Third brazilian consensus for autoantIbodies screening in HEp-2 Cells : historical perspectve, quality control and clinical associatons

O III Consenso Brasileiro para Pesquisa de Autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) objetivou discutir estratégias para controlar a qualidade do ensaio, promover a atualização das associações clínicas dos diversos padrões e avaliar as difculdades de implantação do II Consenso ocorrido no ano de 2002. Métodos: Nos dias 13 e 14 de abril de 2007 participaram do encontro em Goiânia pesquisadores e especialistas de diversos centros universitários e laboratórios clínicos de diferentes regiões do Brasil, com o propósito de discutir e aprovar as recomendações que visam a melhores padronização, interpretação e utilização do ensaio pelos clínicos. Foram convidados como ouvintes representantes comerciais de diferentes empresas produtoras de insumos para realização do teste de FAN. Resultados e conclusão: Dada a heterogeneidade de microscópios e reagentes disponíveis no mercado, o III Consenso enfatizou a necessidade do controle de qualidade em ensaios de imunofuorescência indireta. Foram também feitas algumas adequações na terminologia utilizada para classifcar os diferentes padrões. Finalmente, foi realizada uma atualização das associações clínicas com fnalidade de facilitar cada vez mais o melhor uso do ensaio pelos clínicos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACTThe Third Brazilian Consensus for Autoantibodies Screening in HEp-2 Cells (ANA) had as purpose the evaluation of diffculties in the accomplishment of the 2nd Consensus recommendations that took place in the year of 2002, the discussion of strategies for quality control of the assay and the discussion of an update of the clinical associations of the several immunofuorescent patterns. Methods: Several ANA experts from university centers and private laboratories in different areas in Brazil joined the workshop in Goiânia on 2007 April 13 and 14 with the purpose of discussing and approving the recommendations for standardization, interpretation and use of the test by physicians. Commercial representatives of different ANA slide brands were also invited as listeners to the workshop. Results and conclusion: The 3rd ANA Consensus emphasized the need for quality control in indirect immunofuorescent assays since there is a considerable heterogeneity of available microscopes and reagents. It also promoted adaptations in the previously approved terminology used to classify the different patterns and fnally updated the clinical associations of the several patterns with the purpose of providing guidance for interpretation of the assay by clinical pathologists and assistant physicians

Third Brazilian consensus for autoantibodies screening in HEp-2 cells (ANA) : recommendations for standardization of autoantibodies screening trial in HEp-2 cells, quality control and clinical associations

Objetivo: O 3º Consenso Brasileiro para pesquisa de autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) teve como propósito avaliar as dificuldades de implantação do 2º Consenso ocorrido no ano de 2002, discutir estratégias para controlar a qualidade do ensaio e promover a atualização das associações clínicas dos diversos padrões. Métodos: Participaram do encontro em Goiânia nos dias 13 e 14 de abril de 2008 pesquisadores e especialistas de diversos centros universitários e laboratórios clínicos de diferentes regiões do Brasil, com o propósito de discutir e aprovar as recomendações que visam à melhor padronização, interpretação e utilização do ensaio pelos clínicos. Representantes comerciais de diferentes empresas produtoras de insumos para realização do teste de FAN foram convidados como ouvintes. Resultados e Conclusões: O 3º Consenso enfatizou a necessidade do controle de qualidade em imunofluorescência dada a heterogeneidade de microscópios e reagentes disponíveis no mercado, promoveu adequações na terminologia utilizada para classificar os diferentes padrões e, finalmente, atualizou as associações clínicas com finalidade de facilitar cada vez mais o melhor uso do ensaio pelos clínicos. ________________________________________________________________________________ ABSTRACTObjective: The Third Brazilian Consensus for autoantibodies Screening in HEp-2 cells had as purpose the evaluation of difficulties in the accomplishment of the 2nd Consensus recommendations that took place in the year of 2002, the discussion of strategies for quality control of the assay and the promotion of an update of the clinical associations of the several immunofluorescent patterns. Methods: Several ANA experts from university centers and private laboratories in different areas in Brazil joined the workshop in Goiânia on 2008 April 13 and 14 with the purpose of discussing and approving the recommendations for standardization, interpretation and use of the test by physicians. Commercial representatives of different ANA slide brands were also invited as listeners to the workshop. Results and Conclusions: The 3rd Consensus emphasized the need for quality control in indirect immunofluorescent since there is a considerable heterogeneity of available microscopes and reagents. It also promoted adaptations in the previously approved terminology used to classify the different patterns and finally updated the clinical associations of the several patterns with the purpose of providing guidance for interpretation of the assay by clinical pathologists and assistant physicians

Anti-C1q, anti-chromatin/nucleosome, and anti-dsDNA antibodies in juvenile systemic lupus erythematosus patients

OBJETIVO: Avaliar a presença de anticorpos anti-C1q, anticromatina/nucleossomo e anti-DNA de duplo filamento (dsDNA) em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico juvenil (LESJ) e controles. MÉTODOS: Foram analisados 67 pacientes com LESJ e 34 controles saudáveis para presença de anticorpos anti-C1q, anticromatina/nucleossomo e anti-dsDNA pelo método ELISA. Os níveis de C1q foram avaliados por imunodifusão radial. RESULTADOS: Na época, a média de idade era similar entre os pacientes com LESJ e os controles (14,6 ± 3,86 vs. 13,6 ± 2,93 anos; P = 0,14). Foram observadas frequências mais altas de anticorpos anti-C1q, anticromatina/nucleossomo e anti-dsDNA em pacientes com LESJ em relação aos controles (20% vs. 0%; P = 0,0037; 48% vs. 0%; P < 0,0001 e 69% vs. 3%; P < 0,0001, respectivamente). A mediana dos anticorpos anti-C1q, anticromatina/nucleossomo e anti-dsDNA também foi significativamente mais alta em pacientes com LESJ em relação aos controles [9,6 (5,5-127) vs. 7,5 (5-20) unidades, P = 0,0006; 18 (1,9-212) vs. 3,2 (1,7-17) unidades, P < 0,0001; e 111 UI/mL (6-741) vs. 14 (6-33) UI/mL, P < 0,0001, respectivamente]. A sensibilidade para os anticorpos anti-C1q, anticromatina/nucleossomo e anti-dsDNA foi: 21% (IC: 11-33), 49% (IC: 36-62) e 70% (IC: 57-81). A especificidade foi de 100% (IC: 88-100), 100% (88-100) e 97% (IC: 83-99), respectivamente. Foi observada uma correlação positiva entre os níveis de anti-dsDNA e tanto anticorpos anti-C1q (r = 0,51; IC: 0,29-0,68; P < 0,0001) como anticromatina/nucleossomo (r = 0,87; IC: 0,79-0,92; P < 0,0001). Foi observada uma correlação negativa entre os níveis de anti-C1q e C1q (r = -0,33; IC: -0,56-0,05; P = 0,018). A frequência de anti-dsDNA foi mais alta em pacientes com SLEDAI-2K &gt; 1 (P = 0,0047), e não foram observadas diferenças nas frequências desses três autoanticorpos e nefrite (P &gt; 0,05). CONCLUSÃO: Nosso estudo demonstrou elevada especificidade para diagnóstico de lúpus envolvendo os três autoanticorpos, especialmente anti-C1q e anticromatina/nucleossomo

Flow cytometry: Immunophenotyping in 48 hairy cell leukemia cases and the relevance of fluorescence intensity in CDs expression for diagnosis

Objectives: To report the experience and the importance of flowcytometry immunophenotyping by measuring the positivity andantigenic expression intensity in the diagnosis of 48 patients withhairy cell leukemia (HCL). Methods: From November 1991 to June2005, 4318 cases were analyzed by flow cytometry, 3556 (82.3%) ofwhich were oncohematological diseases. Forty-eight cases of hairycell leukemia (1.3%) were diagnosed. Morphological analysis wasperformed on slides stained with Grunwald Giemsa panchromaticdye, analyzed by two experienced professionals. The cytochemicalanalyses made were for acid phosphatase and tartrate-resistant acidphosphatase (TRAP). For antigenic expression analysis, the monoclonalantibodies used were: CD2, CD3, CD5, CD7, CD10, CD11c, CD19,CD20, CD22, CD23, CD25, CD38, HLA-DR, FMC-7, CD79b, CD103,IgM, IgG, IGD, kappa and lambda. Results: By analyzing positivity andmonoclonal antibody expression intensity in the forward scatter vs.side scatter histograms (used between 1991 and 2001), and in CD19vs. SSC histograms with sequential histograms (after 2001), it waspossible to confirm this pathology and to discriminate residual cellsafter the specific therapy. Conclusion: Diagnostic confirmation of hairycell leukemia by flow cytometry is a fast and accurate method that isuseful in the clinical laboratory. The option for an initial CD19 vs. SSChistogram and an analysis of antigenic expression intensity in the bonemarrow showed to be statistically more efficient

Determination of rivaroxaban in patient’s plasma samples by anti-Xa chromogenic test associated to High Performance Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry (HPLC-MS/MS) - Fig 4

<p>Method comparison HPLC-MS/MS assay and the anti-Xa assay from external laboratory (n = 19): (A) Spearman correlation of rivaroxaban results obtained by the HPLC-MS/MS assay and the anti-Xa assay used for rivaroxaban measurement from external laboratory; (B) Bland-Altman analyses.</p

Stability data of rivaroxaban in human plasma.

<p>Stability data of rivaroxaban in human plasma.</p