Global host molecular perturbations upon in situ loss of bacterial endosymbionts in the deep-sea mussel Bathymodiolus azoricus assessed using proteomics and transcriptomics

Background: Colonization of deep-sea hydrothermal vents by most invertebrates was made efficient through their adaptation to a symbiotic lifestyle with chemosynthetic bacteria, the primary producers in these ecosystems. Anatomical adaptations such as the establishment of specialized cells or organs have been evidenced in numerous deep-sea invertebrates. However, very few studies detailed global inter-dependencies between host and symbionts in these ecosystems. In this study, we proposed to describe, using a proteo-transcriptomic approach, the effects of symbionts loss on the deep-sea mussel Bathymodiolus azoricus' molecular biology. We induced an in situ depletion of symbionts and compared the proteo-transcriptome of the gills of mussels in three conditions: symbiotic mussels (natural population), symbiont-depleted mussels and aposymbiotic mussels. Results: Global proteomic and transcriptomic results evidenced a global disruption of host machinery in aposymbiotic organisms. We observed that the total number of proteins identified decreased from 1118 in symbiotic mussels to 790 in partially depleted mussels and 761 in aposymbiotic mussels. Using microarrays we identified 4300 transcripts differentially expressed between symbiont-depleted and symbiotic mussels. Among these transcripts, 799 were found differentially expressed in aposymbiotic mussels and almost twice as many in symbiont-depleted mussels as compared to symbiotic mussels. Regarding apoptotic and immune system processes - known to be largely involved in symbiotic interactions - an overall up-regulation of associated proteins and transcripts was observed in symbiont-depleted mussels. Conclusion: Overall, our study showed a global impairment of host machinery and an activation of both the immune and apoptotic system following symbiont-depletion. One of the main assumptions is the involvement of symbiotic bacteria in the inhibition and regulation of immune and apoptotic systems. As such, symbiotic bacteria may increase their lifespan in gill cells while managing the defense of the holobiont against putative pathogens

Impact des procédés de fabrication des formules infantiles sur la digestion[i] in vitro[/i] des caséines

Introduction et But de l’étude. – Les procédés de transformation appliqués aux matières premières telles que le lait peuvent engendrer des modifications de structure des principaux constituants. Par exemple, le traitement thermique du lait provoque des interactions entre les protéines et les autres constituants de la matrice (lipides, sucres) entrainant l’apparition d’agrégats thermo-induits, de composés de Maillard… La susceptibilité de ces structures néoformées à être digérées par le nourrisson et la nature des peptides bioactifs libérés au niveau intestinal par leur hydrolyse a été très peu étudiée jusqu’alors. L’objectif de ce travail était donc de déterminer l’impact de deux paramètres technologiques (couple temps/température, pourcentage d’extrait sec du lait avant traitement thermique) considérés comme essentiels dans la fabrication de formules infantiles sur la digestion des caséines et en particulier sur leur aptitude à résister au tractus digestif. Matériel et Méthodes. – Six échantillons de poudres ont été fabriqués en atelier pilote en soumettant un lait à 25 % ou 35 % d’extrait sec à trois types de traitements thermiques classiquement utilisés en industrie (80 °C/20 s, 85 °C/180s, 105 °C/60s). Les six échantillons produits plus un 7e n’ayant reçu aucun traitement thermique (témoin négatif) ont été caractérisés (taille des particules, composition globale) puis soumis à un modèle statique in vitro de digestion. Le modèle utilisé consistait en trois phases : une phase gastrique de 60 min à pH 3 en présence de pepsine porcine, suivie d’une phase duodénale de 30 min à pH 6,5 en présence de trypsine porcine, chymotrypsine bovine et sels biliaires puis d’une incubation de 15 min avec des vésicules de la bordure en brosse de l’épithélium intestinal de porc. Les pHs et teneurs en enzymes et sels biliaires ont été choisis pour correspondre à ceux physiologiquement retrouvés chez le nourrisson. Les formules infantiles digérées avec ce modèle ont été analysées en électrophorèse SDS-PAGE et par technique ELISA et western-blotting en utilisant une collection de 22 anticorps monoclonaux spécifiques de différents épitopes des caséines \alphas1, \alphas2, \beta et \kappa. Les peptides générés en fin de phase duodénale et intestinale ont été identifiés par spectrométrie de masse. Résultats. – Les régions \alphas1(f133-151), \alphas1(f185-199), \alphas2(f36-75), \beta(1-25) et \beta(76-93) ont été montrées comme les plus résistantes à la digestion et ce, quel que soit le procédé de transformation utilisé. Ces régions correspondent à des zones phosphorylées des caséines ou très hydrophobes au pH gastrique et donc peu accessibles aux protéases. Le traitement thermique du lait modifie toutefois les profils peptidiques obtenus en fin de digestion. Conclusions. – Ces résultats renforcent l’idée qu’à termes, en maitrisant les procédés de fabrication des formules infantiles, on doit pouvoir orienter la production de peptides bioactifs dans l’intestin

Association between major cardiovascular events and esketamine: A pharmacovigilance study

This project is a case/non-case study which studies the risks of serious cardiovascular adverse events reported with esketamine in the global pharmacovigilance database

Impact des procédés de fabrication des formules infantiles sur la digestion[i] in vitro[/i] des caséines

Introduction et But de l’étude. – Les procédés de transformation appliqués aux matières premières telles que le lait peuvent engendrer des modifications de structure des principaux constituants. Par exemple, le traitement thermique du lait provoque des interactions entre les protéines et les autres constituants de la matrice (lipides, sucres) entrainant l’apparition d’agrégats thermo-induits, de composés de Maillard… La susceptibilité de ces structures néoformées à être digérées par le nourrisson et la nature des peptides bioactifs libérés au niveau intestinal par leur hydrolyse a été très peu étudiée jusqu’alors. L’objectif de ce travail était donc de déterminer l’impact de deux paramètres technologiques (couple temps/température, pourcentage d’extrait sec du lait avant traitement thermique) considérés comme essentiels dans la fabrication de formules infantiles sur la digestion des caséines et en particulier sur leur aptitude à résister au tractus digestif. Matériel et Méthodes. – Six échantillons de poudres ont été fabriqués en atelier pilote en soumettant un lait à 25 % ou 35 % d’extrait sec à trois types de traitements thermiques classiquement utilisés en industrie (80 °C/20 s, 85 °C/180s, 105 °C/60s). Les six échantillons produits plus un 7e n’ayant reçu aucun traitement thermique (témoin négatif) ont été caractérisés (taille des particules, composition globale) puis soumis à un modèle statique in vitro de digestion. Le modèle utilisé consistait en trois phases : une phase gastrique de 60 min à pH 3 en présence de pepsine porcine, suivie d’une phase duodénale de 30 min à pH 6,5 en présence de trypsine porcine, chymotrypsine bovine et sels biliaires puis d’une incubation de 15 min avec des vésicules de la bordure en brosse de l’épithélium intestinal de porc. Les pHs et teneurs en enzymes et sels biliaires ont été choisis pour correspondre à ceux physiologiquement retrouvés chez le nourrisson. Les formules infantiles digérées avec ce modèle ont été analysées en électrophorèse SDS-PAGE et par technique ELISA et western-blotting en utilisant une collection de 22 anticorps monoclonaux spécifiques de différents épitopes des caséines \alphas1, \alphas2, \beta et \kappa. Les peptides générés en fin de phase duodénale et intestinale ont été identifiés par spectrométrie de masse. Résultats. – Les régions \alphas1(f133-151), \alphas1(f185-199), \alphas2(f36-75), \beta(1-25) et \beta(76-93) ont été montrées comme les plus résistantes à la digestion et ce, quel que soit le procédé de transformation utilisé. Ces régions correspondent à des zones phosphorylées des caséines ou très hydrophobes au pH gastrique et donc peu accessibles aux protéases. Le traitement thermique du lait modifie toutefois les profils peptidiques obtenus en fin de digestion. Conclusions. – Ces résultats renforcent l’idée qu’à termes, en maitrisant les procédés de fabrication des formules infantiles, on doit pouvoir orienter la production de peptides bioactifs dans l’intestin

Mutations of POLR3A Encoding a Catalytic Subunit of RNA Polymerase Pol III Cause a Recessive Hypomyelinating Leukodystrophy

Leukodystrophies are a heterogeneous group of inherited neurodegenerative disorders characterized by abnormal white matter visible by brain imaging. It is estimated that at least 30% to 40% of individuals remain without a precise diagnosis despite extensive investigations. We mapped tremor-ataxia with central hypomyelination (TACH) to 10q22.3-23.1 in French-Canadian families and sequenced candidate genes within this interval. Two missense and one insertion mutations in five individuals with TACH were uncovered in POLR3A, which codes for the largest subunit of RNA polymerase III (Pol III). Because these families were mapped to the same locus as leukodystrophy with oligodontia (LO) and presented clinical and radiological overlap with individuals with hypomyelination, hypodontia and hypogonadotropic hypogonadism (4H) syndrome, we sequenced this gene in nine individuals with 4H and eight with LO. In total, 14 recessive mutations were found in 19 individuals with TACH, 4H, or LO, establishing that these leukodystrophies are allelic. No individual was found to carry two nonsense mutations. Immunoblots on 4H fibroblasts and on the autopsied brain of an individual diagnosed with 4H documented a significant decrease in POLR3A levels, and there was a more significant decrease in the cerebral white matter compared to that in the cortex. Pol III has a wide set of target RNA transcripts, including all nuclear-coded tRNA. We hypothesize that the decrease in POLR3A leads to dysregulation of the expression of certain Pol III targets and thereby perturbs cytoplasmic protein synthesis. This type of broad alteration in protein synthesis is predicted to occur in other leukoencephalopathies such as hypomyelinating leukodystrophy-3, caused by mutations in aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional protein 1 (AIMP1)