Descrição clínica, imunohistoquímica e estudo dos genes VHL, SDHB, SDHC, SDHD e MAX em uma série de pacientes com feocromocitoma e paraganglioma do Distrito Federal

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciência da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciência da Saúde, 2014.INTRODUÇÃO: Feocromocitomas (FEO) e paragangliomas (PGL) são tumores neuroendócrinos, originários de células chromafins, localizados na medula supra-renal e em tecidos extra-adrenais, respectivamente. FEO e PGL são geralmente benignos, com morbidade e mortalidade relacionadas com a produção de catecolaminas. Malignidade é relatada em aproximadamente 10%, dos casos. Estudos recentes têm mostrado que, pelo menos, 25% de todos os casos de FEO / PGL podem ter uma base genética. MÉTODOS: 17 pacientes com FEO / PGL foram incluídos. Os dados clínicos, bioquímicos e radiológicos foram obtidos dos prontuários médicos. Estudos histopatológicos e imuno-histoquímico para marcadores neuroendócrinos foram realizados. DNA genômico foi extraído e as regiões codificantes dos genes VHL, SDHB, SDHC SDHD, MAX foram amplificados e seqüenciados automaticamente. A técnica de MLPA foi utilizada para a triagem de grandes deleções / inserções. A análise do gene RET foi realizada em um paciente com evidência clínica de neoplasia endócrina múltipla do tipo 2A (MEN2A). O consentimento livre e esclarecido foi obtido de todos os pacientes. RESULTADOS: Este estudo é composto por 6 casos de PGL e 11 FEO, 5 pacientes tiveram história familiar postivia e 4 apresentaram malignidade. A análise Imunohistoquímica confirmou a origem de neuroendócrina de todos os tumores. A análise genética revelou a mutação (p.Q164R) no gene VHL em uma paciente do sexo feminino com FEO e hemangioblastoma cerebelar e sua filha assintomática. Uma mutação no gene RET foi encontrada (p.C618R), em uma paciente do sexo feminino com FEO e carcinoma medular da tiróide (CMT; NEM2A) e seus 2 filhas com CMT. Uma grande dleção do exon 1 do gene SDHB foi encontrada em quatro pacientes: Duas irmãs com PGL paraaortico, e dois casos aparentemente esporádicos apresentando PGL. DISCUSSÃO: O diagnóstico molecular feito pelo seqüenciamento de Sanger juntamente com o MLPA constitui uma estratégia adequada para procurar tanto mutações pontuais quanto grandes deleções. Associações genótipo-fenótipo para VHL e RET são bem descritos, mas os efeitos fisiopatológicos das grandes deleções no SDHB ainda não estão bem elucidados. Correlações fenotípicas ainda não foram bem caracterizados já que grandes deleções no SDHB tem uma apresentação muito variável. O SDHB pode atuar como um gene supressor tumoral, e uma grande deleção pode conduzir a um fenótipo tumoral. Estudos genéticos em pacientes com FEO e PGL são recomendados, uma vez que as mutações podem também ser encontrados em casos aparentemente esporádicos, e que um resultado positivo pode influenciar a monitorização clínica e o aconselhamento genético dos pacientes e seus descendentes. ___________________________________________________________________________ ABSTRACTINTRODUCTION: Pheochromocytomas (PCC) and Paragangliomas (PGL) are neuroendocrine tumors originating from chromafin cells, located in the adrenal medulla and extra-adrenal tissue, respectively. PCC and PGL are usually benign, with morbidity and mortality related to the production of catecholamines. Malignancy is reported in approximately 10%; of cases. Recent studies have shown that at least 25%; of all PCC/PGL cases may have a genetic basis. METHODS: 17 patients with PCC/PGL were included. Clinical, biochemical and radiological data were obtained from medical records. Histopathological and immunohistochemical studies for neuroendocrine markers were performed. Genomic DNA was extracted and the coding regions of VHL, SDHB, SDHC SDHD, MAX were amplified and automatically sequenced. Multiplex ligand-probe amplification (MLPA) was used for screening large deletions/insertions. RET gene analysis was also performed in one patient with clinical evidence of multiple endocrine neoplasia type 2A (MEN2A). Genuine consent was obtained from all. RESULTS: Our series consisted of 6 PGLs and 11 PCCs patients; 5 had familial history and 4 were malignant. Immunohistochemistry confirmed the neuroendocrine origin of all tumors. Genetic analysis revealed the (p.Q164R) VHL mutation in a woman with PCC and cerebellar hemangioblastoma and her asymptomatic daughter. A RET mutation was found (p.C618R) in a woman with PCC and thyroid medullary carcinoma (TMCa; MEN2A) and her 2 daughters with TMCa. A large deletion of SDHB exon 1 was found in 4 patients: Two sisters with paraortic PGL, and two apparently sporadic cases presenting with PGL. DISCUSSION: Molecular diagnosis done by Sanger’s sequencing combined with MLPA constitute an adequate strategy to search for both point mutations and large deletions. Genotype-phenotype associations for VHL and RET are well described, but the pathophysiological effects of large deletions on SDHB are still unclear. No phenotype correlations have been characterized for large SDHB deletions due to a highly variable presentation. SDHB may act as a tumor suppressor, and a large deletion may lead to a tumor phenotype. Rational recommendations for genetic studies in PCCs and PGLs are in progress given that mutations may also be found in apparently sporadic cases, and that a positive result might influence clinical monitoring and genetic counseling of patients and their offspring

ESTUDO MOLECULAR DE FAMÍLIA COM APRESENTAÇÃO CLÍNICA DE TUMORES RELACIONADOS À SÍNDROME DE VON HIPPEL-LINDAU (VHL)

A síndrome de Von Hippel-Lindau (VHL) é uma desordem familiar autossômica dominante hereditária com penetrância superior a 90% em pessoas com mais de 60 anos e incidência de 1/36.000 nascimentos por ano. É caracterizada pelo desenvolvimento de neoplasias benignas e malignas, decorrentes de mutações no gene VHL, gene supressor tumoral, responsável pela síntese da proteína VHL, que regula, negativamente, a produção de fatores angiogênicos, localizado na região 3p25-26.2. A síndrome é causada pela inativação dessa proteína, sendo esse o fator responsável pelo aumento da produção de fatores de crescimento, o que explica a proliferação vascular dos tumores característicos dessa síndrome, como hemangioblastoma medular, carcinoma de células renais e o feocromocitoma, além de tumores na retina e no cerebelo. Feocromocitomas e paragangliomas são tumores neuroendócrinos raros, têm o diagnóstico baseado em evidências bioquímicas de produção de catecolaminas, podem ser diagnosticados em pacientes de diferentes idades e surgir de forma aleatória. Por outro lado, cerca de 90% desses tumores, quando encontrados em crianças, são associados a alguma síndrome hereditária. O objetivo é realizar um estudo de caso, clínico e molecular de uma família que apresenta como caso índice uma criança de 11 anos com feocromocitoma, diagnosticada e atendida pelo Hospital Universitário de Brasília. Foram coletadas amostras de sangue periférico dos pacientes por punção intravenosa, e feita a extração do DNA por meio do kit da QiAgen. O material genético obtido foi submetido à reação em cadeia da polimerase (PCR), sendo realizada a amplificação do gene VHL por pares de oligonucleotídeos iniciadores específicos. A amplificação dos produtos de PCR foi confirmada em gel de agarose a 1%, e os produtos foram submetidos ao sequenciamento automático de Sanger, cuja análise foi realizada pelo software Sequencher®, e os resultados encontrados foram comparados com os principais bancos de dados genômicos. A partir do histórico familiar do paciente e da confirmação de feocromocitoma, foram pesquisados os três éxons do gene VHL, sendo possível identificar a mutação missense R167Q em heterozigose no caso índice, assim como em sua genitora, confirmando a suspeita da síndrome familiar. O diagnóstico de qualquer um dos tumores característicos dessa mutação, principalmente em crianças, é uma indicação para realização de estudos moleculares no caso índice e em todos os membros familiares, assim como a supervisão do grupo familiar para conhecimento dos portadores da mutação. Os tumores advindos da mutação do gene VHL, quando malignos, são de evolução rápida e agressiva. Tendo em vista que a mutação ocorre em umgene supressor tumoral, com o avanço dos estudos dessa e de outras síndromes hereditárias, é possível melhorar o prognóstico e a qualidade de vida dos pacientes, diminuindo a morbidade dos portadores dessas síndromes. Os tumores derivados da síndrome de Von Hippel-Lindau, normalmente, são múltiplos e multifocais, aumentando a necessidade de acompanhamento constante dos pacientes, para avaliar a regressão ou a manifestação de novos tumore

What determines mortality in malignant pheochromocytoma? : report of a case with eighteen-year survival and review of the literature

Pheochromocytoma (PCC) is a tumor derived from adrenomedullary chromaffin cells. Prognosis of malignant PCC is generally poor due to local recurrence or metastasis. We aim to report a case of malignant PCC with 18-year survival and discuss which factors may be related to mortality and long-term survival in malignant pheochromocytoma. The patient, a 45-year-old man, reported sustained arterial hypertension with paroxysmal episodes of tachycardia, associated with head and neck burning sensation, and hand and foot tremors. Diagnosis of PCC was established biochemically and a tumor with infiltration of renal parenchyma was resected. No genetic mutation or copy number variations were identified in SDHB, SDHD, SDHC, MAX and VHL. Over 18 years, tumor progression was managed with 131I-MIBG (iodine-metaiodobenzylguanidine) and 177Lutetium-octreotate therapy. Currently, the patient is asymptomatic and presents sustained stable disease, despite the presence of lung, para-aortic lymph nodes and femoral metastases. Adequate response to treatment with control of tumor progression, absence of significant cardiovascular events and other neoplasms, and lack of mutations in the main predisposing genes reported so far may be factors possibly associated with the prolonged survival in this case. Early diagnosis and life-long follow-up in patients with malignant pheochromocytoma are known to be crucial in improving survival

What determines mortality in malignant pheochromocytoma? – Report of a case with eighteen-year survival and review of the literature

SUMMARY Pheochromocytoma (PCC) is a tumor derived from adrenomedullary chromaffin cells. Prognosis of malignant PCC is generally poor due to local recurrence or metastasis. We aim to report a case of malignant PCC with 18-year survival and discuss which factors may be related to mortality and long-term survival in malignant pheochromocytoma. The patient, a 45-year-old man, reported sustained arterial hypertension with paroxysmal episodes of tachycardia, associated with head and neck burning sensation, and hand and foot tremors. Diagnosis of PCC was established biochemically and a tumor with infiltration of renal parenchyma was resected. No genetic mutation or copy number variations were identified in SDHB, SDHD, SDHC, MAX and VHL. Over 18 years, tumor progression was managed with 131I-MIBG (iodine-metaiodobenzylguanidine) and 177Lutetium-octreotate therapy. Currently, the patient is asymptomatic and presents sustained stable disease, despite the presence of lung, para-aortic lymph nodes and femoral metastases. Adequate response to treatment with control of tumor progression, absence of significant cardiovascular events and other neoplasms, and lack of mutations in the main predisposing genes reported so far may be factors possibly associated with the prolonged survival in this case. Early diagnosis and life-long follow-up in patients with malignant pheochromocytoma are known to be crucial in improving survival

OSR1 disruption contributes to uterine factor infertility via impaired Müllerian duct development and endometrial receptivity.

Three sisters, born from consanguineous parents, manifested a unique Müllerian anomaly characterized by uterine hypoplasia with thin estrogen-unresponsive endometrium and primary amenorrhea, but with spontaneous tubal pregnancies. Through whole-exome sequencing followed by comprehensive genetic analysis, a missense variant was identified in the OSR1 gene. We therefore investigated OSR1/OSR1 expression in postpubertal human uteri, and the prenatal and postnatal expression pattern of Osr1/Osr1 in murine developing Müllerian ducts (MDs) and endometrium, respectively. We then investigated whether Osr1 deletion would affect MD development, using WT and genetically engineered mice. Human uterine OSR1/OSR1 expression was found primarily in the endometrium. Mouse Osr1 was expressed prenatally in MDs and Wolffian ducts (WDs), from rostral to caudal segments, in E13.5 embryos. MDs and WDs were absent on the left side and MDs were rostrally truncated on the right side of E13.5 Osr1-/- embryos. Postnatally, Osr1 was expressed in mouse uteri throughout their lifespan, peaking at postnatal days 14 and 28. Osr1 protein was present primarily in uterine luminal and glandular epithelial cells and in the epithelial cells of mouse oviducts. Through this translational approach, we demonstrated that OSR1 in humans and mice is important for MD development and endometrial receptivity and may be implicated in uterine factor infertility