Cactaceae epifíticas: germinação, desenvolvimento pós-seminal e morfoanatomia

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2015.Espécies de Cactaceae, adaptadas ao epifitismo, são encontradas na Mata Atlântica brasileira. Algumas destas espécies tem potencial ornamental, como é o caso de espécies de Rhipsalis e Lepismium. Este estudo teve por objetivo investigar a germinação e o desenvolvimento pós-seminal in vitro, em água e em meios de cultivo, e analisar a morfoanatomia de plântulas e caule de Rhipsalis neves-armondii, R.teres e Lepismium cruciforme. Foram coletados segmentos de caules e frutos. As sementes das três espécies, após serem extraídas dos frutos e secas, foram colocadas para germinar em água sobre papel filtro e ágar. Amostras foram coletadas aos 15, 30 e 60 dias após as sementes terem sido colocadas para germinar. O vigor das sementes foi testado com tetrazólio. Para análise de crescimento e desenvolvimento (aos 60 dias) foi determinado: comprimento da parte aérea e raiz, número de raízes, produção de biomassa, teor de clorofilas e carotenóides e concentração de proteínas solúveis totais. Para estudos da anatomia de plântula e caule adulto, em microscopias óptica (MO) e eletrônica de varredura (MEV), as amostras foram fixadas em gluteraldeído 2,5% em tampão fosfato de sódio 0,1M, em pH 7,2. Amostras infiltradas em historresina foram seccionadas transversalmente, coradas com azul de toluidina e analisadas em MO. Para MEV, as amostras foram desidratadas e secas em ponto crítico de CO2. Também foram realizadas secções paradérmicas no caule in vivo. Os resultados revelaram que a taxa de germinação em água foi maior do que em ágar. Os teores de clorofilas e carotenóides foram maiores em plântulas de R. teres. O desenvolvimento de plântulas produzidas, tanto por germinação de sementes em água, quanto em agar, indicou ser indispensável a incrementação de nutrientes, pois as substâncias de reserva foram exauridas até os 60 dias de cultivo. As plântulas, independente do processo de cultivo apresentaram coloração verde uniforme, hipocótilo suculento, cilíndrico e com diâmetro gradativamente maior em direção aos cotilédones. Plântulas cultivadas em água mostraram epicótilo mais desenvolvido em R. neves-armondii, com presença de espinhos, comparado com R. teres; em L. cruciforme, aos 60 dias o epicótilo ainda não era evidenciado. Em ágar, as sementes de R. neves-armonddi não germinaram. A morfologia do hipocótilo de L. cruciforme alterou-se quando vista em secções transversais, de circular aos 30 dias para achatada aos 60 dias. Características anatômicas do hipocótilo de R. teres e L. cruciforme foram: epiderme unisseriada e com cutícula, estômatos do tipo paracítico e no mesmo nível das demais célulasepidérmicas; parede periclinal externa das células epidérmicas alterou de plana para convexa com o desenvolvimento; córtex com hidrênquima; e cilindro central sem fibras associadas aos feixes vasculares colaterais. A análise de caule de plantas adultas de R. teres e L. cruciforme revelou constituição histológica com epiderme uniestratificada, estômatos ciclocíticos afundados na superfície, cutícula espessa e amplo hidrênquima. Cutícula espessa e hidrênquima constatados no hipocótilo das plântulas e nos caules de plantas adultas são características xéricas, importantes para economia hídrica destas epífitas que são protegidas da irradiação solar pelo forófito, mas com limitação de disponibilidade água.Abstract : Cactaceae species epiphytism adapted are found in the Brazilian Atlantic Forest. Some of those species have ornamental potential, such as Rhipsalis and Lepismium species. This study aimed to investigate the germination and post-seminal development in vitro, in water and in culture medium, and analyze the morphoanatomy seedlings and stem of Rhipsalis neves-armondii, R.teres and Lepismium cruciforme. Segments of stems and fruits were collected. The seeds of the three species, after being extracted from the fruit and dried, were germinated in water on filter paper and in agar. Samples were collected at 15, 30 and 60 days after the seeds were germinated. Seed vigor was tested with tetrazolium. For growth and development analysis (60 days) was determined: shoot and root length, root number, biomass production, chlorophylls and carotenoids and total soluble proteins content. For studies of seedling and adult stem anatomy, in light microscopy (LM) and scanning electron microscopy (SEM), samples were fixed in 2.5% glutaraldehyde in sodium phosphate buffer 0.1M, em pH 7.2. Samples infiltrated in historesin were cross-sectioned, stained with toluidine blue and examined by LM. For SEM, samples were dehydrated and critical point dried using CO2. Paradermic sections were made in vivo stem. The results revealed that germination rate in water was higher than in agar. The contents of chlorophylls and carotenoids were higher in R. teres seedlings. The development of seedlings produced both for germination of seeds in water as in agar indicated it essential to incrementing nutrients, because the reserve substances are exhausted up to 60 days of cultivation. The seedlings showed uniform green color, succulent hypocotyl, cylindrical and gradually larger in diameter towards the cotyledons and this was independent of cultivation process. Seedlings grown in water showed hypocotyl more developed in R. neves-armondii, with the presence of thorns, compared with R. teres; in L. cruciforme, at 60 days, the epicotyl was not yet evident. The R. neves-armonddi seeds do not germinate in agar. The morphology of the L. cruciforme hypocotyl changes when seen in cross-section, from circular (30 days) to flat (60 days). Anatomical characteristics of the R. teres and L. cruciforme hypocotyl were: uniseriate epidermis and with cuticle, the stomata of paracitic type and on a level with other epidermal cells; with development the epidermal cells showed changes planer to convex periclinal outer wall; cortex with hydrenchyma; and central cylinder showed no fibers associated with collateral vascular bundles. The stem analysis of adult plants of R. teres and L. cruciforme revealedhistological constitution with uniseriate epidermis, ciclocytic stomata sunk into the surface, thick cuticle and hydrenchyma ample. Thick cuticle and hydrenchyma ample observed in seedlings hypocotyl and mature plants stems are xeric characteristics, important for water economy of these epiphytes that are protected from sunlight by the host tree, but with limited availability water

High-risk screening and diagnosis of inborn errors of metabolism : a practical guide for laboratories

Inborn errors of metabolism (IEM) are a large and heterogeneous group of genetic diseases. In most of these conditions, the presence of variants in specific genes leads to enzyme deficiencies that affect a particular metabolic step. The number of laboratories dedicated to the study of IEM is very limited worldwide, and its multiplication is urgently required for a more effective diagnosis. With the scarcity of specialized centers, the diagnosis of affected individuals comes too late or does not happen at all. Moreover, the biological samples have to travel long distances, compromising its quality and delaying still more the diagnosis. In this work, we suggest a practical guide for a basic biochemical laboratory to get involved in the study of IEM. This proposal was based on already described metabolic tests and involves the need of just a few, simple, and affordable instruments that can give an enormous quantity of information about the possible metabolic defect faced, such as a spectrophotofluorometer and a gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) instrument. The procedures proposed can be customized and adapted to particular needs and situations, which make it especially useful for developing countries

Nonsense mediated mRNA decay affects nonsense transcripts levelsand in vitro response to gentamicin and ataluren in X-ALD

1 p.Fil: Amorosi, CA. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas; Argentina.Fil: Kemp, Stephan. Universidad de Amsterdan; Netherlands.Fil: : Dodelson de Kremer, Raquel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas; Argentina.Fil: Argaraña, Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.Fil: Ramirez Oller, Ana María. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas; Argentina.Background: X-linked adrenoleukodystrophy (X-ALD) is caused by mutations in the ABCD1 gene, characterized by increased concentrations of very long-chain fatty acids due to a defect in peroxisomal β-oxidation. Aminoglycosides and PTC124 can readthrough premature termination codons (PTCs), allowing the translation of full length proteins. Response to drugs found only in patients with the higher level of mRNA. Nonsense-mediated mRNA decay (NMD) is a mechanism, which degrades transcripts carrying PTCs and has an important role in response to treatments to promote readthrough. UPF1 RNA helicase are involved in this pathway. Objetives: Prove aminoglycosides and PTC124 in fibroblast cultures from patients with X-ALD. Analyze NMD efficiency in X-ALD fibroblasts. Materials and Methods: Fibroblasts from patients (p.Trp137*, p.Ser290*, p.Arg464*) were treated with different doses of gentamicin and PTC124. Protein expression was analyzed by Western blot. NMD was directly inhibited by using siRNA against UPF1 and indirectly by Cicloheximide. Levels of mRNA were determined by qPCR. * The study was approved by Comité Institucional de Etica para la Investigación Clínica (CIEIS) Polo Hospitalario, Provincia de Córdoba. * This work was supported by Fundación Florencio Fiorini , SECyT-UNC, PICT-FONCYThttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1007/s10545-013-9633-zFil: Amorosi, CA. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas; Argentina.Fil: Kemp, Stephan. Universidad de Amsterdan; Netherlands.Fil: : Dodelson de Kremer, Raquel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas; Argentina.Fil: Argaraña, Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.Fil: Ramirez Oller, Ana María. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas; Argentina.Bioquímica y Biología Molecular (ídem 1.6.3

Eficácia da Suplementação de citrulina para diminuir o risco de hipertensão pulmonar após cirurgia de cardiopatia congênita: Uma experiência local

Pulmonary hypertension (PH) is a major cause of morbi-mortality among patients with congenital heart disease (CHD) and also a potentially severe complication after surgical repair. Oral citrulline, a precursor to NO synthesis, is safe and efficacious for decreasing the risk of postoperative PH. Objective: The aim of the present study was to investigate in pediatric patients the changes of plasma citrulline, arginine, homocysteine and nitric oxide (NO) metabolites and pulmonary artery pressures (PAP) pre-post cardiac surgery in order to describe our population status with regard to the risk of pulmonary hypertension and look for potential biomarkers for early detection and treatment. Main results/Discussion: 16 Argentine pediatric patients with CHD undergoing cardiopulmonary bypass were randomized in two groups: (A) with and (B) without perioperative citrulline supplementation. We found that plasma citrulline median levels before surgery were lower in both groups respect to referential values, probably due to the poor nutritional status of our patients; only group A surpassed post-surgery the minimum recommended level to avoid PH. Furthermore, none of the patients in group A showed mean PAP higher than 20 mmHg, whereas in group B, 67% of the measurements were ≥ than the reference level. Conclusions: We reaffirm that citrulline supplementation it is effective in reducing postoperative pulmonary hypertension and biomarkers could evidence patient status as a translational medicine application.La hipertensión pulmonar (HP) es una causa importante de morbimortalidad entre pacientes con cardiopatía congénita (CHD) y también una complicación potencialmente grave después de la reparación quirúrgica. La citrulina oral, precursora de la síntesis de óxido nítrico, es segura y eficaz para disminuir el riesgo postoperatorio de HP. Objetivo: El presente estudio tuvo como objetivo investigar en pacientes pediátricos los cambios plasmáticos de los metabolitos citrulina, arginina, homocisteína y óxido nítrico y la presión arterial pulmonar (PAP) antes y después de la cirugía cardíaca para describir el estado de nuestra población con respecto al riesgo de HP y buscar posibles biomarcadores para su detección y tratamiento temprano. Resultados principales / Discusión: 16 pacientes pediátricos argentinos con CHD sometidos a bypass cardiopulmonar fueron aleatorizados en dos grupos: (A) con y (B) sin suplementación perioperatoria de citrulina. Encontramos que los niveles medios de citrulina en plasma antes de la cirugía fueron más bajos en ambos grupos con respecto a los valores referenciales, probablemente debido a un estado nutricional deficiente de nuestros pacientes; solo el grupo A superó el nivel mínimo recomendado para evitar la HP. Además, ninguno de los pacientes en el grupo A mostró una PAP media superior a 20mmHg, mientras que en el grupo B, el 67% de las mediciones fue mayor que el nivel de referencia. Conclusiones: Reafirmamos que la suplementación con citrulina es efectiva para reducir la HP postoperatoria y que los biomarcadores podrían evidenciar el estado del paciente como una aplicación de medicina traslacional.A hipertensão pulmonar (HP) é uma das principais causas de morbimortalidade entre pacientes com cardiopatia congênita (DCC) e também uma complicação potencialmente grave após o reparo cirúrgico. A citrulina oral, precursora da síntese do NO, é segura e eficaz para diminuir o risco de HP pós-operatória. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi investigar em pacientes pediátricos as alterações dos metabólitos plasmáticos da citrulina, arginina, homocisteína e óxido nítrico (NO) e pressões da artéria pulmonar (PAP) pré-pós-cirurgia cardíaca, a fim de descrever nosso status populacional com com relação ao risco de hipertensão pulmonar e procure potenciais biomarcadores para detecção e tratamento precoces. Principais resultados / Discussão: 16 pacientes pediátricos argentinos com DCC submetidos à circulação extracorpórea foram randomizados em dois grupos: (A) com e (B) sem suplementação peri-operatória de citrulina. Descobrimos que os níveis médios de citrulina plasmática antes da cirurgia eram menores nos dois grupos em relação aos valores referenciais, provavelmente devido ao mau estado nutricional de nossos pacientes; somente o grupo A superou no pós-operatório o nível mínimo recomendado para evitar HP. Além disso, nenhum dos pacientes do grupo A apresentou PAP média superior a 20 mmHg, enquanto no grupo B, 67% das medidas foram ≥ acima do nível de referência. Conclusões: Reafirmamos que a suplementação com citrulina é eficaz na redução da hipertensão pulmonar no pósoperatório e os biomarcadores podem evidenciar o status do paciente como aplicação de medicamento translacional.Fil: Silvera Ruiz, Silene Maite. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudios de las Metabolopatías Congénitas; Argentina. Gobierno de la Provincia de Cordoba. Ministerio de Salud. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Grosso, Carola L.. Gobierno de la Provincia de Cordoba. Ministerio de Salud. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Est.de Las Metabolopatias Congenitas. Cátedra de Clinica Pediatrica; ArgentinaFil: Tablada, Margot. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Agropecuarias; ArgentinaFil: Cabrera, Marcelo. Gobierno de la Provincia de Cordoba. Ministerio de Salud. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; ArgentinaFil: Dodelson de Kremer, Raquel. Gobierno de la Provincia de Cordoba. Ministerio de Salud. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Est.de Las Metabolopatias Congenitas. Cátedra de Clinica Pediatrica; ArgentinaFil: Juaneda, Ernesto. Gobierno de la Provincia de Cordoba. Ministerio de Salud. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; ArgentinaFil: Laróvere, Laura Elena. Gobierno de la Provincia de Cordoba. Ministerio de Salud. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Est.de Las Metabolopatias Congenitas. Cátedra de Clinica Pediatrica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentin

Lesch-Nyhan disease and its variants: Phenotypic and mutation spectrum of Hypoxanthine-Guanine Phosphoribosyltransferase deficiency in Argentine patients

Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HPRT) deficiency is a disorder of purine metabolism responsible for Lesch-Nyhan Disease (LND) and its variants, HPRT-related hyperuricemia with neurologic dysfunction (HND) and HPRT-related hyperuricemia (HRH). The objective of this study was to characterize a cohort of Argentine patients with HPRT deficiency diagnosed in a single center. Results: Twenty nine patients were studied, including 12 LND, 15 HND and 2 HRH. The average onset age was 0.64 years for LND with motor delay as the main manifestation, 8.84 years for HND and 2.5 years for HRH; nephrological manifestations predominated as presenting features in these variants. The average diagnosis age was 3.58 years for LND, 17.21 years for HND and 2.5 years for HRH. Clinical heterogeneity was more evident in HND, even in members of the same family. All patients presented hyperuricemia and no detectable HPRT activity in erythrocyte lysate. The molecular study allowed to identify 9 different mutations in HPRT1 gene from 24 patients (11 independent pedigrees) and to establish genotype-phenotype correlation. In conclusion, this study describes the genotypic/phenotypic spectrum of HPRT deficiency in Argentine patients and highlights the need to increase awareness about the suspicion of these diseases, especially the LND variants with high clinical heterogeneity.Fil: Laróvere, Laura Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudios de las Metabolopatías Congénitas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fairbanks, Lynette D.. Purine Research Laboratory, St. Thomass Hosp; Reino UnidoFil: Jinnah, H. A.. University of Emory; Estados UnidosFil: Guelbert, Norberto Bernardo. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad, Córdoba; ArgentinaFil: Escuredo, Emilia. Purine Research Laboratory, St. Thomass Hosp; Reino UnidoFil: Becerra, Adriana Berónica. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad, Córdoba; ArgentinaFil: Dodelson de Kremer, Raquel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudios de las Metabolopatías Congénitas; Argentin

Population-Based Study of New Mutations Causing Sandhoff Disease in Argentina

2pSandhoff Disease (SD) is a lysosomal storage disorder caused by mutations in the HEXB gene. A high incidence of SD has been described in an Argentine region called ‘‘Valle de Traslasierra.’’ Mutations c.445þ1G>A and p.S261Cfs12X were found in 98.7% and 1.3% of mutant alleles, respectively. In previous population-based studies, the carrier frequency has been estimated to be 1 in 16 to 29, all heterozygous with c.445þ1G>A. Recently, we detected new mutations in 5 Argentinian patients: c.1082þ5G>A, c.1242þ1G>A, c.1451G>A (p.Gly484Glu), c.1597C>T (p.Arg533Cys) and c.1601G>A (p.Cys534Tyr).Fil: Mugnaini, Julia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO). Hospital de Niños. Cátedra de Clínica Pediátrica; Argentina.Fil: Dardis, Andrea. Hospital Universitario ‘‘Santa Maria del la Misericordia’’. Centro Coordinador Regional de Enfermedades Raras, Udine; Italia.Fil: Dodelson de Kremer, Raquel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Hospital de Niños. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO). Cátedra de Clínica Pediátrica; ArgentinaFil: Oller Ramírez, Ana María. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Medicas. Hospital de Niños. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO). Cátedra de Clínica Pediátrica; Argentina.Fil: Azar, Nydia Beatriz. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO). Hospital de Niños. Cátedra de Clínica Pediátrica; ArgentinaFil: Becerra, Adriana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO). Hospital de Niños. Cátedra de Clínica Pediátrica; Argentina.Fil; Zampieri, S. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO). Hospital de Niños. Cátedra de Clínica Pediátrica; Argentina.Fil: Guelbert, Norberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO). Hospital de Niños. Cátedra de Clínica Pediátrica; Argentina.Bioquímica y Biología Molecula

Nonequilibrium corrections in the pressure tensor due to an energy flux

The physical interpretation of the nonequilibrium corrections in the pressure tensor for radiation submitted to an energy flux obtained in some previous works is revisited. Such pressure tensor is shown to describe a moving equilibrium system but not a real nonequilibrium situation.Comment: 4 pages, REVTeX, Brief Report to appear in PRE Dec 9

Brincar para aprender para brincar: as experiências e ações extensionistas do Projeto de Lixo a Bicho

Anais do 35º Seminário de Extensão Universitária da Região Sul - Área temática: Educação, Meio AmbienteO Projeto de extensão de “DE LIXO A BICHO: Ações de educação socioambiental por meio de materiais lúdico residuais” é d​ esenvolvido pelo Instituto Federal de Santa Catarina – IFSC, Câmpus Itajaí e tem como objetivo o fomento de vivências e ações extensionistas de educação ambiental junto à comunidade escolar, por meio da utilização de materiais lúdicos residuais oriundos de redes colaborativas. Os brinquedos são produzidos a partir de resíduos limpos obtidos de diversos ramos de atividades industriais e sua criação tem como foco a reflexão sobre as questões ambientais contemporâneas, visando à sensibilização de crianças e jovens no contexto da Educação Básica. As atividades descritas fazem parte de um conjunto de ações que têm como objeto principal os brinquedos criados e produzidos no âmbito desse projeto, cuja ênfase está no fomento às experiências lúdicas voltadas para a educação ambiental numa perspectiva crítica. O primeiro material lúdico desenvolvido pela equipe foi a BICHORUGA, ​ u m a ressignificação do jogo das cinco marias que traz elementos para reflexão sobre a produção, consumo, descarte e gestão de resíduos na sociedade e suas consequências. As ações de extensão têm sido propostas em diversos contextos, atendendo diferentes públicos, desde professores e gestores até crianças do Ensino Básico, na perspectiva do brincar para aprender ou do aprender para brinca

A broad spectrum of genomic changes in latinamerican patients with EXT1/EXT2-CDG

Multiple osteochondromatosis (MO), or EXT1/EXT2-CDG, is an autosomal dominant O-linked glycosylation disorder characterized by the formation of multiple cartilage-capped tumors (osteochondromas). In contrast, solitary osteochondroma (SO) is a non-hereditary condition. EXT1 and EXT2, are tumor suppressor genes that encode glycosyltransferases involved in heparan sulfate elongation. We present the clinical and molecular analysis of 33 unrelated Latin American patients (27 MO and 6 SO). Sixty-three percent of all MO cases presented severe phenotype and two malignant transformations to chondrosarcoma (7%). We found the mutant allele in 78% of MO patients. Ten mutations were novel. The disease-causing mutations remained unknown in 22% of the MO patients and in all SO patients. No second mutational hit was detected in the DNA of the secondary chondrosarcoma from a patient who carried a nonsense EXT1 mutation. Neither EXT1 nor EXT2 protein could be detected in this sample. This is the first Latin American research program on EXT1/EXT2-CDG.Fil: Delgado, M. A.. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Martinez Domenech, G.. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Sarrión, P.. Universidad de Barcelona; EspañaFil: Urreizti, R.. Universidad de Barcelona; EspañaFil: Zecchini, L.. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; ArgentinaFil: Robledo, H. H.. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; ArgentinaFil: Segura, F.. Universidad Nacional de Córdoba; ArgentinaFil: Dodelson de Kremer, Raquel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Balcells, S.. Universidad de Barcelona; EspañaFil: Grinberg, D.. Universidad de Barcelona; EspañaFil: Asteggiano, Carla Gabriela. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Est.de Las Metabolopatias Congenitas. Cátedra de Clinica Pediatrica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentin

Identification and functional analyses of CBS alleles in Spanish and Argentinian homocystinuric patients

Homocystinuria due to CBS deficiency is a rare autosomal recessive disorder characterized by elevated plasma levels of homocysteine (Hcy) and methionine (Met). Here we present the analysis of 22 unrelated patients of different geographical origins, mainly Spanish and Argentinian. Twenty‐two different mutations were found, 10 of which were novel. Five new mutations were missense and five were deletions of different sizes, including a 794‐bp deletion (c.532−37_736 + 438del794) detected by Southern blot analysis. To assess the pathogenicity of these mutations, seven were expressed heterologously in Escherichia coli and their enzyme activities were assayed in vitro, in the absence and presence of the CBS activators PLP and SAM. The presence of the mutant proteins was confirmed by Western blotting. Mutations p.M173del, p.I278S, p.D281N, and p.D321V showed null activity in all conditions tested, whereas mutations p.49L, p.P200L and p.A446S retained different degrees of activity and response to stimulation. Finally, a minigene strategy allowed us to demonstrate the pathogenicity of an 8‐bp intronic deletion, which led to the skipping of exon 6. In general, frameshifting deletions correlated with a more severe phenotype, consistent with the concept that missense mutations may recover enzymatic activity under certain conditions