The Methyltransferases PRMT4/CARM1 and PRMT5 Control Differentially Myogenesis in Zebrafish

In vertebrates, skeletal myogenesis involves the sequential activation of myogenic factors to lead ultimately to the differentiation into slow and fast muscle fibers. How transcriptional co-regulators such as arginine methyltransferases PRMT4/CARM1 and PRMT5 control myogenesis in vivo remains poorly understood. Loss-of-function experiments using morpholinos against PRMT4/CARM1 and PRMT5 combined with in situ hybridization, quantitative polymerase chain reaction, as well as immunohistochemistry indicate a positive, but differential, role of these enzymes during myogenesis in vivo. While PRMT5 regulates myod, myf5 and myogenin expression and thereby slow and fast fiber formation, PRMT4/CARM1 regulates myogenin expression, fast fiber formation and does not affect slow fiber formation. However, our results show that PRMT4/CARM1 is required for proper slow myosin heavy chain localization. Altogether, our results reveal a combinatorial role of PRMT4/CARM1 and PRMT5 for proper myogenesis in zebrafish

Expression patterns of CREB binding protein (CREBBP) and its methylated species during zebrafish development

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Etude des gènes cibles du calcium impliqués dans la détermination cellulaire au cours de l'embryogénèse précoce

Chez l'embryon de Xénope pendant la gastrulation, une augmentation de la concentration intracellulaire en calcium est nécessaire et suffisante pour engager les cellules ectodermiques dorsales vers la destinée neurale. Or la relation entre cette variation calcique et l'expression des gènes neuraux précoces est inconnue. De tels gènes, isolés par une approche soustractive sont induits suite à une variation calcique et par noggin: xPRMT1b, une arginine N-méthyltransférase I et xMLP, un effecteur du complexe calcium-calmoduline. Ils s'expriment au niveau des territoires présomptifs neuraux. L'étude fonctionnelle de xPRMT1b montre que cette enzyme est nécessaire au développement des structures neurales antérieures, et l'intègre dans la voie de signalisation neurale contrôlée par le signal calcique. Le calcium en coordination avec les autres voies pro-neurales serait un signal instructif, permettant un contrôle spatio-temporel de la compétence neurale via l'expression de gènes pro-neuraux.During gastrulation, an increase in intracellular Ca2+ is both necessary and sufficient to commit the ectoderm to a neural fate in Xenopus embryos. However, the relationship between this Ca2+ increase and the expression of early neural genes has yet to be defined. Using a subtractive library, we isolated such genes characterised by an expression induced both by an increase in calcium and by the dorsalizing factor noggin. We specifically focused on xPRMT1b, an arginine N-methyltransferase and xMLP, a calcium-calmodulin effector. During embryogenesis, these genes are expressed in neural territories. Functional analysis of xPRMT1b showed that this enzyme is required for correct anterior neural development. We have then included xPRMT1b in the neural pathway triggered by calcium signalling. Thus, calcium, in addition with the other pro-neural pathways, is an instructive signal which contributes to the spatio-temporal control of neural competence.TOULOUSE3-BU Santé-Centrale (315552105) / SudocSudocFranceF

When mentoring matters: a French mentoring program for women in science

International audienceAn innovative program addresses the need for support, encouragement and guidance on the part of women scientists in the early years of their career, during their PhD

xMLP est un gène de réponse précoce au calcium lors de la détermination neurale chez Xenopus laevis

Pendant la gastrulation chez l’embryon d’Amphi- bien, les cellules ectodermiques ont le choix entre un destin épidermique et un destin neural. Ce choix de destinée résulte d’un antagonisme entre l’activation ventralisante de la voie induite par les « Bone Morphogenetic Proteins » (spécification épidermique), et les facteurs dorsalisants (tels que Noggin, Chordin ou Follistatine) sécrétés par le mésoderme en dorsal (spécification neurale). De plus, la détermination neurale nécessite une signalisation instructive qui implique l’activation de canaux calciques de type L. L’augmentation de la concentration intracellulaire en calcium qui en résulte est nécessaire et suffisante pour orienter les cellules de l’ectoderme compétent vers la voie neurale. Nous avons recherché par criblage d’une banque soustractive entre ectodermes induits dans la voie neurale versus non induits, les gènes de détermination neurale qui sont immédiatement transcrits après la variation calcique. Le premier gène candidat étudié ici code pour xMLP, une « MARCKS like protein ». xMLP est activé par une augmentation de la concentration calcique intracellulaire et par le facteur dorsalisant Noggin. Il est exprimé au niveau des territoires neuraux au cours de la gastrulation et de la neurulation. Le rôle possible de xMLP dans la détermination neurale sera discuté

Protocol to locally express cxcl12a during zebrafish olfactory organ development by combining IR-LEGO with live imaging

Summary: Temporal and spatial regulation of gene expression is crucial for proper embryonic development. Infrared laser-evoked gene operator (IR-LEGO) can provide information for various developmental processes. Here, we present a protocol to locally express cxcl12a during zebrafish olfactory organ development1 using a combination of IR-LEGO and live imaging. We describe steps for implementing IR-LEGO, biological sample preparation, live imaging, data collection, and analysis. This protocol can be applied to virtually any genetically modified experimental organism. : Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics