Ocorrencia de beta-lactamases de espectro ampliado em enterobactérias isoladas em dois hospitais universitários

Orientadora : Ilma Hiroko HigutiCo-orientadora : Libera Maria Dalla CostaDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografiaResumo: A produção de beta-lactamases de espectro ampliado (ESBL) é um importante mecanismo de resistência aos antimicrobianos beta- lactâmicos em Enterobactérias. Sua pesquisa deve ser realizada para evitar que resultados falsos sensíveis paràs cefalosporinas e aztreonam sejam reportados nos testes de sensibilidade. Além disso, informações sobre a ocorrência de ESBL, contribuem para que medidas preventivas sejam tomadas, a fim de diminuir disseminação desse mecanismo de resistência entre as bactérias. A pesquisa de ESBL é padronizada pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) apenas para Klebsiella spp. e Escherichia coli, entretanto, as ESBL têm tido crescente incidência também em outras enterobactérias. Para determinação da ocorrência de ESBL em dois hospitais universitários de Curitiba, 498 amostras de enterobactérias foram triadas por disco-difusão, observando-se a redução do halo de sensibilidade a aztreonam, ceftriaxona, cefpodoxima, ceftazidima ou cefotaxima. Entre as amostras bacterianas testadas, 155 foram positivas no teste de triagem para ESBL, das quais 121 (78%) foram confirmadas pelo teste de adição de ácido clavulânico. A ocorrência de ESBL encontrada foi de 24%, sendo em Klebsiella pneumoniae de 57,4 %, em Klebsiella oxytoca de 21,4% e em Escherichia coli de 7,2%. Em outras enterobactérias não-Klebsiella spp. e não-Escherichia coli a ocorrência foi 21,6%, demonstrando a necessidade da pesquisa de ESBL também nessas espécies. A ceftriaxona e cefotaxima foram os antimicrobianos com maior sensibilidade no teste de triagem (99,2%) e a combinação cefotaxima/cefotaxima + ácido clavulânico foi a mais sensível no teste confirmatório (96,7%).Abstract: Production of Extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) is an important mechanism of antimicrobial resistance in enterobacteria. Its detection should be made to avoid reports of false susceptibility results by routine susceptibility tests in producer strains, and also gives information for the adoption of control measures to reduce dissemination of this mechanism of resistance among bacteria. Detection is standardized by NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standard) only for Klebsiella spp. and E. coli, however, ESBL has increasing occurrence also in other enterobacteria. To determine the occurrence of ESBL in two teaching hospitals of Curitiba, 498 isolates of enterobacteria were tested by disk diffusion to select ESBL-producing bacteria, through the susceptibility reduction of aztreonam, ceftriaxone, cefpodoxime, ceftazidime and cefotaxime, recommended by NCCLS. Out of 498 isolates, 155 were positive in the initial screen test and 121 were confirmed by clavulanic acid disk diffusion test. This work have shown that the occurrence of ESBL in these hospitals is high (24%), with the percentage in K. pneumoniae of 57,4%, K. oxytoca 21,4% and E. coli 7,2%. Among other enterobacteria non-Klebsiella spp. and non-E. coli the occurrence has 21, 6%, shown that to search of ESBL is necessary also in this species. Ceftriaxone and Cefotaxime were the antibiotics with higher sensitivity for initial screen test (99, 2%) and the combination of cefotaxime/cefotaxime + clavulanic acid was the most sensitive for confirmatory test

Prevalência e caracterização molecular de Beta-Lactamases de espectro ampliado (ESBL) em enterobactérias isoladas no Hospital de Clínicas de Curitiba.

Orientadora : Profa. Dra.Iara Taborda Messias ReasonCo-orientadora : Profa. Drª Libera Maria Dalla CostaTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 03/05/2011Bibliografia: fls. 138-162Área de concentração: Análises ClínicasResumo: A resistencia em enterobacterias esta aumentando de forma alarmante no mundo todo. Este trabalho avaliou a ocorrencia de ƒÀ-lactamases de espectro ampliado (ESBLs) em 1827 amostras de enterobacterias isoladas de pacientes internados no Hospital de Clinicas da Universidade Federal do Parana, no periodo de 2003 a 2008. A deteccao de ƒÀ-lactamases foi realizada por testes fenotipicos (duplo disco difusao, disco combinado, teste de Hodge) e genotipicos (reacao em cadeia da polimerase e sequenciamento). A similaridade genetica entre as cepas foi determinada por eletroforese em campo pulsado (PFGE) e a suscetibilidade aos antimicrobianos por microdiluicao em agar. Os fatores de risco e desfecho clinico associados com cepas produtoras de ESBL foram avaliados por um estudo de caso-controle. Entre as amostras testadas, 382 (20,9%) foram confirmadas como produtoras de ESBL, sendo o tipo CTX-M encontrado em 284 amostras (74,3% das ESBLs), o tipo SHV em 84 amostras (22,0%), o tipo CTX-M junto com SHV em dez amostras (2,6%), o tipo TEM em duas amostras (0,6%) e o tipo PER tambem em duas amostras (0,6%). Os micro-organismos produtores de ESBL apresentaram 99,3% de sensibilidade a imipenem, 98,2% a meropenem, 86,4% ao ertapenem e 90,3% a tigeciclina. Seguindo os novos criterios do Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI, 2010), 19,6% das amostras produtoras de ESBL seriam reportadas como sensiveis a ceftazidima, ; 4,3% a cefotaxima, 10,4% ao aztreonam e 12,14% ao cefepime, respectivamente. A deteccao de ESBL em Enterobacter spp. apresentou melhor sensibilidade quando foi usado o cefepime como substrato ou quando inibidores de AmpC foram adicionados ao agar. A disseminacao das amostras produtoras de ESBL CTX-M foi predominantemente clonal em Enterobacter aerogenes e policlonal nas demais especies, com alguns grupos de amostras relacionadas. A presenca de ESBL em Enterobacter spp. causadores de bacteremias nao aumentou a mortalidade, porem, aumentou o tempo de permanencia dos pacientes no hospital. Nao foram encontradas ƒÀ-lactamases AmpC plasmidianas (pAmpC) ou carbapenamases nas amostras de 2003 a 2008. Essas ƒÀ-lactamases foram encontradas apenas em 2010, sendo a pAmpC do tipo CMY-2 encontrada em tres isolados de E. coli nao relacionados e a carbapenemase do tipo KPC-2 encontrada em tres isolados de K. pneumoniae altamente relacionados. Estudos epidemiologicos sao importantes para determinar a prevalencia e vias de trasmissao das cepas produtoras de ƒÀ-lactamases e, assim, fornecer dados para estabeler protocolos de deteccao laboratorial, terapia e intervencoes para reducao da disseminacao da resistencia.Abstract: The resistance in Enterobacteriaceae is increasing worldwide. This study has evaluated the occurrence of extended spectrum â-lactamases (ESBL) in 1827 samples of Enterobacteria isolated from patients at the Clinical Hospital, Federal University of Parana, during 2003 to 2008. The detection of â-lactamases was performed by phenotypic tests (double disc diffusion, combined disk, Hodge) and genotypic tests (polymerase chain reaction and sequencing). The genetic similarity among strains was determined by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and the antimicrobial susceptibility by agar microdilution. Risk factors and clinical outcomes associated with ESBL producing strains were evaluated by a case-control study. Among the samples tested, 382 (20.9%) were confirmed as ESBL producers and the CTX-M group found in 284 (74.3%) isolates, the SHV group in 84 (22.0%), the TEM group and the PER group in two isolates (0.6% each of them) and the CTX-M plus SHV group togheter in dez isolates (2.6%). The 99.3% of the ESBL producing organisms were imipenem susceptible, 98.2% meropenem, 86.4% ertapenem and 90.3% tigecycline susceptible. Following the new Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI, 2010) breakpoints 19.6%, 4.3%, 10.4% and 12.14% of ESBL would be reported as ceftazidime, cefotaxime, aztreonam and cefepime susceptible respectively. The ESBL detection in Enterobacter spp. isolates has showed better sensitivity when cefepime was used as substrate or when AmpC inhibitors were added to the agar. The spread of the CTX-M ESBL-producing organisms was mainly clonal in Enterobacter aerogenes and polyclonal, with some groups of related strains, in other species. The ESBL production in Enterobacter spp. causing bacteremia has not increased the mortality, but has caused longer hospital stay. Plasmid AmpC and carbapenamases were not found in samples from 2003-2008, appearing only in strains isolated in 2010. The CMY-2 plasmid AmpC were found in three polyclonal strains of E. coli and KPC carbapenemase were found in three clone strains of K. pneumoniae. Epidemiological studies are important to determine the prevalence and routes of dissemination of â-lactamases producing strains, thus preventing the spread of resistance

Detection of PER-2-Producing Enterobacter cloacae in a Brazilian Liver Transplantation Unit

Universidade Federal de São Paulo, Dept Med, Lab Alerta, São Paulo, BrazilUniv Fed Parana, Hosp Clin, BR-80060000 Curitiba, Parana, BrazilFac & Inst Pesquisa Pele Pequeno Principe, Curitiba, Parana, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Med, Lab Alerta, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Ocorrencia de beta-lactamases de espectro ampliado em enterobactérias isoladas em dois hospitais universitários

Orientadora : Ilma Hiroko HigutiCo-orientadora : Libera Maria Dalla CostaDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografiaResumo: A produção de beta-lactamases de espectro ampliado (ESBL) é um importante mecanismo de resistência aos antimicrobianos beta- lactâmicos em Enterobactérias. Sua pesquisa deve ser realizada para evitar que resultados falsos sensíveis paràs cefalosporinas e aztreonam sejam reportados nos testes de sensibilidade. Além disso, informações sobre a ocorrência de ESBL, contribuem para que medidas preventivas sejam tomadas, a fim de diminuir disseminação desse mecanismo de resistência entre as bactérias. A pesquisa de ESBL é padronizada pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) apenas para Klebsiella spp. e Escherichia coli, entretanto, as ESBL têm tido crescente incidência também em outras enterobactérias. Para determinação da ocorrência de ESBL em dois hospitais universitários de Curitiba, 498 amostras de enterobactérias foram triadas por disco-difusão, observando-se a redução do halo de sensibilidade a aztreonam, ceftriaxona, cefpodoxima, ceftazidima ou cefotaxima. Entre as amostras bacterianas testadas, 155 foram positivas no teste de triagem para ESBL, das quais 121 (78%) foram confirmadas pelo teste de adição de ácido clavulânico. A ocorrência de ESBL encontrada foi de 24%, sendo em Klebsiella pneumoniae de 57,4 %, em Klebsiella oxytoca de 21,4% e em Escherichia coli de 7,2%. Em outras enterobactérias não-Klebsiella spp. e não-Escherichia coli a ocorrência foi 21,6%, demonstrando a necessidade da pesquisa de ESBL também nessas espécies. A ceftriaxona e cefotaxima foram os antimicrobianos com maior sensibilidade no teste de triagem (99,2%) e a combinação cefotaxima/cefotaxima + ácido clavulânico foi a mais sensível no teste confirmatório (96,7%).Abstract: Production of Extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) is an important mechanism of antimicrobial resistance in enterobacteria. Its detection should be made to avoid reports of false susceptibility results by routine susceptibility tests in producer strains, and also gives information for the adoption of control measures to reduce dissemination of this mechanism of resistance among bacteria. Detection is standardized by NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standard) only for Klebsiella spp. and E. coli, however, ESBL has increasing occurrence also in other enterobacteria. To determine the occurrence of ESBL in two teaching hospitals of Curitiba, 498 isolates of enterobacteria were tested by disk diffusion to select ESBL-producing bacteria, through the susceptibility reduction of aztreonam, ceftriaxone, cefpodoxime, ceftazidime and cefotaxime, recommended by NCCLS. Out of 498 isolates, 155 were positive in the initial screen test and 121 were confirmed by clavulanic acid disk diffusion test. This work have shown that the occurrence of ESBL in these hospitals is high (24%), with the percentage in K. pneumoniae of 57,4%, K. oxytoca 21,4% and E. coli 7,2%. Among other enterobacteria non-Klebsiella spp. and non-E. coli the occurrence has 21, 6%, shown that to search of ESBL is necessary also in this species. Ceftriaxone and Cefotaxime were the antibiotics with higher sensitivity for initial screen test (99, 2%) and the combination of cefotaxime/cefotaxime + clavulanic acid was the most sensitive for confirmatory test

Prevalência e caracterização molecular de Beta-Lactamases de espectro ampliado (ESBL) em enterobactérias isoladas no Hospital de Clínicas de Curitiba.

Orientadora : Profa. Dra.Iara Taborda Messias ReasonCo-orientadora : Profa. Drª Libera Maria Dalla CostaTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 03/05/2011Bibliografia: fls. 138-162Área de concentração: Análises ClínicasResumo: A resistencia em enterobacterias esta aumentando de forma alarmante no mundo todo. Este trabalho avaliou a ocorrencia de ƒÀ-lactamases de espectro ampliado (ESBLs) em 1827 amostras de enterobacterias isoladas de pacientes internados no Hospital de Clinicas da Universidade Federal do Parana, no periodo de 2003 a 2008. A deteccao de ƒÀ-lactamases foi realizada por testes fenotipicos (duplo disco difusao, disco combinado, teste de Hodge) e genotipicos (reacao em cadeia da polimerase e sequenciamento). A similaridade genetica entre as cepas foi determinada por eletroforese em campo pulsado (PFGE) e a suscetibilidade aos antimicrobianos por microdiluicao em agar. Os fatores de risco e desfecho clinico associados com cepas produtoras de ESBL foram avaliados por um estudo de caso-controle. Entre as amostras testadas, 382 (20,9%) foram confirmadas como produtoras de ESBL, sendo o tipo CTX-M encontrado em 284 amostras (74,3% das ESBLs), o tipo SHV em 84 amostras (22,0%), o tipo CTX-M junto com SHV em dez amostras (2,6%), o tipo TEM em duas amostras (0,6%) e o tipo PER tambem em duas amostras (0,6%). Os micro-organismos produtores de ESBL apresentaram 99,3% de sensibilidade a imipenem, 98,2% a meropenem, 86,4% ao ertapenem e 90,3% a tigeciclina. Seguindo os novos criterios do Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI, 2010), 19,6% das amostras produtoras de ESBL seriam reportadas como sensiveis a ceftazidima, ; 4,3% a cefotaxima, 10,4% ao aztreonam e 12,14% ao cefepime, respectivamente. A deteccao de ESBL em Enterobacter spp. apresentou melhor sensibilidade quando foi usado o cefepime como substrato ou quando inibidores de AmpC foram adicionados ao agar. A disseminacao das amostras produtoras de ESBL CTX-M foi predominantemente clonal em Enterobacter aerogenes e policlonal nas demais especies, com alguns grupos de amostras relacionadas. A presenca de ESBL em Enterobacter spp. causadores de bacteremias nao aumentou a mortalidade, porem, aumentou o tempo de permanencia dos pacientes no hospital. Nao foram encontradas ƒÀ-lactamases AmpC plasmidianas (pAmpC) ou carbapenamases nas amostras de 2003 a 2008. Essas ƒÀ-lactamases foram encontradas apenas em 2010, sendo a pAmpC do tipo CMY-2 encontrada em tres isolados de E. coli nao relacionados e a carbapenemase do tipo KPC-2 encontrada em tres isolados de K. pneumoniae altamente relacionados. Estudos epidemiologicos sao importantes para determinar a prevalencia e vias de trasmissao das cepas produtoras de ƒÀ-lactamases e, assim, fornecer dados para estabeler protocolos de deteccao laboratorial, terapia e intervencoes para reducao da disseminacao da resistencia.Abstract: The resistance in Enterobacteriaceae is increasing worldwide. This study has evaluated the occurrence of extended spectrum â-lactamases (ESBL) in 1827 samples of Enterobacteria isolated from patients at the Clinical Hospital, Federal University of Parana, during 2003 to 2008. The detection of â-lactamases was performed by phenotypic tests (double disc diffusion, combined disk, Hodge) and genotypic tests (polymerase chain reaction and sequencing). The genetic similarity among strains was determined by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and the antimicrobial susceptibility by agar microdilution. Risk factors and clinical outcomes associated with ESBL producing strains were evaluated by a case-control study. Among the samples tested, 382 (20.9%) were confirmed as ESBL producers and the CTX-M group found in 284 (74.3%) isolates, the SHV group in 84 (22.0%), the TEM group and the PER group in two isolates (0.6% each of them) and the CTX-M plus SHV group togheter in dez isolates (2.6%). The 99.3% of the ESBL producing organisms were imipenem susceptible, 98.2% meropenem, 86.4% ertapenem and 90.3% tigecycline susceptible. Following the new Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI, 2010) breakpoints 19.6%, 4.3%, 10.4% and 12.14% of ESBL would be reported as ceftazidime, cefotaxime, aztreonam and cefepime susceptible respectively. The ESBL detection in Enterobacter spp. isolates has showed better sensitivity when cefepime was used as substrate or when AmpC inhibitors were added to the agar. The spread of the CTX-M ESBL-producing organisms was mainly clonal in Enterobacter aerogenes and polyclonal, with some groups of related strains, in other species. The ESBL production in Enterobacter spp. causing bacteremia has not increased the mortality, but has caused longer hospital stay. Plasmid AmpC and carbapenamases were not found in samples from 2003-2008, appearing only in strains isolated in 2010. The CMY-2 plasmid AmpC were found in three polyclonal strains of E. coli and KPC carbapenemase were found in three clone strains of K. pneumoniae. Epidemiological studies are important to determine the prevalence and routes of dissemination of â-lactamases producing strains, thus preventing the spread of resistance

Distribution of extended-spectrum β-lactamase types in a Brazilian tertiary hospital

INTRODUCTION: Epidemiological data on the prevalence of extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) are scarce in Brazil despite the fact that these data are essential for empirical treatment and control measures. The objective of this study was to evaluate the prevalence of different ESBLs by type and distribution in a tertiary hospital in southern Brazil. METHODS: We evaluated 1,827 enterobacterial isolates between August 2003 and March 2008 isolated from patients at a tertiary hospital. Samples were identified using a Vitek automated system and were confirmed by biochemical testing. The identified ESBL strains were characterized by phenotypic methods, polymerase chain reaction (PCR), and sequencing. Genetic similarities were evaluated by pulsed-field gel electrophoresis. RESULTS: It was 390 (21.3%) ESBL-producing strains, which expressed the ESBLs CTX-M (292), SHV (84), CTX and SHV (10), TEM (2), and PER (2). CONCLUSIONS: The prevalence of ESBL-expressing strains was high, especially in Klebsiella pneumoniae and Enterobacter spp. CTX-M was the predominant type of ESBL observed, and its genetic variability indicates a polyclonal distribution

Is it possible to perform bacterial identification and antimicrobial susceptibility testing with a positive blood culture bottle for quick diagnosis of bloodstream infections?

Abstract INTRODUCTION: Bloodstream infections can be fatal, and timely identification of the etiologic agent is important for treatment. METHODOLOGY: An alternative method, consisting of direct identification and susceptibility testing of blood culture bottles using the automated VITEK 2® system, was assessed. RESULTS: All 37 of the Gram-negative bacilli (GNB) identifications and 57.1% of the 28 Gram-positive cocci (GPC) identifications matched those obtained with standard methods. In susceptibility testing, the agreement was greater than 90%. CONCLUSIONS: This alternative methodology may assist in the early identification and susceptibility testing of GNB. Further research is necessary to develop appropriate methods for GPC

Is it possible to perform bacterial identification and antimicrobial susceptibility testing with a positive blood culture bottle for quick diagnosis of bloodstream infections?

<div><p>Abstract INTRODUCTION: Bloodstream infections can be fatal, and timely identification of the etiologic agent is important for treatment. METHODOLOGY: An alternative method, consisting of direct identification and susceptibility testing of blood culture bottles using the automated VITEK 2® system, was assessed. RESULTS: All 37 of the Gram-negative bacilli (GNB) identifications and 57.1% of the 28 Gram-positive cocci (GPC) identifications matched those obtained with standard methods. In susceptibility testing, the agreement was greater than 90%. CONCLUSIONS: This alternative methodology may assist in the early identification and susceptibility testing of GNB. Further research is necessary to develop appropriate methods for GPC.</p></div