals that the traditional knowledge continues deeply rooted in the communities, and popular wisdom is kept through the representative images of the herbalist and people with considerable knowledge about this topic. Rev. Biol. Trop. 59 (4): 1859-1867. Epub 2011 December 01
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