Sobrevivência e obtenção de mutantes induzidos por agentes mutagênicos em Metarhizium anisopliae

Uma linhagem selvagem do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae foi submetida à ação de três agentes mutagênicos: radiação gama, luz ultravioleta e ácido nitroso. Curvas de sobrevivência foram obtidas para cada mutagênicos utilizado e mutantes foram selecionados a partir de doses dos mutagênicos que proporcionassem de 1 a 5% de sobrevivência. Mutantes morfológicos para a coloração de conídios e mutantes auxotróficos foram isolados. Mutantes para coloração de conidios foram agrupados em duas classes, uma com conídios amarelos e outra com conídios vinho pálido. Os mutantes auxotróficos obtidos foram deficientes para aminoácidos e vitaminas e mais de 58% deles eram auxotróficos para prolina/argmina. Radiação gama foi o mutagênico mais eficiente com uma porcentagem de obtenção de mulantes auxotróficos de aproximadamente 0,2%, seguido pela luz ultravioleta (0.12%) e pelo ácido nitroso (0.06%).Os mulantes morfológicos e auxotróficos obtidos até o momento em Metarhizium anisopliae foram revistos.A wild strain of Metarhizium anisopliae, an entomopathogenic fungus, was submitted to three mutagenic agents: gamma radiation, ultraviolet light and nitrous acid. Survival curves were obtained and mutants were selected using different mutagenic doses which gave 1 to 5% survival. Morphological and auxotrophic mutants were isolated. Morphological mutants were grouped in a class with yellow conidia and other with pale vinaceous conidia as opposed to the green wild type conidia. Auxotrophic mutants had requirements for vitamin and aminoacid biosynthesis. More than 58% of the total auxotrophk mutants required proline/aipnine. Gamma radiation showed to be the most efficient mutagenic agent giving 0.2% of auxotrophk mutants followed by ultraviolet light (0.12%) and nitrous acid (0.06%).The conidial colour and auxotrophk mutants isolated until now from M. anisopliae were reviewed

Bioprospecção de bactérias isoladas de milho para promoção de crescimento de plantas.

Isolados bacterianos associados a raízes de milho identificados por sequenciamento parcial do gene 16S RNAr foram avaliados em testes de promoção de crescimento vegetal. Também foram conduzidos testes in vitro para a capacidade de produção de sideróforos, solubilização de fosfato, produção de AIA, FBN e produção de enzimas líticas. Cinco isolados apresentaram resultados promissores na caracterização enzimática e nos testes de atividade promotora de crescimento e, portanto, poderão ser avaliados in vivo quanto a parâmetros de crescimento vegetal em ensaios em casa de vegetação

Diversidade genética de bactérias que colonizam nódulos radiculares de Phaseolus vulgaris L. cultivado em campo e em casa de vegetação.

Foi realizado o sequenciamento parcial dos genes 16S rRNA e glnII de seis isolados de nódulos radiculares de feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.), sendo três de plantas cultivadas a campo (LGMB10, LGMB57 e LGMB58) e três de plantas cultivadas em casa de vegetação (LGMB73, LGMB88 e LGMB99). Foi observada uma preferência de colonização de acordo com o experimento avaliado

Bactérias endofíticas e rizobactérias como promotoras de crescimento em plantas de milho.

A cultura de milho se destaca no cenário mundial e o Paraná é o maior produtor nacional dessa cultura. O uso e inoculantes a partir de bactérias que interagem com a planta de forma direta ou indireta, é uma alternativa de redução de custos e impacto ambiental. Na interação planta e bactéria, são encontradas rizobactérias e bactérias endofíticas, diazotróficas e/ou promotoras de crescimento vegetal. A promoção de crescimento pode ser direta pela produção de fitormônios, como auxinas; disponibilidade de nutrientes por meio de solubilização de fosfato e produção de sideróforos; ou no caso das dizotróficas, por fixação biológica de nitrogênio. Também, a promoção de crescimento vegetal pode ser de forma indireta por meio de produção de substâncias inibidoras do crescimento de fitopatógenos ou por competição por espaço e/ou nutrientes. A identificação genética de cepas bacterianas contrib ui para a seleção de estirpes com melhor desempenho para atividade promotora de crescimento vegetal e, portanto, promissoras para produção de inoculantes. O sequenciamento do gene 16S rRNA é uma ferramenta molecular importante para determinar a posição taxonômica de estirpes de bactérias. Assim, o presente trabalho tem por objetivo selecionar bactérias com atividade promotora de crescimento vegetal e caracterizá-las geneticamente. Para isso, foram isoladas cepas bacterianas de raízes de milho para estabelecer uma coleção. As cepas foram submetidas aos testes in vitro para promoção de crescimento vegetal e sequenciamento do gene ribossomal 16S para identificação molecular. As bactérias com melhor desempenho nos testes in vitro são selecionadas para experimentação em casa de vegetação

Endophytic and pathogenic Phyllosticta species, with reference to those associated with Citrus Black Spot

We investigated the identity and genetic diversity of more than 100 isolates belonging to Phyllosticta (teleomorph Guignardia), with particular emphasis on Phyllosticta citricarpa and Guignardia mangiferae s.l. occurring on Citrus. Phyllosticta citricarpa is the causal agent of Citrus Black Spot and is subject to phytosanitary legislation in the EU. This species is frequently confused with a taxon generally referred to as G. mangiferae, the presumed teleomorph of P. capitalensis, which is a non-pathogenic endophyte, commonly isolated from citrus leaves and fruits and a wide range of other hosts. DNA sequence analysis of the nrDNA internal transcribed spacer region (ITS1, 5.8S nrDNA, ITS2) and partial translation elongation factor 1-alpha (TEF1), actin and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GPDH) genes resolved nine clades correlating to seven known, and two apparently undescribed species. Phyllosticta citribraziliensis is newly described as an endophytic species occurring on Citrus in Brazil. An epitype is designated for P. citricarpa from material newly collected in Australia, which is distinct from P. citriasiana, presently only known on C. maxima from Asia. Phyllosticta bifrenariae is newly described for a species causing leaf and bulb spots on Bifrenaria harrisoniae (Orchidaceae) in Brazil. It is morphologically distinct from P. capitalensis, which was originally described from Stanhopea (Orchidaceae) in Brazil; an epitype is designated here. Guignardia mangiferae, which was originally described from Mangifera indica (Anacardiaceae) in India, is distinguished from the non-pathogenic endophyte, P. brazilianiae sp. nov., which is common on M. indica in Brazil. Furthermore, a combined phylogenetic tree revealed the P. capitalensis s.l. clade to be genetically distinct from the reference isolate of G. mangiferae. Several names are available for this clade, the oldest being P. capitalensis. These results suggest that endophytic, non-pathogenic isolates occurring on a wide host range would be more correctly referred to as P. capitalensis. However, more genes need to be analysed to fully resolve the morphological variation still observed within this clade

Caracterização morfofisiológica e genética de bactérias endofíticas isoladas de raízes de diferentes genótipos de milho (Zea mays L.).

A cultura do milho (Zea mays L.) tem relevante expressão no cenário mundial e o Estado do Paraná desempenha importante papel como maior produtor de milho no Brasil. Assim, todas as estratégias que permitam otimizar a produção deste importante cultivo são importantes para a pesquisa aplicada. Bactérias endofíticas apresentam alto potencial na elevação dos índices de produtividade, por mecanismos como a fixação biológica do nitrogênio, a promoção do crescimento de plantas pela produção de fitohormônios, o controle de patógenos, entre outros. Objetivos: Isolar bactérias que se associam endofiticamente com diferentes genótipos de milho (linhagens e híbridos) e caracterizá-las quanto a diversas propriedades morfofisiológicas e genéticas. Métodos: Inicialmente foi estabelecida uma coleção de 217 isolados de bactérias endofíticas de raízes de milho e destes, 98 foram mantidos em condições de laboratório. Foram realizadas caracterizações morfofisiológicas, incluindo morfologia de colônias, diversos testes bioquímicos (crescimento em diferentes meios de cultura, redução do nitrato, urease, catalase, tolerância intrínseca a antibióticos) e avaliação da capacidade de fixação do nitrogênio in vitro. Como etapa subsequente, avaliou-se o perfil genético das bactérias através da amplificação do DNA com o primer BOX-PCR, relacionado a regiões repetitivas e não codificantes do DNA. Foi realizado, ainda, o sequenciamento parcial do gene 16S RNAr de bactérias representantes dos principais agrupamentos obtidos com os dados morfofisiológicos, sendo identificados os gêneros Pantoea, Bacillus, Burkholderia e Klebsiella. Resultados: Foi observada alta variabilidade entre os isolados obtidos em todos os parâmetros analisados, confirmando que populações com elevado grau de diversidade morfofisiológica e genética se estabelece endofiticamente com o milho. É interessante constatar que essa diversidade ocorre mesmo em linhagens e híbridos de milho obtidos em condições normais de melhoramento para a gramínea, que não consideram a capacidade de associação com bactérias endofíticas. Conclusão: O estabelecimento dessa importante coleção, com microrganismos pertencentes a gêneros pouco estudados com a cultura do milho no Brasil permitirá a condução de estudos para a avaliação da capacidade promotora de crescimento ou mesmo fixação biológica de nitrogênio nesses isolados bacterianos

Composition of endophytic fungal community associated with leaves of maize cultivated in south Brazilian field

The objective of this study was to conduct a survey about fungi associated with leaves from two different maize plant lineages and to analyze their microbiota diversity. Isolated fungi were identified by morphological analysis and molecular taxonomy was performed using ITS1-5.8S-ITS2 rDNA. About 27 fungi morphotypes were obtained, 15 of them were from the first maize lineage. About 86.7% of the individuals belonged to the Dothideomycetes class (Phoma sorghina, Epicocum nigrum, Cladosporium sp., Bipolaris zeicola, and Alternaria alternata complex) and 13.3% to the Sordariomycetes class (Diaporthe/Phomopsis sp. and Nigrospora sp.). This ratio was opposite in the other maize lineage with 25.0% of Dothideomycetes (E. nigrum and Pleosporales) and 75.0% of Sordariomycetes (Gibberella fujikuroi complex, Fusarium graminearum complex, Diaporthe/Phomopsis sp., and Nigrospora sp.). By concerning the analyses of morphological characteristics and molecular phylogeny, this study intended to identify the groups of saprophytic, phytopathogenic, and mycotoxin fungi, which differently co-inhabit leaf tissue of maize plants in both tested lineages

Analysis of the genetic diversity of Candida isolates obtained from diabetic patients and kidney transplant recipients

Yeasts of the genu