Lokalisationsmechanismen der ATPase des Virulenz-assoziierten Typ VI Sekretionssystems in Burkholderia thailandensis

Das Typ VI Sekretionssystem (T6SS) besteht aus einem in der Membran verankerten kontraktilen zytoplasmatischen Tubus, der eine Nadel in Nachbarzellen treibt um toxische Effektoren zu sekretieren. Der kontrahierte Tubus wird von der AAA+ ATPase ClpV entfaltet und recycelt. Immer mehr Studien zeigen, dass die Lokalisation des T6SS in der Bakterienzelle von dem Typ der Zielzelle bedingt wird. T6SS, die gegen eukaryotische Zellen wirken, zeigen eine polare Lokalisation, wohingegen T6SS, die Bakterien angreifen, eine zufällige Lokalisation aufweisen. Wie die T6SS-Proteine den Assemblierungsort erreichen, ist jedoch unbekannt. Ziel dieser Arbeit war es, mithilfe des Modellorganismus Burkholderia thailandensis erste Informationen über die grundlegenden Lokalisationsmechanismen der T6SS-Komponenten zu erlangen. B. thailandensis besitzt mehrere T6SS. Unter anderem das T6SS-1, welches Effektoren in andere Bakterien transloziert und das T6SS-5, ein essentieller Virulenzfaktor der Wirtszellen manipuliert. Vorausgegangene Arbeiten haben gezeigt, dass die ATPasen dieser beiden Sekretionssysteme, ClpV-1 und ClpV-5, diskrete Fokusse bilden, die eine zufällige bzw. polare Lokalisation aufweisen. ClpV-1-GFP-Fokusse weisen eine hohe Dynamik auf, die vermutlich den Abbau von kontrahierten Tubuli anzeigt. Im Gegensatz dazu sind ClpV-5-sfGFP-Fokusse statisch am Pol lokalisiert, was auf eine niedrigere Aktivität schließen lässt. Zunächst wurde die Rolle des T6SS-Apparates bei der Lokalisation von ClpV bestimmt. Dazu wurden B. thailandensis Mutanten mit vollständigen T6SS-1 und T6SS-5 Gencluster-Deletionen hergestellt. Es konnte gezeigt werden, dass die diskrete, singuläre Fokusbildung von ClpV-1-GFP in der ∆T6SS-1-Mutante signifikant reduziert war, was bedeutet, dass ClpV-1 ohne T6SS-1-Proteine nicht lokalisieren kann. Im Gegensatz dazu lokalisiert ClpV-5-sfGFP auch in Abwesenheit der T6SS-5-Proteine am Pol. Das könnte bedeuten, dass es mit einem anderen Faktor interagiert, um zum Pol zu gelangen. Die Ergebnisse zeigen, dass die T6SS ATPasen unterschiedliche Informationen über die subzelluläre Lokalisation enthalten können. Weiterhin konnte die polare Lokalisation von ClpV-5 in der ∆T6SS-5 Mutante sowohl während der Infektion von Wirtszellen als auch außerhalb in Kulturmedium beobachtet werden. Ein intrazelluläres Signal der Wirtszelle ist daher nicht in Lokalisation von ClpV-5 involviert. Andere zytoplasmatische T6SS-5-Proteine wie TssK-5 und TssC-5 zeigten eine diffuse Verteilung in der ∆T6SS-5-Mutante. Die Beeinträchtigung von zellulären Faktoren, die in die räumliche Organisation von Bakterienzellen involviert sind, wie beispielsweise das Zytoskelettprotein MreB, hatte keinen Einfluss auf die Fokusbildung von ClpV-5 und ClpV-1. Da das T6SS ein kontaktabhängiges System ist und das Signal zur Kontraktion von T6SS-5 und T6SS-1 unbekannt ist, wurde der Einfluss von Oberflächenkontakt auf die Verteilung von ClpV-5 und ClpV-1 untersucht. Dafür wurden die Bakterien für unterschiedliche Zeitintervalle auf Agarosepads aufgetropft, um Oberflächenkontakt zu generieren. Als Kontrolle wurden die Bakterien in Flüssigkultur mit Paraformaldehyd fixiert. Die Ergebnisse zeigen, dass Oberflächenkontakt nicht essentiell für die polare Lokalisation von ClpV-5 ist, diese aber induziert. Nach längerer Inkubation änderte sich die diffuse Verteilung von TssK-5-sfGFP zu diskreter Fokusbildung. Die Fokusse waren zufällig lokalisiert und scheinen unspezifisch zu sein. In B. thailandensis-Bakterien, die eine chromosomale clpV-1-gfp Fusion exprimierten und länger auf Agarosepads aufgetropft waren, konnte ein ClpV-1-GFP-Signal beobachtet werden. Die gleiche Mutante ohne Oberflächenkontakt zeigte kein GFP-Signal. Hieraus lässt sich schließen, dass Oberflächenkontakt ein Signal zur Expression von clpV-1 und vermutlich des gesamten T6SS-1-Genclusters darstellt. Zusammenfassend sind in dieser Arbeit neue Erkenntnisse zur Lokalisation von ClpV ATPasen von T6SS, die gegen Bakterien und Wirtszellen gerichtet sind, gewonnen worden

Prototyping Large-Sized Objects Using Freeform Thick Layers of Plastic Foam

Current Rapid Prototyping systems are primarily aimed at small-sized objects containing many shape details. In this paper a Rapid Prototyping technology is presented that is aimed at largesized objects having a complex, freeform outer shape. This new technology builds the model out ofthick layers, each having freeform outside faces. The paper will present: an overview of current methods to produce large prototypes, the basics of the new method, the technology used to produce the layers, the toolpath planning and finally the overall system design.Mechanical Engineerin

Childhood- versus Adolescent-Onset Antisocial Youth with Conduct Disorder: Psychiatric Illness, Neuropsychological and Psychosocial Function

The present study investigates whether youths with childhood-onset antisocial behavior have higher rates of psychiatric illness, neuropsychological and psychosocial dysfunction than youths who engage in antisocial behavior for the first time in adolescence. Prior studies have generally focused on single domains of function in heterogeneous samples. The present study also examined the extent to which adolescent-onset antisocial behavior can be considered normative, an assumption of Moffitt's dual taxonomy model.Forty-three subjects (34 males, 9 females, mean age = 15.31, age range 12-21) with a diagnosis of conduct disorder (CD) were recruited through Headspace Services and the Juvenile Justice Community Centre. We compared childhood-onset antisocial youths (n = 23) with adolescent-onset antisocial youths (n = 20) with a conduct disorder, across a battery of psychiatric, neuropsychological and psychosocial measures. Neuropsychological function of both groups was also compared with normative scores from control samples.The childhood-onset group displayed deficits in verbal learning and memory, higher rates of psychosis, childhood maltreatment and more serious violent behavior, all effects associated with a large effect size. Both groups had impaired executive function, falling within the extremely low range (severely impaired).Childhood-onset CD displayed greater cognitive impairment, more psychiatric symptoms and committed more serious violent offences. The finding of severe executive impairment in both childhood- and adolescent-onset groupings challenges the assumption that adolescent-onset antisocial behavior is a normative process

The Burkholderia Type VI Secretion System 5: Composition, Regulation and Role in Virulence

The soil saprophyte and Tier I select agent Burkholderia pseudomallei can cause rapidly fatal infections in humans and animals. The capability of switching to an intracellular life cycle during infection appears to be a decisive trait of B. pseudomallei for causing disease. B. pseudomallei harbors multiple type VI secretion systems (T6SSs) orthologs of which are present in the surrogate organism Burkholderia thailandensis. Upon host cell entry and vacuolar escape into the cytoplasm, B. pseudomallei and B. thailandensis manipulate host cells by utilizing the T6SS-5 (also termed T6SS1) to form multinucleated giant cells for intercellular spread. Disruption of the T6SS-5 in B. thailandensis causes a drastic attenuation of virulence in wildtype but not in mice lacking the central innate immune adapter protein MyD88. This result suggests that the T6SS-5 is deployed by the bacteria to overcome innate immune responses. However, important questions in this field remain unsolved including the mechanism underlying T6SS-5 activity and its physiological role during infection. In this review, we summarize the current knowledge on the components and regulation of the T6SS-5 as well as its role in virulence in mammalian hosts

LONDRES (Reino Unido). Planos de población. 1723 (1666). 1:1900

Dedicatoria : "Ut memoria saltem pristinae Londinii formae diruno quo subsidit incendium supervivat : Tabulam eiusdem umbratilem Societati Antiquariae Londinensi dedicat Georgius Vertue. MDCCXXIII"Escala gráfica de 300 yardas [= 14,7 cm]. Orientado con lis en rosa de treinta y dos vientosToponimia de las principales calles y plazas de la ciudad, señalándose además sus edificios más relevantesEn servilleta, tabla con las líneas punteadas utilizadas para indicar la extensión del incendio que sufrió la ciudad, las ampliaciones de las calle y las líneas que seguían las mismas antes de aquélDedicatoria enmarcada en un muro de ruinas sobre el cual hay una lámpara encendida y filactería con la leyenda: "Non etinguetur"Forma parte de la Colección MendozaInserta : "A plan of the City of London and Westminster". Relación de los principales edificios y parques, indicados por clave alfabética. Siete vias de los más importantes edificios. tanto civiles como religiosos, de la ciuda

Impact of Prison Status on HIV-Related Risk Behaviors

Baseline data were collected to evaluate the effectiveness of interventions on completion of the hepatitis A and B vaccine series among 664 sheltered and street-based homeless adults who were: (a) homeless; (b) recently (<1 year) discharged from prison; (c) discharged 1 year or more; and (d) never incarcerated. Group differences at baseline were assessed for socio–demographic characteristics, drug and alcohol use, sexual activity, mental health and public assistance. More than one-third of homeless persons (38%) reported prison time and 16% of the sample had been recently discharged from prison. Almost half of persons who were discharged from prison at least 1 year ago reported daily use of drugs and alcohol over the past 6 months compared to about 1 in 5 among those who were recently released from prison. As risk for HCV and HIV co-infection continues among homeless ex-offenders, HIV/HCV prevention efforts are needed for this population

Client's violence toward social workers

The aim of this study is to characterize clients’ violence toward social workers in terms of its frequency and type, as well as to identify the organizational measures used to reduce and manage work-related violence. Data collection involved 3 Portuguese organizations within two different stages, which included the use of interviews and questionnaires directed to social workers (n = 108) and their managers (n = 27). The results indicate that at least half of the participants were victims of clients’ violence and verbal aggression, which is the most common type of violence. The results also revealed a set of measures of primary, secondary and tertiary interventions that are being used by the organizations involved in this studyinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio