Desarrollo de vacunas basadas en bacterias lácticas : expresión de antígenos del VIH en Lactococcus lactis para inducir inmunidad en mucosas

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Inmunobiología) UANLUANLhttp://www.uanl.mx

Magnetic Nanoparticles of Chitosan for Targeted Delivery System of Plasmids to the Lungs

One of the major problems of gene therapy is the efficient, specific, and targeted delivery as well as the safety of the materials used in such systems. The specific targeted delivery of genes to the lung offers the possibility to treat a variety of specific diseases. We developed chitosan nanoparticles with the plasmid pCEM-Luc, which contains a promoter activated by magnetic field. Nanoparticles of 200–250 nm obtained by ionic gelation with a 99% retention rate were transfected in B16F10 cells and in vivo in the lungs of Balb/c mice by intratracheal administration. We observed that an external magnetic field increased the expression of the luciferase reporter gene in B16F10 cells transfected with magnetic nanoparticles and inhomogenized lungs of mice which determined differences in levels of expression between different regions of the lungs (apical or distal and left or right). The highest levels of luciferase activity were observed in the apical left region. The magnetic nanoparticles prove an efficient delivery system to in vitro transfection of cells and lung tissue

Inducción de inmunidad en mucosas contra el VIH mediante la secreción del Asa V3 y fusionada a la subunidad A2b de la toxina del cólera en lactococcus lactis.

El síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) continúa siendo una importante prioridad sanitaria en el mundo. Aunque existe un avance importante en la prevención de nuevas infecciones por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) y en la reducción del número anual de defunciones relacionadas con el SIDA, el número de personas que viven con el VIH sigue en aumento. Si partimos de que el principal mecanismo de infección viral es a través del contacto sexual, el cual involucra a la mucosa genital, el propósito de esta investigación es el desarrollar una estrategia de inmunización basada en bacterias lácticas, mediante el uso ingeniería molecular para modificar genéticamente a la bacteria para que exprese antígenos virales en el sitio de entrada del patógeno y genere inmunidad humoral y celular específica contra el VIH. Para esta estrategia utilizamos Lactococcus lactis como vector bacteriano de expresión del antígeno V3 del VIH, así como la fusión de éste a la subunidad A2B de la toxina del cólera como un segmento con actividad adyuvante, para la generación de inmunidad contra el virus infectante. Después de la construcción de las bacterias recombinantes, inmunizamos ratones de 6 semanas por vía oral o genital, para demostrar la generación de inmunidad humoral mediante anticuerpos específicos IgG e IgA anti-V3, así como inmunidad celular mediante la inducción de la interleucina-2 (IL-2) e interferón-gamma (INF- ) en linfocitos de bazo y de sangre periférica. Ambos tipos de inmunidad específica contra el VIH se generaron a nivel sistémico en suero y a nivel local en mucosas. Este vector bacteriano recombinante seguro para consumo humano representa una nueva estrategia para el envío dirigido a las mucosas de antígenos del VIH asociado o fusionado a un segmento proteico que aumenta la inmunogenicidad a la región V3 del virus. Esta estrategia de inmunización puede ser optimizada y evaluada como una nueva alternativa de vacuna segura y efectiva que genere inmunidad neutralizante a nivel de las mucosas del VIH

Detection of anti-HspX antibodies and HspX protein in patient sera for the identification of recent latent infection by Mycobacterium tuberculosis.

Mycobacterium tuberculosis is a pathogen causing tuberculosis (TB) a spectrum of disease including acute and asymptomatic latent stages. Identifying and treating latently-infected patients constitutes one of the most important impediments to TB control efforts. Those individuals can remain undiagnosed for decades serving as potential reservoirs for disease reactivation. Tests for the accurate diagnosis of latent infection currently are unavailable. HspX protein (α-crystallin), encoded by Rv2031c gene, is produced in vitro by M. tuberculosis during stationary growth phase and hypoxic or acidic culture conditions. In this study, using standard, and Luminex xMAP® bead capture ELISA, respectively, we report on detection of anti-HspX IgG and IgM antibodies and HspX protein in sera from acute and latent TB patients. For the antibody screen, levels of IgG and IgM antibodies were similar between non-infected and active TB patients; however, individuals classified into the group with latent TB showed higher values of anti-HspX IgM (p = 0.003) compared to active TB patients. Using the bead capture antigen detection assay, HspX protein was detected in sera from 56.5% of putative latent cases (p< 0.050) compared to the background median with an average of 9,900 pg/ml and a range of 1,000 to 36,000 pg/ml. Thus, presence of anti-HspX IgM antibodies and HspX protein in sera may be markers of latent TB