Sap-specifikus fehérjekölcsönhatások azonosítása és szerepük a T-limfocita funkciókban = Identification of sap-specific protein interactions in T-cells and their role in T-cell function

A pályázat fő célkitűzése a SLAM (signaling limfocilymphocyte activation molecule) koreceptor molekula immunregulációs szerepének vizsgálata volt. A SAP (SLAM associated protein ) és az EAT-2 (Ewing Sarcoma Associated Transcript-2) szerepe a SLAM család receptorainak szignalizációs folyamataiban bizonyított. Kimutattuk, hogy a SAP és az EAT-2 molekula a Fyn molekulán kívül a Hck, az Lck a Lyn, és az Fgr kinázzal is képes kapcsolódni. Ezen interakciók nem az SH3, hanem a kináz domén kapcsolódásával jönnek létre. A src-családba tartozó kinázok aktivitásának szabályozása a kináz doménnel történő interakción keresztül eddig ismeretlen, így az általunk felfedezett interakciók egy új szabályozó mechanizmus megismeréséhez vezethetnek. Az aktivált dendritikus sejtek és T-sejtek felszínén expresszálódó SLAM receptor indukálta szignalizációs folyamatok modellezésére in vitro kísérleti rendszert állítottunk be és vizsgáltuk a SLAM szignalizáció CD40L- és/vagy LPS-aktivációra gyakorolt hatását dendritikus sejtekben. Kimutattuk, hogy a SLAM receptor homo-asszociációja általi szignalizáció gátolja dendritikus sejtek CD40ligandum-indukálta gyulladási citokin termelését. (IL-12, TNF-?, IL-6) és csökkenti a naív T-sejtek Th1 irányba történő differenciációját. Valószínűsíthető, hogy DS-T-sejt interakció során létrejövő SLAM homoasszociáció szerepet játszhat a autoimmun eredetű gyulladási folyamatok kialakulásának gátlásában vagy azok intenzitásának csökkentésében. | SLAM (Signaling Lymphocyte Activation Molecule, CD150) is a self-ligand receptor on the surface of activated T- and B-lymphocytes, macrophages and dendritic cells (DCs). Here we have examined the effect of SLAM signaling on dendritic cell functions. The single SH2-domain adaptors SAP (SLAM associated protein ) and EAT-2 (Ewing Sarcoma Associated Transcript-2) are major regulators of SLAM signaling. We found that SAP and EAT-2 interact with Src kinases including Hck, Lck, Lyn, and Fgr both in yeast and in transfected cell lines. Surprisingly, these interactions occur via the kinase domain rather than the SH3-domain of the kinase. The interaction of these adaptors with the kinase domain of Src kinases indicates that a novel pathway may exist to modulate the activity of Src-kinases. To examine the effect of SLAM signaling on CD40L and/or LPS induced dendritic cell functions we developed an in vitro model system. We found that SLAM-signaling strongly inhibited CD40L-induced production of IL-12, IL-6, TNF-?. LPS-induced IL-12 secretion, however, was not inhibited, rather increased by SLAM-engagement. Finally, CD40L-activated DCs affected by exposure to SLAM/SLAM engagement were impaired in their ability to induce differentiation of na?ve T lymphocytes into IFN-? producing Th1 effector cells. These findings implicate SLAM as a potent regulator of physiological or pathological inflammatory responses that may have an impact on the clinical management of autoimmune diseases

Early phenomena following cryogenic lesion of rat brain : a preliminary study

The cerebrovascular laminin becomes detectable following lesions, whereas the lamina basalis-receptor β-dystroglycan disappears. These alterations may be indirect markers of a glio-vascular detachment which may result in the impairment of blood-brain-barrier. The present study estimates the correlations between the post-lesion exudation and the aforementioned phenomena. Lesions were performed in ketamine-xylazine anaesthesia with a copper rod cooled with dry ice. Immediately, or in 5 or 10 min brains were fixed in buffered 4% paraformaldehyde. Immunohistochemical reactions were performed in floating sections. Exudation was estimated with immunohistochemical detection of plasma-fibronectin and immunoglobulins. Glio-vascular connections were investigated with immunohistochemistry (GFAP, S100, glutamine synthetase), and electron microscopy. Laminin immunoreactivity appeared already at immediate fixation. Exudate was found only around the vessels. β-dystroglycan was still detectable. At five-ten minutes the territory of exudate became confluent and dystroglycan disappeared. Some but not all vessels were free of astrocytes. Electron microscopy demonstrated wide perivascular ’spaces’. ’In vivo’ monitoring was attempted with a multiphoton microscope in the Department of Biophysics of Semmelweis University. Astrocytes were labeled supravitally with sulforhodamine 101 so glio-vascular connections were visible. However, neither in the intact brain nor in 30-min post-lesion period astrocyte motility was observed

Dendritikus sejt altípusok együttműködése fiziológiás és kóros állapotban = The interplay of dendritic cell subtypes in health and disease

A dendritikus sejtek (DC) az immunfolyamatok fontos irányítói, melyek alapvető szerepet játszanak a központi és perifériás tolerancia és a gyulladásos folyamatok kiváltásában, fenntartásában és szabályozásában. Kis számuk ellenére számos, fenotípus és funkció alapján eltérő alcsoportot képviselnek. Kutatási koncepciónk szerint a DC altípusok a DC készlet védelmét, a hatékony feladatmegosztást és a celluláris együttműködési lehetőségek kihasználását szolgálja. Ennek alapján a plazmacitoid DC-ek és a monocita eredetű DC-ek altípusainak aktivációban betöltött szerepét vizsgáltuk és a DC stimulációban elsődleges szerepet játszó membránhoz kötött, valamint citoplazmatikus mintázatfelismerő receptorok ligand általi aktivációját követő jelátviteli pályák együttműködésére összpontosítottunk. Eredményeink a konvencionális és plazmacitoid DC-ekben is igazolták, hogy a mintázatfelismerő receptorok (PRR) kifejeződése még a ligandum jelenlétében sem elegendő feltétele funkcionális aktivitásuknak, hanem azt a jelpályák egymást erősítő vagy gátló hatása határozza meg. Ennek megfelelően az általunk vizsgált, lokalizációjukban eltérő, de működésük alapján átfedő aktivitással rendelkező PRR-ok által kiváltott jelek egymásra hatása alapvetően meghatározza a DC-ek válaszát és így a természetes és adaptív immunválasz irányultságát, mértékét és kimenetelét. | Dendritic cells (DC) are important regulators of immune responses, which play a pivotal role in the induction, maintenance and regulation of both peripheral tolerance and inflammation. Despite their low numbers, DC involve phenotypically and functionally distinct subtypes and subsets. Based on our concept of research, DC subtypes and subsets serve the maintenance of the DC pool, support appropriate labour distribution and promotes cell-to-cell collaborations. Thus we investigated the role of plasmacytoid DC and monocyte-derived DC subsets in the activation process of these cells and focused to the cross-talk of signaling pathways triggered by the ligation of membrane integrated and cytosolic pattern recognition receptors (PRR). Our results performed with both conventional and plasmacytoid DC revealed that the expression of PRR and their ligation by specific ligand by itself is not sufficient to induce functionality, but is highly dependent on the synergistic or inhibitory interplay of the signaling cascades actually triggered. In accordance with these findings we suggest that the collaboration of signaling cascades induced by PRR with distinct cellular localizations but overlapping functions determine the cellular response of DC and subsequently the polarization, extent and outcome of the immune response

The Homolog of the Five SH3-Domain Protein (HOFI/SH3PXD2B) Regulates Lamellipodia Formation and Cell Spreading

Motility of normal and transformed cells within and across tissues requires specialized subcellular structures, e.g. membrane ruffles, lamellipodia and podosomes, which are generated by dynamic rearrangements of the actin cytoskeleton. Because the formation of these sub-cellular structures is complex and relatively poorly understood, we evaluated the role of the adapter protein SH3PXD2B [HOFI, fad49, Tks4], which plays a role in the development of the eye, skeleton and adipose tissue. Surprisingly, we find that SH3PXD2B is requisite for the development of EGF-induced membrane ruffles and lamellipodia, as well as for efficient cellular attachment and spreading of HeLa cells. Furthermore, SH3PXD2B is present in a complex with the non-receptor protein tyrosine kinase Src, phosphorylated by Src, which is consistent with SH3PXD2B accumulating in Src-induced podosomes. Furthermore, SH3PXD2B closely follows the subcellular relocalization of cortactin to Src-induced podosomes, EGF-induced membrane ruffles and lamellipodia. Because SH3PXD2B also forms a complex with the C-terminal region of cortactin, we propose that SH3PXD2B is a scaffold protein that plays a key role in regulating the actin cytoskeleton via Src and cortactin