Alcocer González, Juan Manuel

Luna Cruz, Itza Eloísa

Rodríguez Padilla, Maria Cristina

Terrazas Armendáriz, Luis Daniel

Rodríguez Padilla, Cristina

Repositorio Academico Digital UANL

III Simposio Nacional de   Ciencias Farmacéuticas y Biomedicina I Simposio Nacional de  Microbiología Aplicada 1 RCFB, Ed. Esp. 1, 2017  Septiembre 1 y 2 2016 Construcción y evaluación de un promotor eucariótico que controla la expresión de genes heterólogos en condiciones de hipoxia   Luis Daniel Terrazas Armendáriza, Itza Eloisa Luna Cruza, María Cristina Rodríguez Padillaa, Juan Manuel Alcocer Gonzáleza*.   aLaboratorio de Inmunología y Virología, departamento de Inmunología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Autónoma de Nuevo León, 66450, San Nicolás de los Garza, Nuevo León, México. danielterrazas307@hotmail.com  Palabras clave: factor inducible por hipoxia, elementos de respuesta a hipoxia, pHRE-Luc.   Introducción La hipoxia es una característica común en los tumores sólidos, contribuyendo local y sistémicamente a la progresión tumoral, además de la falta de respuesta a la radioterapia y quimioterapia. El factor de transcripción: factor inducible por hipoxia (HIF-1) es el mayor regulador de la adaptación del tumor a la hipoxia, induciendo la expresión de muchos genes que permiten a las células sobrevivir en estas condiciones1,2. La presencia de regiones hipóxicas en neoplasias malignas es uno de los factores predictivos más importantes. Paradójicamente la hipoxia también es un blanco terapéutico atractivo ya que se produce hipoxia severa solo en el tejido del tumor sólido3. Muchos genes sensibles a hipoxia son regulados el sistema elementos de respuesta a hipoxia/factor inducible por hipoxia (HRE/HIF1), los HRE se localizan dentro de regiones potenciadoras de estos promotores. El sistema de regulación (HRE/HIF1)  es común en todas las células de mamíferos y tejidos humanos, este sistema se puede utilizar para lograr la expresión selectiva de genes terapéuticos en condiciones de hipoxia4. Cuando (HREs)  derivados de diferentes genes se colocan en plásmidos y sistemas de vectores virales, confieren inducibilidad hipóxica sobre los promotores heterólogos en varios tipos de células por lo que la hipoxia puede ser explotada para el tratamiento de cáncer selectivo5.   Parte experimental se creó y caracterizó el vector hipóxico pHRE-Luc, se comprobó su funcionalidad en la línea celular B16F10 mediante la medición de la expresión génica del gen reportero luciferasa en condiciones de hipoxia y normoxia bajo la influencia de 6 copias de los (HRE).     Resultados y discusión En condiciones de hipoxia, el vector pHRE-Luc fue estadísticamente más eficiente que en normoxia para inducir la expresión génica, el RNA de interferencia dirigido contra HIF redujo significativamente la expresión del gen reportero en condiciones de hipoxia (Tabla 1).   Conclusión Las secuencias en tándem llamadas elementos de respuesta a hipoxia regulan la expresión del gen reportero adyacente en condiciones de hipoxia y la activación del promotor en respuesta a condición de hipoxia es determida por la proteína HIF.  Este vehículo proporciona las bases para plantear un sistema sitio dirigido a las regiones hipóxicas de los tumores para terapia génica específica del cáncer.  Tabla 1. Cuantificación de la expresión de luciferasa en unidades relativas de luz (URL) del plásmido HRE-Luc en condiciones de Normoxia e hipoxia en células B16F10.   Normoxia Hipoxia Hipoxia+ RNA de interferencia (HIF) 379,851 URL 1,878,666 URL 55,939 URL   Referencias 1Arvelo F y Cotte C. Invest. Clín. 2009. V.50, 4, pp529-546. 2Monti E, Gariboldi MB. Curr Mol Pharmacol. 2011. V.4, 16, pp62-77. 3 Baumann RP, Penketh PG, Seow HA, Shyam K, Sartorelli AC. Radiat Res. 2008. V.170, 5, pp651-660. 4Greco O, Marples B, Dachs GU, Williams KJ, Patterson AV, Scott SD. Gene Ther. 2002. V.9,  20, pp1403-1411. 5J-Y Lee, Y-S Lee, J-M Kim, KL Kim, J-S Lee, H-S Jang, I-S Shin, W Suh, E-S Jeon, J Byun, D-K Kim. Gene Ther. 2006. 13, pp857-868.   

Construcción y evaluación de un promotor eucariótico que controla la expresión de genes heterólogos en condiciones de hipoxia.

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