Orientadora : Profa. Dra.Iara Taborda Messias ReasonCo-orientadora : Profa. Drª Libera Maria Dalla CostaTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 03/05/2011Bibliografia: fls. 138-162Área de concentração: Análises ClínicasResumo: A resistencia em enterobacterias esta aumentando de forma alarmante no mundo todo. Este trabalho avaliou a ocorrencia de ƒÀ-lactamases de espectro ampliado (ESBLs) em 1827 amostras de enterobacterias isoladas de pacientes internados no Hospital de Clinicas da Universidade Federal do Parana, no periodo de 2003 a 2008. A deteccao de ƒÀ-lactamases foi realizada por testes fenotipicos (duplo disco difusao, disco combinado, teste de Hodge) e genotipicos (reacao em cadeia da polimerase e sequenciamento). A similaridade genetica entre as cepas foi determinada por eletroforese em campo pulsado (PFGE) e a suscetibilidade aos antimicrobianos por microdiluicao em agar. Os fatores de risco e desfecho clinico associados com cepas produtoras de ESBL foram avaliados por um estudo de caso-controle. Entre as amostras testadas, 382 (20,9%) foram confirmadas como produtoras de ESBL, sendo o tipo CTX-M encontrado em 284 amostras (74,3% das ESBLs), o tipo SHV em 84 amostras (22,0%), o tipo CTX-M junto com SHV em dez amostras (2,6%), o tipo TEM em duas amostras (0,6%) e o tipo PER tambem em duas amostras (0,6%). Os micro-organismos produtores de ESBL apresentaram 99,3% de sensibilidade a imipenem, 98,2% a meropenem, 86,4% ao ertapenem e 90,3% a tigeciclina. Seguindo os novos criterios do Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI, 2010), 19,6% das amostras produtoras de ESBL seriam reportadas como sensiveis a ceftazidima, ; 4,3% a cefotaxima, 10,4% ao aztreonam e 12,14% ao cefepime, respectivamente. A deteccao de ESBL em Enterobacter spp. apresentou melhor sensibilidade quando foi usado o cefepime como substrato ou quando inibidores de AmpC foram adicionados ao agar. A disseminacao das amostras produtoras de ESBL CTX-M foi predominantemente clonal em Enterobacter aerogenes e policlonal nas demais especies, com alguns grupos de amostras relacionadas. A presenca de ESBL em Enterobacter spp. causadores de bacteremias nao aumentou a mortalidade, porem, aumentou o tempo de permanencia dos pacientes no hospital. Nao foram encontradas ƒÀ-lactamases AmpC plasmidianas (pAmpC) ou carbapenamases nas amostras de 2003 a 2008. Essas ƒÀ-lactamases foram encontradas apenas em 2010, sendo a pAmpC do tipo CMY-2 encontrada em tres isolados de E. coli nao relacionados e a carbapenemase do tipo KPC-2 encontrada em tres isolados de K. pneumoniae altamente relacionados. Estudos epidemiologicos sao importantes para determinar a prevalencia e vias de trasmissao das cepas produtoras de ƒÀ-lactamases e, assim, fornecer dados para estabeler protocolos de deteccao laboratorial, terapia e intervencoes para reducao da disseminacao da resistencia.Abstract: The resistance in Enterobacteriaceae is increasing worldwide. This study has evaluated the occurrence of extended spectrum â-lactamases (ESBL) in 1827 samples of Enterobacteria isolated from patients at the Clinical Hospital, Federal University of Parana, during 2003 to 2008. The detection of â-lactamases was performed by phenotypic tests (double disc diffusion, combined disk, Hodge) and genotypic tests (polymerase chain reaction and sequencing). The genetic similarity among strains was determined by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and the antimicrobial susceptibility by agar microdilution. Risk factors and clinical outcomes associated with ESBL producing strains were evaluated by a case-control study. Among the samples tested, 382 (20.9%) were confirmed as ESBL producers and the CTX-M group found in 284 (74.3%) isolates, the SHV group in 84 (22.0%), the TEM group and the PER group in two isolates (0.6% each of them) and the CTX-M plus SHV group togheter in dez isolates (2.6%). The 99.3% of the ESBL producing organisms were imipenem susceptible, 98.2% meropenem, 86.4% ertapenem and 90.3% tigecycline susceptible. Following the new Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI, 2010) breakpoints 19.6%, 4.3%, 10.4% and 12.14% of ESBL would be reported as ceftazidime, cefotaxime, aztreonam and cefepime susceptible respectively. The ESBL detection in Enterobacter spp. isolates has showed better sensitivity when cefepime was used as substrate or when AmpC inhibitors were added to the agar. The spread of the CTX-M ESBL-producing organisms was mainly clonal in Enterobacter aerogenes and polyclonal, with some groups of related strains, in other species. The ESBL production in Enterobacter spp. causing bacteremia has not increased the mortality, but has caused longer hospital stay. Plasmid AmpC and carbapenamases were not found in samples from 2003-2008, appearing only in strains isolated in 2010. The CMY-2 plasmid AmpC were found in three polyclonal strains of E. coli and KPC carbapenemase were found in three clone strains of K. pneumoniae. Epidemiological studies are important to determine the prevalence and routes of dissemination of â-lactamases producing strains, thus preventing the spread of resistance
